КОМПЛЕКСНЫЙ ПРЕПАРАТ-ПРОБИОТИК В ИММОБИЛИЗОВАННОЙ И ЛИОФИЛИЗИРОВАННОЙ ФОРМЕ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ Российский патент 2008 года по МПК A61K35/74 A61P43/00 

Описание патента на изобретение RU2317089C2

Изобретение относится к препаратам медицинского и ветеринарного назначения и способам их получения и может быть использовано в биотехнологии, медицине и сельском хозяйстве.

Для профилактики и лечения многих патологических состояний, обусловленных нарушением эндоэкологии, широкое распространение получили энтеросорбенты. Это различные типы активных углей, например карбактин, карболонг, микросорб, полифепан и т.д. (Сенов П.Л. Фармацевтическая химия. - М.: Медицина, 1978, с.132-133; патент РФ N2029546, МПК6 А61К 9/16, опубл. 27.02.95 г.), природные материалы и их аналоги (кристаллическая микроцеллюлоза, цеолиты, хитозаны, пектины и т.д.), синтетические минеральные сорбенты и другие материалы, которые используются для очищения организма от шлаков, радионуклидов, тяжелых металлов и токсинов. Энтеросорбенты снижают эффекты экзо- и эндотоксикозов.

Однако энтеросорбенты не устраняют причин, вызывающих эффекты экзо- и эндотоксикозов, как правило, они не селективны, работают в основном на избыток субстрата, могут оказывать негативное действие из-за сорбции нужных для организма метаболитов (витаминов, гормонов) и не обеспечивают активно нормализацию микробиоценоза.

Функции нормальной микрофлоры в организме являются жизненно важными и очень обширными: синтезирующая, регуляторная, десенсибилизирующая, дезинтоксикационная, ферментативная, защитная и иммуностимулирующая. Для нормализации микробиоценоза широкое распространение получили препараты живых бактериальных клеток: бифидобактерий (межд. заявка (WO) № 85/03848), МКИ А23С 9/12, опубл. 12.09.85 г.), лактобактерий (заявка ЕПВ № 0154614, МКИ А23С 9/123, опубл. 11.09.85 г.), колибактерий и т.д.

Недостатками этих препаратов являются довольно короткие сроки их хранения, если они находятся в жидкой форме, или высокая стоимость, если они изготовлены в сухой форме, а также слабая устойчивость к инактивирующим факторам внешней среды и желудочно-кишечного тракта организма при применении.

Известен комплексный препарат, включающий пористый неорганический носитель и иммобилизованные на нем клетки микроорганизмов (заявка ФРГ №3410650, МКИ С12N 11/14, опубл. 03.10.85 г.). В качестве носителей применяют сталактитовые подложки с двойной структурой пор. Подложки имеют сквозные макропоры, которые делают возможным свободный обмен жидкости и газа из внутренней части носителя в окружающую среду. Размер макропор лежит в пределах величины клеток микроорганизмов.

Недостатком данного препарата является то, что он не предназначен для использования в качестве медицинского или ветеринарного препарата в связи с отсутствием данных о влиянии сталактитового носителя с нанесенными на нем микроорганизмами на микробиоценоз желудочно-кишечного тракта организма человека или животного.

Известен комплексный фармацевтический препарат, включающий фармацевтически приемлемый носитель и иммобилизованные на нем микроорганизмы (межд. заявка (WO) №91/09608, МКИ А61К 35/74, опубл. 11.07.91 г.). Носитель не нарушает жизнеспособности микроорганизмов. В качестве микроорганизмов используют штамм L1a Streptococcus lactis. Препарат предназначен для борьбы с патогенной микрофлорой кишечника человека и животных, вызывающей диарею и другие желудочно-кишечные расстройства.

Недостатком препарата является то, что используемый в нем штамм L1a Streptococcus lactis влияет в основном на патогенную микрофлору кишечника человека и животных, т.е. проявляет антагонистические свойства, но слабо участвует в восстановлении микрофлоры желудочно-кишечного тракта. Кроме того, отсутствуют данные об антацидных свойствах носителя, что свидетельствует о слабой защите носителем иммобилизованных клеток Streptococcus lactis при действии внутренней среды организма с низкими значениями рН.

Известен комплексный бактериальный препарат, включающий носитель и иммобилизованные на нем микробные клетки в концентрации на 1 мм2 2,1×103-1,0×105 (патент РФ №2017486, МПК6 А61К 31/00, опубл. 15.08.94 г.). В качестве носителя используют активированный уголь в виде порошка с размером частиц менее 30 мкм, а в качестве микроорганизмов используют лактобактерии и кишечные палочки.

Недостатком такого препарата является то, что активированный уголь, используемый в качестве носителя, является тонкопористым сорбентом с преобладанием микропор и высокой удельной поверхностью. Вследствие этого микробные клетки расположены на поверхности частиц сорбента и недостаточно защищены при неблагоприятном воздействии окружающей среды. Активированные угли активно поглощают низкомолекулярные биологически активные вещества, витамины и газы кишечника, что ухудшает работу перистальтики. Они быстро забиваются и работают преимущественно в верхних отделах желудочно-кишечного тракта. Кроме того, угли не обладают антацидными свойствами, что не способствует выживаемости нанесенных на них клеток при действии сред с низкими значениями рН. Препарат не предусматривает использование одновременно нескольких штаммов микроорганизмов разных видов, например смеси бифидо- и лактобактерии, что значительно снижает эффективность действия препарата особенно при восстановлении микрофлоры желудочно-кишечного тракта.

Известен препарат-пробиотик в иммобилизованной форме, включающий носитель, представляющий собой сорбент, и клетки эубиотиков, иммобилизованные на указанном носителе, причем клетки эубиотиков используют совместно с питательной средой, а в качестве сорбента используют материал с антацидными свойствами, развитой мезо- и макропористой структурой и объемом макропор не менее 0,01 см3/г в виде порошка с размером частиц не более 0,1 мм, или в виде гранул размером (0,1-5,0) мм, или в виде таблеток при следующем количественном соотношении компонентов препарата, мас. %: клетки эубиотиков с питательной средой и титром 108-108 КОЕ/мл - 1,0-50,0; носитель-сорбент - остальное до 100%.

В качестве сорбента используют пористый материал на основе оксида алюминия с гидрофильно-гидрофобной топохимией поверхности, например энтеросорбент типа СУМС-1, модифицированный углеродом, или энтеросорбент типа СИАЛ, модифицированный кремнийорганическим полимером. В качестве эубиотиков используют бифидо- или лактобактерии или их смесь (патент РФ №2118535, МПК6 А61К 35/74, опубл. 10.09.98 г.).

Однако используемые в указанном препарате сорбенты обладают недостаточной эффективностью сорбции и десорбции бактерий-эубиотиков, а также имеет низкую колонизационную активность входящих в состав препарата бактерий-эубиотиков.

Известен способ получения комплексного препарата бактерий-эубиотиков (патент РФ №2067114, МПК А61К 35/74, опубл. 27.09.96 г.), включающий выращивание в условиях глубинного культивирования культуры штаммов бифидобактерий и стрептококка, смешивание биомассы с защитной средой следующего состава (мас.%): сахароза 25-30; желатин 2-3; сухое молоко 3-5; глутамат натрия 0,5-1 и контактно-сорбционное обезвоживание целевого продукта, которое проводят охлажденным до минус 8-10°С сорбентом, например окисью алюминия, с остаточной влажностью менее 1% при массовом соотношении 1:10-12, соответственно, а досушивание осуществляют в течение 18-20 часов при температуре 0-5°С в замкнутом объеме.

Однако используемый в указанном способе сорбент обладает недостаточной эффективностью сорбции и десорбции бактерий-эубиотиков, а также имеет низкую колонизационную активность бактерий-эубиотиков.

Наиболее близким техническим решением (прототипом) является препарат-пробиотик в иммобилизованной и лиофилизированной форме (патент РФ №2164801, МПК А61К 35/74, опубл. 10.04.01). Препарат включает носитель, представляющий собой сорбент, и клетки пробиотиков, иммобилизованные на указанном носителе, причем клетки пробиотиков используют совместно с питательной средой, а в качестве сорбента используют материал с антацидными свойствами, развитой мезо- и макропористой структурой и объемом макропор не менее 0,01 см3/г в виде порошка с размером частиц не более 0,1 мм, или в виде гранул размером (0,1-5,0) мм, или в виде таблеток, согласно изобретению препарат дополнительно содержит защитную среду, а клетки пробиотиков с питательной средой представляют собой сухой концентрат бифидобактерий на молочной основе с титром 108-1010 КОЕ/г и содержанием аминокислот (мг/100 г сухой биомассы): глутаминовая кислота - 15,0-68,0; глутамин - 8,0-20,0; лейцин - 10,0-50,0; аргинин - 20,0-30,0; цистеин - 50,0-80,0 при следующем соотношении компонентов препарата в сухом виде мас.%: клетки эубиотиков с питательной средой и титром 108-1010 КОЕ/г - 0,1-10,0; защитная среда - 0,1-10,0; носитель-сорбент - остальное до 100%. В качестве защитной среды используют желатин, сахарозу, аскорбиновую кислоту и хлористый натрий при следующем содержании компонентов, мас.%: желатин - 8,5-11,5; аскорбиновая кислота - 0,8-1,2; хлористый натрий - 1,7-3,0; сахароза - остальное до 100%. В качестве сорбента используют пористый материал на основе оксида алюминия с гидрофильно-гидрофобной топохимией поверхности, например энтеросорбент типа СУМС-1, модифицированный углеродом. Препарат в качестве бактерий-пробиотиков дополнительно содержит сухую закваску вязких штаммов ацидофильных бактерий Lactobacillus acidophilus типа АВ, соотношение которых с сухим концентратом бифидобактерий составляет 1:(8-9) соответственно. В качестве бифидобактерий в сухом концентрате используют бактерии Bifidum bifidum №1, или №791, или ЛВА-3, или Bifidobacterium longum 379, или Bifidobacterium adolescentis MC-42, или смесь бактериальных клеток указанных штаммов, взятых в равных весовых долях.

Наиболее близким способом (прототипом) является способ получения комплексного препарата-пробиотика в иммобилизованной и лиофилизированной форме, приведенный в описании к патенту РФ №2164801, МПК А61К 35/74, опубл. 10.04.01, включающий отмывку и стерилизацию пористого энтеросорбента СУМС-1, модифицированного углеродом, и его охлаждение до комнатной температуры, смешивание энтеросорбента и бактерий-эубиотиков с питательной и защитной средами в соотношении не более 1:1 и выдерживание смеси в течение не менее 1 часа при перемешивании и температуре +4°С до полной иммобилизации бактериальных клеток на энтеросорбент, отмывку полученного комплексного препарата в изотоническом солевом растворе с последующим его замораживанием и лиофильной сушкой.

Однако используемые в указанном препарате и способе его получения сорбенты также обладают недостаточной эффективностью сорбции и десорбции бактерий-эубиотиков. Кроме того, наблюдается низкая колонизационная активность входящих в состав препарата бактерий-эубиотиков.

Техническим результатом заявляемых технических решений является создание такого комплексного препарата-пробиотика со способом его получения, который обеспечивал бы более высокую эффективность сорбции и десорбции клеток бактерий энтеросорбентом СУМС-1, определяющей его клиническую эффективность, и более высокую колонизационную активность бактерий-эубиотиков.

Указанный технический результат достигается тем, что в комплексном препарате-пробиотике в иммобилизованной и лиофилизированной форме, включающем носитель, представляющий собой пористый энтеросорбент СУМС-1 на основе оксида алюминия, модифицированный углеродом с гидрофильно-гидрофобной топохимией поверхности, и клетки бактерий-эубиотиков с питательной и защитной средами, иммобилизованными на указанном носителе-энтеросорбенте, согласно изобретению клетки бактерий-эубиотиков с питательной средой представляют собой лиофилизированный концентрат консорциума бифидобактерий, или лактобактерий, или их смесь с титром 108-1010 КОЕ/г, а в качестве пористого модифицированного углеродом энтеросорбента СУМС-1 он содержит энтеросорбент СУМС-1, дополнительно обработанный раствором соли металла в соответствии со способом по п.п.5 и 6 формулы изобретения при следующем соотношении компонентов препарата в лиофилизированном виде, мас.%:

клетки с питательной средой консорциума бифидо-,или лактобактерий-эубиотиков, или их смесьс титром 108-1010 КОЕ/г1,0-10,0защитная среда0,1-10,0энтеросорбент СУМС-1, дополнительно обработанныйраствором соли металлаостальное до 100%.

Препарат с содержанием микробной биомассы менее 0,1 мас.% имеет низкий биотитр с преобладанием прочно связанных с сорбентом клеток, т.е. действует преимущественно как энтеросорбент. Количество микробных клеток, вводимых в препарат, не превышает 15 мас.%, вследствие чего вся биомасса бактерий препарата находится в защищенном состоянии. При этом энтеросорбент СУМС-1 в препарате сохраняет основные свои свойства, обеспечивающие связывание и выведение из кишечника токсинов, продуктов незавершенного метаболизма и патогенных микроорганизмов.

В качестве консорциума бифидобактерий он содержит штаммы бифидобактерий: Bifidobacterium bifidum 8-3, Bifidobacterium longum ДВА-13 и Bifidobacterium adolescentis ГО-13 в соотношении 8:1:1.

В качестве консорциума лактобактерий он содержит штаммы лактобактерий Lactobacillus acidophilus 57S, Lactobacillus plantarum П-75, Lactobacillus casei С6 в соотношении 4:1,0:1,0.

Смесь консорциумов бифидо- и лактобактерий имеет соотношение от 1:1 до 3:1.

Указанный технический результат достигается также тем, что в способе получения комплексного препарата-пробиотика в иммобилизованной и лиофилизированной форме, включающем отмывку и стерилизацию пористого энтеросорбента СУМС-1, модифицированного углеродом, и его охлаждение до комнатной температуры, смешивание энтеросорбента и бактерий-эубиотиков с питательной и защитной средами в соотношении не более 1:1 и выдерживание смеси в течение не менее 1 часа при перемешивании и температуре не выше +4°С до полной иммобилизации бактериальных клеток на энтеросорбент, отмывку полученного комплексного препарата в изотоническом солевом растворе с последующим его замораживанием и лиофильной сушкой, согласно изобретению перед стерилизацией энтеросорбент СУМС-1 обрабатывают раствором соли металла в объемном соотношении не более 1:1 и отмывают от реагента 2-3-кратным объемом дистиллированной воды, а в качестве бактерий-эубиотиков используют концентрат консорциума бифидобактерий, или лактобактерий, или их смесь с титром 108-1010 КОЕ/г.

В качестве раствора соли металла используют 3%-ный раствор сульфата магния.

В качестве консорциума бифидобактерий используют штаммы бифидобактерий: Bifidobacterium bifidum 8-3, Bifidobacterium longum ДВА-13, Bifidobacterium adolescentis ГО-13 в соотношении 8:1:1, а в качестве консорциума лактобактерий используют штаммы лактобактерий Lactobacillus acidophilus 57S, Lactobacillus plantarum П-75 и Lactobacillus casei С6 в соотношении 4:1,0:1,0. Смесь консорциумов бифидо- и лактобактерий имеет соотношение от 1:1 до 3:1.

Штамм бифидобактерий: Bifidobacterium bifidum 8-3 депонирован во ВНИИгенетика в ВКПМ под №В 5799. Штамм Bifidobacterium longum ДВА-13 депонирован во ВНИИгенетика в ВКПМ под №В 5894. Штамм Bifidobacterium adolescentis ГО-13 депонирован во ВНИИгенетика в ВКПМ под № В 2944.

Штамм лактобактерий Lactobacillus acidophilus 57S депонирован во ВНИИгенетика в ВКПМ под №В 5863. Штамм Lactobacillus plantarum П-75 депонирован во ВНИИгенетика в ВКПМ под №В 3962. Штамм Lactobacillus casei С6 депонирован во ВНИИгенетика в ВКПМ под №В 5724.

Введение в препарат сухой микробной биомассы с биотитром 108-1010 КОЕ/г обеспечивает ему оптимальную биологическую активность. Если исходная микробная биомасса имеет титр меньше 108 КОЕ/г, то препарат обладает недостаточной биологической активностью и при введении в желудочно-кишечный тракт проявляет слабый лечебно-профилактический эффект. Титр сухой микробной биомассы более 1010 КОЕ/мл значительно увеличивает стоимость препарата без значительного увеличения лечебно-профилактического эффекта.

Основу жидкой бактериальной суспензии для сушки составляют клетки-эубиотики в молочной питательной среде с повышенным титром клеток (109-1010 КОЕ/мл) - жидкий концентрат бифидобактерий. Молочная питательная среда с клетками-эубиотиками содержит повышенное количество белка (не менее 12% СОМ - сухого остатка молока). Это позволяет увеличить антибиотические свойства бактерий-пробиотиков в препарате. Кроме того, повышенное количество белка увеличивает антацидные свойства препарата. Высокая концентрация клеток в жидкой бактериальной суспензии позволяет их использовать в препарате в сухом виде в концентрации 1,0-10,0% с титром 108-1010 КОЕ/мл.

Носитель-сорбент представляет собой механически прочные частицы порошка, или гранулы, или таблетки, выполненные из оксида алюминия, поверхность которых модифицирована углеродом при получении сорбента типа СУМС-1 черного цвета. Сорбенты имеют удельную поверхность до 300 м2/г и развитую структуру мезо- и макропор. Размеры макропор сорбента соизмеримы с размерами микробных клеток, что позволяет заполнять макропоры указанными клетками. Регулированием процентного содержания углерода в сорбенте с последующими окислительно-восстановительными его обработками обеспечивается получение носителя с заданными гидрофильно-гидрофобными и другими топохимическими характеристиками. Сорбенты типа СУМС-1 в меньшей степени, чем другие аналогичные материалы, извлекают витамины и гормоны из организма и не нарушают перистальтику, что делает возможным их применение длительными курсами. Наличие в сорбенте оксида алюминия придает его поверхности определенные буферные антацидные свойства, что способствует лучшему сохранению активности и выживанию иммобилизованных на нем микробных клеток, например, при прохождении препарата через желудок (устраняет отрицательное влияние желудочного сока на микробные клетки) или при других неблагоприятных условиях (низких рН).

Макропористая структура носителя-сорбента, ячейки которого заполнены микробными клетками, также способствует защите этих иммобилизованных клеток от инактивирующих факторов внешней среды. Причем микробные клетки, находящиеся в порах, и клетки, находящиеся близко к внешней поверхности носителя-сорбента, отличаются по своим десорбционным способностям, и такая неоднородность свойств клеток обеспечивает пролонгированное действие препарата и способствует колонизации не только верхних, но и нижних отделов кишечника. Пористый носитель, являясь энтеросорбентом, снимает эффекты местного (а через него и общего) токсикоза, что способствует выживаемости бактерий препарата и микрофлоры кишечника, а также снижает нагрузку на органы детоксикации человека или животного. Кроме того, при использовании в препарате в качестве микробных клеток консорциума бифидобактерий, или консорциума лактобактерий, или смеси консорциумов бифидо- и лактобактерий обеспечивается не только вытеснение из желудочно-кишечного тракта патогенных микроорганизмов (за счет антагонистических свойств указанных бактерий), но и восстановление сильно сокращенной микрофлоры кишечника при дисбактериозе и других заболеваниях.

Ниже приведены примеры составов предлагаемого комплексного препарата бактерий-эубиотиков в иммобилизованной и лиофилизированной форме.

Пример 1. Препарат-пробиотик "Экофлор" в виде порошка с размером частиц (40-100) мкм (мас.%):

клетки с питательной средой консорциума лактобактерийс титром 1010 КОЕ/г1,0защитная среда, в том числе:желатин0,085аскорбиновая кислота0,008хлористый натрий0,017сахароза0,89энтеросорбент СУМС-1, дополнительно обработанный3%-ным раствором сульфата магнияостальное до 100%.

Пример 2. Препарат-пробиотик "Экофлор" в виде порошка с размером частиц (40-100) мкм (мас.%):

клетки с питательной средой консорциума бифидобактерийс титром 109 КОЕ/г7,0защитная среда, в том числе:желатин0,85аскорбиновая кислота0,08хлористый натрий0,17сахароза8,9энтеросорбент СУМС-1, дополнительно обработанный3%-ным раствором сульфата магнияостальное до 100%.

Пример 3. Препарат-пробиотик "Экофлор" в виде гранул размером (0,5-5,0) мм (мас.%):

клетки с питательной средой ититром 108 КОЕ/г смеси консорциумовбифидо- и лактобактерий всоотношении 1:110,0защитная среда, в том числе:желатин0,575аскорбиновая кислота0,06хлористый натрий0,15сахароза4,215энтеросорбент СУМС-1, дополнительно обработанный3%-ным раствором сульфата магнияостальное до 100%.

Пример 4. Препарат-пробиотик "Экофлор" в виде гранул размером (0,5-5,0) мм (мас.%):

клетки с питательной средой и титром 109 КОЕ/гсмеси консорциумов бифидо- и лактобактерий всоотношении 3:15,0защитная среда, в том числе:желатин0,85аскорбиновая кислота0,08хлористый натрий0,17сахароза8,9энтеросорбент СУМС-1, дополнительно обработанный3%-ным раствором сульфата магнияостальное до 100%.

Пример 5. Технология получения готовых форм препарата "Экофлор".

По специальной технологии готовят исходные сорбенты типа СУМС-1 (патент РФ №2026733), в котором оксид алюминия модифицирован углеродом, с требуемой пористой структурой, химической природой поверхности и размером частиц или гранул. Далее мерное количество энтеросорбента СУМС-1 засыпают в цилиндрическую емкость, заливают дистиллированной водой в объемном соотношении 1:1 и тщательно перемешивают. Отмывают не менее 3-х раз дистиллированной водой до полного исчезновения угольной пленки и взвеси. Далее энтеросорбент СУМС-1 обрабатывают раствором соли металла, а именно 3%-ным раствором сульфата магния в объемном соотношении 1:1. Отмывают от сульфат-ионов 2-3-кратным объемом дистиллированной воды. После обработки энтеросорбента СУМС-1 3%-ным раствором сульфата магния эффективность его биосорбции увеличивается в 1,4 раза, а эффективность биодесорбции, определяющая клинический эффект от действия препарата, равна 1.

Стерилизацию СУМС-1 ведут сухим жаром в сушильном шкафу россыпью слоем не более 1,5-2,0 см при температуре (160±2)°С в течение 2 часов. Контроль стерильности СУМС-1 определяют микробиологически. Контроль процесса стерилизации СУМС-1 осуществляют с помощью химических тестов.

Процесс иммобилизации СУМС-1 проводят в асептических условиях. Для иммобилизации берут равные по объему (1:1) количества энтеросорбента СУМС-1 и культуры консорциумов микроорганизмов. Для иммобилизации используют консорциум бифидобактерий (с титром не менее 1010 КОЕ/мл), или консорциум лактобактерий (с титром не менее 108 КОЕ/мл), или их смесь в объемном соотношении 9:1 соответственно в соответствии с примерами 1-3. Биомассу бактерий приготавливают на молочной питательной среде, содержащей повышенное количество белка (не менее 12% СОМ - сухого остатка молока) по стандартной технологии.

Смесь энтеросорбента СУМС-1 с клетками бактерий-эубиотиков тщательно перемешивают в течение 5 мин и помещают на шейкер на 1 час при интенсивности 100 колебаний в минуту при температуре 6±2°С. Процесс иммобилизации возможно вести в стеклянной посуде на роллерной установке. Для определения качества иммобилизации из исходного титра бифидобактерий и лактобактерий в концентрате бифидо- и лактобактерий вычитают полученный результат биотитрования. Процесс считается завершенным, если в растворе осталось не более 50% от исходного количества бифидо- и лактобактерий.

Далее продукт однократно промывают в изотоническом растворе NaCl. Мутный раствор стерильно сливают, отбирают пробы и проводят контроль полноты процесса иммобилизации по МУК 4.2.577-96 (Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов", п.7.1 и п.7.10). Процесс считается завершенным, если в растворе осталось не более 50% от исходного количества бифидо- и лактобактерий.

Отмытый продукт замораживают в низкотемпературном холодильнике типа "Кельвинатор" при температуре минус (40-45)°С в течение (24-48) часов. Кассеты с предварительно замороженным препаратом перегружают в сушильную камеру при достижении температуры плит минус (20-30)°С и камеру вакуумируют. Готовый препарат "Экофлор" в сухой иммобилизованной форме фасуют во флаконы и герметично закрывают пробками. Массовая доля влаги составляет не более 3,0 мас.%.

В таблице 1 приведены адсорбционные емкости СУМС-1 после модификации поверхности (измерялась по адсорбции метиленового синего согласно ФС 42-3283-96).

Таблица 1
Данные по адсорбционной емкости энтеросорбента СУМС-1 после обработки солями металлов
№ п/пНаименование солейАдсорбционная емкостьрН сорбента1СУМС-1 чистый0,017±0.002 г8,22СУМС-1+AlCl3 (0,36%)0,018±0.002 г6,13СУМС-1+AlCl3 (0,75%)0,018±0.002 г5,84СУМС-1+AlCl3 (3%)0,012±0.001 г3,265СУМС-1+MgSO4 (1%)0,017±0.001 г6,76СУМС-1+MgSO4·6Н2O (3%)0,024±0.002 г6,57СУМС-1+MgSO4·6Н2О (5%)0,027±0.003 г6,38СУМС-1+MgCl2 (1%)0,015±0.002 г6,59СУМС-1+MgCl2 (3%)0,018±0.002 г6,610СУМС-1+NiCl2 (3%)0,016±0.002 г5,911СУМС-1+ZnCl2 (3%)0,019±0.001 г5,5

Обработанная поверхность СУМС-1 оценивалась в биологических тестах по:

1) эффективности биосорбции (отношение количества сорбированных клеток к общему количеству бактерий в исходной суспензии),

2) эффекивности биодесорбции (отношение количества бактерий, десорбированных с поверхности СУМС-1, к количеству сорбированных бактерий).

Эффективность биодесорбции является важным показателем, во многом определяющим клиническую эффективность ИКЭ. Результаты биологических тестов приведены в табл. 2.

Таблица 2
Данные биологического тестирования энтеросорбента СУМС после обработки солями металлов
Модификация поверхностиЭффектив. десорбции LgT4/LgT3Эффектив. сорбции LgT1/LgT3Исходный титр Т1 (КОЕ/мл)Сорбция Т3=(Т1-Т2)Десорбция Т4T3Т2Иммобилизация консорциума бифидобактерийAlCl3 - 0,01%0,87141,0011·10104·1089,6·1095·108AlCl3 - 0,36%0,87811,00041·10107·1079,93·1096·108AlCl3 - 0,75%0,90091,0001·10101·1089,99·1091·109MgSO4·6Н2O - 3%1,00001,0151·10103·1097·1097·109MgSO4·6Н2О - 3%0,93441,0041·10101·1099·1092·109Иммобилизация смеси консорциумом бифидо- и лактобактерийMgSO4·6Н2O - 3%0,90681,0071·10101,6·1098,4·1091·109Иммобилизация консорциума лактобактерийMgSO4·6Н2O - 3%0,78391,0056·1086·1075,4·1087·106Примечание:
Т1 (КОЕ/мл) - исходный титр биомассы бактерий;
Т2 (КОЕ/мл) - титр биомассы бактерий, оставшейся после иммобилизации на энтеросорбент;

Т3=Т1-T2 - титр (КОЕ/мл) бактериальных клеток, иммобилизованных на сорбенте;
Т4 - титр (КОЕ/мл) бактериальных клеток после десорбции, определяющий клинический эффект от действия препарата

Таким образом, по результатам исследований обработанной поверхности СУМС-1 солями металлов вариант №6 (табл.1) обработки MgSO4·6H2О (3%) является наиболее оптимальным. После обработки энтеросорбента СУМС-1 3%-ным раствором сульфата магния эффективность его биосорбции увеличивается в 1,4 раза (отношение сорбированных клеток к общему количеству бактерий в исходной суспензии), а эффективность биодесорбции, определяющая клинический эффект от действия комплексного препарата (отношение количества бактерий, десорбированных с поверхности СУМС-1 к количеству сорбированных на нем бактерий), равна 1, что показывает о том, что практически все бактерии могут десорбироваться в желудочно-кишечном тракте.

Результаты доклинических исследований

Проведенные исследования подтвердили, что комплексный препарат «Экофлор» нетоксичен для лабораторных животных, восстанавливает нормобиоценоз кишечника, элиминирует условно-патогенную и патогенную микрофлору, не вызывает побочных и непредвиденных нежелательных реакций, стимулирует процессы адаптации организма к неблагоприятным факторам внешней среды. Основные результаты исследования:

1) морфометрические показатели животных в экспериментальных группах нарастали в соответствии с популяционным стандартом;

2) лабораторные анализы крови оставались в пределах физиологической нормы;

3) гистологические исследования органов показали отсутствие токсического воздействия;

4) подтверждено отсутствие повреждающего действия на структуру кишечного эпителия со стороны препарата;

5) патолого-анатомическое вскрытие подтвердило состояние органов в норме. Полученные результаты свидетельствуют о том, что комплексный препарат «Экофлор» успешно прошел доклинические испытания.

Результаты клинических исследований комплексного препарата «ЭКОФЛОР»

Все пациенты (45 человек - экспериментальная группа и 25 человек - группа сравнения) имели хроническую патологию: атопический дерматит - в 44,4% случаев; острый аллергоз - в 11,1% случаев; вторичный хронический пиелонефрит - в 22,2% случаев; сахарный диабет - в 11,1% случаев; бронхиальная астма - в 11,1% случаев.

После проведенного экспериментального курса лечения комплексным препаратом «Экофлор» были получены следующие результаты:

1) препарат «Экофлор» способствует уменьшению абдоминального болевого синдрома, проявлений диспепсического синдрома, нормализации моторной функции кишечника, регрессу кожных высыпаний;

2) применение «Экофлора» способствует уменьшению субъективных клинических (недомогание, слабость, нарушение аппетита) и объективных лабораторных критериев (нормализация лейкоцитарного индекса интоксикации и гематологического показателя интоксикации, купирование синдрома цитолиза и нормализация общего белка сыворотки крови, а также уменьшение выраженности мочевого синдрома), отражающих синдром эндогенной интоксикации;

3) при использовании препарата «Экофлор» в 62,2% наблюдается полное восстановление функций переваривания и всасывания в кишечнике, у остальных больных - тенденция к нормализации показателей;

4) препарат «Эклофлор» способствует восстановлению кишечной микрофлоры: кишечной палочки, бифидофлоры; снижению кокковых форм, кишечной палочки со слабо выраженными ферментными свойствами, лактозонегативных энтеробактерий;

5) при приеме препарата не выявлены побочные эффекты и осложнения.

Таким образом, препарат успешно прошел клинические испытания, является безвредным и высокоэффективным средством в отношении восстановления нормобиоценоза кишечника и купирования синдрома эндогенной интоксикации.

Похожие патенты RU2317089C2

название год авторы номер документа
КОМПЛЕКСНЫЙ ПРЕПАРАТ-ПРОБИОТИК В ИММОБИЛИЗОВАННОЙ И ЛИОФИЛИЗИРОВАННОЙ ФОРМЕ 2008
  • Молокеев Алексей Владимирович
  • Ильина Рома Мирославовна
  • Яцентюк Раиса Михайловна
  • Молокеева Наталья Валентиновна
  • Зыкова Наталья Альгимантасовна
  • Карих Татьяна Леонидовна
  • Соколова Татьяна Васильевна
  • Никулин Леонид Георгиевич
  • Куслий Александр Георгиевич
  • Мироненко Вячеслав Владимирович
  • Ясудис Галина Владимировна
  • Гусева Ирина Александровна
RU2371479C1
ПРЕПАРАТ-ПРОБИОТИК В СУХОЙ ИММОБИЛИЗОВАННОЙ ФОРМЕ 1999
  • Молокеев А.В.
  • Никулин Л.Г.
  • Ильина Р.М.
  • Криницина Э.В.
  • Карих Т.Л.
  • Молокеева Н.В.
  • Байбаков В.И.
  • Андреева М.А.
  • Соболева Н.В.
RU2164801C1
СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА ИЗ ЖИВЫХ ШТАММОВ МИКРООРГАНИЗМОВ ЛАКТО- И БИФИДОБАКТЕРИЙ "LB-КОМПЛЕКС Л" 2010
  • Соловьева Ирина Владленовна
  • Белова Ирина Викторовна
  • Точилина Анна Георгиевна
  • Ефимов Евгений Игоревич
  • Иванова Татьяна Петровна
  • Новикова Надежда Алексеевна
  • Новоселова Татьяна Ивановна
  • Новоселов Яков Борисович
RU2441907C1
КОМПЛЕКСНЫЙ БАКТЕРИАЛЬНЫЙ ПРЕПАРАТ 1997
  • Бородин Ю.И.
  • Бурмистров В.А.
  • Гуськов А.А.
  • Рачковская Л.Н.
  • Репина В.В.
  • Репин В.Е.
  • Саранина И.В.
RU2118535C1
КОНСОРЦИУМ ШТАММОВ ЛАКТОБАКТЕРИЙ И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НА ЕГО ОСНОВЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОЙ ДОБАВКИ ИЛИ ЗАКВАСКИ ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА КИСЛОМОЛОЧНЫХ ПРОДУКТОВ 2008
  • Зыкова Наталья Альгимантасовна
  • Молокеев Алексей Владимирович
  • Молокеева Наталья Валентиновна
  • Ильина Рома Мирославовна
  • Карих Татьяна Леонидовна
  • Соколова Татьяна Васильевна
  • Никулин Леонид Георгиевич
  • Куслий Александр Георгиевич
  • Мироненко Вячеслав Владимирович
  • Ясудис Галина Владимировна
  • Гусева Ирина Александровна
RU2376366C2
Способ получения и композиция для повышения эффективности пробиотических микроорганизмов 2020
  • Кареткин Борис Алексеевич
  • Савельев Дмитрий Владимирович
  • Лоссь Елена Павловна
  • Терешкова Елена Андрияновна
RU2740140C1
БАКТЕРИАЛЬНАЯ СИСТЕМА ДЛЯ НОРМАЛИЗАЦИИ МИКРОБИОЦЕНОЗА ОРГАНИЗМА ЧЕЛОВЕКА И ЖИВОТНЫХ 2012
  • Бурмистров Василий Александрович
  • Фролова Ирина Игоревна
  • Бурылин Сергей Юрьевич
RU2530174C2
МОЛОЧНАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ БАКТЕРИЙ-ПРОБИОТИКОВ 2006
  • Зыкова Наталья Альгимантасовна
  • Молокеев Алексей Владимирович
  • Ильина Рома Мирославовна
  • Никулин Леонид Георгиевич
  • Куслий Александр Георгиевич
  • Мироненко Вячеслав Владимирович
  • Ясудис Галина Владимировна
  • Гусева Ирина Александровна
RU2326939C2
КОНСОРЦИУМ ШТАММОВ ЛАКТОБАКТЕРИЙ И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НА ЕГО ОСНОВЕ ПРЕПАРАТА, ИСПОЛЬЗУЕМОГО В КАЧЕСТВЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОЙ ДОБАВКИ ИЛИ ЗАКВАСКИ ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА КИСЛОМОЛОЧНЫХ ПРОДУКТОВ 2006
  • Зыкова Наталья Альгимантасовна
  • Молокеев Алексей Владимирович
  • Молокеева Наталья Валентиновна
  • Ильина Рома Мирославовна
  • Карих Татьяна Леонидовна
  • Соколова Татьяна Васильевна
  • Никулин Леонид Георгиевич
  • Куслий Александр Георгиевич
  • Мироненко Вячеслав Владимирович
  • Ясудис Галина Владимировна
  • Гусева Ирина Александровна
RU2326938C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОЙ ДОБАВКИ В СУХОЙ ФОРМЕ, СОДЕРЖАЩЕЙ БАКТЕРИИ-ЭУБИОТИКИ, И НАЧИНКА ДЛЯ ХЛЕБНЫХ ИЛИ КОНДИТЕРСКИХ ИЗДЕЛИЙ НА ЕЕ ОСНОВЕ 1999
  • Хомичева С.Я.
RU2142504C1

Реферат патента 2008 года КОМПЛЕКСНЫЙ ПРЕПАРАТ-ПРОБИОТИК В ИММОБИЛИЗОВАННОЙ И ЛИОФИЛИЗИРОВАННОЙ ФОРМЕ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ

Изобретение относится к препаратам медицинского и ветеринарного назначения и способам их получения и может быть использовано в биотехнологии, медицине и сельском хозяйстве. Комплексный препарат-пробиотик включает носитель, представляющий собой пористый энтеросорбент СУМС-1 на основе оксида алюминия, и клетки бактерий-эубиотиков с питательной и защитной средами, иммобилизованные на указанном носителе-энтеросорбенте. Клетки бактерий-эубиотиков с питательной средой представляют собой лиофилизированный концентрат консорциума бифидобактерий, или лактобактерий, или их смесь с титром 108-1010 КОЕ/г, а в качестве пористого модифицированного углеродом энтеросорбента СУМС-1 он содержит энтеросорбент СУМС-1, дополнительно обработанный раствором соли металла при следующем соотношении компонентов препарата в лиофилизированном виде, мас.%: клетки с питательной средой консорциума бифидо-, или лактобактерий-эубиотиков, или их смесь с титром 108-1010 КОЕ/г 1,0-10,0; защитная среда 0,1-10,0; энтеросорбент СУМС-1, дополнительно обработанный раствором соли металла, - остальное до 100%. Способ получения препарата включает обработку пористого энтеросорбента СУМС-1 раствором соли металла в объемном соотношении не более 1:1 и его отмывку от реагента 2-3-кратным объемом дистиллированной воды, смешивание энтеросорбента и бактерий-эубиотиков с питательной и защитной средами в соотношении не более 1:1 и выдерживание смеси до полной иммобилизации бактериальных клеток на энтеросорбент с последующим его замораживанием и лиофильной сушкой, перед стерилизацией. В качестве бактерий используют концентрат консорциума бифидобактерий, или лактобактерий, или их смесь с титром 108-1010 КОЕ/г. Комплексный препарат-пробиотик обеспечивает более высокую эффективность сорбции и десорбции клеток бактерий энтеросорбентом СУМС-1, определяющей его клиническую эффективность, и более высокую колонизационную активность бактерий-эубиотиков. 2 н. и 7 з.п. ф-лы, 2 табл.

Формула изобретения RU 2 317 089 C2

1. Комплексный препарат-пробиотик в иммобилизованной и лиофилизированной форме, включающий носитель, представляющий собой пористый энтеросорбент СУМС-1 на основе оксида алюминия, модифицированный углеродом с гидрофильно-гидрофобной топохимией поверхности, и клетки бактерий-эубиотиков с питательной и защитной средами, иммобилизованные на указанном энтеросорбенте, отличающийся тем, что клетки бактерий-эубиотиков с питательной средой представляют собой лиофилизированный концентрат консорциума бифидобактерий, или лактобактерий, или их смесь с титром 108-1010 КОЕ/г, а в качестве пористого модифицированного углеродом энтеросорбента СУМС-1 он содержит энтеросорбент СУМС-1, дополнительно обработанный раствором соли металла при следующем соотношении компонентов препарата в сухом виде, мас.%:

клетки с питательной средой консорциума бифидо-,или лактобактерий-эубиотиков, или их смесьс титром 108-1010 КОЕ/г1,0-10,0защитная среда0,1-10,0энтеросорбент СУМС-1, дополнительно обработанныйраствором соли металлаостальное

2. Комплексный препарат-пробиотик по п.1, отличающийся тем, что в качестве консорциума бифидобактерий он содержит штаммы бифидобактерий: Bifidobacterium bifidum 8-3, Bifidobacterium longum ДВА-13 и Bifidobacterium adolescentis ГО-13 в соотношении 8:1:1.3. Комплексный препарат-пробиотик по п.1, отличающийся тем, что в качестве консорциума лактобактерий он содержит штаммы лактобактерий Lactobacillus acidophilus 57S, Lactobacillus plantarum П-75, Lactobacillus casei Сб в соотношении 4:1,0:1,0.4. Комплексный препарат-пробиотик по п.1, отличающийся тем, что смесь консорциумов бифидо- и лактобактерий имеет соотношение от 1:1 до 3:1.5. Способ получения комплексного препарата-пробиотика в иммобилизованной и лиофилизированной форме, включающий отмывку и стерилизацию пористого энтеросорбента СУМС-1, модифицированного углеродом, и его охлаждение до комнатной температуры, смешивание энтеросорбента и бактерий-эубиотиков с питательной и защитной средами в соотношении не более 1:1 и выдерживание смеси в течение не менее 1 часа при перемешивании и температуре не выше +4°С до полной иммобилизации бактериальных клеток на энтеросорбент, отмывку полученного комплексного препарата в изотоническом солевом растворе с последующим его замораживанием и лиофильной сушкой, отличающийся тем, что перед стерилизацией энтеросорбент СУМС-1 обрабатывают раствором соли металла в объемном соотношении не более 1:1 и отмывают от реагента 2-3 кратным объемом дистиллированной воды, а в качестве бактерий-эубиотиков используют концентрат консорциума бифидобактерий, или лактобактерий, или их смесь с титром 108-1010 КОЕ/г.6. Способ по п.5, отличающийся тем, что в качестве раствора соли металла используют 3%-ный раствор сульфата магния.7. Способ по п.5, отличающийся тем, что в качестве консорциума бифидобактерий используют штаммы бифидобактерий: Bifidobacterium bifidum 8-3, Bifidobacterium longum ДВА-13, Bifidobacterium adolescentis ГО-13 в соотношении 8:1:1.8. Способ по п.5, отличающийся тем, что в качестве консорциума лактобактерий используют штаммы лактобактерий Lactobacillus acidophilus 57S, Lactobacillus plantarum П-75 и Lactobacillus casei Сб в соотношении 4:1,0:1,0.9. Способ по п.5, отличающийся тем, что смесь консорциумов бифидо- и лактобактерий имеет соотношение от 1:1 до 3:1.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2008 года RU2317089C2

ПРЕПАРАТ-ПРОБИОТИК В СУХОЙ ИММОБИЛИЗОВАННОЙ ФОРМЕ 1999
  • Молокеев А.В.
  • Никулин Л.Г.
  • Ильина Р.М.
  • Криницина Э.В.
  • Карих Т.Л.
  • Молокеева Н.В.
  • Байбаков В.И.
  • Андреева М.А.
  • Соболева Н.В.
RU2164801C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СУХОГО ПРОБИОТИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА 1991
  • Нахабин И.М.
  • Перелыгин В.В.
  • Биркина Ю.С.
  • Старцев А.В.
RU2067114C1
КОМПЛЕКСНЫЙ БАКТЕРИАЛЬНЫЙ ПРЕПАРАТ 1997
  • Бородин Ю.И.
  • Бурмистров В.А.
  • Гуськов А.А.
  • Рачковская Л.Н.
  • Репина В.В.
  • Репин В.Е.
  • Саранина И.В.
RU2118535C1
КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ОСТРЫХ РЕСПИРАТОРНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ HIB-ЭТИОЛОГИИ У ДЕТЕЙ И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ 2003
  • Горбунов С.Г.
  • Мацулевич Т.В.
  • Вайншток И.И.
RU2258524C2

RU 2 317 089 C2

Авторы

Молокеев Алексей Владимирович

Ильина Рома Мирославовна

Яцентюк Раиса Михайловна

Молокеева Наталья Валентиновна

Зыкова Наталья Альгимантасовна

Карих Татьяна Леонидовна

Байбаков Владимир Иванович

Соколова Татьяна Васильевна

Никулин Леонид Георгиевич

Куслий Александр Георгиевич

Мироненко Вячеслав Владимирович

Ясудис Галина Владимировна

Гусева Ирина Александровна

Даты

2008-02-20Публикация

2006-01-10Подача