СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ХРОНИЧЕСКОЙ ТОКСИЧЕСКОЙ ГЕПАТОПАТИИ Российский патент 2009 года по МПК G09B23/28 

Изобретение относится к медицине, а именно экспериментальной токсикологии, фармакологии, и может быть использовано при изучении хронических токсических поражений печени и в доклиническом исследовании гепатозащитных препаратов.

Задача, решаемая данным изобретением, - это создание модели хронической гепатопатии.

Наиболее близким по совокупности признаков к заявленному изобретению является способ моделирования токсического гепатита (см. а.с. №1469516, кл. G09В 23/28, БИ №12. 30.03.89 г.) путем подкожного введения 50%-ного масляного раствора четыреххлористого углерода на оливковом масле из расчета 0,1 мл на 100 г массы тела животного. Инъекции производили каждый 4-й день в течение 8 недель, всего 14 инъекций.

Известный способ не является физиологичным, так как многократное подкожное введение масляного раствора химического вещества вызывает некробиотические изменения на месте введения и очень медленно достигает органа - мишени. Кроме того, способ моделирования является продолжительным и длится 8 недель.

Техническим результатом изобретения является безопасное воспроизведение патологии, сокращение сроков моделирования и приближение к клиническому течению хронического процесса в печени за счет развития структурных и функциональных изменений в гепатоцитах при действии химического вещества.

Технический результат достигается тем, что в желудок лабораторного животного через зонд ежедневно однократно в течение трех недель вводят 50% раствор 2,4-дихлорфенола на оливковом масле в дозе 5 мг на 100 г массы тела.

Повышение воспроизводимости и формирования хронического патологического процесса в печени достигается за счет использования производного фенола - 2,4-дихлорфенола, являющегося приоритетным загрязнителем окружающей среды (см. Доклад Рабочей группы ВОЗ. Токсикологическая оценка галогенированных ароматических соединений в связи с загрязнением подземных вод. Европейское региональное бюро ВОЗ. Копенгаген. 1981. - С.28-30; Лужников Е.А., Костомарова Л.Г. Острые отравления. Руководство для врачей. - М.: Медицина, 2000. - С.215-217).

Способ моделирования позволяет изучить патологию в динамике развития, выявленные нарушения функций печени у животных идентичны с изменениями в печени больных хроническим токсическим гепатитом.

Экспериментальная хроническая токсическая гепатопатия (ХТГ) подтверждена биохимическими и морфогистохимическими показателями.

Способ осуществляется следующим образом.

Лабораторному животному ежедневно однократно в течение трех недель через зонд в желудок вводят 50%-ный раствор 2,4-дихлорфенола на оливковом масле в дозе 5 мг на 100 г массы тела.

Готовят 50%-ный раствор 2,4-дихлорфенола на оливковом масле из расчета 1 часть 2,4-дихлорфенола и 2 части оливкового масла, перемешивают и вводят через зонд в желудок лабораторным животным.

ПРИМЕР. Крысе, 200 г, 50%-ный раствор 2,4-дихлорфенола на оливковом масле вводится ежедневно однократно в течение трех недель в дозе 5 мг на 100 г массы тела. Гибель животных в течение эксперимента не установлена. Сравнение и оценка полученных данных (показателей: поведенческих реакций, биохимических, морфологических, гистохимических) во время эксперимента проводили до и после моделирования. После трех недельного введения 2,4 дихлорфенола отмечены изменения показателей поведенческих реакций. Так после моделирования уменьшилось количество пересеченных квадратов на 58% и число заглядываний «норковый рефлекс» на 61,5% по сравнению с данными, полученными до моделирования (см. табл.1).

Таблица 1
Показатели поведенческих реакцийПоказателиДо моделирования ХТГПосле моделированияОткрытое поле, кол-во пересеченных квадратов за 2 мин9,5ХТГ
5,5 «Норковый рефлекс», кол-во заглядываний за 2 мин6,54,0

По истечении трех недель проведена декапитация животного под легким эфирным наркозом. Экспериментальная хроническая токсическая гепатопатия подтверждена изменениями биохимических, морфологических и гистохимических показателей (см. табл.2-4).

В сыворотке крови выявлено повышение активности основных ферментов - индикаторов цитолитического синдрома: аланинаминотрансферазы (на 79,1%), аспартатаминотрансферазы (на 50%), лактатдегидрогеназы (на 87,6%) и индикатора холестаза: щелочной фосфатазы на 21,8% (см. табл.2)

Таблица 2
Биохимические показателиПоказателиДо моделирования ХТГПосле моделирования ХТГАланинаминотрансфераза, моль/ч.л.32,157,5Аспартатаминотрансфераза, моль /ч.л.10,816,2Лактатдегидрогеназа, моль/ч.л.29,956,1Щелочная фосфатаза, моль/ч.л.15,118,44Триглицериды, моль/л1,22,6

Создание модели привело к увеличению относительной массы печени (на 57,0%), количества безъядерных гепатоцитов и уменьшению содержанию двухъядерных гепатоцитов и Купферовских клеток (см. табл.3). Морфометрическими исследованиями препаратов печени выявлено снижение ядерно-цитоплазматического отношения, отношение стромы к паренхиме.

Таблица 3
Морфологические показателиПоказателиДо моделирования ХТГПосле моделирования ХТГОтносительная масса печени, мг/г32,150,4Безъядерные гепатоциты, %4,014,6Двухъядерные гепатоциты, %12,09,3Купферовские клетки, %4,32,8Ядерно-цитоплазматическое отношение, у.е.0,430,19Отношение стромы к паренхиме, у.е.0,250,13

На гистологических препаратах в поле зрения большое количество нектротизированных гепатоцитов, некоторые из них с вакуолизированными ядрами, видно огрубление и отек стромы, вокруг клеток в инфильтратах много лимфоцитов. Гепатоциты в состоянии белковой и жировой дистрофии, в основном находятся в перипортальной зоне.

Гистохимический анализ ткани печени показал снижение содержания гликогена (на 20,0%), активности сукцинатдегидрогеназы (на 14,2%) и АТФ-азы (на 33,9%), увеличение активности кислой (на 20,0%) и щелочной (на 76,4%) фосфатазы и количества липидов на 14,2% (см. табл.4).

Таблица 4
Гистохимические показателиПоказателиДо моделирования ХТГПосле моделирования ХТГЛипиды, у.е.8,49,6Гликоген, у.е.8,56,8Сукцинатдегидрогеназа, у.е.8,127,01Кислая фосфатаза, у.е.7,59,0Щелочная фосфатаза, у.е.8,915,7АТФ-аза, у.е.7,04,7

Предлагаемым способом воспроизводится надежная модель хронического токсического гепатита, что подтверждено морфогистохимическим анализом печени и биохимическими показателями. Модель позволяет изучать хроническую патологию печени в динамике его развития при воздействии токсичных химических веществ.

Предлагаемый способ моделирования хронического токсического гепатита, в сравнении с известным способом, позволяет безопасное воспроизвединие модели, при сокращенных сроках эксперимента и в более упрощенном виде приблизиться к клиническому течению хронической патологии печени вследствие развития структурных и функциональных изменений в гепатоцитах, что подтверждено морфогистохимическим анализом, биохимическими показателями и оценкой поведенческих реакций.

Предлагаемый способ моделирования хронической токсической гепатопатии является эффективным, позволяет изучать функциональные нарушения в печени в динамике развития и может быть использовано в разработке и поиске эффективных гепатозащитных средств для лечения и профилактики данной патологии.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к экспериментальной токсикологии и фармакологии, и может быть использовано для моделирования хронической токсической гепатопатии. Для этого экспериментальным животным вводят 50% раствор 2,4-дихлорфенола на оливковом масле через зонд в желудок ежедневно однократно в течение трех недель в дозе 5 мг на 100 г массы тела. Способ обеспечивает адекватную воспроизводимость модели и позволяет изучать данную патологию печени в динамике развития. 4 табл.

Способ моделирования хронической токсической гепатопатии, включающий введение химического вещества экспериментальным животным, отличающийся тем, что в качестве токсического вещества используют 50%-ный раствор 2,4-дихлорфенола на оливковом масле, вводимый через зонд в желудок ежедневно однократно в течение трех недель в дозе 5 мг на 100 г массы тела.