СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ХРОНИЧЕСКОГО АБАКТЕРИАЛЬНОГО ПРОСТАТИТА Российский патент 2008 года по МПК G01N33/68 G01N33/52 

Изобретение относится к области медицины и найдет применение в урологии, в частности при дифференциальной диагностике форм хронического абактериального простатита.

Хронический простатит остается в настоящее время весьма распространенным, недостаточно изученным и плохо поддающимся лечению заболеванием. Он поражает мужчин преимущественно молодого и среднего возраста, то есть наиболее сексуально активных, нередко осложняется нарушением копулятивной и генеративной функций.

Очевидным является не только медицинское, но и социальное значение проблемы повышения эффективности диагностики и лечения хронического простатита.

Современная медицина не располагает углубленными и достоверными сведениями относительно причинных факторов и механизмов развитие хронического простатита, особенно абактериального. В большинстве случаев хронического простатита его этиология, патогенез и патофизиология остаются неизвестными (Nickel J.C: Простатит: инфекционное заболевание? Infect Urol 2000a; 13: 31-38).

Наиболее распространенной на сегодняшний день в мире является предложенная Национальным Институтом Здоровья США (1995 г.) классификация, в которой особенно выделяется категория III - хронический абактериальный простатит с воспалительным компонентом и без оного (Лоран О.Б., Сегал А.С. Хронический простатит. В кн.: Х Российский сьезд урологов. Материалы: Простатит. Москва, 1-3 октября 2002 г. М.; 2004. 209-222.).

В настоящее время основными методами диагностики хронического простатита являются микроскопические, бактериологические и иммунологические методы исследования мочи, секрета предстательной железы эякулята, крови.

При изучении доступной медицинской и патентной литературы выявлены различные способы диагностики хронического простатита.

Так, в заявке №96114641/14 от 19.07.96. Бюл.№3, 1998 г. МПК G01N 33/53, 33/48 описан «Способ диагностики хронического простатита», предусматривающий определение уровня растворимого антигена лейкоцитов-2 (РАЛ-2) в сперме и при его содержании 20 мкг/мл и выше диагностируют хронический простатит.

В патенте РФ №20001133206/14 от 06.12.01. Бюл. №23, 2003 г. МПК G01N 33/92 описан «Способ диагностики активности течения хронического простатита», при котором проводят исследование секрета предстательной железы, при этом в нем определяют концентрацию диеновых коньюгатов и шиффовых оснований, рассчитывают коэффициент активности воспаления. При уменьшении его значения активность течения хронического простатита увеличивается.

Недостатками указанных способов является неточность диагностика различных форм хронического простатита.

В качестве прототипа взят способ диагностики, описанный в статье Daniel A Shoskes, Qussay Albakri, Kim Thomas and Daniel Cook «Полиморфизм цитокинов при хроническом простатите/синдроме хронической тазовой боли: связь с диагнозом и ответом на проводимую терапию» (The Journal of Urology, July, 2002, Volume 168, Number 1. с.331-335), предусматривающий изучение различных видов цитокинов в крови.

Недостатком данного способа диагностики хронического простатита является его сложность, невозможность определения различных форм хронического простатита.

Целью настоящего изобретения является дифференциальная диагностика форм хронического абактериального простатита. Эта цель достигается путем определения в сыворотке крови активности супероксиддисмутазы (СОД) по методу Mistra H.P., Fridovich I., (1972) и каталазы (КТ) по методу Korolyuk M.A. et al., 1988.

Клинические обследования добровольцев - здоровых мужчин - позволили установить, что уровень активности СОД и каталазы в сыворотке крови составляет в среднем 77 усл. ед/мл и 55 Ед/мл соответственно.

Способ определения активности СОД в сыворотке крови осуществляют следующим образом. К сыворотке крови приливают 96%-ный этиловый спирт и хлороформ в соотношении 1:0,3:0,15, перемешивают и добавляют кристаллический дигидрофосфат калия из расчета 300 мг на 1 мг сыворотки крови. Смесь энергично встряхивают и центрифугируют 20 мин при 6000 об/мин. В надосадочной жидкости определяют активность СОД. Об активности фермента судят по степени ингибирования восстановления нитросинего тетразолия в присутствии супероксидрадикала, генерируемого в реакции восстановления адреналином молекулярного кислорода в щелочной среде. В состав инкубационной смеси входят 2 мл 0,05 М Na-карбонатного буфера, рН 10,2, 0,1 мл 0,05% раствора нитросинего тетразолия, 0,02 мл супернатанта (опыт) или 0,02 мл дистиллированной воды (контроль). Реакцию запускают добавлением в опытную и контрольную пробы 0,05 мл 0,1% раствора адреналина гидрохлорида. Инкубацию осуществляют 10 мин при 30°С, затем измеряют величину оптической плотности на спектрофотометре при длине волны 540 нм. Активность СОД выражают в условных единицах на 1 мл сыворотки крови, принимая за 1 усл. ед. 50% ингибирования процесса восстановления нитросинего тетразолия, вызванного внесением биоматериала в инкубационную среду.

Принцип способа определения активности каталазы в сыворотке крови основан на способности перекиси водорода образовывать с солями молибдата стойкий окрашенный комплекс и осуществляется следующим образом.

В контрольную пробирку вносят 2,0 мл 0,03% раствора перекиси водорода, 1,0 мл 4% раствора молибдата аммония, 0,1 мл сыворотки крови, без следов гемолиза. В опытную пробирку вносят 2,0 мл 0,03% раствора перекиси водорода и 0,1 мл сыворотки крови, инкубируют 10 минут при комнатной температуре, реакцию останавливают добавлением 1,0 мл 4% раствора молибдата аммония. В контрольную и опытную пробирки приливают по 0,5 мл 10% раствора трихлоруксусной кислоты, перемешивают и центрифугируют 20 мин при 3000 об/мин, интенсивность окраски центрифугата измеряют на спектрофотометре при длине волны 410 нм против дистиллированной воды.

Активность каталазы выражают в Ед/мл (единицах действия на мл в мин), численно равных % ингибирования реакции за счет каталазы по отношению к контрольной пробе. Расчет проводят по формуле:

А(Ед/мл)=E_K-E_O/E_K×100, где Е_K и Е_О - экстинкции соответственно контрольной и опытной проб.

При снижении активности СОД от 69 до 62 усл. ед/мл и повышении активности каталазы от 66 до 74 Ед/мл диагностируют хронический абактериальный простатит (ХАП) воспалительной формы, а при активности СОД от 62 усл. ед/мл и ниже и повышения активности каталазы от 60 до 66 Ед./мл - ХАП невоспалительной формы.

Пример №1

Больной А., 25 лет.

Жалобы: боли в надлобковой области и промежности.

Анамнез: считает себя больным в течение двух лет. Ежегодно проходил противорецидивный курс консервативной терапии с незначительным эффектом.

Физикальное исследование: при пальцевом ректальном исследовании - железа уплотнена, симметрична, обычной формы, умеренно болезненна.

Индекс простатических симптомов (ИПС) - 23.

Лабораторная диагностика:

Простато-специфический антиген (ПСА) - 0,04 нг/мл.

Оценка мочи и секрета простаты по Meares and Stamey.

1 - порция мочи (ПМ) - 1-2 лейк. в поле зрения, микрофлора не обнаружена.

2 - ПМ - 1-2 лейк. в поле зрения, микрофлора не обнаружена.

Секрет простаты (СП) - лейк-ты до 50 в поле зрения. S. Epidermidis - менее 10³ в 1 мл.

3 - ПМ - лейк-ты до 100 в поле зрения, микрофлора не обнаружена.

Уровень активности СОД в сыворотке крови - 65,34 усл. ед/мл.

Уровень активности каталазы в сыворотке крови - 71,05 Ед/мл.

Поставлен диагноз: хронический абактериальный простатит, воспалительная форма.

Пример №2

Больной Т., возраст: 30 лет.

Жалобы: на боли в промежности, учащенное болезненное мочеиспускание, ослабленную эрекцию.

Анамнез: считает себя больным около 5 лет, инфекций, передаваемых половым путем, не отмечает. Неоднократно проводил курсы консервативной терапии у уролога с незначительным, временным эффектом.

Физикальное исследование: при пальцевом ректальном исследовании: предстательная железа обычной формы, незначительно болезненная.

ИПС-31.

Лабораторная диагностика:

ПСА - 1.26 нг/мл.

Оценка мочи и секрета простаты по Meares and Stamey.

1 - ПМ - 0-1 лейк. в поле зрения, микрофлора не обнаружена.

2 - ПМ - 0-1 лейк. в поле зрения, микрофлора не обнаружена.

СП - 4 - 5 лейк. в поле зрения, микрофлора не обнаружена.

3 - ПМ 4-5 лейк. в поле зрения, микрофлора не обнаружена.

Уровень активности СОД в сыворотке крови - 45,64 усл. ед/мл.

Уровень активности каталазы в сыворотке крови - 64,81 Ед/мл.

На основании полученных данных поставлен диагноз: хронический абактериальный простатит, невоспалительная форма.

Преимущества предлагаемого способа по сравнению с прототипом состоят в том, что он позволяет проводить дифференциальную диагностику между формами хронического абактериального простатита и в зависимости от этого определять тактику лечения.

Супероксиддисмутаза (СОД) и каталаза (КТ) являются важнейшими компонентами ферментативной антиоксидантной системы, отвечающими за защиту организма от определенных форм активных кислородных метаболитов. Они отличаются высокой специфичностью действия, клеточной и органной локализацией и использованием в качестве катализаторов металлов. СОД катализирует реакцию дисмутации супероксидного радикала с образованием перекиси водорода и молекулярного кислорода со скоростью, превышающей на три порядка спонтанную дисмутацию.

Широкое участие супероксидных радикалов в ферментетивных реакциях синтеза простагландинов и метаболизма ксенобиотиков, а также клеточной пролиферации и экспрессии определенных генов позволяет рассматривать СОД как фермент, выполняющий не только защитную, но и регуляторную функции.

Синергистом СОД в клетке является каталаза, препятствующая накоплению перекоси водорода, образующаяся при дисмутации супероксидного анионрадикала и при аэробном окислении восстановленных флавопротеидов. Фермент катализирует двухэлектронное восстановление перекиси водорода до воды: 2Н₂O₂→КТ→Н₂O₂+O₂.

Каталаза - гемсодержащий фермент, максимальное содержание которого обнаружено в эритроцитах, а также в печени и почках; длительно сохраняет свою высокую активность, почти не требует энергии активации.

Из-за большой молекулярной массы каталаза плохо проникает внутрь клеток; уровень внутриклеточной каталазы регулируется образованием перекиси водорода.

Предлагаемый способ апробирован на 37 больных и показал высокую информативность.

Изобретение относится к области медицины и найдет применение в урологии, в частности при дифференциальной диагностике форм хронического абактериального простатита. Сущность способа: у больных в сыворотке крови определяют активности супероксиддисмутазы (СОД) и каталазы (КТ). При снижении активности СОД от 69 до 62 усл. ед/мл и повышении активности каталазы от 66 до 74 Ед/мл диагностируют хронический абактериальный простатит (ХАП) воспалительной формы. При активности СОД от 62 усл. ед/мл и ниже и повышении активности каталазы от 60 до 66 Ед./мл - ХАП невоспалительной формы. Использование способа позволяет проводить дифференциальную диагностику между формами хронического абактериального простатита, что дает возможность определять тактику лечения.

Способ дифференциальной диагностики хронического абактериального простатита, предусматривающий клиническое обследование, отличающийся тем, что в сыворотке крови определяют уровни активности супероксиддисмутазы (СОД) и каталазы (КТ), и при снижении активности СОД от 69 до 62 усл. ед./мл и повышении активности каталазы от 66 до 74 Ед./мл диагностируют хронический абактериальный простатит (ХАП) воспалительной формы, а при активности СОД от 62 усл. ед./мл и ниже и повышении активности каталазы от 60 до 66 Ед./мл - ХАП невоспалительной формы.