СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ГЕРПЕС-ВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ У БЕРЕМЕННЫХ ПУТЕМ ПОДСЧЕТА ГЕРПЕСНЫХ ТЕЛЕЦ В ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ Российский патент 2008 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для диагностики герпес-вирусной инфекции путем подсчета в периферической крови беременных процентного содержания герпесных телец.

Недостатки известных способов:

Герпесные тельца выявлялись до настоящего времени следующими цитологическими и ИФА методами:

1. Взятие отпечатков, соскобов из выделенных органов: слизистой уретры, стенок влагалища, канала шейки матки. Взятый путем биопсии материал заливался в парафин и изучался на гистологических срезах (Карпова О.Б., Авророва Н.Ф., 1988; Цинзерлинг А.В., 1993; Цинзерлинг А.В. и др., 1993).

2. Методом ИФА (иммунобиохимическая реакция - Исаков В.А., 2004).

С помощью вышеприведенных цитологических и ИФА методов не предоставляется возможности выявить механизм образования телец, образованных лейкоцитами, сближенными в силу повышения зарядности ганглиозидов в периферической крови.

Примененный способ резко сокращает время для обнаружения в легкодоступной среде - периферической крови - формирование телец, образованных лейкоцитами, сближенными в силу повышения зарядности ганглиозидов при воздействии на их клеточные мембраны возбудителя инфекции.

Предложенный способ осуществляется следующим образом:

1. В стерильную пробирку, смоченную гепарином, из вены беременной набирается 2 мл крови. После оседания форменных элементов путем центрифугирования при 1500 тыс. об/мин лейкоцитарная пленка осторожно отсасывается пипеткой и в объеме 2 капель помещается в пробирку, где находится 0,5 мл сыворотки крови этого же пациента (t=37°C), полученная в результате центрифугирования цельной крови. Взвесь встряхивается и содержится 15 мин в термостате при t=37°C. После этого к 0,5 л этой взвеси добавляется 0,5 мл 0,5% раствора нейтрального красного, приготовленного на физиологическом растворе при рН 7,4. Смесь должна постоять 5 мин в термостате при t=37°C, после чего ее встряхивают и осторожно каплю наносят на предметное стекло и на центрифуге "Diff Spin. Slide Sprinter" мгновенно приготовляют мазок (4 сек). На этом мазке, после того как он подсохнет, производится подсчет герпесных телец на 100 лейкоцитов.

2. После приготовления мазка обнаруживаются герпесные тельца, образованные лейкоцитами на различных этапах формирования (см. чертеж) от сближения лейкоцитов друг к другу (А, Б) до плотного укомплектования их (В) и образования вокруг них общей оболочки (Г).

Количество герпесных телец нарастает по мере увеличения титра антител к вирусу герпеса: при титре 1:3200 - до 1,0±0,06%; при титре антител 1:6400 - до 2,0±0,03%, а при титре антител 1:12800 - до 5,0±0,30% и выше. Титр антител определялся иммуноферментным анализом на спектрофотометре "Stax-Fax-2100" (USA).

3. Предлагаемый способ прошел клиническую апробацию на базе акушерско-гинекологического отделения Дальневосточного научного центра физиологии и патологии дыхания СО РАМН. С помощью предложенного способа проведено обнаружение герпесных телец в периферической крови у 60 беременных при вспышке герпес-вирусной инфекции из 75 обследованных. Таким образом, предлагаемый способ может быть эффективно использован для диагностики герпес-вирусной инфекции у беременных в 80% случаев.

Пример 1: Е., 23 года. При первичном поступлении в отделение со сроком беременности в 19 недель методом ИФА не обнаружено признаков герпесной инфекции. В периферической крови герпесных телец не обнаружено. Повторное поступление в отделение. Беременность - 24 недели. ИФА методом обнаружена вспышка герпесной инфекции. Титр антител - 1:12800. В периферической крови на 100 лейкоцитов отмечается 4% герпесных телец, образованных сближением лейкоцитов друг к другу, в мембранах которых обнаруживается интенсивная реакция на ганглиозиды. Диагноз - тяжелая стадия герпес-вирусной инфекции.

Пример 2: 20 лет. При поступлении в отделение в периферической крови методом ИФА отмечается титр антител к вирусу герпеса 1:3200. В периферической крови насчитывается 1,5% телец, образованных сближенными лейкоцитами, в мембранах которых отмечается повышенная реакция на ганглиозиды. Диагноз - средняя тяжесть заболевания герпесной инфекцией.

Литература

1. Карпова О.Б., Авророва Н.Ф. Простой герпес этиология, диагностика, клинико-анатомические проявления. - Л., 1988, С.86-91.

2. Цинзерлинг А.В. Современные инфекции. Патологическая анатомия и вопросы патогенеза - Соб.; Сотис, 1993, 287 с.

3. Цинзерлинг А.В., Попова Е.Д., Байков В.В., Кузьмин В.В., Карпова О.Б., Мазинг Ю.А., Кожухарь В.Г., Сорокина Л.В. Экспериментальная модель генерализованной герпетической инфекции новорожденных. Архив Патологии, Москва, Медицина, Т.55, №5, 1993, с.28-32.

4. Исаков В.А. и др. Современная терапия герпес-вирусных инфекций. Руководство для врачей - Спб., М., 2004.

Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностическим методам. Для осуществления способа диагностики герпес-вирусной инфекции у беременных к 1-2 каплям лейкоцитарной взвеси, взятой после центрифугирования цельной крови пациента в пробирке, добавляют 0,5 мл сыворотки крови пациента. Выдерживают 15 минут в термостате при t=37°C и прибавляют 0,5 мл 0,5% нейтрального красного, приготовленного на физиологическом растворе при рН 7,4. Полученную смесь содержат 5 мин в термостате при t=37°C, после чего каплю смеси наносят на предметное стекло и изготовляют мазок центрифугированием в течение 4 секунд. После подсыхания мазка проводят подсчет герпесных телец на 100 лейкоцитов, при этом герпесные тельца представляют собой сближенные в силу повышения зарядности ганглиозидов лейкоциты. При содержании герпесных телец 3-5±0,3% судят о тяжелой стадии герпес-вирусной инфекции, при 1-2,0±0,2% - о средней стадии заболевания, у здоровых беременных герпесные тельца практически не обнаруживаются. Использование изобретения позволяет существенно сократить время исследования. 1 ил.

Способ диагностики герпес-вирусной инфекции у беременных, включающий исследование венозной периферической крови, отличающийся тем, что к 1-2 каплям лейкоцитарной взвеси, взятой после центрифугирования цельной крови пациента в пробирке, добавляют 0,5 мл сыворотки крови пациента, выдерживают 15 мин в термостате при t=37°C и прибавляют 0,5 мл 0,5%-ного нейтрального красного, приготовленного на физиологическом растворе при рН 7,4; полученную смесь содержат 5 мин в термостате при t=37°C, после чего каплю смеси наносят на предметное стекло и изготовляют мазок центрифугированием в течение 4 с, после подсыхания мазка проводят подсчет герпесных телец на 100 лейкоцитов, при этом герпесные тельца представляют собой сближенные в силу повышения зарядности ганглиозидов лейкоциты, при содержании герпесных телец 3-5±0,3% - судят о тяжелой стадии герпес-вирусной инфекции, при 1-2,0±0,2% - судят о средней стадии заболевания, у здоровых беременных герпесные тельца практически не обнаруживаются.