СПОСОБ ВЗЯТИЯ КРОВИ У ЛАБОРАТОРНЫХ МЫШЕЙ Российский патент 2008 года по МПК G01N33/48 G01N1/00 

Изобретение относится к физиологии, а именно к взятию крови с последующим отделением сыворотки при изучении влияния белковых препаратов на показатели естественной резистентности.

Известен способ получения крови лабораторных животных с помощью декапитации, описанный в SU №1296117 А1 «Устройство для забора крови у мелких лабораторных животных», опубликованный 15.03.1987.

Недостатки данного способа заключаются в малых количествах собираемой крови, недостаточных для исследования физиологических показателях крови при влиянии белковых препаратов на организм животного.

Упрощение способа взятия крови у белых мышей и увеличение количественных и качественных показателей собираемой крови и сыворотки достигается тем, что кровь берут у белых мышей: контрольных и опытных (иммунизированных препаратом из костного мозга, белковой природы). Для этого отбирают здоровых животных, находящихся в одной весовой и возрастной категориях и в одном физиологическом состоянии. Формируют группы из контрольных и опытных животных. Животных помещают в одинаковые условия после иммунизации опытных и следят за их физиологическим состоянием до появления первого иммунного ответа на введенный антиген. Препарат для введения в заднюю подушечку мыши получают из костного мозга трубчатых костей диких и сельскохозяйственных животных путем осаждения белков из клеток костного мозга с помощью 10% раствора трихлоруксусной кислоты и последующего диализа белкового раствора.

Взятие крови у мышей обеих групп проводят декапитацией головы животного. Животных предварительно выдерживают в термостате в течение 2-5 минут при температуре 40-42°С (происходит повышение обмена веществ и разжижение крови мышей). Затем животное с помощью пинцета хватают за складку кожи на загривке, фиксируют и отсекают голову стерильными ножницами. Кровь собирают с помощью воронки в тонкие пробирки Уленгута до тех пор, пока происходят предсмертные судорожные конвульсии тела животных, и кровь порциями выбрасывается в воронку.

Кровь после взятия 25-30 мин выдерживают в термостате (35...37°С), затем сгусток ее обводят тонкой металлической палочкой (отделение сгустка от стенок сосуда) и ставят на 16-18 часов в холодильник. Сыворотку отсасывают пипеткой с помощью груши, переносят в стерильный сосуд, закрывают крышкой и хранят в холодильнике. Таким образом, можно получить до 1,5...2 мл крови и ≈0,5 мл сыворотки.

Пример 1.

Беспородных белых мышей, самцов в одной возрастной категории (4-6 месяцев) массой 18,8±0,3 г иммунизируют препаратом из костного мозга лисиц, содержащим 50,3 г/л общего белка в своем составе (таблица 1), в подушечку задней левой лапки в дозе 0,025 мл на мышь. Через 7-8 дней от животных опытных и контрольных групп собирают кровь для исследования сыворотки на общий белок и его фракции. Проводят декапитацию головы животных, не помещая их предварительно в термостат. Собирают кровь и отделяют сыворотку как описано выше. Таким образом, получают до 0,5±0,04 мл крови.

Таблица 1
Электрофорез костного мозга лисиц в геле агарозы по методике Чекишева В.М. (1977)ПробаОбщий белок (г/л)Альбумины (г/л)Глобулины (г/л)γ₁+γ₂%∑γ₁+γ₂α₁α₂βγ₁γ₂150,36,187,0610,5911,4711,473,5315,0029,82250,36,297,1910,7810,7810,784,4815,2630,33350,37,068,8311,478,8310,593,5214,1128,05450,36,409,1510,979,1511,892,7414,6329,09Средние данные50,36,48±0,28,06±0,710,95±0,410,23±0,711,18±0,43,57±0,314,75±0,328,32±0,5

Пример 2.

Иммунизируют лабораторных мышей белковым препаратом из костного мозга лисиц по примеру 1, но перед забором крови методом декапитации животных помещают в термостат на 2-5 минут при температуре 40-42°С. Таким образом, получают 1,7±0,07 мл крови и 0,48±0,01 мл сыворотки. В таблицах 2 и 3 показаны данные исследования крови мышей, полученной заявленным способом, разделенных на две группы: с нормальной температурой тела (контроль) и нагреваемые в термостате, а в таблице 4 - разность средних показателей электрофореза, отобранной сыворотки крови мышей.

Таблица 2
Лейкограмма крови мышей до и после нагреванияГруппыПалочкоядерные нейтроф.Сегментоядерные нейтроф.МоноцитыЭозинофилыЛимфоцитыКонтрольМ±m8,3±0,5147,9±1,02,1±0,043,2±0,3038,2±0,38%100,0100,0100,0100,0100,0Нагреваемые животныеМ±m8,3±0,1148,1±0,162,1±0,173,3±0,1838,2±0,20%100,0100,4100,0103,1100,0

При увеличении температуры тела животных количество и видовой состав лейкоцитов изменились незначительно в сравнении с контрольной группой животных.

Таблица 3
Динамика изменения показателей иммунной защиты мышей, подвергаемых нагреваниюПоказателиТемпература тела мышей, °С37,538,3123

Продолжение таблицы 3Лейкоциты6,09±0,0706,15±0,07Общий белок83,7±0,4585,4±1,32Фагоцитарная активность25,8±1,5729,6±1,11

По данным таблицы 3 видно, что показатели клеточной и гуморальной защиты животных с температурой тела 38,3°С изменились незначительно в сторону увеличения. Показатели ФА - на 14,7%, общего белка - на 2,03% в сравнении с контролем.

Таблица 4
Оценка разности средних показателей, двух выборок электрофореза сыворотки крови мышей (контроль-опыт) n=10Показатели электрофореза г/лЛабораторные мышиРазница показателейРконтрольопытОбщий белок49,5±0,9185,4±1,32+25,90<0,001Альбумины12,0±0,6425,0±1,41+12,93<0,001Глобулиныα₁7,0±0,4011,4±0,43+4,42<0,001α₂7,3±0,2811,7±0,85+4,44<0,001β9,1±0,3310,3±0,72+1,21>0,05γ₁10,3±0,2620,3±0,73+10,05<0,001γ₂3,2±0,136,4±0,42+3,28<0,001γ₁+γ₂13,6±0,1826,8±0,41+13,2<0,001%∑ γ₁+γ₂27,6±0,4331,4±0,59+4,4<0,001

Отличительным преимуществом предлагаемого способа взятия крови у мышей является доступность предложенного способа, что позволяет повысить выход собираемой крови и сыворотки, не изменяя при этом ее качественные показатели, и изучить влияние иммуностимулирующих препаратов на организм животного. Так, например, у опытных животных, иммунизированных костномозговым препаратом, в 1,7 раз увеличилось содержание общего белка и в 1,9 раз γ₁+γ₂ глобулинов в сыворотке крови по сравнению с контролем.

Изобретение относится к физиологии, а именно к методам взятия крови при изучении влияния белковых препаратов на показатели естественной резистентности. Сущность способа заключается в том, что кровь у мышей собирают при помощи декапитации головы животных, предварительно помещенных в термостат на 2-5 минут при температуре 40-42°С. Использование изобретения позволяет упростить взятие крови у белых мышей и увеличить количественные показатели собираемой крови и сыворотки. 4 табл.

Способ взятия крови у лабораторных мышей для определения концентрации общего белка, включающий забор крови при помощи декапитации животных, пробы которой помещают в микропробирки, пригодные для центрифугирования, отличающийся тем, что кровь собирают от животных, предварительно помещенных в термостат на 2-5 мин при температуре 40-42°С.