СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ФОРМ ХРОНИЧЕСКОГО АБАКТЕРИАЛЬНОГО ПРОСТАТИТА Российский патент 2009 года по МПК G01N33/84 

Изобретение относится к области медицины и найдет применение в урологии, в частности при диагностике форм хронического абактериального простатита.

Хронический простатит считается самым распространенным урологическим заболеванием у мужчин моложе 50 лет и третьим по частоте урологическим диагнозом у мужчин старше 50 лет, составляя 8% амбулаторных вызовов к урологу. С возрастом частота заболевания простатитом увеличивается и достигает 30-73%. Влияние простатита на качество жизни сопоставимо с инфарктом миокарда, стенокардией, болезнью Крона, что обусловливает также значительные психологические и социальные проблемы у больных хроническим простатитом мужчин трудоспособного возраста.

Наиболее распространенной на сегодняшний день в мире является предложенная Национальным Институтом Здоровья СИТА (1995 г.) классификация, в которой особенно выделяется категория III - хронический абактериальный простатит с воспалительным компонентом и без оного (Лоран О.Б., Сегал А.С. Хронический простатит. В кн.: Х Российский съезд урологов. Материалы: Простатит. Москва, 1-3 октября 2002 г. М., 2004. 209-222.).

Современная медицина не располагает углубленными и достоверными сведениями относительно причинных факторов и механизмов развития хронического абактериального простатита.

В настоящее время основными методами диагностики форм хронического абактериального простатита являются микроскопические, бактериологические и иммунологические методы исследования крови, мочи, секрета предстательной железы, спермы.

При изучении доступной медицинской и патентной литературы выявлены различные способы диагностики хронического простатита.

В заявке на изобретение №2004100574/15, Бюл. №31, 2005 г. описан «Способ лабораторной диагностики хронического простатита», при котором проводят исследование 10 мл пред- и постмассажной порций утренней мочи, при этом определяют количество лейкоцитов в 1 мл каждой порции. При различной степени повышения этого показателя проводят дифференциальную диагностику хронического простатита.

В патенте РФ №2210779, Бюл. №23, 2003 г. МПК G01N 33/92 описан «Способ диагностики активности течения хронического простатита», при котором проводят исследование секрета предстательной железы, при этом в нем определяют концентрацию диеновых коньюгатов и шиффовых оснований, рассчитывают коэффициент активности воспаления. При уменьшении его значения активность течения хронического простатита увеличивается.

В патенте РФ №2103691, Бюл.№3, 1998 г. МПК G01N 33/53, 33/48 описан «Способ диагностики активности течения хронического простатита», предусматривающий определение уровня растворимого антигена лейкоцитов - 2 (РАЛ - 2) в сперме и при его содержании 20 мкг/мл и выше диагностируют хронический простатит.

Недостатками указанных способов является неточность диагностики различных форм хронического простатита.

В качестве прототипа взят способ диагностики, описанный в патенте РФ №2276359. Бюл. №13, 2006 г. МПК G01N 33/53, 33/68 «Способ дифференциальной диагностики хронического абактериального простатита», предусматривающий клиническое обследование, при котором определяют уровень активности α₂ - макроглобулина в секрете простаты. При его активности от 0,1 до 0.2 ИЕ/мл диагностируют хронический абактериальный простатит невоспалительной формы, а при 0,2 ИЕ/мл и выше диагностируют хронический абактериальный простатит воспалительной формы.

Недостатком данного способа диагностики хронического абактериального простатита является сложность получения достаточного количества биоматериала, и поэтому процедуру его получения иногда приходится повторять.

Целью настоящего изобретения является упрощение способа диагностики форм хронического абактериального простатита.

Эта цель достигается путем количественного определения в сперме содержания оксида азота, высвобождаемого макрофагальной NO-синтазой по методу Шебзухова Ю.В. и соавт., (Шебзухов Ю.В., Вайсбурд М.Ю., Артюшкин К.В., Мысякин Е.Б. // Синтез окиси азота перитонеальными макрофагами мыши под действием С-реактивного протеина // Бюл. экспериментальной биологии и медицины, 1998, т.25, №1, с.48-50.).

Ход определения. Сперму разводят холодным физиологическим раствором, после чего подвергают центрифугированию в течение 5 минут при 1500 оборотов в минуту. Для выделения суспензии лейкоцитов берут супернатант и помещают в центрифужную пробирку; центрифугируют 15 минут при скорости 1500 оборотов в минуту. Осевшие лейкоциты собирают автоматической микропипеткой на 100 мкл, после чего помещают их в центрифужную пробирку с 2 мл холодного физиологического раствора для отмывки клеток и центрифугируют 15 минут при скорости 1500 оборотов в минуту. Супернатант аккуратно удаляют, а из придонных клеток в небольшом количестве жидкости делают суспензию путем умеренного взбалтывания, не вызывая сильного пенообразования. Стандартизацию проводят путем подсчета числа клеток в камере Горяева и соответствующего разведения материала физиологическим раствором, после чего получают рабочую суспензию лейкоцитов. Продукцию оксида азота мононуклеарными клетками спермы определяют по методике Ю.В.Шебзухова и соавторов (1998). Выделенную по вышеописанному методу суспензию лейкоцитов смешивают в равных объемах с раствором L-аргинина гидрохлорида в физиологическом растворе (2:1) и помещают в специальный инкубатор-термостат; инкубируют при температуре 37°С в течение 24 часов. О выработке оксида азота судят по качественной реакции на нитриты с помощью реактива Грисса. Количество выработанного оксида азота фагоцитирующими клетками спермы выражают в [нМ/2·10⁵ клеток]·10^-3.

При содержании выработанного NO фагоцитирующими клетками спермы от 38 до 26 [н/М 2·10⁵ клеток]·10^-3 диагностируют хронический абактериальный простатит (ХАП) воспалительной формы, а при содержании от 23 [н/М 2·10⁵ клеток]·10^-3 и ниже - ХАП невоспалительной формы.

Пример №1.

Больной Ц., 30 лет

Жалобы: боли в паховых областях, промежности, крестцовой области.

Анамнез: считает себя больным около года. К врачу не обращался.

Физикальное исследование: при пальцевом ректальном исследовании - железа уплотнена, симметричная, с четкими границами.

Индекс простатических симптомов (ИПС) - 25.

Лабораторная диагностика:

Простато-специфический антиген (ПСА) - 0,85 нг/мл.

Оценка мочи и секрета простаты по Meares and Stamey.

1 - порция мочи (ПМ) - 1-2 лейк. в поле зрения, уропатогенная микрофлора не обнаружена.

2 - ПМ - 0-1 лейк., уропатогенная микрофлора не обнаружена. Секрет простаты (СП) - до 100 лейк., уропатогенная микрофлора не обнаружена.

3 - ПМ -до 100 лейк., уропатогенная микрофлора не обнеружена.

Сперма - 40-50 лейк., уропатогенная микрофлора не обнаружена.

Содержание оксида азота спермы - 30,2 [н/М 2·10⁵]·10^-3.

Поставлен диагноз: Хронический абактериальный простатит, воспалительная форма.

Пример №2.

Больной Т., возраст: 39 лет.

Жалобы: на боли в надлобковой области, промежности.

Анамнез: считает себя больным около 3 лет. От лечения у уролога улучшения в состоянии не отмечает.

Физикальное исследование: при пальцевом ректальном исследовании - предстательная железа симметричная, с четкими границами, обычной формы, незначительно болезненная.

ИПС-24.

Лабораторная диагностика:

ПСА - 0,08 нг/мл.

Оценка мочи и секрета простаты по Meares and Stamey.

1 - ПМ - 0-1 лейк. в поле зрения, уропатогенная микрофлора не обнаружена.

2 - ПМ - 0-1 лейк., уропатогенная микрофлора не обнаружена.

СП - 2-4 лейк., уропатогенная микрофлора не обнаружена.

3 - ПМ - 4-5 лейк., урпатогенная микрофлора не обнаружена.

Сперма - 5-7 лейк., уропатогенная микрофлора не обнаружена.

Содержание оксида азота спермы - 18,7 [н/М 2·10⁵]·10^-3.

На основании полученных данных поставлен диагноз хронический абактериальный простатит, невоспалительная форма.

Преимущества предлагаемого способа по сравнению с прототипом состоят в том, что он позволяет упростить диагностику форм хронического абактериального простатита и в зависимости от этого определять тактику лечения.

В макрофагах, нейтрофилах, гепатоцитах, мезангиальных и гладкомышечных клетках синтез оксида азота определяет индуцибельная NO-синтаза, при стимуляции которой продукция оксида азота может возрастать в десятки раз, при этом оксид азота приобретает цитотоксические свойства, превращаясь в пероксинитрит. Образовавшийся оксид азота в условиях оксидативного стресса, с наибольшей скоростью реагирует с супероксидным анион-радикалом и переходными металлами: гемовыми комплексами железа и меди, железосерными структурами. Реакция оксида азота с супероксидом протекает с большой скоростью, при этом образуется пероксинитрит.

Пероксинитрит окисляет железосерные активные центры, тиолы и нитрозилирует белки по остаткам тирозина. В нейтральной среде пероксинитрит достаточно нестабилен и после протонирования разлагается с образованием гидроксильного радикала - короткоживущего и исключительно реакционно-способного интермедиата.

Цитотоксическое действие оксида азота, подобно эффекту других активных форм кислорода может проявляться и в отношении собственных клеток организма.

Предлагаемый способ апробирован на 30 больных и показал высокую информативность.

Изобретение относится к области медицины, а именно к урологии, и касается способа дифференциальной диагностики форм хронического абактериального простатита. Способ заключается в определении содержания оксида азота в сперме. При содержании выработанного NO фагоцитирующими клетками спермы от 38 до 26 [н/М 2·10⁵ клеток]·10^-3 диагностируют хронический абактериальный простатит (ХАП) воспалительной формы, а при содержании от 23 [н/М 2·10⁵ клеток]·10^-3 и ниже - ХАП невоспалительной формы. Использование способа позволяет с высокой информативностью проводить дифференциальную диагностику между формами хронического абактериального простатита.

Способ дифференциальной диагностики форм хронического абактериального простатита, предусматривающий клиническое обследование, отличающийся тем, что в сперме определяют содержание оксида азота, высвобождаемого макрофагальной NO-синтазой и при снижении количества выработанного NO фагоцитирующими клетками спермы от 38 до 26 [н/М 2·10⁵ клеток]·10^-3 диагностируют хронический абактериальный простатит (ХАП) воспалительной формы, а при содержании от 23 [н/М 2·10⁵ клеток]·10^-3 и ниже - ХАП невоспалительной формы.