СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА ГЕНИТАЛИЙ У ЖЕНЩИН Российский патент 2007 года по МПК A61B10/00 G01N33/48 G01N33/52 

Изобретение относится к медицине, а именно к фтизиатрии, и может быть использовано для диагностики туберкулеза гениталий у женщин.

Актуальность современной диагностики туберкулеза женских гениталий определяется его значительным местом в структуре вне легочных локализаций и сложностью его выявления на ранних стадиях болезни. Трудности диагностики обусловлены малыми формами и ограниченным характером поражения, а позднее распознавание ведет к развитию значительных анатомических изменений, фиброза и бесплодия. Первичное поражение маточных труб в значительной мере ограничивает забор материала, что существенно снижает возможности методов обследования. В связи с этим особую актуальность приобретает разработка методик, позволяющих быстро и достоверно оценить наличие туберкулезной инфекции в женских половых органах и определить степень ее активности. Диагностическая постановка сегментарных проб (патент №2154415) подразумевает обострение туберкулезного процесса на введение специфического антигена, которое сопровождается местными (кожными) и очаговыми (в гениталиях) реакциями. Однако очаговая реакция не всегда уловима, а местные проявления не позволяют локализовать очаг поражения. Для объективизации проб необходимо проведение дополнительных исследований: бактериологических, биохимических (АДА), иммунологических (ИФА) и морфологических, которые подтверждают диагноз по данным литературы в 30%, а согласно данным, полученным нами за последние 5 лет, в 10% случаев. При изолированном использовании тестов до и после проб в 100% диагноз подтверждается только при обнаружении клеток Лангханса в перитонеальной жидкости.

Прототипом предлагаемого способа послужил скрининговый метод определения ХЛ клеточных элементов менструальной крови (Грачева М.П., Крайненко Е.В. Хемилюминесцентный метод диагностики генитального туберкулеза у женщин // Туберкулез и экология. - 1997. - №3. - С.36-38.). Тест проводится с использованием специфического митогена (BCG), в ответ на добавление которого у больных туберкулезом в отличие от больных с неспецифическими воспалительными процессами отмечается повышение уровня хемилюминесценции крови. Однако данный метод не является специфичным для туберкулеза женских половых органов, так как регистрируемое повышение хемилюминесценции может быть реакцией на любую локализацию туберкулезного процесса, поскольку в состав менструального отделяемого входит периферическая кровь со всеми ее форменными элементами.

Задачей предлагаемого способа является повышение достоверности диагностики туберкулеза женских гениталий.

Задача осуществляется за счет того, что исследуют активность клеток перитонеальной жидкости при помощи хемилюминесценции до проведения сегментарных туберкулиновых проб на передней брюшной стенке и через 72 часа, и при увеличении исходного показателя более чем в два раза диагностируют туберкулез.

Преимуществами способа являются забор биологического материала максимально приближен к очагу туберкулезного воспаления, что обеспечивает его высокую диагностическую точность. Способ специфичен для туберкулеза женских гениталий, поскольку проводится на фоне сегментарных туберкулиновых проб, при которых туберкулин вводится внутрикожно в область проекции внутренних гениталий на переднюю брюшную стенку.

Способ осуществляется следующим образом.

При постановке реакции ХЛ 0,5 мл образца перитонеальной жидкости, полученной при пункции Дугласова пространства, помещают в стерильную пробирку со средой RPMI 1640 (Биолот. СПб) с добавлением 20 ME гепарина на 1 мл. Исследование проводят дважды - до туберкулиновой пробы и через 72 часа после. Подсчитывают количество клеток в пунктате, в световом микроскопе в камере Горяева. Люминолзависимая хемилюминесценция регистрируется на приборе VIKTOR 2 1420 (Wallas. Финляндия) в 96 - луночных белых непрозрачных платах (фирма Costar). Для определения уровня спонтанной хемилюминесценции в каждую лунку вносят 20 мкл пунктата в среде, 40 мкл раствора люминола 104 М, 140 мкл сбалансированного раствора Хенкса (Биолот) рН 7,2.

Для постановки индуцированной пробы в лунку вносят 20 мкл пунктата в среде, 20 мкл зимозана, опсонизированного сывороткой крови доноров (либо фарболмиристатом 20 мкл), 40 мкл люминола, 120 мкл раствора Хенкса. Результаты оценивают в динамике в течение 40 минут и выражают светосуммой, т.е. количеством импульсов в секунду, подсчитанным в течение указанного времени.

Данный способ позволяет объективно оценивать развитие воспалительного процесса в маточных трубах в ответ на введение туберкулина. Выявлено достоверное повышение хемилюминесценции в ответ на индуктор после постановки сегментарных проб у женщин с генитальным туберкулезом по сравнению с больными неспецифическими гинекологическими заболеваниями (см. табл.). Диагностическим критерием у отдельно взятой больной считается повышение индуцированной ХЛ более чем в 2 раза по сравнению с исходным уровнем.

ТаблицаОсобенности хемилюминесцентного ответа клеток пунктата Дугласова пространства у больных туберкулезом женских гениталийГруппы больныхХемилюминесценцияиндуцированная фарболмиристатом (имп/с за 40 мин)индуцированная зимозаном (имп/с за 40 мин)До постановки пробПосле постановки пробДо постановки пробПосле постановки пробНеспецифические заболевания
N=527,5±6,738,6±31,3476,9±27.273,5±56.6Туберкулез
N=88.6±231,7±10,3^*38,9±8,8184,8±70,9^*

^* - Различия по сравнению с соответствующими показателями до постановки проб.

Способ обладает высокой чувствительностью 87,5% и специфичностью 98,7%.

Клинические примеры.

Пример №1. Больная С., 32 лет, История болезни №326; поступила в ГУ "СПб НИИФ" в 2003 году. Жалобы при поступлении на оскуднение месячных с октября 2002 года, бесплодие в течение последних 2-х лет, слабость, потливость, потерю веса - 6 кг. Месячные с 13 лет, регулярные, 5-6 дней через 28-30, обильные, безболезненные. С 2002 года отмечает оскудение месячных. Объективно: Наружные половые органы развиты правильно. В зеркалах: шейка матки и слизистая влагалища обычной окраски, шейка матки с явлениями эндоцервицита. Бимануальное исследование: тело матки не увеличено, подвижное, безболезненное. Правый яичник при пальпации безболезненный, не увеличенный. Слева в области придатков пальпируется слабо, болезненное образование неправильной формы. Слева свод укорочен.

Гистеросальпингограмма: полость матки обычных размеров с неровными контурами в области дна справа. Трубы контрастированы с обеих сторон на протяжении 3-4 см, заканчиваются шарообразными расширениями, непроходимы. В шеечном канале неровность контуров.

После постановки сегментарных проб на передней брюшной стенке у больной появились боли внизу живота, усилились слабость, потливость. При гинекологическом осмотре отмечено появление болезненности слева в области придатков и заднего свода влагалища, на основании чего очаговая реакция расценена как положительная. Общая реакция положительная: после туберкулиновых проб у больной усилились слабость, потливость. Местная реакция на введение туберкулина отрицательная. Серологические реакции: РПК 47 усл. ед, РПГ 33,0 усл. ед, ИФА 0,326 ед. опт. плотн. - все положительные. ИФА пунктата Дугласова пространства до проб 0,426 ед. опт. плотн., после проб 0,440 ед. опт. плотн, АДА пунктата до проб 6,5 ед., после проб 10,1 ед., что является диагностическими критериями на туберкулез. Уровень зимозаниндуцированной люминолзависимой хемилюминесценции в жидкости из Дугласова пространства после постановки сегментарных проб в пять раз по сравнению с исходной, с 39,9 имп/с за 40 мин до 205,4 имп/с за 40 мин, уровень люминолзависимой хемилюминесценции, индуцированной фарболмиристатом, увеличился в три раза с 10,0 имп/с за 40 мин до 34,7 имп/с за 40 мин, что является диагностическим критерием.

Диагноз: Туберкулез придатков матки активный, МБТ отрицательно. Бесплодие II.

Пример №2. Больная Б. 27 лет, История болезни №381; поступила в клинику ГУ "СПб НИИФ". Жалобы на отсутствие беременности в течение 1.5 лет. Месячные с 12 лет по 6-7 дней через 30, регулярные, болезненные в 1-й день, обильные. В 2001 году начала обследоваться по поводу отсутствия беременности.

Объективно: Наружные половые органы развиты правильно. В зеркалах: Слизистая влагалища обычной окраски, на шейке матки эрозия. Бимануальное исследование: тело матки увеличено, соответствует 5/6 недель беременности, плотное крупнобугристое, подвижное, чувствительно при пальпации. Слева придатки не пальпируются, пяжистая область их пальпации болезненна. Справа пальпируется увеличенный чувствительный яичник.

Гистеросальпингограмма: полость матки несколько увеличена в размерах, девиирует влево, в области маточных углов дефекты наполнения не исключены, гиперплазия слизистой, полипы. Левая труба не контрастирована. Правая труба истончена, контрастирована до ампулярного отдела, превращенного в сактосальпинкс.

В ходе обследования больной были поставлены градуированная кожная проба и градуированная проба Манту в V и VI разведениях на предплечьях. Местная реакция находилась в пределах нормэргии. Общая и очаговая - отрицательные. Пациентке поставлены сегментарные пробы на передней брюшной стенке. Местная реакция отрицательная. Общей и очаговой реакций также не зарегистрировано. Результаты комплексного обследования подтвердили неспецифический характер патологического процесса. При этом прироста уровня хемилюминесценции перитонеальной жидкости не зарегистрировано.

Таким образом, приведенные примеры иллюстрируют информативность заявленного способа для диагностики туберкулеза женских половых органов.

Изобретение относится к области медицины, в частности к фтизиатрии. Способ обеспечивает повышение достоверности диагностики за счет максимального приближения забора биологического материала к очагу туберкулезного воспаления. Проводят исследование биологического материала при помощи хемилюминесценции, при этом определяют уровень люминолзависимой хемилюминесценции перитонеальной жидкости до проведения сегментарных туберкулиновых проб на передней брюшной стенке и через 72 часа после проведения и при увеличении исходного показателя более чем в 2 раза диагностируют туберкулез. 1 табл.

Способ диагностики туберкулеза гениталий у женщин, включающий исследование биологического материала при помощи хемилюминесценции, отличающийся тем, что определяют уровень люминолзависимой хемилюминесценции перитонеальной жидкости до проведения сегментарных туберкулиновых проб на передней брюшной стенке и через 72 ч после проведения и при увеличении исходного показателя более чем в 2 раза диагностируют туберкулез.