СПОСОБ ОЦЕНКИ СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ ПОВРЕЖДАЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ ГЕРПЕС-ВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ НА ИММУННЫЙ СТАТУС БЕРЕМЕННЫХ Российский патент 2009 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для диагностики характера секреторной активности IgAs местными лимфоэпителиальными органами (небной миндалиной) на различных этапах гестации с целью оценки степени тяжести повреждающего действия герпес-вирусной инфекции на иммунный статус беременной.

Недостатки известных способов оценки секреторной активности местными лимфоэпителиальными органами.

1. Для оценки секреторной активности IgAs местными лимфоидными органами использовался либо смыв секрета слизистой носа (Л.А.Матвеева, 1986; А.В.Чебуркин и др. 1973), либо слюна полости рта (Шварцман Я.С., Хазенсон Л.Б., 1978).

2. Исследования проводились при гриппе (Шварцман Я.С. и др., 1975) либо при пневмонии у детей (Матвеева Л.А., 1986).

3. Оценка секреторной активности местных лимфоидных органов у беременных при вспышке герпес-вирусной инфекции не проводилась.

Недостатком вышеприведенных способов оценки секреторной активности IgAs местными лимфоидными органами является:

1. В слизистой полости носа сконцентрированных лимфоидных образований не бывает.

2. Смывы, как и слюна, из полости рта не дают конкретного представления о месте локализации секретируемого IgAs, что не отражает конкретно работу того или иного местного лимфоэпителиального органа в динамике развития патологического процесса.

Целью изобретения является предложить способ оценки секреторной активности IgAs местными лимфоэпителиальными органами (небные миндалины) у беременных при герпес-вирусной инфекции путем получения смыва с поверхности небных миндалин с последующей оценкой содержания IgAs на 1 белка в полученном смыве. Полученные данные позволяют оценить интенсивность секреторной активности IgAs местными лимфоэпителиальными органами при различной степени тяжести герпес-вирусной инфекции (в зависимости от титра антител к возбудителю).

Предложенный способ осуществляется следующим образом.

Для анализа использовали свежеприготовленные смывы, полученные по стандартной методике, включающей промывание 5 мл физиологического раствора с температурой 37°С поверхности небных миндалин с помощью шприца. После чего образцы собирали в центрифужные пробирки для дальнейшей обработки. На начальном этапе образцы смывов тщательно перемешивали и подвергали центрифугированию при 3000 об/мин в течение 10 минут. Затем супернатант отделяли декантированием, а полученную взвесь разводили в соотношении 1:500 фосфатным буферным раствором с рН 7,6 из набора реагентов для количественного иммуноферментного анализа секреторного иммуноглобулина А. Для этого 0,5 мл рабочего буферного раствора тщательно перемешивали с 10 мкл исследуемого образца в специальных планшетах для разведений.

Подготовленные таким образом пробы использовали для дальнейшего иммуноанализа на наличие секреторного IgAs в смывах с миндалин с помощью набора реагентов ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирск. Результаты учитывали фотометрически на микропланшетном иммуноферментном анализаторе «Stat-Fax-2100» (USA) при длине волны 450 нм.

Расчет активности секреторного IgAs в образце проводили на единицу белка, полученного по методу Лоури с использованием стандартного набора ООО «Агат-Мед» (Москва) и спектрофотометра «Stat-Fax-1904+» (USA). Для определения количества белка в смыве с небных миндалин применяли ранее полученный центрифугат. Объем образца, фотометрическое измерение и расчет концентрации общего белка производили согласно предлагаемой стандартной методике при длине волны 540 нм.

Определение IgAs выполнялось у одной и той же беременной как в период обострения инфекции, так и через 60 дней после исчезновения внешних признаков герпес-вирусной инфекции. Степень тяжести заболевания контролировалась определением титра антител к вирусу простого герпеса стандартным иммуноферментным методом с помощью спектрофотометра «Stat-Fax-1904+» (USA).

Предлагаемый способ прошел клиническую апробацию в клинике Государственного учреждения Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания СО РАМН. С помощью предложенного способа было обследовано 52 беременные с герпес-вирусной инфекцией. Результаты проверки заявленного способа показали его эффективность, подтверждая, что по мере нарастания титра антител к вирусу герпеса у беременной снижается выработка IgAs на поверхности небных миндалин.

1. При тяжелой форме герпесной инфекции (титр антител - 1:12800) уровень IgAs в смывах с небных миндалин колебался в пределах 150-170±2,9 нг/мл.

2. При средней степени тяжести инфекции (титр антител - 1:3200) уровень IgAs в смывах с небных миндалин определялся в пределах 210-230±3,1 нг/мл.

3. Через 60 дней после вспышки инфекции (титр антител - 1:800) содержание IgAs в смывах с небных миндалин определялось в пределах 280-300±4,7 нг/мл.

Литература

1. Ботвиньева В.В. Система местного иммунитета и заболевания органов дыхания у детей / В.В.Ботвиньева, М.А.Уланова // - МЖР, разд. V. - 1981. - №7. - С.19-22.

2. Матвеева Л.А. Местный иммунитет при болезнях легких у детей / Л.А.Матвеева. - Томск. 1986. - 189 с.

3. Шварцман Я.С. Иммуноглобулины и антитела в секрете дыхательных путей людей, иммунизированных живой гриппозной вакциной // Докл. АН СССР. - 1972. - №2. - с.470-472.

4. Шварцман Я.С. Местный иммунитет / Я.С.Шварцман, Л.Б.Хазенсон. - Л., 1978. - 222 с.

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для оценки степени тяжести повреждающего действия герпес-вирусной инфекции на иммунный статус беременных. Сущность способа: в смывах с небных миндалин определяют IgAS на единицу белка. Уровень IgAS 150-170±2,9 нг/мл соответствует тяжелой форме герпесной инфекции в период обострения. Уровень IgAS 210-230±3,1 нг/мл соответствует средней форме герпесной инфекции в период обострения. Через 60 дней после вспышки инфекции уровень IgAS составляет 280-300±4,7 нг/мл. Использование способа позволяет оценить секреторную активность IgAS небными миндалинами у беременных при герпес-вирусной инфекции.

Способ оценки степени тяжести повреждающего действия герпес-вирусной инфекции на иммунный статус беременных, отличающийся тем, что в смывах с небных миндалин определяют IgAs на единицу белка, уровень IgAs 150-170±2,9 нг/мл соответствует тяжелой форме герпесной инфекции в период обострения, уровень IgAs 210-230±3,1 нг/мл соответствует средней форме герпесной инфекции в период обострения, через 60 дней после вспышки инфекции уровень IgAs составляет 280-300±4,7 нг/мл.