СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РАЗВИТИЯ ВНУТРИУТРОБНОЙ ГИПОКСИИ ПЛОДА Российский патент 2008 года по МПК G01N33/68 

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в акушерстве, перинатологии, медицинской экологии.

Известны различные способы прогнозирования и доклинической диагностики развития внутриутробной гипоксии и/или задержки внутриутробного развития плода.

Известны способы прогнозирования плацентарной недостаточности и внутриутробной гипоксии по определению содержания молекул средней массы (МСМ) в биосубстратах (сыворотка крови и моча) при нормальной и осложненной беременности у женщин и их новорожденных. МСМ - универсальные биохимические маркеры, отражающие уровень патологического белкового метаболизма. Считается, что МСМ могут проникать через плацентарный барьер, оказывая непосредственное токсическое воздействие на плод, и, вызывая патологические нарушения, приводят к синдрому полиорганной недостаточности.

Однако данные способы диагностики не специфичны и не обладают достаточной степенью точности, так как МСМ является интегральным показателем, характеризующим метаболические нарушения независимо от этиологических причин. Это объясняется тем, что избыточное накопление МСМ в организме отмечается при поражении почек, при шоке различной этиологии, сепсисе, злокачественных образованиях, травмах, остром панкреатите, при диабетических поражениях сосудов, при заболеваниях сердечно-сосудистой системы. Значительным недостатком существующих методов является невозможность использования стандарта для получения точных количественных показателей, поэтому результаты реакции выражаются в единицах оптической плотности [Патент №2148256 «Способ доклинического прогнозирования плацентарной недостаточности», G01N 33/49, G01N 33/48, 27.04.2000].

Известен способ диагностики гипоксии плода во время беременности путем исследования крови, согласно которому гипоксию плода диагностируют по содержанию плодово-плацентарных гормонов в крови беременных (эстриола, прогестерона, кортизола, пролактина).

Однако данный способ диагностики гипоксии плода во время беременности не обладает достаточной степенью точности. Известно, что содержание эстрогенов в крови определяется не только состоянием плода и функциональной активностью его надпочечников, но и зависит от функций плаценты, от функционального состояния надпочечников и печени матери, поскольку в печени эстрогенные гормоны подвергаются инактивации и количественное содержание эстрогенов в крови подвержено значительным индивидуальным колебаниям. Данный способ практически непригоден для диагностики гипоксии плода в начальной ее стадии, так как у незрелого плода функция надпочечников значительно снижена, в связи с чем содержание эстрогенных гормонов в крови матери находится на уровне, который выходит за пределы чувствительности метода.

Недостатком указанного способа является его высокая себестоимость, а также небезопасность для здоровья персонала лабораторий, связанная с постоянной радиологической нагрузкой на организм врача-лаборанта [Савельева Г.М., Федорова М.В., Клименко П.А., Сичинава Л.Г. Плацентарная недостаточность. - М.: Медицина, 1991, с.171-176].

Известен способ прогнозирования состояния новорожденных детей по определению в лимфоцитах периферической крови беременной активности сукцинатдегидрогеназы и альфаглицерофосфатдегидрогеназы. Дается прогноз тяжелого состояния новорожденного с выраженными метаболическими нарушениями в первые три дня жизни.

Недостатком предлагаемого способа, основанного на цитохимическом исследовании активности окислительно-восстановительных ферментов в лимфоцитах (СДГ и а-ГДФ) капиллярной крови беременных женщин, является достаточно поздний срок диагностики - за 1-3 дня до родов, что ограничивает возможность коррекции метаболических нарушений у матери и плода в процессе всей беременности и не позволяет оценить степень тяжести гипоксии плода в периоде антенатального и перинатального развития [Заявка №2003138181, G01N 33/68, Способ раннего прогнозирования состояния новорожденных детей].

Ближайшим аналогом заявляемого способа является способ диагностики гипоксии плода, проводимый по крови беременной с определением малонового диальдегида (МДА), антиокислительной активности (АОА) и антиокислительной защиты организма (АОЗ) как отношение АОА/МДА в эритроцитах, при снижении АОЗ до 1,90-0,82 диагностируют гипоксию плода.

Однако предлагаемый способ диагностики гипоксии плода не обладает достаточной степенью точности. Это объясняется тем, что при оценке состояния антиоксидантной системы крови недостаточно определять только концентрацию МДА и АОА. Для объективного анализа необходимо учитывать концентрацию гидроперекисей липидов (ГПЛ) и активность каталазы (АК). Активность каталазы и антиокислительная активность плазмы в совокупности отражают состояние антиоксидантной системы крови (синтоксические программы адаптации), но при патологии изменяются в разной степени, поэтому для получения более достоверного результата необходимо проводить анализ по обоим показателям. Концентрация малонового диальдегида и гидроперекисей липидов в совокупности отражает, насколько интенсивно протекают в организме оксидантные процессы (кататоксические программы адаптации), и, кроме того, при патологии эти показатели изменяются в разной степени, поэтому для получения более достоверного результата необходимо проводить анализ по обоим показателям. Методика определения МДА и АОА, на которую ссылаются авторы в прототипе, не является корректной, а следовательно, достоверной для диагностики гипоксии плода [Авторское свидетельство №1752185, G01N 33/48, 30.07.92, Способ диагностики гипоксии плода].

Задача технического решения заключается в создании способа прогнозирования развития внутриутробной гипоксии плода.

Технический результат заключается в повышении точности прогнозирования развивающейся гипоксии в системе «мать-плацента-новорожденный» на фоне метаболических нарушений беременной и возможности проведения медикаментозной профилактики, своевременного лечения гипоксических состояний плода.

Поставленная задача решается тем, что в способе прогнозирования развития внутриутробной гипоксии плода в венозной крови беременной определяют фонд свободных аминокислот, при установлении гипераминоацидемии рассчитывают коэффициент отношения незаменимых аминокислот к заменимым и при величине коэффициента 0,5 и менее прогнозируют развитие внутриутробной гипоксии в системе «мать-плацента-плод» на фоне метаболических нарушений беременной. Исследование крови проводят в третьем триместре беременности и перед родами.

Отличительными признаками заявляемого решения является то, что в венозной крови беременной определяют фонд свободных аминокислот, при установлении гипераминоацидемии рассчитывают коэффициент отношения незаменимых аминокислот к заменимым и при величине коэффициента 0,5 и менее прогнозируют развитие внутриутробной гипоксии в системе «мать-плацента-плод» на фоне метаболических нарушений беременной. Исследование крови беременной проводят в третьем триместре беременности и перед родами.

Новизна заявляемого способа заключается в том, что впервые предлагается использовать исследование аминокислотного спектра сыворотки крови беременных для доклинической и дофункциональной диагностики развития гипоксического состояния плода и синдрома задержки внутриутробного развития.

Компенсаторно-приспособительные резервы организма матери и плода реализуются через процессы метаболизма, определяющие исход беременности. Для профилактики задержки внутриутробного развития плода (ЗВРП) первостепенное значение имеет раннее начало коррекции гипоксических сдвигов и метаболических нарушений. В настоящее время оценка состояния фетоплацентарной системы включает комплекс важнейших функциональных параметров, которые определяются при помощи антенатальной ультразвуковой диагностики, допплерографии, кардиотокографии и компьютерной кардиоинтервалографии. Эти методы исследования позволяют оценить рост и развитие плода, состояние его сердечной деятельности, выявить степень тяжести гемодинамических нарушений в системе «мать-плацента-плод», но не дают полного представления о степени тяжести гипоксии плода. Метаболические процессы обеспечивают не только рост и развитие плода, но и подготовку всей функциональной системы «мать-плацента-новорожденный» к нормальному течению родов. Для правильного выбора лечебной тактики и метода родоразрешения требуется оценка не только функционального состояния фетоплацентарного комплекса с использованием перечисленных методов, но и оценка функционального резерва метаболического пула, его реактивности.

Сущность заявляемого способа подтверждается следующими экспериментальными данными. Исследована сыворотка крови у 170 беременных женщин и их 170 новорожденных. В контроле обследовано 53 беременные женщины с физиологическим течением беременности и родов, родившие здоровых детей с пропорциональным физическим развитием. Группа женщин с отягощенным акушерским и гинекологическим анамнезом представлена в количестве 117 беременных. У всех обследованных качественный состав аминокислотного спектра постоянен и представлен 20 свободными АК. Отмечено динамическое равновесие АК в системе «мать-плацента-новорожденный» у соматически здоровых беременных (табл.1). Коэффициент отношения незаменимых АК к заменимым в крови беременных, новорожденных, в плаценте наблюдается достаточно стабильный: 0,78-0,73-0,71, что говорит о равновесии азотистого и белкового обмена в системе.

Результаты оценки состояния аминокислотного фонда в биосубстратах системы «мать-плацента-новорожденный» при внутриутробной гипоксии и гипотрофии плода показывают, что выраженные нарушения аминокислотного баланса в данной системе сопровождаются развитием гипоксического состояния плода (табл.2).

Действие на организм гипоксии независимо от ее генеза приводит к возрастанию суммарного количества аминокислот (табл.2). У женщин наблюдается возрастание фонда свободных аминокислот в сыворотке крови в 1,5 раза от нормы, в плаценте 1,7 раза, что в дальнейшем выражается в дисбалансе аминокислот у новорожденных (Р<0.05). Наблюдается гипераминоацидемия: у доношенных и недоношенных новорожденных с задержкой внутриутробного развития увеличивается содержание общего пула аминокислот в 1,3 раза от нормы за счет более значительного умеренного возрастания уровня заменимых АК и падения незаменимых АК (Р<0.05). Сниженный коэффициент отношения незаменимых АК к заменимым Кн/з отражает дисбаланс АК в системе «мать-плацента-новорожденный» 0,5-0,44-0,47-0,4 (Р<0.05) и степень тяжести гипоксии плода. При развитии гипоксического состояния нарушается аминокислотный баланс в сыворотке крови беременных, в плаценте, в сыворотке крови новорожденных.

Падение концентрации незаменимых АК и возрастание заменимых АК сопровождается усилением катоболических процессов, результирующей которых является снижение массы тела плода и задержки его развития. Новорожденные, испытавшие внутриутробную гипоксию, отстают по основным массо-ростовым показателям: имеют при рождении массу тела ниже 10 перцентиля (Р<0.05). Присутствует пропорциональная зависимость (R=0,72 при Р<0.05) между массой тела новорожденных и концентрацией ряда незаменимых АК. У всех детей с задержкой внутриутробного развития снижен уровень незаменимых аминокислот, участвующих в пластических процессах и необходимых для обеспечения роста: гистидина в среднем на 23,4% - у доношенных, на 33,6% - у недоношенных; свободного аргинина в среднем на 15,0% - у доношенных и на 55,3% - у недоношенных; валина на 60,8% и метионина на 53,4%.

Таблица 1
Содержание свободных аминокислот (АК) в системе «мать-плацента-новорожденный» у соматически здоровых беременных женщин и их новорожденныхАминокислоты (АК), мкмоль/лЖенщины (n=53)Новорожденные (n=53)кровьплацентакровьФонд свободных АК4010,4±298,32806,3±108,33980,0±336,4Заменимые2255,3±155,51622,9±32,42323,4±150,2Незаменимые1755,1±142,81183,4±76,01656,6±186,2Кн/з0,780,730,71

Таблица 2
Содержание свободных аминокислот в системе «мать-плацента-новорожденный» при внутриутробной гипоксии плодаАминокислоты (АК), мкмоль/лЖенщины (n=117)Новорожденные (n=117)кровьплацентакровьФонд свободных АК6018,9±141,74896,1±69,44995,7±189,9Заменимые4001,0±104,53401,7±49,23383,3±92,5Незаменимые2017,9±36,21494,4±20,21612,4±97,4Кн/з0,50,440,47

Данный способ осуществляется следующим образом. Анализ на свободные АК проводится в период комплексного обследования женщин в период третьего триместра беременности и перед родами. Забор крови и ее анализ проводятся по стандартной методике. Состояние аминокислотного обмена оценивают методом ионообменной хроматографии с помощью автоматического анализатора аминокислот. Концентрацию свободных АК в сыворотке крови выражают в мкмоль/л. Для каждого исследуемого образца на хроматограмме прописывается весь спектр свободных АК и определяется концентрация каждой из них. Определяется отношение незаменимых АК к заменимым с расчетом коэффициента К н/з.

Пример 1. Пациентка С., 28 лет, первобеременная. Срок беременности 38 недель, с благоприятным течением беременности. Общее состояние удовлетворительное. Жалоб нет. Предлежание плода головное. Сердцебиение плода 144 уд. в мин, ясное, ритмичное. Данные УЗИ и допплерометрии соответствуют нормам. Фонд свободных АК равен 3802,1 мкмоль/л. Коэффициент соотношения незаменимых аминокислот к заменимым (Кн/з) в крови женщины - 0,8. Роды через естественные родовые пути. Родился практически здоровый ребенок с массой 3300 г, длиной 51 см, с оценкой по шкале Апгар 8/9 баллов, без нарушений клеточного метаболизма. Коэффициент соотношения незаменимых аминокислот к заменимым (Кн/з) у ребенка - 0,71.

Пример 2. Пациентка Г., 32 года, повторнобеременная повторнородящая, с отягощенным акушерским анамнезом. Срок беременности 37 недель. Беременность отягощена анемией II степени, преэклампсией легкой степени (отеки, белок в моче 0,066 г/л). Состояние удовлетворительное. Жалоб нет. Предлежание плода головное. Сердцебиение плода 140 уд. в мин, ясное, ритмичное. По данным УЗИ и допплерометрии - ФПН IA ст. Фонд свободных АК равен 3712,0 мкмоль/л. Коэффициент соотношения незаменимых аминокислот к заменимым Кн/з в крови женщины - 0,78. Роды через естественные родовые пути. Родился практически здоровый ребенок с массой 3150 г, длиной 52 см, с оценкой по шкале Апгар 8/9 баллов, без нарушений клеточного метаболизма. У новорожденного Кн/з = 0,71.

Пример 3. Пациентка А., 21 год, повторнобеременная первородящая, с отягощенным акушерским анамнезом. Срок беременности 38 недель. Беременность отягощена угрозой прерывания в I-ом и III-м триместрах. Состояние женщины перед обследованием удовлетворительное. Жалоб нет. Предлежание плода головное. Сердцебиение плода ясное, ритмичное, 144 уд. в мин. Данные УЗИ и допплерометрия в пределах нормы. Фонд свободных АК равен 5077,3 мкмоль/л. Коэффициент соотношения незаменимых аминокислот к заменимым Кн/з равен 0,5. Роды через естественные родовые пути. Родился доношенный ребенок с массой 3080 г, длиной 52 см, с оценкой по шкале Апгар 6/7 баллов, с клиническими проявлениями гипоксии плода. Кн/з у новорожденного - 0,47.

Пример 4. Пациентка X., 24 года, повторнобеременная первородящая, с отягощенным акушерским анамнезом. Срок беременности 37-38 недель. Беременность отягощена угрозой прерывания, ОРВИ - в I-ом триместре; анемией I степени, ожирением I степени, хр. пиелонефритом в ст. ремиссии. Состояние женщины перед обследованием удовлетворительное. Жалоб нет. Предлежание плода головное. Сердцебиение плода 148 уд. в мин, ясное, ритмичное. Отмечает усиленное шевеление плода. По данным УЗИ и допплерометрии - ФПН II ст. Фонд свободных АК равен 5782,6 мкмоль/л. Коэффициент соотношения незаменимых аминокислот к заменимым (Кн/з) - 0,48. Роды через естественные родовые пути. Родился доношенный ребенок с массой 2770 г, длиной 49 см, с оценкой по шкале Апгар 5/6 баллов, с задержкой внутриутробного развития, с клиническими проявлениями гипоксии плода. Кн/з у новорожденного - 0,41.

Сопоставление данных исследования свободных АК с клиническими данными показало, что метод имеет важное диагностическое и прогностическое значение в группе беременных высокого перинатального риска. Данные исследования, проведенные в динамике, позволяют осуществить индивидуальную оценку эффективности проводимой терапии, прогнозировать состояние новорожденного, определить оптимальные сроки родоразрешения как в интересах женщины, так и ее плода.

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для прогнозирования развития внутриутробной гипоксии плода. Сущность способа: в третьем триместре беременности и перед родами в венозной крови беременных определяют фонд свободных аминокислот. При условии установления гипераминоацидемии рассчитывают коэффициент отношения незаменимых аминокислот к заменимым. При величине коэффициента 0,5 и менее прогнозируют развитие внутриутробной гипоксии в системе «мать-плацента-плод» на фоне метаболических нарушений беременной. Использование способа позволяет повысить точность прогнозирования развития внутриутробной гипоксии плода, что дает возможность своевременно проводить медикаментозную профилактику и лечение гипоксических состояний плода. 1 з.п. ф-лы, 2 табл.

1. Способ прогнозирования развития внутриутробной гипоксии плода, заключающийся в исследовании крови беременной, отличающийся тем, что в венозной крови определяют фонд свободных аминокислот, при установлении гипераминоацидемии рассчитывают коэффициент отношения незаменимых аминокислот к заменимым, и при величине коэффициента 0,5 и менее прогнозируют развитие внутриутробной гипоксии в системе «мать-плацента-плод» на фоне метаболических нарушений беременной.2. Способ прогнозирования развития внутриутробной гипоксии плода по п.1, отличающийся тем, что исследование крови проводят в третьем триместре беременности и перед родами.