СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ЦИРРОЗА ПЕЧЕНИ Российский патент 2003 года по МПК G09B23/28 

Изобретение относится к экспериментальной медицине и фармакологии, может быть использовано для изучения токсических поражений печени, в доклиническом исследовании гепатозащитных препаратов и в разработке новых способов лечения данной патологии.

Наиболее близким по совокупности существенных признаков к заявляемому изобретению является способ создания модели гепатита и цирроза печени млекопитающих (см. а. с. 94026117, G 09 В 23/28, БИ 24, 1996), где в качестве химического вещества берут формалин и вводят его путем вдыхания воздуха, содержащего 17,5-18,5 мг/л формалина.

Известный способ моделирования цирроза печени является продолжительным и трудоемким: ежедневные ингаляционные опыты в течение 7 месяцев. Кроме того, 70%-ный раствор формалина представляет собой водный раствор формальдегида, который обладает резко выраженным раздражающим и сенсибилизирующим действием, средняя смертельная концентрация для крыс 588 мг/м³. Предельно допустимая концентрация паров формальдегида в воздухе рабочей зоны 0,5 мг/м³, 2 класс опасности. Вещество остронаправленного механизма действия, способное вызывать аллергические заболевания в условиях производства и требующее автоматического контроля за его содержанием в воздухе.

При концентрации формалина 17,5-18,5 мг/л (или 17500-18500 мг/м³) возможно развитие острого отравления всего организма с воспалительными и некробиотическими изменениями слизистых оболочек верхних дыхательных путей и легких.

В условиях производства хроническое воздействие высоких концентраций формалина недопустимо.

Техническим результатом изобретения является повышение воспроизводимости и упрощение способа, сокращение сроков моделирования цирроза печени и приближение к клиническому течению данной патологии печени.

Технический результат достигается тем, что в желудок лабораторного животного 2 раза в неделю в течение месяца вводят 50%-ный раствор совтола-1 на оливковом масле из расчета 0,25 мл на 100 г массы тела и ежедневно в течение месяца вместо воды для питья дают 10%-ный раствор этанола.

Для определения кратности введения 50%-ного раствора совтола-1 на оливковом масле и его количества для моделирования цирроза печени был проведен эксперимент на животных, полученные данные сведены в табл. 1.

Одновременно в течение всего эксперимента животным давали вместо воды 10%-ный раствор этанола.

Из таблицы 1 видно, что при кратности введения 50%-ного раствора совтола-1 на оливковом масле два раза в неделю воспроизводится надежная модель цирроза печени без гибели животных.

Повышение воспроизводимости формирования хронического патологического процесса в печени и сокращения сроков опыта достигается при использовании совтола-1 и 10%-ного этанола в качестве питья вместо воды, за счет потенцирования гепатотоксического эффекта. Экспериментальный цирроз печени подтвержден морфогистохимическими и биохимическими показателями.

Способ моделирования цирроза печени осуществляется следующим образом.

Лабораторному животному два раза в неделю в течение месяца вводят в желудок зондом 50%-ный раствор совтола-1 на оливковом масле из расчета 0,25 мл на 100 г массы тела.

На протяжении всего эксперимента ежедневно для питья дают 10%-ный раствор этанола.

Готовят: 50%-ный раствор совтола-1 на оливковом масле из расчета 1 часть совтола-1 и 2 части оливкового масла, перемешивают и вводят в желудок зондом, а 10%-ный раствор этанола для питья готовят путем разведения 96^o этилового спирта.

ПРИМЕР . Крысе, 180 г, 50%-ный раствор совтола-1 на оливковом масле вводился из расчета 0,25 мл на 100 г массы тела дважды в неделю в течение одного месяца, на протяжении эксперимента для питья животному давали 10%-ный раствор этанола.

В течение всего опыта не отмечено каких-либо изменений внешнего вида и поведения животного, кроме частичного отказа от пищи.

По истечении одного месяца проведена декапитация животного. Морфогистохимический анализ кусочков печени показал развитие хронического патологического процесса, основным проявлением которого является цирроз печени.

Это подтверждается увеличением относительной массы печени и развитием в печеночной паренхиме фиброза и цитолиза. На гистологических препаратах печени поля фиброза занимают 3,1% среза, у интактной крысы на долю соединительной ткани приходится 0,5%. Гепатоциты локализованы преимущественно в перипортальной зоне, находятся в состоянии белковой и жировой дистрофии. Определяется дискомплектация печеночных балок, пролиферация соединительной ткани в портальных трактах с проникновением фиброзных тяжей в глубь долек. В поле зрения большое количество некротизированных гепатоцитов, отек и разрыхление стремы, в клеточном инфильтрате наблюдаются лимфоциты.

При морфометрии препаратов печени выявлено снижение ядерноцитоплазматического отношения, отклонения стромы к паренхиме (см. табл.2).

Гистохимический анализ ткани печени показал увеличение активности кислой фосфатазы, щелочной фосфатазы и снижение активности АТФазы.

Экспериментальный цирроз печени подтверждается также изменениями биохимических показателей: увеличением содержания изолированных двойных связей, диеновых коньюгатов, триеновых конъюгатов, глюкозоаминогликанов в ткани печени (см. табл.3).

Кроме того, наблюдается увеличение количества оксипролина во фракциях коллагена кислоторастворимого и кислотоустойчивого.

В сыворотке крови выявлено повышение активности ферментов: аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы, кислой фосфатазы, щелочной фосфатазы, лактатдегидрогеназы.

Предлагаемым способом воспроизводится надежная модель цирроза печени, что подтверждено морфогистохимическим анализом печени и биохимическими показателями. Модель позволяет изучать тяжелый хронический процесс в печени в динамике его развития.

Предлагаемый способ моделирования цирроза печени в сравнении с известным (см. табл. 4) позволяет повысить воспроизводимость моделирования при сокращенных сроках опыта и в более упрощенном виде приблизиться к клиническому течению цирроза печени вследствие развития необратимых структурных и функциональных изменений в гепатоцитах, что подтверждено морфогистохимическим анализом, биохимическими показателями и оценкой поведения животных.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и фармакологии и может быть использовано для изучения токсических поражений печени в доклиническом исследовании гепатозащитных препаратов и в разработке новых способов лечения цирроза печени. Способ представляет собой введение в желудок лабораторного животного два раза в неделю в течение месяца 50%-ного раствора совтола-1 на оливковом масле из расчета 0,25 мл на 100 г массы тела и 10%-ного раствора этанола вместо воды для питья. Способ позволяет повысить воспроизводимость и упростить способ, сократить срок моделирования цирроза печени и приблизить к клиническому течению данной патологии. 4 табл.

Способ моделирования цирроза печени путем введения химических веществ лабораторному животному, отличающийся тем, что в желудок вводят два раза в неделю в течение месяца 50%-ный раствор совтола-1 на оливковом масле из расчета 0,25 мл на 100 г массы тела и 10%-ный раствор этанола вместо воды для питья.