СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОСТОЯНИЯ ПЛОДА Российский патент 1997 года по МПК G01N33/70 

Изобретение относится к медицине, а именно к перинатологии, и может быть использовано для ранней диагностики внутриутробного страдания плода и прогнозирования состояния здоровья новорожденного.

Влияние внутриутробного периода развития плода на состояние здоровья новорожденного ребенка известно, поэтому в разделе медицины, посвященном охране материнства и детства, важное место занимает определение состояния плода и прогноз состояния здоровья новорожденного с целью своевременного назначения лечебно-профилактических мероприятий беременной женщине.

Известен ряд инструментальных способов. К ним относится электрокардиография, фонокардиография плода, кардиотахография с применением окситоцинового теста, ультразвуковое сканирование с исследованием частоты дыхательных движений и двигателей активности плода, амниоскопия /Федорова М.В. Диагностика и лечение внутриутробной гипоксии плода. М. Медицина, 1982; Савельева Г. М. и др. Плацентарная недостаточность. Метод. рек. М. 1987/.

Данные способы позволяют выявить наличие функциональных отклонений в состоянии плода, которые могут быть преходящими в зависимости от адаптационных процессов в системе "мать-плод" и не являются ранними. В основе функциональных нарушений лежат метаболические сдвиги, ранее выявление которых не обеспечивается инструментальной диагностикой.

Биохимические способы, направленные на выявление отдельных метаболических сдвигов, позволяют повысить чувствительность диагностики в отношении пусковых механизмов перинатальной патологии.

Известен способ дородовой диагностики нарушений состояния плода, включающий определение концентрации глюкозы в амниотической жидкости /Гайдай Г.Л. Гордиенко И. Ю. Концентрация глюкозы в амниотической жидкости у беременных группы высокого риска. Лаб. дело. 1991, N 11, стр. 16-18/. У беременных в сроки 16-27 и 32-36 недель беременности путем трансабдоминального амниоцентеза получают околоплодные воды, в которых определяют концентрацию глюкозы. При тяжелых врожденных пороках развития и хромосомных заболеваниях плода концентрация глюкозы в амниотической жидкости повышается, а при врожденных пороках, сочетающихся с выраженными деструктивными изменениями в плаценте у беременных, снижается по сравнению с контролем.

Способ травматичен, поэтому использование его ограничено строгими медико-генетическими показателями при подозрении на врожденные пороки развития плода.

Ближайшим аналогом изобретения является способ определения состояния плода путем исследования крови беременной, в сыворотке которой определяют содержание малонового диальдегида, и при увеличении его содержания выше 6,3 нмоль/мг определяют нарушение состояния плода /Кузнецова В.А. Ситникова О.Г. Слободин В. В. Шпильман В.И. Способ определения состояния плода. Авт.св. N 1492278, A1 G 01 H 33/48/.

В основу способа заложено положение о том, что активация перекисного окисления липидов /ПОЛ/ способствует накоплению гидроперекисей, оказывающих мембрано- и ферментотоксическое действие, вызывающих нарушение энергетического обмена клетки, что в конечном итоге ведет к нарушению состояния организма матери и ребенка.

Однако современные литературные данные свидетельствуют о следующем:
активация перекисного окисления липидов, наряду с другими метаболическими процессами, является необходимым компонентом адаптивной реакции организма при воздействии любых факторов высшей среды;
неблагоприятным является только чрезмерная активация ПОЛ, которую можно выявить при одновременном определении параметров активности ПОЛ, антиоксидантной защиты и расчете соотношения между ними. Поэтому нет оснований считать незначительное повышение параметра активности ПОЛ малонового диальдегида до 6,3 нмоль/мг относительно нормы /5,1 нмоль/мг/ чрезмерным ускорением процессов ПОЛ;
в процессе любой адаптивной реакции организма изменения ПОЛ носят фазовый характер: активации перекисного окисления липидов сменяется в последующем его замедлением, и для тяжелых или длительно текущих патологических процессов характерно замедление ПОЛ;
активация ПОЛ является нормальным физиологическим процессом беременной женщины во второй половине и, особенно, в последней трети беременности и может также зависеть от сезона года.

Все вышесказанное свидетельствует об ограниченных диагностических возможностях способа. Вероятно в силу указанных причин способ обеспечивает с необходимой точностью диагностику только терминального состояния плода, которым является самопроизвольный выкидыш.

Целью предлагаемого изобретения является повышение точности способа за счет чувствительности к ранним нарушениям состояния плода.

Поставленная цель достигается тем, что в эритроцитах беременной женщины определяют концентрацию креатина и при увеличении ее от 510 мкмоль/л и выше определяют нарушение состояния плода.

Ранее по содержанию креатина в крови матери состояние плода не определяли.

Новым признаком также является показатель содержания креатина, выше которого установлена тесная корреляционная связь между гипоксией матери и гипоксическим состоянием ребенка.

Креатин это азотсодержащая органическая кислота, содержащаяся в различных клетках организма, в том числе и в эритроцитах. Особенно большое количество креатина содержится в мышечной ткани, где он играет важную роль в процессах энергетического обмена. Функция креатина в эритроцитах не установлена. Содержание креатина в эритроцитах зависит от возраста клетки: в молодых эритроцитах его содержание в 6-8 раз превышает таковое в старых. В общей популяции эритроцитов средняя концентрация креатина в норме у взрослых составляет 411±30 мкмоль/л, у новорожденных детей 311±19 мкмоль/л. Увеличение концентрации креатина в общей популяции эритроцитов свидетельствует об увеличении числа молодых клеток, т.е. о стимуляции эритропоэза. Известно, что эритропоэз регулируется посредством колебаний насыщения тканей кислородом /Нормальное кроветворение и его регуляция. Под ред. Н.А. Федорова. М. Медицина, 1976, стр. 378/. Поэтому увеличение концентрации креатина в эритроцитах является специфическим признаком гипоксии любого происхождения. Известно, что повышение концентрации креатина в эритроцитах пуповинной крови новорожденного ребенка достоверно свидетельствует о перенесенной плодом за два месяца до родов хронической гипоксии, даже если клинических признаков таковой при рождении не отмечается /Laake E. Daniol A. Syllm-Rapoport I. Gross J. The creatino concontration in young and old red blood colls of normal and hypoxic nowborna// Biomod, Biochim, Acta. 1987. 2/3. p. 214-215/.

Работоспособность способа доказана следующими факторами.

1. При исследовании 31 пары "мать-новорожденный ребенок" установлена прямая корреляция между содержанием креатина в эритроцитах матери и ребенка /ч +0,58, p<0,01/;
2. Установлены достоверные отличия средних значений содержания креатина эритроцитов группы матерей, новорожденные дети которых имели высокий уровень креатина при рождении /1 группа/, от группы матерей, чьи дети имели нормальный уровень креатина /2 группа/ /таблица 1/.

Примечание к таблице достоверность различий между группами, p<0,001.

Увеличение содержания креатина в эритроцитах матери от 510 мкмоль/л и выше является признаком хронической гипоксии у плода и новорожденного.

3. Хроническая гипоксия это универсальное звено любых нарушений гомеостаза плода, которые в случаях, совместимыx с жизнью, у доношенных новорожденных реализуют себя в виде различных клинических проявлений /гипотрофия, нарушение процессов ранней адаптации, асфиксия, высокая степень стигматизации нарушение гемоликвородинамики, предрасположенность к родовой травме, диспропорции в физическом развитии, энцефалопатии/.

Изучение содержания эритроцитарного креатина у 47 беременных женщин однократно в различные сроки от 20 недель беременности до родов с последующим анализом состояния здоровья ребенка показали, что в группе новорожденных детей от матерей, у которых отмечалось повышение содержания креатина от 510 мкмоль/л и выше /1 группа/, 92,5% детей имели описанные клинические варианты патологии, связанной с внутриутробным поражением плода. В группе новорожденных детей от матерей, у которых при однократном исследовании крови содержание креатина не превышало 510 мкмоль/л /2 группа/, аналогичные нарушения выявлены только у 30% детей. По-видимому, отсутствие повышения содержания креатина при однократном исследовании не гарантирует отсутствия такого повышения в более ранние или более позднее сроки беременности. Регулярные исследования крови беременных женщин позволят перевести часть женщин 2 группы в 1 группу, что будет способствовать увеличению различий количества регистрируемых нарушений состояния плода в этих группах.

Способ осуществляют следующим образом.

У беременных из пальца или из вены берут 0,5 мл крови в пробирку с каплей гепарина. Кровь центрифугируют, отделяют плазму от эритроцитов и последние отмывают общепринятым способом физиологическим раствором. К 0,1 мл эритроцитов добавляют 0,4 мл дистиллированной воды и 1,5 мл 10% ТХУ. Через 5 мин смесь центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин. Отбирают 1 мл центрифугата и нейтрализуют его 30% раствором K₂CO₃. Содержимое креатина определяют методом Ennor A. Rosenberg H. /The determination and dietribution of phoaphocreatine in animal tisaues// Biochem. J. 1952. v.51, n.5 p. 606-610/.

Для этого к нейтрализованному центрифугату последовательно добавляют по 0,5 мл 0,142% парахлормеркурибензоата, 1% альфа-нафтола в щелочном растворе, 0,05 м диацетила. Через 30 мин развития окраски в темноте пробу колориметрируют при длине волны 540 нм. Расчет проводят по формуле:

где C концентрация креатина, мкмоль/л эритроцитарной массы;
E_оп экстинция опытной пробы;
E_ст экстинция стандартной пробы, содержащей вместо опытного образца 1 мл стандартного раствора;
0,0763 количество мкмоль креатина в 1 мл стандартного раствора;
1000 коэффициент пересчета на 1 л;
п разведение.

При увеличении концентрации креатина от 510 мкмоль/л и выше определяют нарушение состояния плода.

Пример 1. Беременная Т. В 36 недель беременности проведено определение концентрации креатина в эритроцитах, которая составила 310 мкмоль/л. Диагностировано отсутствие нарушения состояния плода. В 40 недель беременности проведено повторное определение концентрации, которая составила 509 мкмоль/л, что также свидетельствовало об отсутствии нарушения состояния плода. Роды срочные. Ребенок родился в удовлетворительном состоянии с оценкой по шкале Апгар 8/9 баллов. Физическое развитие нормальное. Содержание креатина в эритроцитах пуповинной крови 406 мкмоль/л, свидетельствующее об отсутствии хронической гипоксии у плода с 32 по 40 неделю беременности. Состояние ребенка в период новорожденности удовлетворительное.

Пример 2. Беременная П. В 24 недели беременности проведено определение концентрации креатина в эритроцитах, которая составила 558 мкмоль/л. Определено нарушение состояния плода. В 34 недели беременности проведено повторное исследование. Концентрация креатина составила 510 мкмоль/л. Состояние плода определено как нарушенное. Роды в срок. Ребенок родился с оценкой по шкале Апгар 9/9 баллов. Физическое развитие ребенок "маленький к сроку гестации", дистрофический вариант. Кефалогематома правой теменной кости. Кривошея справа. Признаки внутричерепной родовой травмы, очаговая симтоматика, снижение физиологических рефлексов.

Применение способа обеспечивает следующий положительный эффект:
расширение диагностических возможностей за счет повышения чувствительности;
малая травматичность, обеспечиваемая возможностью взятия крови из пальца;
обеспечивает возможность определения длительности нарушения метаболического гомеостаза в организме матери и ребенка;
обеспечивает возможность мониторинга за состоянием плода.

Изобретение относится к медицине, а именно к перинатологии, и может быть использовано для ранней диагностики внутриутробного страдания плода и прогнозирования состояния здоровья новорожденного. Целью изобретения является повышение точности способа за счет чувствительности к ранним нарушениям состояния плода. Поставленная цель достигается тем, что в эритроцитах беременной женщины определяют концентрацию креатина и при увеличении ее от 510 мкмоль/л и выше определяют нарушение состояния плода. Новым является то, что определение концентрации креатина у матери используют для оценки состояния плода и здоровья ребенка. 1 табл.

Способ определения состояния плода, включающий биохимическое исследование крови беременной женщины, отличающийся тем, что в эритроцитах определяют концентрацию креатина и при ее величине 510 мкмоль/л и выше определяют нарушение состояния плода.