СПОСОБ ДААБУЛЯ НОРМАЛИЗАЦИИ И СТАБИЛИЗАЦИИ ГОМЕОСТАЗА МАКРОФАГОВ ПРИ ЛЕЧЕНИИ ОНКОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ Российский патент 2008 года по МПК A61K33/00 A61K35/00 A61P35/00 

Изобретение относится к медицине, в частности к способам нормализации и стабилизации гомеостаза макрофагов при лечении онкологических заболеваний.

Способы нормализации и стабилизации гомеостаза макрофагов при лечении онкологических заболеваний автору неизвестны.

Технический результат от использования предлагаемого способа заключается в создании способа пригодного для нормализации и стабилизации гомеостаза макрофагов при лечении онкологических заболеваний, не только не приводящего в процессе лечения к интоксикации организма, но и снимающего интоксикацию, вызванную химиотерапией или лучевой терапией.

Указанный технический результат достигается тем, что способ нормализации и стабилизации гомеостаза макрофагов при лечении онкологических заболеваний, заключается в приеме внутрь воды питьевой структурированной «Ренорм» (далее - вода «Ренорм»), изготовляемой в соответствии с ТУ 01-31-004-18688563-004 в суточной дозе 20-1500 мл.

Указанный технический результат достигается также тем, что прием дозы производят в 3 приема на пустой желудок.

Система фагоцитирующих мононуклеаров (макрофагов) является основным звеном. регулирующим межклеточные взаимоотношения при развитии всех патологических, в том числе, опухолевых и воспалительных процессах [1]. Макрофаги играют важную роль в противоопухолевом иммунитете [2, 3, 4, 5, 6, 7]. Так, макрофаги из опухолей типа саркомы Молоки выделяют in vitro растворимый, диализируемый и термостабильный фактор, угнетающий включение 3H-тимидина опухолевыми клетками [8]. Причем макрофаги оказывают воздействие только на клетки с нарушенной дифференцировкой, не влияя на нормальные клетки [9].

Макрофаги принимают участие в иммунном ответе на всех его этапах. Во-первых, они осуществляют немедленную защитную реакцию до тех пор, пока не произойдет усиление иммунного ответа, регулируемого антигенспецифичными Т-клетками. Во-вторых, они вызывают активацию Т-клеток, осуществляя процессинг и презентацию им антигена. И. наконец, активированные в свою очередь Т-клетками они выполняют важные функции в эффекторных механизмах клеточного иммунитета, вызывая воспаление и уничтожая микроорганизмы (бактерии, грибы), дефектные собственные, а также опухолевые клетки [10].

В любом организме ежедневно, как дефект митоза клеток, образуется огромное количество атипичных (опухолевых) клеток. Однако в норме резидентные макрофаги органов и тканей обнаруживают эти клетки и сами, фагоцитруя их, расшифровывают их генетическую принадлежность и направляют ее лимфоцитам, которые в дальнейшем осуществляют ликвидацию атипичных клеток.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. Принимают внутрь воду «Ренорм» в количестве 20-1500 мл в сутки в 3 приема на пустой желудок.

Воду «Ренорм» получают обработкой воды с помощью разработанного автором устройства.

На чертеже изображено устройство для получения воды «Ренорм».

Устройство содержит первый источник 1 сигнала с частотой f₁, второй источник 2 сигнала с частотой f₂≠f₁, излучатель 3, усилитель 4.

Устройство работает следующим образом. Сигналы от источников 1, 2 поступают на входы (разные края металлической пластины, полюса катушки индуктивности или громкоговорителя) излучателя 3 через усилитель 4 и излучаются в окружающее пространство, создавая электромагнитное или звуковое поле, под действием которого вещества, находящиеся в этом поле, структурируются.

Влияние воды «Ренорм» на нормализацию и стабилизацию макрофагов было доказано при исследовании цитологического статуса слизистых оболочек ротовой и носовой полости волонтеров после водопотребления воды «Ренорм».

Изучен цитологический статус слизистых оболочек носовой и ротовой (щека) полости у волонтеров при потреблении иммуномодулирующей воды «Ренорм» (2). Контролем служила 1-я группа, потребляющая московскую водопроводную воду. Каждая группа состояла из 5 волонтеров, у которых сначала снимались фоновые показатели слизистых через 2 недели 1 месяц и через 1 месяц после месячного водопотребления.

Мазки - отпечатки слизистых оболочек полости рта (щека) и носа брались неинвазивным методом, фиксировались над пламенем горелки и окрашивались по Граму. В слизистой щеки определялись адгезия, число видов микрофлоры, из них наличие морфологически идентифицированных стафилококков и стрептококков без определения их патогенности, число лейкоцитов в поле зрения как среднее на 10 полей зрения, число буккальных эпителиоцитов первых 3-х стадий дифференцировки, 4-й стадии, 5-й стадии, 6-й стадии - безъядерные и их коэффициент дифференцировки (КДЭ), определяемый как соотношение суммы буккальных эпителиоцитов различных 1-5-хстадий дифференцировки, умноженных на коэффициенты стадий к числу буккальных безъядерных эпителиоцитов, умноженного на 6; в слизистой носа - среднее число лейкоцитов, при значительном их количестве высчитывался процентный состав: эозинофилов. нейтрофилов, из них долю неизмененных нейтрофилов, сумму лимфоцитов и моноцитов, число видов микрофлоры, из них наличие морфологически идентифицированных стафилококков и стрептококков без определения их патогенности, количество слизи. По этим 18 показателям диагностировались состояния: в слизистой щеки - норма, воспаление и как отдельный или сопутствующий диагноз - неблагополучие микрофлоры; в слизистой носа - норму, воспаление, острое воспаление и как отдельный или сопутствующий диагноз - неблагополучие микрофлоры и аллергия.

Изучение слизистых оболочек фонового обследования волонтеров во всех изучаемых группах выявило различные состояния слизистых и, кроме того, в динамике исследование некоторые волонтеры заболевали, что из-за большого разброса величин показателей не всегда позволило выявить статистически значимые изменения.

Московская водопроводная вода.

В группе волонтеров, пивших 2 недели московскую водопроводную воду, в слизистой рта сохранялось то же соотношение диагнозов состояния, как и при фоновом обследовании: 60% волонтеров с нормальным состоянием и 40% - с воспалением слизистой носа, при 2-недельном потреблении определено 80% волонтеров с нормальным состоянием. В обоих случаях аллергическое состояние выявлено у 60% волонтеров. Хотя в этой экспериментальной группе ни у одного из волонтеров не определены малодифференцированные буккальные эпителиоциты в слизистой рта и отмечена тенденция к снижению в 2,9 раза числа лейкоцитов в слизистой носа, однако среди всех нейтрофилов слизистой носа наблюдалась тенденция к снижению в 2,27 раза числа их нормальных форм, а среднее число лейкоцитов в слизистой рта 3-кратно увеличилось.

Через 1 месяц по сравнению с фоновым обследованием сократился процент волонтеров с нормальным состоянием слизистой рта. У одного из волонтеров сохранились малодифференцированные клетки и в 2,12 раза увеличилось число лейкоцитов. При этом наблюдалось улучшение состояния слизистой носа. Через 1 месяц после месячного потребления московской водопроводной воды не было отмечено изменения состояния слизистых носа и рта.

При этом адгезия буккальных эпителиоцитов во всех группах закономерно не менялась.

Иммуномодулирующая вода «Ренорм».

Через 2 недели приема воды «Ренорм» отмечено снижение числа лейкоцитов в слизистых оболочках носа и рта. Так, число лейкоцитов в слизистой рта через 2 недели и через 1 месяц после месячного приема воды «Ренорм» снизилось в 3 раза - с 2,4+2,1 до 0,8+0,2. Через 1 месяц после начала приема воды «Ренорм» величина этого показателя снизилась в 1,6 раза и составила 1,5+0,4. В слизистой носа также отмечено снижение этого показателя в 1.44 раза - с 27,6+18,5 до 19,2+8,2 - через 2 недели после начала приема воды «Ренорм». Особенно выраженное - 2,51-кратное снижение имело место через 1 месяц после месячного воздействия - до 11+4,2. Достоверность различий также не была определена из-за большой вариабельности показателей в группе, и, кроме того, в ходе эксперимента некоторые волонтеры заболели, что привело к ухудшению показателей цитологического статуса слизистых.

После месячного потребления воды «Ренорм» и через 1 месяц после окончания эксперимента не определялись мало дифференцированные буккальные эпителиоциты 1-3 стадии, что свидетельствует о повышении барьерной функции эпителия при исследуемом водопотреблении.

Положительный эффект на слизистые оболочки носа и рта от приема воды «Ренорм» наглядно продемонстрирован на индивидуальном уровне. Так, у 2-х волонтеров, у которых перед началом эксперимента отмечалось воспаление слизистой оболочки рта, через 1 месяц приема воды «Ренорм» произошло улучшение многих показателей. После месячного приема воды «Ренорм» и особенно через 1 месяц после окончания эксперимента все показатели слизистых оболочек носа и рта у 50% волонтеров полностью нормализовались, у остальных воспаление слизистой рта протекало менее выражение, что, в первую очередь, касалось снижения числа лейкоцитов с 10 до 1,1 и числа видов микрофлоры с 18 до 5.

Была проведена работа по исследованию влияния воды «Ренорм» на фагоцитирующие клетки и продукцию реактивных форм кислорода (РФК) цельной крови и на выживаемость животных с асцитными опухолями.

Определение состава клеточной популяции в крови производили по методу Романовского. Делали мазок, окрашивали азур-эозином по Романовскому и подсчитывали процентный состав клеточной популяции. Окрашенный мазок микроскопировали с иммерсионной системой.

Продукцию РФК оценивали по интенсивности хемилюминесценции (ХЛ) в присутствии люминола. Метод основан на окислении люминола или его производных реактивными формами кислорода в присутствии пероксидазы. При этом образуются возбужденные формы люминола, нестабильные, короткоживущие и превращающиеся в аминофталат с излучением квантов света. Интенсивность люминолзависимой ХЛ регистрировали на люминометре «БИОТОКС». Индукцию РФК осуществляли путем добавления к суспензии клеток частиц латекса диаметром 1 мкм или раствора ФМА (форбол-12-миристат-13). Среда инкубации для измерения ХЛ содержала 0,9% NaCI, 5 mM MOPS, 5 mM глюкозы, 1 тМ CaCI₂, 1 mM MnCI₂, (рН 7,6), 20 мкМ люминола. Объем инкубационной смеси составлял 0.5 мл. Конечная концентрация латекса - 10⁷ частиц/мл, ФМА - 2×10^-7 М. Регистрацию ХЛ ответа проводили при 37°С. Для расчета удельной ХЛ-активности фагоцитирующих клеток определяли число импульсов, продуцируемых 1 клеткой за 1 мин. На основании количества фагоцитов, выделенных из 1 мл крови, и удельной ХЛ рассчитывали общую продукцию РФК одного мл крови.

Состав среды для определения продукции реактивных форм кислорода, продуцируемой цельной кровью и фракцией фагоцитов: среда инкубации (рН 7,6) - 0,5 мл, люминол - 2,8×10^-3 М, 5 мкл ФМА - 2×10^-7 М, энхансер - 10^-6 М, 10 мкл цельной крови.

Таким образом, в данной работе было установлено, что вода «Ренорм» способна модулировать функцию фагоцитирующих клеток и РФК-генерирующую активность цельной крови in vitro и in vivo. При этом увеличилась продолжительность жизни опухоленосителя на 55%. Степень ингибирования роста опухоли при этом составила 155%.

Изучали противоопухолевую активность воды «Ренорм», примененной в комбинированном лечении с коммерческим платиносодержащим препаратом цисплатин-ЛЭНС. Лечебный эффект оценивали по продолжительности жизни мышей с перевиваемой опухолью меланома В-16. При лечении водой «Ренорм» ее использовали в виде заменителя воды, другого питья мышам из этих экспериментальных групп не давали. При лечении водой «Ренорм» мыши имели доступ к препарату круглосуточно, на протяжении всего эксперимента, начиная со дня прививки опухоли. В результате проведенного исследования было установлено:

При введении препарата цисплатин-ЛЭНС в дозе 2,0 мг/кг внутрибрюшинно, пятикратно, с интервалом между инъекциями 24 часа, и воды «Ренорм» отмечено увеличение продолжительности жизни мышей с меланомой В-16: на 40% при использовании воды «Ренорм».

В настоящее время ведущее место в лечении больных злокачественными новообразованиями гениталий занимают лучевая и химиотерапия, которые, помимо действия на опухолевый процесс, оказывают также побочные эффекты, в том числе вызывает иммунодепрессию.

Поэтому одной из актуальных проблем радиационной онкологии является поиск средств, ослабляющих иммуносупрессивное действие ионизирующих излучений и химиопрепаратов.

В связи с этим целью нашего исследования явилось изучение возможности воды «Ренорм» ослаблять иммунодепрессивное действие лучевой и химиотерапии больных злокачественными новообразованиями женских половых органов.

Для достижения поставленной цели выполнена оценка состояния неспецифического и специфического иммунитета при (химио) лучевом лечении на фоне приема воды «Ренорм».

В основную группу вошли данные по изучению иммунитета 19 больных с онкогинекологической патологией, проходивших специализированное лучевое или химиолучевое лечение в клинике МРНЦ РАМН (г.Обнинск).

Воду «Ренорм» принимали по 50 мл 3 раза в день в течение всего периода лечения.

Длительность приема в зависимости от продолжительности (химио) лучевого лечения составляла 1,5-3 месяца.

Для оценки результатов применения структурированной воды «Ренорм» в лаборатории клинической иммунологии МРНЦ РАМН методом проточной цитофлуориметрии с моноклональными антителами и другими методами оценено относительное и абсолютное содержание популяций иммунокомпететных клеток и их функциональное состояние:

- Т-лимфоцитов (CD3+, CD4+, CD8+, CD4/CD8, CD3 + HLADR+, РБТЛ, спонтанная и индуцированная ФГА, ИС);

- В-лимфоцитов (CD19+, сывороточные ИГМ, G, А-классов, ЦИК);

- НК-клеток (CD16+, цитотоксический индекс, ЦИ, по отношению к культуре клеток линии К-562);

- количество лейкоцитов и способность нейтрофильных фагоцитов поглощать микробы штамма St. Aureus (фагоцитарное число, ФЧ, и фагоцитарный индекс, ФИ).

Контролем служили показатели 25 больных, проходивших лечение по поводу рака тела и шейки матки, программами терапии и набором тестов иммунологического обследования (ретроспективный контроль).

Выполнена статистическая обработка данных с применением t-критерия Стьюдента. Определен характер и степень изменения (снижения, повышения) каждого изученного показателя иммунитета после проведенного лечения в основной (после ЛТ / до ЛТ) и контрольной группах (после ЛТ + Ренорм / до ЛТ + Ренорм). Эффективность применения воды «Ренорм» определялась делением индивидуальных коэффициентов, по формуле: (после ЛТ + Ренорм/после ЛТ).

В исходном статусе обследованных групп пациентов характер и выраженность нарушений иммунитета были сходными: снижено количество и пролиферация Т-клеток. снижено количество В-лимфоцитов с тенденцией возрастания уровней сывороточных ИГМ и ИГG-классов, снижена спонтанная цитотоксичность естественных (натуральных) киллерных клеток, ЦИ. В основной группе, кроме того, отмечен более низкий процент и количество НК-клеток (по сравнению с контрольной группой). Фагоцитоз в пределах нормы.

(Химио) лучевая терапия снизила в 1,5-2 раза количество лейкоцитов, лимфоцитов, Т- и В-клеток в циркуляции. Количество же НК-клеток осталось без изменения. После облучения и (химио) лучевой терапии с добавлением приема воды «Ренорм» отмечена такая же степень снижения числа Т- и В-клеток в циркуляции. Значительной разницы с контрольной группой не выявлено. Можно отметить, что в группе пациентов, принимавших «Ренорм», выражена тенденция возрастания числа активированных Т-лимфоцитов (СОЗ + Н1АВК+), спонтанной пролиферации Т-клеток, некоторого снижения уровня циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК).

Проведенное исследование показало положительное воздействие воды «Ренорм» на нормализацию иммунного статуса онкологических больных при комбинированном лечении.

Полученные результаты исследований подтверждены и следующими конкретными примерами.

Пример 1. Больная К. 1960 г.р.

Клинический диагноз: рак правой молочной железы.

Цитологическое заключение от 02.02.2001: клетки, обнаруженные в материале (пунктат) соответствуют коду: 8010/3 рак, БДУ.

С 05.02.2001 проводилась химиотерапия по схеме CAF. После этого была проведена лучевая терапия. От операции в дальнейшем отказалась.

Параллельно проводимым химиотерапии и лучевой терапии получала с 07.03.2001 структурированную воду «Ренорм» по 50 мл. 3 раза в день за 30 мин. до еды.

При этом, если после 1-го курса химиотерапии отмечалась тошнота рвота слабость и начали выпадать волосы, то при приеме воды «Ренорм» эти явления практически отсутствовали и, если они появлялись по ходу лечения, по своей интенсивности были намного меньше.

Показатели общих и биохимических анализов крови были в пределах допустимой нормы. Снижение некоторых показателей крови, связанное с проводимой терапией, корректировалось в течение 5-7 дней. Спустя 9 месяцев от начала терапии и до сих пор проводимые плановые исследования не подтвердили наличия опухоли или метастазов.

Пример 2. Больной П., 1927 г.р.

Клинический диагноз от 25.08.2000: Опухоль ободочной кишки. ИБС, СП 2ФК. Атеросклеротический кардиосклероз. НК1, ГБ 2 ст.

С 28.08.2000 по настоящее время принимает воду «Ренорм» по 50 мл 3 раза в день за 30 мин до еды. В марте 2002 г. оперирован. В операционном материале имелось кистозное образование, а атипичные клетки отсутствовали. Иначе говоря, в результате приема воды «Ренорм» опухоль погибла с последующим образованием кисты. Постоперационный период проходил без особенностей. Химиотерапия и лучевая терапия не применялись. Проводимые в дальнейшем исследования не подтвердили наличия опухоли или метастазов.

Пример 3. Больная П., 1935 г.р.

Клинический диагноз от 20.10.2001: меланома анального канала, pT1N0M0, 1-я стадия. Состояние после геморроидэктомии с удалением опухоли анального канала. Ранее обнаруженная в гистологическом материале меланома отсутствовала в операционном материале.

Гистологическое заключение: в слизисто-подслизистом слое толстой кишки комплексы меланомы.

Больная с 03.11.2001 и по 30.01.2003 принимала воду «Ренорм» по 50 мл 3 раза в день за 30 мин до еды.

Больной 04.12.2001 выполнена радикальная операция: брюшино-промежностная экстирпация прямой кишки с низведением сигмовидной кишки в промежностную рану.

Постоперационный период протекал без осложнений. Низведенная кишка фиксирована состоятельно. Промежностная рана заживала вторичным натяжением, без признаков задержки раневого отделимого.

Гистология: в удаленной кишке - истончение и атрофия плоского эпителия с очаговым папилломатозом; слизистая толстой кишки обычного строения, стенка кишки склерозирована, с очагами гистоцитарными инфильтратами. Комплексов меланомы не выявлено. В лимфатических узлах 1-, 2-, 3-го порядка метастазов не выявлено. В окружающей кишки клетчатке метастазов нет. Проводимые в дальнейшем исследования не подтвердили наличия опухоли или метастазов.

Пример 4. Больная Ж., 1927 г.р.

Клинический диагноз от 12.02.2003: рак матки.

Гистологическое заключение от 13.02.2003: в биопсийном материале во всех препаратах раздробленные фрагменты аденокарциномы, скорее всего тела матки.

С 23.02.2003 и по настоящее время принимает воду «Ренорм» по 50 мл 3 раза в день за 30 мин до еды.

Больной проводилась соответствующая лучевая терапия. Терапия походила без особенностей. Состояние больной при этом и в после проводимой терапии оставалось удовлетворительным, симптомы интоксикации практически не были отмечены.

Проводимые в дальнейшем исследования не подтвердили наличия опухоли или метастазов.

Пример 5. Больная Г., 1924 г.р.

Клинический диагноз от 11.02.2004: рак шейки матки.

Цитологическое заключение от 12.02.2004: плоскоклеточный рак шейки матки без ороговения. Гистологическое заключение от 28.02.2004: высокодифференцированный плоскоклеточный рак шейки матки с ороговением.

Гистологическая картина менялась от плоскоклеточного рака шейки матки к высокодифференцированному плоскоклеточному раку шейки матки. В дальнейшем (заключение от 27.05.2005) гистологическая картина показывает лимфоидную инфильтрацию в строме под эпителием и отсутствие атипичных клеток, что говорит об исчезновении ранее подтвержденного рака.

С 18.06.2004 и по настоящее время принимает воду «Ренорм» по 50 мл. 3 раза в день за 30 мин до еды.

Лучевая и химиотерапия не проводились.

Гистологическое заключение от 26.05.2005: в доставленных фрагментах шейки матки гистологическая картина стационарного эндоцервикоза на фоне хронического эндоцервицита. Покровный эпителий неравномерно утолщен с очагами дисплазии 2-3 ст. В строме под эпителием лимфоидная инфильтрация.

Пример 6. Больная О., 1947 г.р.

Клинический диагноз 2003 г.: инфильтративный протоковый рак левой молочной железы.

В примере 6 был диагностирован рак молочной железы, который обязательно дает метастазы (тем более за 3 года).

Гистологическое заключение 2003 г.: инфильтративный протоковый рак молочной железы.

С 2003 г. и по настоящее время принимает воду «Ренорм».

В настоящее время опухоль не растет и ее метастазирование не обнаруживается.

Пример 7.

Больной А.. 1939 г.р. Клинический диагноз: меланома кожи лица. Гистологическое заключение: картина соответствует меланоме кожи. С 06.01.05 принимает воду «Ренорм». По настоящее время опухоль не растет. Метастазов нет.

Пример 8.

Больная П., 1937 г.р.

Клинический диагноз: рак правой молочной железы с метастазами в печени.

Цитологическое заключение: клетки, обнаруженные в материале (пунктат), соответствуют коду: 8010/3 рак, БДУ.

С 13.05.99 принимает Ренорм. Через год метастазов в печени не обнаружено.

Изобретение относится к медицине, к онкологии, и может быть использовано для нормализации и стабилизации гомеостаза макрофагов при лечении онкологических заболеваний. Для этого принимают воду «Ренорм» в суточной дозе 20-1500 мл. При этом дозу принимают в 3 приема на пустой желудок. Способ позволяет снизить интоксикацию организма, вызванную химиотерапией или лучевой терапией, нормализовать и стабилизировать гомеостаз макрофагов, способствуя эффективному обнаружению атипичных клеток и их ликвидации. 1 з.п. ф-лы, 1 ил.

1. Способ нормализации и стабилизации гомеостаза макрофагов при лечении онкологических заболеваний, заключающийся в приеме воды «Ренорм» в суточной дозе 20-1500 мл.2. Способ по п.1, отличающийся тем, что прием дозы производят в 3 приема на пустой желудок.