СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ВТОРИЧНЫХ ИММУНОДЕФИЦИТОВ У МОЛОДНЯКА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА Российский патент 2009 года по МПК A61K36/00 A61K39/395 

Изобретение относится к ветеринарии, касается способа коррекции вторичных иммунодефицитов и может быть использовано как основной или дополнительный компонент стимуляции иммунной системы молодняка сельскохозяйственных животных, преимущественно телят, для повышения общей резистентности и иммунологической реактивности к действию различных повреждающих агентов.

Иммунодефициты - нарушения иммунного статуса организма вследствие дефекта одного или нескольких механизмов иммунного ответа, проявляются повышенной инфекционной заболеваемостью. Вторичные иммунодефициты являются приобретенными, развиваются под воздействием на организм неблагоприятных факторов окружающей среды. В первые дни жизни у новорожденных телят физиологический иммунодефицит вызван отсутствием в организме иммуноглобулинов, характеризуется недостаточностью В-системы, на фоне которого развиваются желудочно-кишечные болезни, проявляющиеся диареей (первый критический период), в возрасте 20-40 дней иммунодефицит связан с расходованием колостральных иммуноглобулинов при недостаточности собственного иммунопоэза, характеризуется недостаточностью фагоцитарной и Т-систем, на фоне которого развиваются болезни с поражением органов дыхания (второй критический период).

Известны способы коррекции вторичных иммунодефицитов с применением неспецифических стимуляторов иммунитета (синтетического, бактериального, растительного, биологического происхождения), различающихся по структуре и механизмам действия [1, 2, 3, 4, 5, 6, 7]. Проблема применения иммунотропных средств обусловлена высокой динамичностью иммунной системы, ее многокомпонентностью, наличием большого количества прямых и обратных связей, поэтому один и тот же препарат в зависимости от исходного состояния иммунной системы, дозы и кратности введения и ряда других факторов может вызывать прямо противоположные эффекты.

В качестве наиболее близкого аналога нами рассматривается способ профилактики молозивных иммунодефицитов, включающий применение неспецифического иммуноглобулина, который инъецируют подкожно или внутримышечно в первый день жизни и повторно с интервалом в 14 дней в течение 2 месяцев [8].

Цель изобретения - повышение эффективности профилактики иммунодефицитных состояний у телят.

Это достигается использованием комплексного лекарственного средства растительного происхождения на фоне пассивной иммунизации неспецифическим иммуноглобулином, причем в качестве лекарственного средства растительного происхождения предложено комплексное лекарственное средство, представляющее собой 70% спиртовую настойку измельченной растительной смеси почек сосны обыкновенной, травы и соцветий эхинацеи пурпурной, корневищ и корней девясила высокого, взятых в соотношении 1:1:1.

Используемые ингредиенты комплексного лекарственного средства широко применяются в фитотерапии. Обоснованием для выбора компонентов композиции послужили данные о фармакологических свойствах и химическом составе лекарственного растительного сырья. Каждый компонент содержит биологически активные вещества, воздействующие одновременно на все звенья иммунной системы, а также обладающие выраженным антимикробным действием на патогенную и условно патогенную микрофлору.

Почки сосны обладают дезинфицирующим, фитонцидным, витаминным и успокаивающими свойствами, эффективно предотвращают распространение микробной и вирусной инфекции в организме.

Трава и соцветия эхинацеи пурпурной обладают иммуномодулирующей активностью, подавляют активность гиалуронидазы - фермента, способствующего повышению проницаемости для вирусов и микробов, увеличивают противомикробную активность лейкоцитов, макрофагов и нейтрофилов крови и повышают синтез защитных антител и эндогенного интерферона.

Корневища и корни девясила высокого обладают противовоспалительным, антимикробным, бактерицидным и противогрибковым свойствами.

Химический состав лекарственного средства представлен комплексом биологически активных веществ, обеспечивающих его высокий фармакотерапевтический эффект. Доминирующими биологически активными веществами являются: эфирное масло, фенольные соединения, флавоноиды, полисахариды, витамины, микроэлементы, главными из которых можно считать цинк, селен и железо.

Флавоноиды (содержат все компоненты) ингибируют фермент катехол-орто-метилтрансферазу и обеспечивают адаптационно-трофическую функцию организма за счет адренопролонгирующего эффекта. Флавоноиды обладают Р-витаминной (капилляроукрепляющей) активностью. В суммарном противовоспалительном эффекте флавоноидов имеет значение их непосредственное действие на клеточные и тканевые мембраны - снижение их проницаемости, уплотнение мембран лизисом, ингибирование гиалуронидазы, антагонистическое действие по отношению к медиаторам воспаления.

Полисахариды (содержат все компоненты) оказывают противовоспалительное, иммунокорригирующее действие. Они стимулируют неспецифический иммунитет и фагоцитоз, деятельность макрофагов и нейтрофилов, а также бактерицидную функцию клеток.

Эфирные масла (содержат все компоненты) отличают несколько видов активности (противомикробная, противовоспалительная, спазмолитическая и отхаркивающая), детали и степень которых варьирует. Так, противомикробное действие имеет широкий спектр и носит неспецифический характер. Механизм его сложен и состоит в деструкции цитоплазматической мембраны бактерий с последующим нарушением обмена, аэробного дыхания, процесса синтеза. Противовоспалительная активность проявляется в защите клеток от дальнейшего повреждения, в ослаблении экссудативной фазы процесса, в лейкоцитарной и макрофагальной инфильтрации, в усилении пролиферации клеток. Частично она обусловлена антиоксидантным эффектом, в результате стабилизируются лизосомальные, митохондриальные и цитоплазматические мембраны, снижается проницаемость капилляров, и одновременно усиливается фагоцитарная активность макрофагов и лейкоцитов.

Фенольные соединения (содержат все компоненты) оказывают противомикробное действие, механизм которого обусловлен их способностью сорбироваться компонентами цитоплазматической мембраны бактерий, образовывать прочные водородные связи с белками и повреждать мембрану, в частности повышая ее проницаемость для ионов (прежде всего калия) и важных метаболитов, теряемых клеткой, а также для воды, поступающей извне и способствующей лизису.

Витамины (витамин С - почки сосны обыкновенной, эхинацея пурпурная; витамин Е - девясил высокий, витамин А - эхинацея пурпурная) участвуют во всех процессах обмена веществ, повышают устойчивость организма к заболеваниям, оказывают противовоспалительное действие, способствуют дезинтоксикации организма.

Микроэлемент цинк (почки сосны обыкновенной, девясил высокий) участвует в организме в иммунных процессах, селен (девясил высокий, который концентрирует селен, почки сосны обыкновенной) является мощным антиоксидантом, а железо (эхинацея пурпурная) - основным структурным компонентом гемоглобина крови и гемсодержащих ферментов.

Все растения комплексного лекарственного средства обладают противомикробным действием, а трава и соцветия эхинацеи пурпурной - вируснейтрализующим свойством, почки сосны предотвращают распространение вирусной инфекции в организме, что обеспечивает устранение (ослабление) причин болезни, противовоспалительное (девясил высокий, эхинацея пурпурная), отхаркивающее (почки сосны), спазмолитическое (девясил высокий) действие, уменьшает патогенетические изменения, а иммуномодулирующая активность эхинацеи пурпурной усиливает защитные, компенсаторно-приспособительные механизмы организма.

Высокая эффективность многокомпонентного растительного средства достигается благодаря сочетанию целого комплекса биологически активных веществ, вследствие чего наблюдается взаимное усиление полезных фармакологических свойств каждого отдельного компонента.

Предложенное растительное средство готовится следующим образом.

Почки сосны обыкновенной, траву и соцветия эхинацеи пурпурной, корневища и корни девясила высокого измельчают (в сухом виде) согласно Государственной Фармакопее и смешивают в соотношении 1:1:1. Сырье помещают в стеклянный сосуд и смачивают, заливая извлекателем (70%-ный спирт) в соотношении 1:5. Слив готового продукта получают через 7 дней. Готовый продукт хранят в темном месте при температуре 5-10°С. Срок годности - 2 года со дня изготовления.

В соответствии с классификацией токсичности веществ по ГОСТу 12.1.007-88 средство может быть оценено как относительно безопасное, поскольку при определении параметров острой токсичности на мышах весом 20,0 г его 20% и 40% водные растворы показали ЛД₅₀ более 17,8 г/кг массы тела, а при внутриутробном введении - более 3,0 г/кг массы тела.

Пример: 100 г почек сосны обыкновенной, 100 г травы и соцветий эхинацеи пурпурной и 100 г корневищ и корней девясила высокого измельчили, смешали, поместили в стеклянный сосуд, залили 1,5 л этилового спирта 70% концентрации и выдержали при температуре 18-20°С в темном месте в течение 7 дней. Готовый продукт слили, лекарственное сырье отжали и отфильтровали.

Способ профилактики иммунодефицитных состояний у телят с применением комплексного лекарственного средства, которое представляет собой 7-8% водный раствор 70% спиртовой настойки измельченной растительной смеси почек сосны обыкновенной, травы и соцветий эхинацеи пурпурной, корневищ и корней девясила высокого, взятых в соотношении 1:1:1, полученной при соотношении сырья и извлекателя 1:5 и выдержанной при температуре 18-20°С в течение 7 дней, на фоне пассивной иммунизации неспецифическим иммуноглобулином осуществляется следующим образом.

70% спиртовую настойку из измельченной растительной смеси почек сосны обыкновенной, травы и соцветий эхинацеи пурпурной и корневищ и корней девясила высокого в виде 7-8% водного раствора, приготовленного на кипяченой охлажденной воде, применяют внутрь в дозе 1,0-1,5 мл /кг живой массы животного с интервалом в 24 часа в течение 15 дней в дополнение к внутримышечной инъекции неспецифического иммуноглобулина в дозе 1,0 мл/кг живой массы животного трехкратно с интервалом в 5 дней.

Сущность способа поясняется примерами.

Пример 1. Изменение иммунобиологических показателей в зависимости от параметров предлагаемого способа определяли в эксперименте на клинически здоровых телятах 5-7-дневного возраста. Отобранных методом аналогов телят распределяли на шесть групп. Телятам первых пяти групп внутримышечно инъецировали неспецифический иммуноглобулин в дозе 1,0 мл/кг живой массы животного трехкратно с интервалом в 5 дней, телятам первых четырех групп дополнительно применяли внутрь комплексное лекарственное средство в виде водного раствора 7% концентрации в течение 15 дней с интервалом в 24 часа в дозах 0,5; 1,0, 1,5 и 2,0 мл/ кг живой массы животного. Телята шестой группы препаратов не получали. Естественную резистентность оценивали по показателям бактерицидной активности сыворотки крови (определяли по методу О.В.Смирновой и Т.А.Кузьминой, 1966), лизоцимной активности сыворотки крови (определяли по методу В.Г.Дорофейчук, 1968) и функциональной активности нейтрофилов крови (определяли в реакции восстановления нитросинего тетразолия по А. Н. Маянскому и др., 1979), иммунный статус - по количеству Т- и В-лимфоцитов (определяли по методу Пирса, 1962) и по содержанию основных классов иммуноглобулинов IgG, IgM (определяли по методу Манчини и др., 1965). Результаты представлены в таблице 1.

Таблица 1 Влияние комплексного лекарственного средства на иммунобиологические показатели и показатели общей неспецифической резистентности в зависимости от дозы Показатели Группы животных Опыт Контроль 1-я- n=14 2-я- n=15 3-я- n=15 4-я- n=14 Доза комплексного лекарственного средства, мл/г живой массы Внутримышечно неспецифический иммуноглобулин n=14 Препаратов не применяли n=14 0,5 1,0 1,5 2,0 в дополнение к внутримышечной инъекции неспецифического иммуноглобулина Т-лимфоциты, % В-лимфоциты, % Функциональная активность нейтрофилов крови, %             - спонтанный тест - - индуцированный тест Иммуноглобулины, мг/мл             G М Лизоцимная активность сыворотки крови, % Бактерицидная активность сыворотки крови, % Примечание: в числителе - показатели до начала опыта, в знаменателе - показатели через 5 дней после окончания опыта.

Полученные результаты подтвердили обоснованность параметров предлагаемого способа. Применение 70% спиртовой настойки измельченной растительной смеси почек сосны обыкновенной, травы и соцветий эхинацеи пурпурной, корневищ и корней девясила высокого, взятых в соотношении 1:1:1, полученной при соотношении сырья и извлекателя 1:5 и выдержанной при температуре 18-20°С в течение 7 дней, в виде 7% водного раствора в дозе 1,0-1,5 мл/кг живой массы животного обеспечивало стабильное повышение иммунобиологических показателей у телят относительно животных группы с применением неспецифического иммуноглобулина и группы без применения препарата. Изменение значений данного параметра способа нецелесообразно, так как при их понижении иммунобиологические показатели выше, чем в группе без применения препаратов, но ниже, чем в группе с применением неспецифического иммуноглобулина, а при их повышении - сохранялись на уровне предлагаемых значений.

Пример 2. Динамику изменения иммунобиологических показателей изучали на 2 группах (опытной и контрольной) клинически здоровых телят хозяйства, длительно неблагополучного по желудочно-кишечным болезням. Телятам опытной группы подкожно инъецировали неспецифический иммуноглобулин в дозе 1,0 мл/кг живой массы животного трехкратно с интервалом в 5 дней и дополнительно применяли внутрь комплексное лекарственное средство в виде водного раствора 7% концентрации в дозе 1,0 мл/ кг массы животного в течение 15 дней с интервалом в 24 часа. Телята контрольной группы препаратов не получали. Иммунобиологические показатели определяли в различные возрастные периоды и оценивали, как в примере 1. Результаты представлены в таблице 2.

Таблица 2 Возрастная динамика изменения иммунобиологических показателей у клинически здоровых телят Показатели Возраст, сут 1 10 20 30 Т-лимфоциты, % В-лимфоциты, % Функциональная активность нейтрофилов крови, %         спонтанный тест индуцированный тест Бактерицидная активность, % Лизоцимная активность, % Иммуноглобулины, %         IgG IgM Примечание: в числителе - показатели опытных, в знаменателе - показатели контрольных животных.

Как видно из таблицы 2, в суточном возрасте различия практически отсутствовали. У животных опытной группы к 10-дневному возрасту происходило повышение основных показателей клеточного и гуморального иммунитета, которое продолжилось до 20-дневного возраста, и в отличие от животных контрольной группы положительная тенденция сохранялась до 30-дневного возраста. Важное практическое значение имело увеличение количества В-лимфоцитов крови (на 53,2% в 10-, на 65,3% в 20- и на 50,8% в 20-дневном возрасте по сравнению с контролем) и иммуноглобулинов в сыворотке крови подопытных телят (IgG - на 17,0% в 10-, на 39,7% в 20- и на 40,2% в 30-дневном возрасте по сравнению с контролем; IgM - на 36,4% в 10-, на 55,6% в 20- и на 36,4% в 30-дневном возрасте по сравнению с контролем), что свидетельствовало о лучшей усвояемости новорожденными молозивных иммуноглобулинов и более раннем начале синтеза собственных иммуноглобулинов.

Пример 3. Эффективность способа профилактики вторичных иммунодефицитов в сравнении с известными изучали в условиях хозяйства, стационарно неблагополучного по желудочно-кишечным болезням телят, обусловленным воздействием на организм ассоциаций вирусов, патогенной и условно-патогенной микрофлоры на фоне нарушения условий содержания и кормления стельных коров и телят. Острые желудочно-кишечные расстройства у молодняка выявляли в 2-3-дневном возрасте. У больных отмечали урежение частоты пульса и дыхания, понижение температуры тела, западение орбиты глаз, синюшность видимых слизистных оболочек, взъерошенность и тусклость шерсти, профузный понос. Бактериологическими и вирусологическими исследованиями подтверждена этиологическая роль рота- и коронавирусов, а также бактерий родов Escherichia и Proteus. Заболеваемость - 87-95%, летальность - 25-30%. По принципу аналогов подбирали клинически здоровых телят 5-7-дневного возраста, которых распределяли на четыре группы по 15 голов в каждой. Телятам первой группы внутримышечно инъецировали неспецифический иммуноглобулин в дозе 1,0 мл/кг живой массы животного трехкратно с интервалом в 5 дней и дополнительно применяли внутрь комплексное лекарственное средство, представляющее собой 8% водный раствор 70% спиртовой настойки измельченной растительной смеси почек сосны обыкновенной, травы и соцветий эхинацеи пурпурной, корневищ и корней девясила высокого, взятых в соотношении 1:1:1, в дозе 1,0 мл/ кг массы животного в течение 15 дней с интервалом в 24 часа (предлагаемый способ). Телятам второй группы внутримышечно инъецировали неспецифический иммуноглобулин в дозе 1,0 мл/кг живой массы животного трехкратно с интервалом в 5 дней (способ-прототип). Телятам третьей группы подкожно инъецировали сыворотку реконвалесцентов в дозе 10,0 мл в течение 9 дней с интервалом в 48 часов (базовый способ). Телята четвертой группы препаратов не получали. За всеми животными наблюдали в течение 30 суток, регистрируя все случаи заболевания, характер их течения и эффективность лечения. Естественную резистентность и иммунный статус оценивали, как в примере 1. Результаты представлены в таблицах 3 и 4.

Таблица 3 Иммунобиологические показатели у телят после курса профилактики Показатели Способ профилактики Внутримышечно неспецифический иммуноглобулин и внутрь настойка
n=15 Внутримышечно неспецифический иммуноглобулин
n=15 Подкожно сыворотка реконвалесцентов
n=15 Без применения препаратов
n=15 Т-лимфоциты, % В-лимфоциты, % Фнкциональная активность нейтрофилов крови по НСТ-тесту, %:         спонтанному индуцированному Бактерицидная активность, % Лизоцимная активность, % Иммуноглобулины, мг/мл: IgG IgM Примечание: в числителе - показатели до начала опыта, в знаменателе - через 5 дней после окончания опыта.

Таблица 4 Сравнительная эффективность предлагаемого и известных способов профилактики вторичных иммунодефицитов Показатели Способ профилактики Внутримышечно неспецифический иммуноглобулин и внутрь настойка n=15 Внутримышечно неспецифический иммуноглобулин
n=15 подкожно сыворотка реконвалесцентов
n=15 Без применения препаратов
n=15 Заболело, голов 1 2 2 3 Форма переболевания         легкая 1 2 2 2 тяжелая       1 Профилактическая эффективность, % 93,3 86,7 86,7 80,0 Продолжительность болезни, дней 4 5-6 6-6,5 7

Установлено, что телята первой группы (предлагаемый способ) имели более высокие иммунобиологические показатели по сравнению с телятами других групп (таблица 3). Из 15 телят первой группы заболел один теленок, причем заболевание протекало в легкой форме (клиническая картина: угнетение, пониженный аппетит, кал жидкий, бежевого цвета, частота дефекаций до 5 раз в сутки) и легко поддалось лечению (на 2-ой день лечения отмечено улучшение общего состояния: аппетит пришел в норму, кал приобрел более густую консистенцию; выздоровление наступало на 4-ый день). Во второй и третьей группах из 15 телят заболело по 2 теленка. В обеих группах по одному теленку переболевало в тяжелой форме (клиническая картина: угнетение, отсутствие аппетита, боли на почве спазма кишечника, кал жидкий, бежевого цвета, частота дефекаций от 5 до 7 раз в сутки). У телят второй и третьей группы с легкой формой переболевания улучшение общего состояния отмечали на 4,5 и 5,5 сутки, а клиническое выздоровление - на 5 и 6 сутки соответственно, при тяжелой форме переболевания незначительное улучшение общего состояния (аппетит улучшился, кал приобрел кашицеобразную консистенцию, частота дефекаций - 5 раз в сутки) наблюдали на 5,5 и 6 сутки, а клиническое выздоровление - на 6 и 6,5 сутки соответственно (таблица 4).

Экспериментальный материал по совокупности показателей, характеризующих иммунный статус и уровень естественной резистентности, подтверждает стимулирующий эффект на организм предлагаемого способа, что выражается как в стимуляции гуморального (повышение показателей бактерицидной активности сыворотки крови и лизоцимной активности сыворотки крови), так и клеточного (повышение количества Т- и В-лимфоцитов, фагоцитарной активности нейтрофилов крови) иммунитета.

Источники информации

1. Субботин В.М., Субботина С.Г., Александров И.Д. Современные лекарственные средства в ветеринарии. Ростов-на-Дону: Феникс, 2001, 600 с.

2. И.Ф.Горлов и др.// Ветеринария, 1996, №7.

3. А.А.Ивановский// Ветеринарный врач, 2000, №2.

4. А.В.Коробко// Ветеринария, 2000, №5.

5. В.П.Николаенко// Ветеринария, 1990, №4.

6. Ш.Б.Садыков// Ветеринария, 1990, №4.

7. Л.А.Макарадзе// Ветеринария, 1999, №3.

8. Бюллетень ВИЭВ, вып.66, М., 1988, с.8-9.

Изобретение относится к области ветеринарии. Способ включает инъекцию неспецифического иммуноглобулина. Дополнительно внутрь применяют 70% спиртовую настойку измельченной растительной смеси почек сосны обыкновенной, травы и соцветий эхинацеи пурпурной, корневищ и корней девясила высокого, взятых в соотношении 1:1:1. Спиртовую настойку получают при соотношении сырья и извлекателя 1:5 и выдерживают при температуре 18-20°С в течение 7 дней. Животным настойку выпаивают в виде 7-8% водного раствора в дозе 1,0-1,5 мл/кг живой массы в течение 15 дней с интервалом в 24 часа. Способ позволяет эффективно стимулировать как гуморальный, так и клеточный иммунитет. 4 табл.

Способ профилактики вторичных иммунодефицитов у молодняка крупного рогатого скота, включающий инъекцию неспецифического иммуноглобулина, отличающийся тем, что дополнительно внутрь применяют 70%-ную спиртовую настойку измельченной растительной смеси почек сосны обыкновенной, травы и соцветий эхинацеи пурпурной, корневищ и корней девясила высокого, взятых в соотношении 1:1:1, полученную при соотношении сырья и извлекателя 1:5 и выдержанную при температуре 18-20°С в течение 7 дней, в виде 7-8%-ного водного раствора в дозе 1,0-1,5 мл/кг живой массы животного в течение 15 дней с интервалом в 24 ч.