ПРИМЕНЕНИЕ ЦИТОФЛАВИНА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ КЛЕЩЕВЫХ НЕЙРОИНФЕКЦИЙ Российский патент 2008 года по МПК A61K31/194 A61K31/708 A61K31/525 A61P25/00 A61P31/14 

Изобретение относится к медицине, инфекционным болезням и предназначено для патогенетической терапии нейроформ клещевого энцефалита (КЭ) и его микстов с иксодовыми клещевыми боррелиозами.

Из исследований последних лет известно, что при патологических процессах в центральной нервной системе экспрессируется оксид азота, который также участвует и в нормальной регуляции некоторых процессов жизнедеятельности. Так, у пациентов с бактериальными менингитами выявлено увеличение концентрации в ликворе нитратов и нитритов. К патогенетическим механизмам развития менингеального синдрома относятся воспаление и отек мозговых оболочек и нередко прилегающей ткани мозга, дисциркуляция в мозговых и оболочечных сосудах, гиперсекреция ликвора и нарушения его циркуляции и оттока, повышение проницаемости гематоэнцефалического барьера, общая интоксикация. Установлено также, что в регуляции производства оксида азота большую роль играют цитокины, индуцирующие или подавляющие его гиперпродукцию. Дисрегуляция производства оксида азота может привести к обширному повреждению тканей, в том числе мозга.

В базисной терапии менингитов вирусной и бактериологической этиологии используют различные группы фармакологических средств, однако большинство из них не способны ограничивать гиперпродукцию оксида азота (NO), вызванную активацией индуцибельной NO-синтазы под воздействием вирусов, липополисахаридов, тейхоевых кислот, не затрагивая при этом существенные регуляторные и защитные функции NO. На практике было выявлено, что водорастворимые тетрациклины (моноциклин, доксициклин) эффективны при состояниях, обусловленных гиперпродукцией азота, однако их применение ограничено только спектром боррелиозной инфекции и, как правило, не используется при моноинфекции клещевым энцефалитом.

Большинство из разработанных веществ, обладающих NO-модулирующими свойствами, находится на стадии экспериментальных исследований и доклинических испытаний. В то же время уже сейчас ясно, что применение как экзогенных доноров NO-групп, так и ингибиторов продукции оксида азота, может представлять собой потенциальные фармакотерапевтические стратегии [12]. Большинство современных терапевтических стратегий базисной патогенетической терапии клещевых нейроинфекций не базируется на принципах энергокоррекции, не позволяет активизировать защитные механизмы, повышающие резистентность к оксидативному стрессу за счет активации собственных антиоксидантных систем.

Известен способ патогенетического лечения клещевых нейроинфекций, описанный в материалах Российской научно-практической конференции, посвященной 110-летию кафедры инфекционных болезней военно-медицинской академии им. С.М.Кирова («Инфекционные болезни: проблемы здравоохранения и военной медицины», СПб, Вмед.А, 2006 г., с.27.

Известный способ включает базовую терапию с использованием медикаментозных средств и с дополнительным применением цитофлавина в течение 7 дней.

Недостаток известного способа заключается в том, что такое лечение не очень эффективно, поскольку применение медикаментозных средств в комплексной терапии часто ограничено целым рядом факторов (см. ниже).

Задачей заявляемого технического решения является повышение эффективности лечения клещевых нейроинфекций.

Поставленная задача решается тем, что для лечения клещевых нейроинфекций цитофлавин применяют по новому назначению, а именно в качестве средства, снижающего гиперпродукцию оксида азота при лечении больного в остром периоде клещевых нейроинфекций.

Применение цитофлавина позволяет понизить гиперпродукцию оксида азота при лечении больного в остром периоде клещевых нейроинфекций, что повышает эффективность дальнейшего лечения.

Применение цитофлавина в качестве средства, снижающего гиперпродукцию оксида азота при лечении больного в остром периоде клещевых нейроинфекций, обусловлено следующим.

Нейроинфекции, как прочие критические состояния в медицине, требуют комплексной этиотропной, патогенетической и симптоматической терапии в остром периоде инфекционного процесса.

Известен ряд препаратов, влияющих на продукцию оксида азота: антибактериальные препараты из группы тетрациклинов, цефалоспорины третьего поколения, стероидные гормоны [8, 11, 14, 15]. Однако их применение в комплексной терапии клещевых инфекций ограничено:

1) клиническими показаниями (например, использование минералкортикоидных гормонов при отеке и набухании головного мозга);

2) клиническим спектром клещевых нейроинфекций, например использование цефалоспоринов третьего поколения или антибиотиков тетрациклинового ряда как средств этиотропной терапии нейроборрелиоза. Причем тетрациклины в лечении нейроборрелиоза используются только американским врачебным обществом и не рекомендованы отечественными специалистами (Лобзин Ю.В., Усков А.Н., 2000), а по некоторым данным не могут быть использованы при лечении клещевых микст-инфекций, так как, по мнению Алексеева А.Н., происходит активация персистирующего вируса КЭ антибактериальными препаратами [1];

3) противоклещевой иммуноглобулин, который используется в качестве средства этиотропной терапии клещевого энцефалита, способствует формированию специфического гуморального иммунного ответа (серотерапия) и не может влиять на продукцию оксида азота.

Патогенетическая терапия неосложненных форм клещевых нейроинфекций - это по существу дезинтоксикационная терапия. Гемодилюция (введение глюкозо-солевых растворов, коллоидных растворов) также не может влиять на продукцию оксида азота.

В статье Арипова Г.С. и др. «Антиоксидантная терапия в комплексной терапии нейроинфекций» использование цитофлавина обосновывается «уменьшением выраженности ишемических и гипоксических повреждений» и «восстановлением активности фермента антиоксидантной защиты», что «способствует более доброкачественному клиническому течению нейроинфекций и более быстрой нормализации качественного и количественного состава ЦСЖ». Цитофлавин оказывает «выраженное корригирующее влияние на содержание металлопротеидов сыворотки крови и ЦСЖ».

Техническим результатом изобретения является снижение эндогенной гиперпродукции оксида азота как одного из звеньев в патогенезе клещевых нейроинфекций. Применение цитофлавина позволяет понизить гиперпродукцию оксида азота при лечении больного в остром периоде клещевых нейроинфекций и является новым.

Заявителю неизвестны технические решения, заключающиеся в применении цитофлавина в качестве средства, снижающего гиперпродукцию оксида азота при лечении больного в периоде ранней реконвалесценции клещевых нейроинфекций, поэтому он считает, что заявляемое техническое решение соответствует критерию «изобретательский уровень».

Заявляемое техническое решение может использоваться для патогенетической терапии нейроформ клещевого энцефалита и его микстов с иксодовыми клещевыми боррелиозами, а потому соответствует критерию «промышленная применимость».

Мы располагаем собственными сведениями о самостоятельном применении цитофлавина, вне комплекса лекарственных средств, по снижению гиперпродукции оксида азота у больных клещевыми нейроинфекциями в периоде ранней реконвалесценции, подтверждающими новизну изобретения.

Под наблюдением находилось 40 человек с различными клиническими формами клещевых нейроинфекций: 20 больных менингеальными формами КЭ, 5 человек - очаговыми формами КЭ, 10 человек - больные клещевой микст-инфекцией (сочетание безэритемной и эритемной форм ИКБ с менингеальными и очаговыми формами КЭ или сочетание лихорадочной формы КЭ и нейроборрелиоза), 5 больных нейроборрелиозом. Всем больным в периоде реконвалесценции вводился цитофлавин для снижения эндогенной гиперпродукции оксида азота, которая сохранялась у больных на 3-4 неделе заболевания. Цитофлавин вводился 1 раз в сутки утром внутривенно капельно (медленно) по 10,0 мл на 200 мл 5% раствора глюкозы со скоростью не более 90 кап./в мин. в течение 7-10 дней.

Определение содержания конечных метаболитов оксида азота (нитраты, нитриты, суммарные метаболиты) проводилось фотокалориметрическим способом по реакции Грисса в модификации Емченко Н.Л. Определение содержания провоспалительного цитокина FNO-α в сыворотке крови проводилось методом ИФА с тест-системой производства ЗАО «Вектор-Бест» (г.Новосибирск). Оценку полученных данных проводили с использованием методов статистического анализа. Проверку нормальности распределения количественных показателей проводили с использованием критерия Колмогорова-Смирнова. В случае отклонения распределения от нормального использовали непараметрические критерии Манна-Уитни, Вилкоксона.

По данным литературы NO является неорганическим соединением со свойствами радикала, синтезируется ферментами из семейства NO-синтаз, которые в присутствии кофакторов окисляют гуанидиновую группу L-аргинина до NO. Конститутивная форма энзима (c-NOS) обычно экспрессируется в клетках нервной и сосудистой систем и регулируется через комплекс Са²⁺-кальмодулин и посттрансляционными модификаторами, а NO функционирует как внутриклеточный или межклеточный медиатор. NO также синтезируется в макрофагах, полиморфно-ядерных лейкоцитах (ПЯЛ) и гепатоцитах. Секретируемый ими радикал выполняет в основном роль противоопухолевого и антипатогенного агента, вызывая задержку деления и гибель чужеродных клеток [9, 10, 13]. Индуцибельная NO-синтаза в норме практически не обнаруживается в клетках. Однако ее синтез индуцируется под воздействием FNO-α, гамма-интерферона, бактериального липосахарида (ЛПС). Преобладающим типом ответа на инфекцию (что подтверждается многими исследованиями) является экспрессия i-NOS и последующая продукция NO и других высокоактивных соединений азота, таких как NO^-, ONOO^- в клетках-хозяевах. FNO-α как аутокринный регулятор через TNFR1 индуцирует экспрессию i-NOS. При этом синтезируется большое количество оксида азота и происходит апоптотическая гибель клеток [6, 7].

В табл.1 показано содержание FNO-α в различные периоды клещевых нейроинфекций. Как следует из этой таблицы, у больных в остром периоде и периоде реконвалесценции наблюдается повышенное содержание FNO-α по сравнению с группой контроля. Полученные показатели по тесту Колмогорова-Смирнова являются статистически достоверными.

Таблица 1Содержание ФНО-альфа в сыворотке крови пациентов в различные периоды заболевания в сопоставлении с группой контроля (пг/мкл) Пациенты, острый периодПациенты, период рекКонтроль (здоровые)Достоверность отличийОстрый периодПериод реконвалесценцииMe
Q_L-Q_UMe
Q_L-Q_UMe
Q_L-Q_Up(KS)p(MU)p(KS)p(MU)ФНО-альфа12,27
0,00-19,5613,73
0,00-22,700,32
0,22-0,40р<0,0010,153р<0,001р<0,152

Как следует из материалов табл.2, в периоде реконвалесценции не происходит полной нормализации показателей нитроксидергических процессов по сравнению с контрольной группой. При сравнении получены достоверные статистические различия по тестам Колмогорова-Смирнова и Манна-Уитни в отношении содержания нитратов (NO₃) и суммарных метаболитов нитроксид-молекулы (NO_x).

Таблица 2Содержание метаболитов нитроксид-молекулы в сыворотке крови больных в ОТ и ТРПримечание: ОТ - острый период, ТР - период реконвалесценции Пациенты, острый периодПациенты, период
реконвалесценцииКонтроль (здоровые)Достоверность отличий   Острый период - контрольПериод реконвалесценции
контрольMe
Q_l-Q_uMe
Q_l-Q_uMe
Q_l-Q_up(KS)P(MU)P(KS)P(MU)NO₂, мкмоль/л5,14
4,15-7,253,35
2,30-5,703,70
3,20-4,04p<0,001<0,001P>0,100,682NOx, мкмоль/л28,40
24,60-33,9720,10
17,30-22,7013,40
11,34-14,40p<0,001<0,001p<0,001<0,001NO₃, мкмоль/л22,55
18,44-28,2015,45
14,00-18,509,30
8,30-10,50p<0,001<0,001p<0,001<0,001

Нитрокиднегативная модификация патогенетически ориентированной терапии цитофлавином привела к нормализации содержания метаболитов нитроксид-молекулы (табл 3). Показатели статистически достоверны в парном тесте Вилконсона.

Таблица 3
Содержание метаболитов оксида азота в сыворотке крови больных клещевыми нейроинфекциями до и после лечения цитофлавиномПоказательДо цитофлавина (n=40)После цитофлавина (n=40)Достоверность отличий согласно парному тесту Вилконсона, РMe
Q_L-Q_UMe
Q_L-Q_UNO₂3,35
3,30-4,602,70
1,90-2,950,001NO_X24,50
20,40-28,4018,00
18,00-22,600,006NO₃15,45
15,20-18,8013,29
15,70-20,300,075

Таким образом, в сравнении с прототипом использование цитофлавина с целью коррекции гиперпродукции оксида азота в периоде рековалесценции у больных клещевыми нейроинфекциями является патогенетически обоснованным и способствует повышению эффективности дальнейшего лечения.

Литература

1. Алексеев А.Н., Дубинина А.В. Журнал инфекционной патологии. - 1996. - Т3., №4. С.5-9.

2. Башкатова В.Г., Раевский К.Е. «Оксид азота в механизмах повреждения мозга, обусловленных нейротоксическим действием глутамата». Биохимия. - 1998. - №63(7). - С.1020-1027.

3. Емченко Н.Л., Цыганенко О.И., Ковалевская Т.В. «Универсальный метод определения нитратов в биосредах организма». Клин. лаборат. диагностика. - 1994. - №6. - С.19-20.

4. Исаева М.П., Леонова Г.М., Кожемяко В.Б. и др. Апоптоз как механизм цитопатического действия вируса клещевого энцефалита. Вопросы вирусологии, 1997; 4: 182-186.

5. Лобзин Ю.В., Усков А.Н. «Лайм-боррелиоз (иксодовые клещевые боррелиозы). Санкт-Петербург. «Изд-во Фолиант», 2000. - 156 с.

6. Brady T.S., Chang L.Y., Day B.J. et al. Extracelluar superoxide dismutase is upregulated with inducible nitric oxide synthase after NF-kappa В activation. J Physiol 1997; 273(5): 1002-1006.

7. Downen M., Amaral T.D., Hua L.L. et al. Neuronal death in cytokine-activated primary human brain cell culture:role of tumor necrosis factor-alpha. J Glia 2003; 28(2): 114-27.

8. Komatsu, Т., Ireland, D.D.C, Chen, N. et al. Neuronal expression of NOS-1 is required for host recovery from viral encephalitis. J Virology 1999; 5: 87-89.

9. Knowles R.S., Moncada S. // Nat. med. - 1994. - Vol.298, Pt. 2. - P.249-258.

10. Moller K. Comparative in vitro activity of penicillin, ceftriakson and ciprofloxacin against pneumococci isolated from meningitis. Neuroreport. - 1998. - №2. - P269-272.

11. Muscara M.N. et al. Theurapeutic potential of nitric oxide donors and inhibitors. Am. J. Physiol. - 1999. - №276. - P. 1313-1316.

12. Pape H.C., Mager R. et al. Neuronal NO-synthase as a factor of neuron activity. J Neuron 1999; 9: 441-448.

13. Shapira L., Barak V. et al. Effect of tetracyclines on the patologic activity of endotoxin: in vitro and vivo studes. Adv. Dent. Res. - 1998. - Vol.12. - №2.- P.78-82.

14. Yrjanheikki J., Keinanen R. et al. Tetracyclines inhibit microglial activation and are neuroprotectivy in global brain ischemia. Proc. Nat. Acad. Sci. USA. - 1998. - Vol.95, №26.-P.15769-15774.

15. Yrjanheikki J., Keinanen R. et al. Tetracyclines inhibit microglial activation and are neuroprotectivy in global brain ischemia. Proc. Nat. Acad. Sci. USA. - 1998. - Vol.95, №26. - P.15769-15774.

Изобретение относится к медицине, инфекционным болезням и может быть использовано для патогенетической терапии клещевых нейроинфекций. Цитофлавин вводят больным клещевыми нейроинфекциями в период ранней реконвалесценции, что позволяет повысить эффективность лечения за счет понижения эндогенной продукции оксида азота. 3 табл.

Применение цитофлавина в качестве средства, снижающего гиперпродукцию оксида азота при лечении больного в периоде ранней реконвалесценции клещевых нейроинфекций.