СРЕДСТВО ДЛЯ ДЕСТРУКЦИИ ОПУХОЛЕВОЙ ТКАНИ И КОРРЕКЦИИ ЭНДОГЕННОЙ ИНТОКСИКАЦИИ ОРГАНИЗМА - ОПУХОЛЕНОСИТЕЛЯ И СПОСОБ ДЕСТРУКЦИИ ОПУХОЛЕВОЙ ТКАНИ И КОРРЕКЦИИ ЭНДОГЕННОЙ ИНТОКСИКАЦИИ ОРГАНИЗМА - ОПУХОЛЕНОСИТЕЛЯ Российский патент 2008 года по МПК A61K31/702 A61K31/194 A61K31/375 A61P35/00 

Изобретение относится к экспериментальной медицине и биологии и может использоваться в медико-биологических экспериментах с целью поиска новых способов лечения онкологических заболеваний.

Поиск новых подходов к терапии злокачественных новообразований остается актуальной медико-биологическим задачей.

Основными способами лечения онкологических заболеваний, приводящих к деструкции (лат. destructio - разрушение) опухолевой ткани, являются лучевая терапия [29], фотодинамическая терапия [11], а также химиотерапия, основанная на использовании различных фармакологических веществ (цитостатики, антиметаболиты, противоопухолевые антибиотики и ферменты [19]). Однако большинство из них, наряду с деструкцией опухолевых клеток, вызывают опосредованные патологические изменения в других органах и системах организма.

Известен способ повышения эффективности химиопрепарата за счет снижения общей токсичности, посредством стимулирования процессов лимфообразования в физиологическом режиме с использованием биофизических (электромагнитное поле, гипербарическая оксигенация и др.), фармакологических (глюкоза, реополиглюкин, манитол, аскорбиновая кислота, прозерин и др.) и биомолекулярных (группа эндогенных морфинов и др.) факторов [8].

Известны способы тепловой деструкции раковых клеток посредством воздействия на патологически измененный участок биоткани: СВЧ электромагнитным полем неинвазивным излучателем [26]; ультразвуковыми волнами с помощью многоканальной антенной решетки путем сканирования [4]; лазерным излучением с плотностью мощности 0,5-2 Вт/см², с длиной волны (1,264±0,01)мкм и с частотой следования импульсов (22,5±1) кГц [5].

Ограничением широкого применения данных способов деструкции опухоли является, во-первых, необходимость в специализированном и высокотехнологичном оборудовании, а во-вторых, вероятность повышения интоксикации организма в результате действия этих физико-химических факторов на ткани, не подверженные злокачественной трансформации.

В связи с чем существует необходимость в разработке способов деструкции опухолевой ткани, не вызывающих патологических изменений в тканях, не подверженных злокачественной трансформации, но и способствующих улучшению состояния организма-опухоленосителя.

В задачу предлагаемого изобретения положено расширение арсенала средств для деструкции опухолевой ткани и коррекции эндогенной интоксикации организма-опухоленосителя, а также разработка способа применения нового средства.

Поставленная задача достигается тем, что предлагается:

1. Применение препарата «олигохит актив» в качестве средства для деструкции опухолевой ткани.

2. Применение препарата «олигохит актив» в качестве средства для коррекции эндогенной интоксикации организма-опухоленосителя.

3. Способ деструкции опухолевой ткани и коррекции эндогенной интоксикации организма опухоленосителя, включающий введение лекарственного средства, отличающийся тем, что опухоленосителю per os ежедневно в дозе 90-100 мг/кг веса вводят препарат «олигохит актив» общим курсом не менее 7 дней.

«Олигохит актив» (иногда употребляют синоним - олигосахаридхитозана сукцинат-аскорбат) (ТУ 9289-004-57184729-03) представляет собой водорастворимый продукт, в котором олигосахарид хитозана (олигохит) (70%), сукцинат (15%) и аскорбат (15%) находятся в ионной связи друг с другом. В физиологических условиях янтарная кислота диссоциирована, поэтому название ее аниона - сукцинат часто применяют как синоним термина «янтарная кислота», а аскорбат - как синоним термина «аскорбиновая кислота». Исследования последних лет показали наличие у сукцината биологической активности с уникальным сочетанием проявлений: по отношению к здоровому организму он выступает в роли адаптогена, а при наличии патологических проявлений демонстрирует нетипично высокий для адаптогенов терапевтический эффект [28]. Сукцинат является нормальным клеточным метаболитом, играет большую роль в обеспечении энергетического баланса в клетке [2, 9, 15], обладает антигипоксическим [12, 28, 30], антиоксидантным [6, 28], радиопротекторным [10] и детоксицирующим действиями [28]. Известны несколько работ, в которых сообщается о результатах применения янтарной кислоты (ЯК) при опухолевом росте: T.Kamata с сотр. (1970) наблюдали торможение роста саркомы М-1 у крыс после введения ЯК [15], А.Л.Коваленко и М.Г.Романцов (1999) показали, что в результате введения ЯК наблюдается существенное уменьшение частоты спонтанных опухолей мышей и увеличение максимальной продолжительности их жизни [6]; Е.В.Козырева (1997) выявила снижение показателя смертности онкологических больных на фоне комплексного применения янтарной, лимонной и α-кетоглутаровой кислот с витаминами и травами [7]. И.А.Помыткин и С.П.Соловьев предложили в комплексе с изотопологами использовать соль ЯК как дополнительное средство в лечении новообразований [17]. Однако в работе В.Н.Анисимова и М.Н.Кондрашовой показано, что подкожные введения животным сукцината натрия в дозе 50 и 250 мг/кг в течение 10 дней, начиная с 3-го дня после трансплантации опухолей, мало влияли на рост перевиваемых опухолей у мышей и крыс [1].

В настоящее время аскорбиновая кислота (АК) применяется в комплексной терапии злокачественных новообразований. Однако данные литературы о влиянии АК на рост опухолей противоречивы. Л.С.Трухановой (1987) на модели канцерогенеза, индуцированного 1,2-диметилгидразином и эстрадиолдипропионатом, показано, что при введени мышам линии СВА растворов АК в концентрациях 0,3; 0,75; и 1,5% наблюдается отчетливая тенденция к уменьшению массы опухоли с увеличением концентрации АК [22]. В работе М.Polydock et al. показано увеличение продолжительности жизни (в 2 раза) мышей с асцидной карциномой Эрлиха на фоне введения АК в дозе 10 мг/кг [31], а по наблюдениям Т.Shingu et al. - ускорение роста опухоли (доза 25 мг/сутки) [32]. В эксперименте Н.А.Харьковской с сотр. введение морским свинкам АК в дозе 0,3 мг/кг массы приводило к полному рассасыванию саркомы, а в дозе 1 г/кг - ускорение роста опухоли [24]. Следовательно, вопрос о возможностях применения этого витамина в онкологии остается открытым.

В последние годы в различных областях медицины широко применяется хитозан и его производные. Хитозан получают путем переработки морских ракообразных, а после ферментативного расщепления высокомолекулярного хитозана образуется новый, водорастворимый продукт - олигосахарид хитозана. В таком виде он легко абсорбируется в кишечнике и быстро попадает в системный кровоток, а затем с током крови доносится к «органам-мишеням». Одно из новых направлений использования его в качестве носителя для лекарственных форм [25]. К.А.Трескуновым и Б.А.Комаровым предложено применять хитозан в виде солевой формы с L-глутаминовой кислотой в сочетании со специальными фитосборами параллельно с лучевой терапией и комплексной химиотерапией до и после операции при лечении онкозаболеваний [21].

Возможность применения препарата «олигохит актив» в качестве средства деструкции опухолевой ткани и коррекции эндогенной интоксикации организма опухоленосителя была показана на экспериментальной модели лимфосаркомы Плисса.

Злокачественных опухоли, независимо от вызвавшей их причины, локализации и гистогенеза характеризуются морфологическим атипизмом, проявляющемся в нарушении структуры ткани или клеток [14]. Так, выбранная нами модель экспериментальной опухоли лимфосаркома Плисса (ЛФС), полученная в 1958 году после подкожной перевивки опухоли, возникшей у крысы, получавшей 3,3 дихлорбензидин, характеризуется следующими особенностями: состоит из мягких, округлой формы клеток, большая часть которых занята крупным ядром; хроматин располагается главным образом в периферической зоне ядра; ядрышки крупные, гиперхромные; цитоплазма отличается умеренной базофилией. Опухоль обладает ярко выраженным инфильтративным ростом в пограничные соединительную и жировую ткань, а также мышцы; метастазирует [16].

Способ деструкции опухолевой ткани и коррекции эндогенной интоксикации был разработан на модели лимфосаркома Плисса; он заключается в том, что животному - опухоленосителю ежедневно per os дают раствор «олигохит актив» концентрацией 90-100 мг/кг веса, общим курсом не менее 7 дней. Выбор дозы и курса введения обоснован как теоретическими данными, так и собственными экспериментальными исследованиями. В статье М.В.Васина с сотр. показано, что максимальный антитоксический и антиоксидантный эффект достигается при дозе ЯК 100 мг/кг веса [3]; а Н.И.Федотчева с сотр. выявили, что в гипометаболических состояниях эффективными дозами при введении сукцината перорально являются 50-100 мг/кг веса [23]. Срок введения веществ выбран как минимальный и соответствующий однократному введению для человека [18]. В наших исследованиях показано, что использование препарата «олигохит актив» в концентрации 90-100 мг/кг веса, общим курсом 7 дней, эффективно для коррекции морфологического состояния печени [27] и свободнорадикального баланса организма опухоленосителя.

Для сравнения были введены группы животных, получавших отдельно янтарную кислоту, олигосахарид хитозана и олугосахарид хитозанасукцинат по той же схеме.

Эксперимент выполнен на 60 белых беспородных крысах, которые были разделены на группы:

1 группа - интактная (n=10). Здоровые животные, не подвергавшиеся каким-либо воздействиям.

2 группа - контрольная (n=10). Животные с ЛФС, без воздействия, получавшие чистую воду.

3 группа - опытная-1 (n=10) (животные с ЛФС, получавшие с 6 дня роста опухоли раствор янтарной кислоты, 7 дней).

4 группа - опытная-2 (n=10) (животные с ЛФС, получавшие с 6 дня роста опухоли раствор олигосахарида хитозана, 7 дней).

5 группа - опытная-3 (n=10) (животные с ЛФС, получавшие с 6 дня роста опухоли раствор олигосахарида хитозана сукцината, 7 дней).

6 группа - опытная-4 (n=10) (животные с ЛФС, получавшие с 6 дня роста опухоли раствор «олигохит актив», 7 дней).

1) На гистологических срезах, окрашенных гематоксилином и эозином, наряду с визуальным описанием ткани ЛФС Плисса, для объективной оценки эффекта вводимых препаратов проводили количественное изучение методом морфометрического анализа, основанного на принципах стереологии с использованием окулярной морфометрической сетки Стефанова С.Б., содержащей 25 узлов, при увеличении микроскопа 10×40×1.5 [20]. На площади препарата, ограниченной сеткой, подсчитывали общее количество клеток опухоли, количество активных клеток и погибающих клеток опухоли. К погибающим клеткам относили клетки с лизирующимися ядрами, а также в состоянии пикноза и кариорексиса [16]. Полученные данные были обработаны на IBM PC/AT с помощью пакетов прикладных программ Statistica-6.0 (Windows ХР). Результаты представлены в таблице 1.

Таблица 1Морфометрические показатели ткани лимфосаркомы ПлиссаГруппы животныхобщее количество клетокколичество активных клетокколичество погибающих клетокконтрольная36,5±2,433,6±2,32,9±0,7опытная-137,2±3,735,3±3,61,9±0,6опытная-234,4±3,328,8±1,7^*5,6±1,2^*опытная-339,9±3,937,7±4,12,2±0,4опытная-431,4±2,0^*17,8±1,5^*13,6±1,3^** - различия достоверны при р≤0,05 по сравнению с контрольной группой.

Гистологическое исследование ЛФС Плисса контрольной группы показало: опухоль состоит из тесно прилегающих друг к другу лимфоидных клеток мелкой округлой формы с круглыми ядрами, занимающими почти целиком базофильную цитоплазму. В отдельных участках опухоли небольшие зоны некроза со слабовыраженной лимфоцитарно-макрофагальной инфильтрацией.

Введение сукцината животным с ЛФС Плисса приводит к замедлению прорастания опухоли в жировую клетчатку, хотя строение опухолевой ткани со стороны опухоли не изменено.

Применение олигосахарида хитозана приводит к фрагментации опухолевой ткани с признаками полнокровия и отека, дискомплексации и вакуолизации клеток, склерозированию сосудов. В то же время выраженного некроза опухоли нет, отмечена лишь дистрофия отдельных опухолевых клеток.

После применения олигосахарида хитозана сукцината наблюдалась дискомплексация и небольшой некроз опухоли с сохранившимися участками опухолевой ткани.

У крыс-опухоленосителей применение комплекса «олигохит актив» вызвало обширные очаги некроза, с обильной инфильтрацией соединительно тканых элементов, в которых опухолевые клетки характеризовались выраженными дистрофическими изменениями.

Морфологические исследования позволили количественно оценить изменения, происходящие в опухоли крыс при введении исследуемых веществ.

Под влиянием янтарной кислоты общее количество клеток в опухоли, по сравнению с контролем (36,5±2,4) достоверно не изменилось (37,2±3,7), но уменьшилось число гибнущих на 35% (1,9±0,6), а количество активных клеток имеет тенденцию к росту (35,3±3,6) и (33,6±2,3 - в контроле). По-видимому, ЯК - неспецифический стимулятор пролиферации клеток.

На фоне введения олигосахарида хитозана общее число клеток опухоли снизилось незначительно (34,4±3,3), при достоверном увеличении количества гибнущих клеток в 1,9 раза (5,6±1,2) и снижении количества активных клеток на 15% (28,8±1,7), по сравнению с контролем.

Введение олигосахарида хитозана сукцината не вызвало достоверных изменений в ткани ЛФС Плисса.

«Олигохит актив» достоверно снизил общее количество опухолевых клеток (31,4±2,0), в результате увеличения в 4,7 раза количества дегенерирующих опухолевых клеток (13,6±1,3), и уменьшения числа активных клеток опухоли в 1,9 раза (17,8±1,5), по сравнению с аналогичными показателями животных контрольной группы (таблица 1).

2) Уровень эндогенной интоксикации оценивали по методу М.Я.Малаховой (1995) путем определения веществ низкой и средней молекулярной массы (ВСНММ) в плазме крови экспериментальных животных [13]. Регистрация спектра исследуемого раствора в зоне ультрафиолета на СФ позволяет произвести комплексную оценку токсических повреждающих факторов и более 200 наименований веществ нормального и патологического метаболизма. Суть метода состоит в осаждении крупномолекулярных частиц плазмы крови и эритроцитов 15%-м раствором трихлоруксусной кислоты с последующей спектрофотометрией водного раствора супернатанта при длине волны 238-298 нм. Шаг длины волны 4 нм. Расчет количества веществ низкой и средней молекулярной массы производится по формуле:

ВНСММ=(Е238+Е242+Е246+...+Е298)*4 (у.е.).

Полученные данные были обработаны на IBM PC/AT с помощью пакетов прикладных программ Statistica-6.0 (Windows XP). Результаты представлены в таблице 2.

Таблица 2Уровень эндогенной интоксикации плазмы крови экспериментальных животныхГруппы животныхУровень эндогенной интоксикации (у.е.), М±mинтактная9,13±0,13контрольная12,64±0,25^**опытная-110,42±0,17^*опытная-211,61±0,31^*опытная-312,08±0,13^*опытная-49,35±0,17^*** - различия достоверны при р≤0,05 по сравнению с группой интактных животных.^* - различия достоверны при р≤0,05 по сравнению с группой животных-опухоленосителей «без воздействия».

Как видно из таблицы 2 через 14 дней после перевивки ЛФС Плисса в плазме крови животных контрольной группы уровень эндогенной интоксикации вырос в среднем на 38% (12,64±0,25 у.е.) по сравнению с показателями интактных животных (9,13±0,13 у.е.).

Наибольшая коррекция уровня эндогенной интоксикации в плазме крови животных-опухоленосителей наблюдалась на фоне введения препарата «олигохит актив» (9,35±0,17 у.е.) - на 26% ниже уровня эндогенной интоксикации в плазме крови животных контрольной группы (12,64±0,25 у.е.).

В группе крыс с ЛФС Плисса, получавших водный раствор янтарнойкислоты, содержание ВНСММ (10,42±0,17 у.е.) в плазме крови на 18% ниже, чем в контрольной группе (12,64±0,25 у.е.).

В то время, как введение растворов олигосахарида хитозана и олигосахарида хитозана сукцината незначительно повлияло на развитие эндогенной интоксикации у крыс с перевитой ЛФС Плисса (на 8% и 4%, соответственно).

Таким образом, сравнительное изучение биологического действия различных веществ на экспериментальной модели перевивной опухоли выявило, что применение комплекса «олигохит актив» приводит к деструкции опухолевой ткани и коррекции эндогенной интоксикации организма опухоленосителя, что позволяет предложить данный способ для использования в медико-биологических экспериментах с целью поиска новых способов лечения онкологических заболеваний, а также применения этого способа в ветеринарной практике.

Пример 1 (Серия экспериментов, иллюстрирующая эффективность препарата «олигохит актив» в отношении деструкции опухолевой ткани)

На 14 день после перевивки опухолевого штамма ЛФС Плисса (на 8 день после начала введения веществ) проведена декапитация всех подопытных животных под эфирным наркозом.

Морфометрическое описание гистологических срезов, окрашенных гематоксилином и эозином, заключалось в подсчете общего количества клеток опухоли, количества активных)1 погибающих клеток опухоли на площади, ограниченной окулярной морфометри ческой сеткой Стефанова С.Б. К погибающим клеткам относили клетки с лизирующимися ядрами, а также в состоянии пикноза и кариорексиса.

1) Крысе №22, весом 260 г в область правого бедра подкожно трансплантировали взвесь клеток опухолевого штамма лимфосаркомы (ЛФС) Плисса в 0,5 мл физиологического раствора. На 14 день после перевивки опухолевого штамма ЛФС Плисса проведена декапитация животного №22 под эфирным наркозом. Морфометрический анализ гистологических срезов ткани опухоли животного №22 показал, что общее количество клеток опухоли равно 37, количество активных клеток - 34, количество погибающих клеток опухоли - 3.

2) Крысе №32, весом 250 г в область правого бедра подкожно трансплантировали взвесь клеток опухолевого штамма ЛФС Плисса в 0,5 мл физиологического раствора. С 6-го дня после трансплантации опухоли в течение 7 дней животное получало ежедневно по 1 мл водного раствора янтарной кислоты в концентрации 90-100 мг/кг веса. По сравнению с контролем, достоверных изменений морфометрических показателей ткани ЛФС Плисса не было: общее количество клеток опухоли - 37, количество активных опухолевых клеток - 35 и погибающих клеток опухоли - 2.

3) Крысе №45, весом 250 г в область правого бедра подкожно трансплантировали взвесь клеток опухолевого штамма ЛФС Плисса в 0,5 мл физиологического раствора. С 6-го дня после трансплантации опухоли в течение 7 дней животное получало ежедневно по 1 мл водного раствора олигосахарида хитозана в концентрации 90-100 мг/кг веса. Морфометрический анализ гистологических срезов ткани опухоли животного №45 выявил снижение общего количества клеток на 11% (33) и количества активных опухолевых клеток на 17% (28), по сравнению с контролем. Число погибающих клеток опухоли увеличилось до 5.

4) Крысе №4, весом 245 г в область правого бедра подкожно трансплантировали взвесь клеток опухолевого штамма ЛФС Плисса в 0,5 мл физиологического раствора. С 6-го дня после трансплантации в течение 7 дней животное получало ежедневно по 1 мл водного раствора олигосахарида хитозана сукцината в концентрации 90-100 мг/кг веса. Морфометрический анализ гистологических срезов ткани опухоли животного №4 показал, что общее количество клеток опухоли - 40, количество активных опухолевых клеток - 38, число погибающих клеток опухоли - 2.

5) Крысе №12, весом 255 г в область правого бедра подкожно трансплантировали взвесь клеток опухолевого штамма ЛФС Плисса в 0,5 мл физиологического раствора. С 6-го дня после трансплантации опухоли в течение 7 дней животное получало ежедневно по 1 мл водного раствора препарата «олигохит актив» в концентрации 90-100 мг/кг веса. Общее количество клеток ЛФС Плисса на площади препарата, ограниченной сеткой, изменилось, по сравнению с контролем, незначительно (33). В то время как количество активных клеток опухоли снизилось на 44% (19), а число гибнущих клеток опухоли в 4,7 раза (14).

Пример №2 (Серия экспериментов, иллюстрирующая эффективность препарата «олигохит актив» в отношении коррекции эндогенной интоксикации организма опухоленосителя).

На 14 день после перевивки опухолевого штамма ЛФС Плисса (на 8 день после начала введения веществ) проведена декапитация всех подопытных животных под эфирным наркозом. Измерение уровня эндогенной интоксикации организма проводили по содержанию веществ низкой и средней молекулярной массы (ВНСММ) в плазме крови экспериментальных животных.

1) Крыса №51, весом 265 г не подвергалась каким-либо воздействиям, содержалась в стандартных условиях. Уровень эндогенной интоксикации в плазме крови крысы №51 составил 9,00 у.е.

2) Крысе №22 (контроль), весом 260 г в область правого бедра подкожно трансплантировали взвесь клеток опухолевого штамма лимфосаркомы (ЛФС) Плисса в 0,5 мл физиологического раствора. На 14 день после перевивки опухолевого штамма ЛФС Плисса уровень эндогенной интоксикации в плазме крови крысы №22 составил 12,83 у.е. Эндогенная интоксикация увеличилась на 42% по сравнению с показателем животного №51.

3) Крысе №32, весом 250 г в область правого бедра подкожно трансплантировали взвесь клеток опухолевого штамма ЛФС Плисса в 0,5 мл физиологического раствора. С 6-го дня после трансплантации опухоли в течение 7 дней животное получало ежедневно по 1 мл водного раствора янтарной кислоты в концентрации 90-100 мг/кг веса. На 14 день после трансплантации опухоли (на 8 день после начала введения раствора янтарной кислоты) уровень эндогенной интоксикации в плазме крови крысы №32 составил 10,34 у.е. Эндогенная интоксикация ниже на 19% по сравнению с контролем.

4) Крысе №45, весом 250 г в область правого бедра подкожно трансплантировали взвесь клеток опухолевого штамма ЛФС Плисса в 0,5 мл физиологического раствора. С 6-го дня после трансплантации опухоли в течение 7 дней животное получало ежедневно по 1 мл водного раствора олигосахарида хитозана в концентрации 90-100 мг/кг веса. На 14 день после трансплантации опухоли (на 8 день после начала введения раствора олигосахарида хитозана) уровень эндогенной интоксикации в плазме крови крысы №45 составил 11,65 у.е. Эндогенная интоксикация ниже аналогичного показателя животного контрольной группы на 9%.

5) Крысе №4, весом 245 г в область правого бедра подкожно трансплантировали взвесь клеток опухолевого штамма ЛФС Плисса в 0,5 мл физиологического раствора. С 6-го дня после трансплантации опухоли в течение 7 дней животное получало ежедневно по 1 мл водного раствора олигосахарида хитозана сукцината в концентрации 90-100 мг/кг веса. На 14 день после трансплантации опухоли (на 8 день после начала введения раствора олигосахарида хитозана сукцината) уровень эндогенной интоксикации в плазме крови крысы №4 составил 12,15 у.е. Эндогенная интоксикация ниже аналогичного показателя животного контрольной группы на 5%.

6) Крысе №12, весом 255 г в область правого бедра подкожно трансплантировали взвесь клеток опухолевого штамма ЛФС Плисса в 0,5 мл физиологического раствора. С 6-го дня после трансплантации опухоли в течение 7 дней животное получало ежедневно по 1 мл водного раствора препарата (олигохит актив» в концентрации 90-100 мг/кг веса. На 14 день после трансплантации опухоли (на 8 день после начала введения раствора препарата «олигохит актив») уровень эндогенной интоксикации в плазме крови крысы №12 составил 9,47 у.е. Эндогенная интоксикация ниже аналогичного показателя животного контрольной группы на 26%.

Пример №3 (Серия экспериментов, иллюстрирующая способ деструкции опухолевой ткани и коррекции эндогенной интоксикации организма опухоленосителя).

На 14 день после перевивки опухолевого штамма ЛФС Плисса (на 8 день после начала введения веществ) проведена декапитация всех подопытных животных под эфирным наркозом.

Измерение уровня эндогенной интоксикации организма проводили по содержанию веществ низкой и средней молекулярной массы (ВНСММ) в плазме крови экспериментальных животных.

Морфометрическое описание гистологических срезов, окрашенных гематоксилином и эозином, заключилось в подсчете общего количества клеток опухоли, количества активных и погибающих клеток опухоли на площади, ограниченной окулярной морфометрическои сечкой Стефанова С.Б. К погибающим клеткам относили клетки с лизирующимися ядрами, а также в состоянии пикноза и кариорексиса.

1) Крыса №51 весом 265 г не подвергалась каким-либо воздействиям, содержалась в стандартных условиях. Уровень эндогенной интоксикации в плазме крови крысы №51 составил 9,00 у.е.

2) Крысе №22 (контроль), весом 260 г в область правого бедра подкожно трансплантировали взвесь клеток опухолевого штамма лимфосаркомы (ЛФС) Плисса в 0,5 мл физиологическою раствора. На 14 день после перевивки опухолевого штамма ЛФС Плисса уровень эндогенной интоксикации в плазме крови крысы №22 составил 12,83 у.е., что на 42% выше по сравнению с показателем здорового животного №51. Морфометрический анализ гистологических срезов ткани опухоли животного №22 показал, что общее количество клеток опухоли равно 37, количество активных клеток - 34, количество погибающих клеток опухоли - 3.

3) Крысе №32, весом 250 г в область правого бедра подкожно трансплантировали взвесь клеток опухолевого штамма ЛФС Плисса в 0,5 мл физиологического раствора. С 6-го дня после трансплантации опухоли в течение 7 дней животное получало ежедневно по 1 мл водного раствора янтарной кислоты в концентрации 90-100 мг/кг веса. На 14 день после трансплантации опухоли (на 8 день после начала введения раствора янтарной кислоты) уровень эндогенной интоксикации в плазме крови крысы №32 составил 10,34 у.е., что на 19% ниже, чем в контроле. Достоверных изменений морфометрических показателей ткани ЛФС Плисса, по сравнению с контролем, не было: общее количество клеток опухоли - 37, количество активных опухолевых клеток - 35 и погибающих клеток опухоли - 2.

4) Крысе №45, весом 250 г в область правого бедра подкожно трансплантировали взвесь клеток опухолевого штамма ЛФС Плисса в 0,5 мл физиологического раствора. С 6-го дня после трансплантации опухоли в течение 7 дней животное получало ежедневно по 1 мл водного раствора олигосахарида хитозана в концентрации 90-100 мг/кг веса. На 14 день после трансплантации опухоли (на 8 день после начала введения раствора олигосахарида хиптозана) уровень эндогенной интоксикации в плазме крови крысы №45 составил 11,65 у.е., ниже аналогичного показателя животного контрольной группы на 9%. Морфометрический анализ гистологических срезов ткани опухоли животного №45 выявил снижение общего количества клеток на 11% (33) и количества активных опухолевых клеток на 17% (28), по сравнению с контролем. Число погибающих клеток опухоли увеличилось до 5.

5) Крысе №4, весом 245 г в область правого бедра подкожно трансплантировали взвесь клеток опухолевого штамма ЛФС Плисса в 0,5 мл физиологического раствора. С 6-го дня после трансплантации опухоли в течение 7 дней животное получало ежедневно по 1 мл водного раствора олигосахарида хитозана сукцината в концентрации 90-100 мг/кг веса. На 14 день после трансплантации опухоли (на 8 день после начала введения раствора олигосахарида хитозана сукцината) уровень эндогенной интоксикации в плазме крови крысы №4 составил 12,15 у.е., что на 5% ниже аналогичного показателя животного контрольной группы. Морфометрический анализ гистологических срезов ткани опухоли животного №4 показал, что общее количество клеток опухоли - 40, количество активных опухолевых клеток - 38, число погибающих клеток опухоли - 2.

6) Крысе №12, весом 255 г в область правого бедра подкожно трансплантировали взвесь клеток опухолевого штамма ЛФС Плисса в 0,5 мл физиологического раствора. С 6-го дня после трансплантации опухоли в течение 7 дней животное получало ежедневно по 1 мл водного раствора препарата «олигохит актив» в концентрации 90-100 мг/кг веса. На 14 день после трансплантации опухоли (на 8 день после начала введения раствора препарата «олигохит актив») уровень эндогенной интоксикации в плазме крови крысы №12 составил 9,47 у.е., что ниже аналогичного показателя животного контрольной группы на 26%. Общее количество клеток ЛФС Плисса на площади препарата, ограниченной сеткой, изменилось, по сравнению с контролем, незначительно (33). В то время как количество активных клеток опухоли снизилось на 44% (19), а число гибнущих клеток опухоли в 4,7 раза (14).

ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ

1. Анисимов В.Н., Кондрашова М.Н. Влияние янтарной кислоты на частоту спонтанных опухолей и продолжительность жизни мышей. // Докл. АН СССР; 1979; 5: 1242-1245.

2. Афанасьев В.В. Клиническая фармакология реамберина (очерк): Пособие для врачей. - СПб., 2005: 44 с.

3. Васин М.В., Ушаков И.Б., Ковтун В.Ю. и др. Влияние мелатонина, аскорбиновой и янтарной кислот на кумуляцию токсического эффекта гаммафоса (амифостина) при его повторном применении. // Фармакология и токсикология; 2004; 137(5): 515-518.

4. Загускин С.Л. и др. Способ селективной деструкции раковых клеток. Патент RU №2147848.

5. Загускин С.Л. и др. Способ избирательной деструкции раковых клеток. Патент RU №2147847.

6. Коваленко А.Л., Романцов М.Г. Реамберин 1,5% для инфузий: от эксперимента в клинику. - СПб.: «СП Минимакс»; 1999: 112 с.

7. Козырева Е.В. Использование янтарной кислоты и других компонентов энергетического обмена в лечении онкологических больных. / сб. науч. статей «Янтарная кислота в медицине, пищевой промышленности, сельском хозяйстве». - Пущино: ОНТИ ПНЦРАН; 1997: 113-117.

8. Колганов А.С. Способ усиления эффективности действия противоопухолевого химиопрепарата. Патент RU №2112983.

9. Кондрашова М.Н. Выясненные и наметившиеся вопросы на пути исследования регуляции физиологического состояния янтарной кислотой. // Терапевтическое действие янтарной кислоты. - Пущино; 1976: 4-12.

10. Косенко Е.А., Каминский Ю.Г. Янтарнокислый натрий-радиопротектор. // сб. науч. статей «Янтарная кислота в медицине, пищевой промышленности, сельском хозяйстве». - Пущино: ОНТИ ПНЦРАН; 1997: 128-133.

11. Куценюк В.В., Гамалея Н.Ф. Фотодинамическая терапия злокачественных опухолей. // Онкология; 2003; 5(1): 69-72.

12. Лукьянова Л.Д. Новые подходы к созданию антигипоксантов метаболического действия. // Вестник РАМН; 1999; 3: 18-25.

13. Малахова М.Я. Метод регистрации эндогенной интоксикации. - СПб.: М.А.П.О; 1995: 35 с.

14. Молотков О.В., Ефременков С.В., Решедько В.В. Патофизиология в вопросах и ответах: учебное пособие. / Под ред. О.В.Молоткова. - Смоленск: САУ; 1999: 271-273.

15. Морозкина Т.С. Энергетический обмен и питание при злокачественных новообразованиях. / Под. ред. В.С.Шапота. - Мн.: Беларусь; 1989: 191 с.

16. Плисе Г.Б. Онкологическая характеристика нового штамма лимфосаркомы крысы. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины; 1961; 2: 95-99.

17. Помыткин И.А., Соловьев С.П. Способ лечения новообразований. Патент RU №2275920.

18. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. / Ред. В.П.Фисенко и др. - М.: ЗАО «ИИА «Ремедиум»; 2000: с.21.

19. Соколов Н.Н., Занин В.А., Александрова С.С.Бактериальные L-аспарагиназы и глутамин(аспарагин)азыя: некоторые свойства, строение и противоопухолевая активность. // Вопросы медицинской химии; 2000; 46(6): 531-548.

20. Солопаева И.М., Стефанов С.Б., Жданова Т.Ф. Количественная морфология биоктатов органов пищеварения. / Методич. рекомендации. -Горький; 1982: 16 с.

21. Трескунов К.А., Комаров Б.А. Способ лечения онкозаболеваний. Патент RU №2165253.

22. Труханова Л.С. Влияние аскорбиновой кислоты на индукцию сарком матки у мышей. // Вопросы онкологии; 1987; 33(11): С.53-57.

23. Федотчева Н.И., Игнатьев Д.А., Лукоянова Н.А., Кондрашова М.Н. Роль янтарной кислоты в активации гипометаболических состояний. // сб. науч. статей «Янтарная кислота в медицине, пищевой промышленности, сельском хозяйстве». - Пущино: ОНТИ ПНЦ РАН: 1997: 70-74.

24. Харьковская Н.А., Фарон Р.А., Хрусталев С.А. Экспериментальное изучение влияния аскорбиновой кислоты на спонтанный бластомогенез. Рук. деп. В ВИНИТИ 26.01.87. Рег. №570-В87.

25. Хитозан per os. Пер. с англ. / Под ред. Риккардо А.А. Муццарелли. - Н.Новгород.: изд-во «Вектор-ТиС»; 2001: 372 с.

26. Шафранов В.В. и др. Способ деструкции сосудистых опухолей у детей. Патент RU №2157134.

27. Щербатюк Т.Г. и др. Способ коррекции морфологического состояния печени опухоленосителей. Патент RU №2271813.

28. Янтарная кислота в медицине, пищевой промышленности, сельском хозяйстве: сб. науч. статей. / Под ред. М.Н. Кондрашовой - Пущино: ОНТИ ПНЦ РАН; 1997: 300 с.

29. Ярмоненко С.П., Вайнсон А.А. Радиобиология человека и животных: Учеб. Пособие. / Под. ред. С.П.Ярмоненко. - М.: Высш. шк.; 2004: 549 с.

30. Chance, B.C. Hollunger G. The interaction of energy and electron transfer reactions in mitochondria / J. Biol. Chem.; 1961; 236(5): 1534-1584.

31. Polydock M.E., Rice D.R.J., Aleandri L. Inhibiting effect of dehydroascorbic acid on cell division in ascites tumors in mice // Exp. Cell. Biol.; 1982; 50(1): 34-38.

32. Shingu M., Sumi Т., Araki Y. Et al. Влияние аскорбиновой кислоты на мышей с асцидной опухолью Эрлиха. // J. Kurume Med. Assoc.; 1975; 38(10): 1009-1013.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и биологии и может использоваться в медико-биологических экспериментах с целью разработки новых способов лечения онкологических заболеваний. Изобретение заключается в том, что животным ежедневно дают препарат «олигохит актив» per os из расчета 90-100 мг/кг веса животного, общим курсом не менее 7 дней. Способ позволяет вызвать деструкцию опухолевой ткани, которая выражается в увеличении количества погибающих клеток и уменьшении числа активных клеток опухоли животных и провести коррекцию эндогенной интоксикации организма-опухоленосителя. Способ не вызывает патологических изменений в тканях, не подверженных злокачественной трансформации, и улучшает состояние организма-опухоленосителя. 3 н.п. ф-лы, 2 табл.

1. Применение препарата «олигохит актив» в качестве средства для деструкции опухолевой ткани.2. Применение препарата «олигохит актив» в качестве средства для коррекции эндогенной интоксикации организма-опухоленосителя.3. Способ деструкции опухолевой ткани и коррекции эндогенной интоксикации организма-опухоленосителя, включающий введение лекарственного средства, отличающийся тем, что опухоленосителю per os ежедневно в дозе 90-100 мг/кг веса вводят препарат «олигохит актив» общим курсом не менее 7 дней.