СПОСОБ СНИЖЕНИЯ ОБСЕМЕНЕННОСТИ КИШЕЧНИКА ДОЖДЕВОГО ЧЕРВЯ Российский патент 2008 года по МПК A61K35/56 

Предлагаемое изобретение относится к микробиологии и может быть применено для фундаментальных научных исследований микробных сообществ кишечника дождевых червей, и получения непосредственного сырья для приготовления фармацевтических вермипрепаратов, исследования возможности сохранения интродуцируемых микроорганизмов различных групп в кишечник дождевых червей.

Известен способ очистки кишечника дождевых червей /Патент США №5,186,944, А61К 35/56, 1993 г/. Способ включает чистку фекальной грязи в пищеварительном тракте червей, размещая их в кислотном водном растворе (Ph 3 - 6,5) от 0,1 до 5 часов; помещение в сосуд, который замораживают при температуре от -10° до -60°С. С последующей сушкой сублимацией при этой температуре от 5 до 12 часов под вакуумом. Вакуумную сушку осуществляют ступенчато от 5 до 15 часов при 20°-30°С и 0,01-0,2 мм рт.ст. или 10 до 20 часов при 35°-50°С и 0,1-0,5 мм рт.ст или от 0,1 до 19 часов при 70°-80°С и 0,001-5 мм рт.ст.

Известен способ очистки кишечника дождевых червей /Патент США №5024844, А61К 35/56, 1991 г/. Живых дождевых червей помещают в пресную воду или 0,1-0,3% водный раствор, по крайней мере, одного состава, включающего от органических кислот типа уксусной кислоты, лимонной кислоты, янтарной кислоты, яблочной кислоты, винной кислоты и молочной кислоты до минеральных кислот типа фосфорной кислоты, серной кислоты и соляной кислоты, и натрийные или калийные соли этих кислот на время от 0,5 до 72 часов, предпочтительно от 1 до 40 часов. Вышесказанный раствор может также быть характеризован как слегка кислотный водный раствор, имеющий водородный показатель от 3 до 6,5. Таким образом, пищеварительный тракт живых дождевых червей будет в основном освобожден от почвы.

Ближайшим аналогом является способ очистки кишечника дождевых червей /Патент США №5,128,148, А61К 35/56, 1992 г./, включающий помещение живых дождевых червей в 0,3% водный раствор, по крайней мере, одного состава, выбранного из группы, состоящей из органических кислот, минеральных кислот, солей натрия органических кислот, солей натрия минеральных кислот, калийных солей органических кислот, и калийных солей минеральных кислот, пока пищеварительный тракт не освобождается от почвы. Вышеуказанный раствор может также быть характеризован как слегка кислотный водный раствор, имеющий водородный показатель от 3 до 6,5. Эти живые дождевые черви оставляются там при температуре от 1° до 25°С, предпочтительно от 2° до 15°С, сроком от 0,5 до 72 часов, предпочтительно от 1 до 40 часов. Таким образом, пищеварительный тракт живых дождевых червей в основном освобождается от почвы их собственными усилиями.

Недостатком известных способов является то, что подготовка червей к исследованиям занимает значительное время и черви в основном погибают.

Задачей предлагаемого изобретения является создания способа очистки пищеварительного тракта дождевых червей, позволяющего снизить время для подготовки червей к исследованиям и сохранить живым исследуемый материал.

Поставленная задача достигается тем, что в способе снижения обсемененности кишечника дождевого червя, дождевому червю вводят перорально 1,5-3,0% раствор перекиси водорода.

При использовании концентрации перекиси водороды меньшей, чем 1,5%, эффект был значительно меньше, при использовании же большей концентрации, чем 3,0%, перекиси водорода черви погибали.

Способ осуществляется следующим образом.

Для снижения обсемененности кишечника Красного Калифорнийского Гибрида используют водные растворы перекиси водорода. После введения с помощью микроинъектора 0,03 мл 3% перекиси водорода перорально двигательная активность дождевого червя существенно снизилась. Спустя 5 минут после инокуляции червей вскрыли и высеяли содержимое кишечника. Анализ показал, что введение 3% перекиси водорода резко снижает численность микрофлоры кишечника: на чашках Петри выросли единичные колонии.

Во второй серии опытов объем инокулята оставляли прежним, а концентрацию перекиси водорода снизили до 1,5%. Данный уровень концентрации сохраняли в последующих опытах. В этом случае в течение всех опытов активность дождевого червя и его поведенческие реакции оставались на уровне нормы. Высев при 30 минутной экспозиции показал, что обсемененность в переднем и заднем отделе кишечника снизилась в 2 раза, а в заднем осталась прежней. Это связано, скорее всего, с тем, что пищевой комок перемещается от глотки до анального отверстия за 2,5-3 часа. Качественный состав доминирующих, наиболее часто выделяемых штаммов снизился с 20 до 6.

При экспозиции 60 минут титр (КОЕ/мл) гетеротрофных микроорганизмов снизился в переднем и среднем отделах кишечника на порядок (с 10³ на 10²), в заднем остался прежним по причинам, указанным выше. Разнообразие микрофлоры кишечника снизилось с 20 до 8 штаммов.

При 3-часовой экспозиции отмечали снижение титра во всех отделах кишечника также на порядок. Микробное разнообразие снизилось с 20 до 7 штаммов (табл.1, 2).

Пример. 1. Вводят 3% перекись водорода дождевому червю per os в объеме 0,03 мл. Отмечается снижение активности поведения дождевого червя. Вскрывают спустя 5 минут после инокуляции и высевают содержимое кишечника. Высев оказался очень скуден: выросли единичные колонии.

Пример 2. При введении 0,03 мл 1,5% перекиси водорода выдерживают червей 30 минут. Вскрытие показало, что обсемененность в переднем и заднем отделе кишечника снизилась в 1,5 раза, а в заднем осталась прежней, потому что пищевой комок перемещается от глотки до анального отверстии за 2,5-3 часа. Качественный состав доминирующих, наиболее часто выделяемых микроорганизмов снизился с 20 до 6.

Пример 3. При выдерживании 60 минут титр (КОЕ/мл) микроорганизмов снизился в переднем и среднем отделах кишечника, в заднем остался прежним по причинам, указанным выше. Титр в переднем кишечнике снизился в 5 раз, в среднем в 4 раза. Разнообразие снизилось до 8.

Пример 4. Выдерживают 3 часа и получили снижение титра в переднем отделе кишечника в 4 раза, в среднем - в 8 раз, в заднем - в 17 раза. Микробное разнообразие снизилось 7.

Предлагаемый способ позволяет сохранить червей живыми для проведения научных изысканий (исследования микрофлоры дождевых червей, ее выживаемость) для получения сравнительно микробиологически безопасного вермисырья.

Изобретение относится к микробиологии и может быть применено для фундаментальных научных исследований микробных сообществ кишечника дождевых червей и получения сырья для приготовления фармацевтических вермипрепаратов. Способ предусматривает пероральное введение дождевому червю 1,5-3,0% раствора перекиси водорода. Способ позволяет снизить время подготовки червя к исследованиям и сохранить его живым. 2 табл.

Способ снижения обсемененности кишечника дождевого червя, отличающийся тем, что дождевому червю вводят перорально 1,5-3,0%-ный раствор перекиси водорода.