СПОСОБ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ СНИЖЕНИЯ АНТИАГРЕГАЦИОННОЙ АКТИВНОСТИ СТЕНКИ СОСУДОВ Российский патент 2008 года по МПК A61B5/00 G01N33/49 G01N33/50 

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии и ангиологии.

Известны методы исследования сосудистых функций (Баркаган З.С., Момот А.П. Основы диагностики нарушений гемостаза. -М., 1999. - 214 с.), однако способа раннего выявления ослабления антиагрегационной актисности сосудов не разработано.

В клинической лабораторной диагностике применяется метод исследования антиагрегационной активности сосудистой стенки с оценкой агрегации тромбоцитов (AT) до и после временной венозной окклюзии.

Однако, никогда ранее результаты данного диагностического метода с использованием трех основных индукторов (АДФ, коллагена и тромбина) не выражали одним числом, высчитывая комплексный антиагрегационный индекс сосудистой стенки (КАИСС), по которому можно было судить о развитии раннего ослабления антиагрегационной активности сосудов.

Целью изобретения является повышение эффективности раннего выявления ослабления антиагрегационной активности сосудов.

Сущность заявляемого способа заключается в том, что для раннего выявления ослабления антиагрегационной активности сосудов больным проводится исследование антиагрегационная активность сосудов с АДФ, коллагеном и тромбином. Из полученных результатов рассчитывают среднеарифметическое значение, которое является КАИСС, позволяющим выявлять ослабление их антиагрегационной активности на ранних этапах.

Способ позволяет своевременно диагносцировать нарушения КАИСС у пациентов, давая возможность назначать на ранних этапах соответствующее лечение, переводящее КАИСС на уровень, близкий к таковому для здоровых людей. При регулярном обследовании в последующем согласно заявляемого способа возможно контролировать КАИСС, что позволит поддерживать его в оптимальном режиме функционирования, существенно снижая риск тромботических осложнений, уменьшая число случаев временной нетрудоспособности, выходов на инвалидность и снижая смертность среди сосудистых больных.

Заявляемый способ осуществляется следующим образом.

Для проведения исследования оценивается AT (Шитикова А.С. В кн.: Гемостаз. Физиологические механизмы, принципы диагностики основных форм геморрагических заболеваний. Под ред. Н.Н.Петрищева, Л.П.Папаян. СПб.: 1999. С.49-52).

Кровь забирают с цитратом натрия 3,8% в соотношении 9:1, центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин, для получения богатой тромбоцитами плазмы (БТП). Часть плазмы отбирают, а оставшуюся центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин, получая бедную тромбоцитами плазму (БеТП). БТП стандартизируют по числу тромбоцитов путем разбавления исходной БТП аутологичным образцом БеТП (до 200·10⁹/л). Концентрация кровяных пластинок в исходной БТП подсчитывается в камере Горяева (в 50 больших квадратах). Объемы смешиваемых БТП и БеТП определяют по формуле

V_БеТП=V_БТП·[(N/200000)-1],

где V_БеТП - объем бедной тромбоцитами плазмы,

N_БТП - объем богатой тромбоцитами плазмы,

N - счетная концентрация тромбоцитов в исходной БТП (клеток/мкл).

Из отобранного объема стандартизированной плазмы на предметное стекло наносят 0,02 мл плазмы и другой пипеткой 0,02 мл р-ра индуктора коллагена в стандартной концентрации (разведение 1:2 основной суспензии). Стеклянной палочкой смешивают плазму с индукторами и включают секундомер. Смесь перемешивают так, чтобы жидкость занимала окружность диаметром около 2 см.

Покачивая стекло круговыми движениями в проходящем свете осветителя, на черном фоне следят через лупу за возникновением агрегатов. При появлении отчетливых агрегатов, просветлении раствора и прилипании части агрегатов к стеклу секундомер отключают, фиксируя время агрегации тромбоцитов.

Реакцию повторяют 2-3 раза с каждым индуктором, находя среднее арифметическое значение для каждого индуктора.

Антиагрегационная активность сосудистой стенки определяется по методу (Балуда В.П., Лукьянова Т.И., Балуда М.В. Метод определения антиагрегационной активности стенки сосудов человека. // Лабор. Дело, 1983. - №6. - с.17-20). В основе этого метода лежит определение времени удлинения агрегации тромбоцитов в плазме, полученной из крови после временной венозной окклюзии.

На плечо руки, из сосудов которой еще не производился забор крови, накладывается манжетка сфигмоманометра и создается давление на 10 мм рт.ст. выше систолического. Через 3 минуты производится взятие 9 мл крови в 1 мл 3,8% раствора цитрата натрия. Ее немедленно центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин для получения богатой тромбоцитами плазмы. Плазму отсасывают пипеткой и сразу же помещают в тающий лед, где хранят до начала исследований. Повторно пробу центрифугируют 20 мин при 3000 об/мин для получения бестромбоцитной плазмы. После подсчета количества тромбоцитов в богатой тромбоцитами плазмы, полученной до венозного застоя, ее разводили БеТП, взятой до (1 проба) и после (2 проба) венозного застоя до концентрации 200000 тромбоцитов/мкл. Полученную смесь встряхивают и инкубируют 10 минут при 20-22°С, затем проводят AT с АДФ (0,5×10^-4М.), коллагеном (разведение 1:2 основной суспензии) и тромбином (0,125 ед/мл) на стекле.

По удлинению времени агрегации тромбоцитов после венозного застоя судили об антиагрегационной активности плазмы крови, обусловленной поступлением в кровоток простациклина из сосудистой стенки. Индекс антиагрегационной активности сосудистой стенки (ИААСС) рассчитывали по формуле

Нормальными значениями для АДФ, коллагена и тромбина можно считать ИААСС 1,65-1,78, 1,50-1,60 и 1,35-1,67 соответственно.

Применение нескольких индукторов агрегации с последующим вычислением из полученных значений ИААСС значение КАИСС (норма 1,50-1,68) позволяет выявлять у пациентов риск развития ослабления антиагрегационной активности сосудов (КАИСС - 1,41-1,49), что требует нормализации образа жизни, стабильной нормализации артериального давления и ежемесячного контроля состояния тромбоцитарного гемостаза, а при значении КАИСС от 1,40 и ниже - необходимо немедленное проведение лечения пациентов.

Внедрение данного способа ранней диагностики ослабления антиагрегационной активности сосудов у различных категорий больных в практику лечебных учреждений позволит решить ряд насущных социально-экономических проблем современности. Ранняя диагностика у различных больных позволит своевременно начинать лечение тромбофиллии, что сократит у этих пациентов сроки временной нетрудоспособности, профилактирует инсульты и инфаркты, уменьшит число выходов на инвалидность и снизит смертность среди данного контингента больных.

Пример 1. Больная М. 43 года, страдающая артериальной гипертонией с метаболическим синдромом на протяжении 3 лет, ведущая здоровый образ жизни, обследована во время диспансерного осмотра по поводу артериальной гипертонии. У больной была взята кровь и исследована по изложенной выше схеме с оценкой ИААСС, с АДФ, коллагеном и тромбином. Установлено, что ИААСС АДФ - 1,65, коллаген 1,55, тромбин - 1,40, КАИСС составлял 1,53, т.е. у пациентки не было выявлено признаков угнетения антиагрегационной функции сосудистой стенки. Больной было рекомендовано и далее контролировать артериальное давление и вести здоровый образ жизни. Так обследование через 12 нед. не выявило отрицательных изменений значений ИААСС - для АДФ -1,70, коллаген - 1,60, тромбина - 1,37. КАИСС составлял 1,55.

Пример 2. Больная К. 48 лет, страдающая артериальной гипертонией с метаболическим синдромом на протяжении 7 лет, обследована во время диспансерного осмотра по поводу артериальной гипертонии. У больной была взята кровь и исследована по изложенной выше схеме с оценкой ИААСС, с АДФ, коллагеном и тромбином и вычислением КАИСС.

У пациентки были выявлены начальные проявления угнетения антиагрегационной функции сосудистой стенки. ИААСС для АДФ составлял 1,50, для коллагена и тромбина 1,45 и 1,29 соответственно. КАИСС составил 1,41. Больной было рекомендовано для адекватного контроля артериального давления и нормализации состояния сосудистой стенки вести здоровый образ жизни и принимать нормодипин 10 мг 1 раз в сутки с ежемесячным обследованием. Так обследование через 12 нед. уже выявило нормализацию ИААСС для АДФ - 1,67, коллагена - 1,54, тромбина - 1,62. Значение КАИСС равнялось 1,61, что говорило о нормализации антиагрегационной активности сосудов у пациентки.

Пример 3. Больная Ю. 61 год, страдающая артериальной гипертонией с метаболическим синдромом на протяжении 12 лет, систематически не лечащаяся, обследована во время обращения в поликлинику по поводу острого бронхита. У больной была взята кровь и исследована по изложенной выше схеме с оценкой ИААСС с АДФ, коллагеном и тромбином и вычислением КАИСС.

У пациентки были выявлены выраженные признаки угнетения антиагрегационной функции сосудистой стенки. КАИСС составлял 1,31 при ИААСС с АДФ 1,31, коллагеном 1,39, тромбином 1,25. Больной был назначен лечебный комплекс из диеты богатой зеленью и витаминами, дозированных физических нагрузок и лизиноприл 10 мг 1 раз в сутки с ежемесячным контролем КАИСС. Исследование антиагрегационной активности стенки сосудов через 9 мес. выявило значительное улучшение КАИСС - 1,44, а через 12 мес. нормализацию значения КАИСС 1,52, при ИААСС с АДФ 1,67 коллагеном 1,52, тромбином 1,38. Дальнейшее соблюдение данных больной рекомендаций позволило поддержать в последующем исследованные параметры антитромботической активности сосудов в нормальных границах.

Способ относится к медицине, а именно к кардиологии и ангиологии. Антиагрегационную активность сосудов определяют путем проведения реакции тромбоцитов по 2-3 раза с каждым индуктором - АДФ, коллагеном и тромбином. Затем рассчитывают индекс антиагрегационной активности сосудистой стенки (ИААСС) для каждого индуктора по формуле

и путем вычисления среднего арифметического значения ИААСС для всех трех индукторов определяют комплексный антиагрегационный индекс стенки сосудов (КАИСС). При значении КАИСС 1,50-1,68 диагностируют отсутствие снижения антиагрегационной активности сосудистой стенки, что не требует лечебных вмешательств, при 1,41-1,49 больные входят в группу риска по развитию снижения антиагрегационной активности и нуждаются в ежемесячном наблюдении врача с обязательным оздоровлением образа жизни, при 1,40 и ниже имеется снижение антиагрегационной активности, требующей коррекции ее состояния. Способ повышает точность диагностики.

Способ раннего выявления ослабления антиагрегационной активности сосудов, отличающийся тем, что антиагрегационную активность сосудов определяют путем проведения реакции тромбоцитов по 2-3 раза с каждым индуктором - АДФ, коллагеном и тромбином, после чего рассчитывают индекс антиагрегационной активности сосудистой стенки (ИААСС) для каждого индуктора по формуле

а затем определяют комплексный антиагрегационный индекс стенки сосудов (КАИСС) путем вычисления среднего арифметического значения ИААСС для всех трех индукторов и при значении КАИСС 1,50-1,68 диагностируют отсутствие снижения антиагрегационной активности сосудистой стенки, что не требует лечебных вмешательств; при значении КАИСС в интервале 1,41-1,49 больные входят в группу риска по развитию снижения антиагрегационной активности сосудистой стенки и нуждаются в ежемесячном наблюдении врача с обязательным оздоровлением образа жизни; при значении КАИСС 1,40 и ниже имеется снижение антиагрегационной активности сосудистой стенки, требующей коррекции ее состояния.