СПОСОБ МЕТКИ МОНОНУКЛЕАРНЫХ КЛЕТОК КРАСНОГО КОСТНОГО МОЗГА С ПОМОЩЬЮ Тс-ЭКСАМЕТАЗИМА Российский патент 2009 года по МПК A61K51/00 A61K35/28 

Описание патента на изобретение RU2343933C1

Изобретение относится к медицине, а именно к радионуклидной диагностике, и может найти применение в кардиологии и кардиохирургии.

Известен способ мечения лейкоцитов крови 99mTc-эксаметазимом, заключающийся в том, что у пациента забирают 50-100 мл крови, методом центрифугирования выделяют клеточную суспензию, затем 10 мин инкубируют клеточную суспензию с 4 мл 500-1000 мБк 99mTc-эксаметазима, после чего добавляют 10 мл бесклеточной плазмы, центрифугируют при 150g в течение 5 мин, удаляют надосадок, а лейкоциты, находящиеся в осадке ресуспензируют 3 мл бесклеточной плазмы и вводят пациенту внутривенно [1].

Данный способ является наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому результату и выбран в качестве прототипа.

Данный способ не позволяет проводить метку мононуклеарных клеток красного костного мозга 99mTc-эксаметазимом и оценивать их распределение в организме.

Задачей изобретения является разработка способа метки мононуклеарных клеток красного костного мозга 99mTc-эксаметазимом, которая дает возможность оценивать их распределение в организме пациента после инфузии (внутривенной, внутрикронарной).

Поставленная задача решается техническим решением, представляющим собой способ метки мононуклеарных клеток красного костного мозга 99mTc-эксаметазимом, включающий забор 100-120 мл костного мозга с последующим выделением мононуклеарных клеток костного мозга методом градиентного центрифугирования. Затем 30-50 млн мононуклеарных клеток красного костного мозга ресуспензируют в 4 мл изотонического раствора натрия хлорида, смешивают с 1500-2500 мБк 99mTc-эксаметазима и инкубируют при комнатной температуре 10 мин. По истечении срока инкубации процесс мечения останавливают добавлением в пробирку с клеточной суспензией 10 мл изотонического раствора натрия хлорида и центрифугируют в течение 5 мин при 150 g. По окончании центрифугирования надосадок, содержащий несвязанный с мононуклеарными клетками костного мозга 99mTc-эксаметазим, убирают, а осадок, содержащий меченные 99mTc-эксаметазимом мононуклеарные клетки красного костного мозга, ресуспензируют в 10 мл изотонического раствора натрия хлорида и измеряют их активность.

Новым в предлагаемом способе является использование 99mTc-эксаметазима в дозе 1500-2500 мБк, а также использование изотонического раствора натрия хлорида для отмывки и ресуспензирования меченых 99mTc-эксаметазимом мононуклеарных клеток красного костного мозга.

На сегодняшний день известно, что все специализированные клетки взрослого организма происходят из плюрипотентных (стволовых) клеток. Своевременное обновление пула здоровых клеток является незаменимым условием здоровья и долголетия многоклеточного организма. Именно поэтому, клеточная терапия рассматривается в качестве одного из перспективных направлений в медицине и других смежных областях биологической и медицинской науки.

Названный вид лечения может обеспечить восстановление высокодифференцированных тканей (нервная, хрящевая, мышечная и т.д.) с помощью имплантации дифференцированных плюрипотентных клеток после повреждения органа или патологии (например, при ишемической болезни, патологиях нервной системы, сахарном диабете и др.).

В последние годы клеточная терапия все больше привлекает внимание кардиохирургов и кардиологов в качестве метода альтернативного лечения сердечно-сосудистых заболеваний, которые, как известно, являются основной причиной инвалидизации и смертности населения. Особое место в ряду данных заболеваний занимает инфаркт миокарда, являющийся первостепенным фактором в развитии сердечной недостаточности (СН).

Развитие биотехнологии, молекулярной и клеточной биологии сделало клетку не только главным объектом воздействий, но и средством лечения многих заболеваний. Клеточную терапию в кардиологии клинически стали серьезно использовать лишь в последние пять лет. Поводом для начала этой большой работы послужили экспериментальные работы D.Orlic с соавт.(2001 г.) [2], S.Tomita с соавт.(2002 г.) [3], где авторы показали, что клетки костного мозга способствовали регенерации зон инфаркта миокарда и улучшению функциональной работы сердца у выживших животных.

Наиболее востребованным и изучаемым видом клеток среди клиницистов, в настоящее время, являются мононуклеарные клетки костного мозга. Это обусловлено не только тем, что среди них содержится до 2% гемопоэтических и до 0,05% мезенхимальных стволовых клеток костного мозга [4], но и возможностью использовать их для аутотрансплантации.

В то же время известно, что как бы не была совершенна искусственно созданная экспериментальная модель на животных, она далеко не всегда может отразить все нюансы клинического течения заболевания.

На сегодняшний день особенно часто дискутируется вопрос о том, как ведут себя клетки после доставки в миокард и в каком количестве фиксируются в миокарде. Для того чтобы ответить на этот вопрос, нужно рационально использовать методы радионуклидной индикации, которые дают возможность пометить мононуклеарные клетки костного мозга изотопами и, в дальнейшем, оценить распределение мононуклеарных клеток костного в организме и степень их накопления в сердце.

Предлагаемый способ по сравнению с известными ранее имеет ряд преимуществ, основные из которых следующие: метод позволяет метить мононуклеарные клетки красного костного мозга, а также за счет использования изотонического раствора натрия хлорида дает возможность избежать забора дополнительного количества крови с целью получения бесклеточной плазмы для отмывки клеток.

Новые признаки проявили в заявляемой совокупности новые свойства, явным образом не вытекающие из уровня технически в данной области и неочевидные для специалиста. Идентичной совокупности признаков в известных технических решениях не обнаружено.

Изобретение будет понятно из следующего описания и чертежа.

На чертеже представлены сцинтиграммы грудной клетки пациента, перенесшего острый инфаркт миокарда: а) - через 30 мин, б) - через 2,5 ч, в) - через 24 ч после интракоронарного введения меченных 99mТс-эксаметазимом мононуклеарных клеток красного костного мозга.

Способ осуществляется следующим образом: первоначально выполняют забор 100-120 мл красного костного мозга с последующим выделением взвеси мононуклеарных клеток красного костного мозга методом градиентного центрифугирования. Затем 30-50 млн мононулкеарных клеток ресуспензируют в 4 мл изотонического раствора натрия хлорида, смешивают с 1500-2500 мБк 99mТс-эксаметазима и инкубируют при комнатной температуре 10 мин. По истечении срока инкубации процесс мечения останавливают добавлением в пробирку с мононуклеарными клетками 10 мл изотонического раствора натрия хлорида и центрифугируют 5 мин при 150 g. По окончании центрифугирования надосадок, содержащий несвязанный с мононуклеарными клетками красного костного мозга 99mТс-эксаметазим убирают, а осадок, содержащий меченные 99mТс-эксаметазимом клетки, ресуспензируют в 10 мл изотонического раствора натрия хлорида и измеряют его активность.

Для того чтобы оценить жизнеспособность меченых указанным способом мононуклеарных клеток красного костного мозга в сравнении с немечеными, мы использовали витальный краситель трепановый синий. По результатам этого исследования значение жизнеспособности в обеих группах составило в среднем 96±4%, при этом достоверных различий выявлено не было.

Сцинтиграфическую индикацию распределения меченых мононуклеаров в организме пациента проводят в планарном или томографическом режиме в течение 24 ч после их введения, поскольку период полураспада 99mTc составляет 6 ч.

Необходимо отметить, что в соответствии с нормальным распределением 99mТс-эксаметазим, использованный нами для метки мононуклеарных клеток красного костного мозга, в сердце не накапливается, а неспецифическая, обусловленная обратным выходом 99mТс-эксаметазима из клеток, аккумуляция радиофармпрепарата в миокарде исключается [5].

Новые существенные признаки позволяют пометить мононуклеарные клетки красного костного мозга 99mТс-эксаметазимом, определить характер распределения мононуклеарных клеток костного мозга в организме, в том числе оценить степень их фиксации в миокарде после инфузии пациенту.

Клинический пример

Больной Б., 52 г., находился на лечении в клиниках ГУ НИИ кардиологии ТНЦ СО РАМН с основным диагнозом ИБС: стенокардия напряжения IV функциональный класс, постинфарктный кардиосклероз, стенозирующий атеросклероз коронарных артерий.

В ходе обследования и наблюдения пациента было принято решение о проведении терапии аутологичными мононуклеарными клетками красного костного мозга. Для этого больному была выполнена пункция гребня повздошной кости, проведен забор 100-120 мл красного костного мозга с последующим выделением взвеси мононуклеарных клеток красного костного мозга методом градиентного центрифугирования. Общее количество выделенных клеток составило 30 млн. Клетки ресуспензировали в 4 мл изотонического раствора натрия хлорида, смешали с 1500 мБк 99mТс-эксаметазима и инкубировали при комнатной температуре 10 мин. По истечении срока инкубации процесс мечения остановили добавлением в пробирку с мононуклеарными клетками 10 мл изотонического раствора натрия хлорида и центрифугировали 5 мин при 150 g. По окончании центрифугирования надосадок, содержащий несвязанный с мононуклеарными клетками красного костного мозга 99mТс-эксаметазим, убрали, а осадок, содержащий меченные 99mТс-эксаметазимом клетки, ресуспензировали в 10 мл изотонического раствора натрия хлорида. Активность меченных 99mТс-эксаметазимом мононкулеарных клеток костного мозга составила 250 мБк, а эффективность мечения - 14%.

Пациенту была проведена ангиография, во время которой в переднюю нисходящую коронарную артерию были введены 30 млн мононуклеарных клеток красного костного мозга, меченых 99mТс-эксаметазимом в 10 мл изотонического раствора натрия хлорида.

Регистрацию распределения меченых 99mТс-эксаметазимом клеток проводили через 30 мин, 2,5 ч и 24 ч после интракоронаного введения на гамма-камере ГКС-301Т (Россия).

Как видно на чертеже (а, б, в), после инфузии мононуклеарные клетки красного костного мозга аккумулируются преимущественно в печени, селезенке, а также фиксируются в сердце. При обработке сцинтиграммы строились зоны интереса, соответствующие всему телу, легким, печени, селезенке и сердцу, с последующим определением скорости счета импульсов в каждой зоне интереса. Затем проводился перерасчет скорости счета импульсов в каждом органе в проценты по отношению ко всему телу. По результатам расчетов через 30 мин после введения (чертеж а) в сердце зафиксировалось 4,1%, в печени - 28,6%, в селезенке - 7,2%, в легких - 14,6% от общей активности введенных мононуклеарных клеток красного костного мозга, меченных 99mТс-эксаметазимом. Через 2,5 ч после введения (чертеж б) в сердце зафиксировалось 3,2%, в печени - 26,7%, в селезенке - 14,8%, в легких - 7,2% от общей активности. Через 24 ч после введения в сердце зафиксировалось 3,2%, в печени - 26,7%, в селезенке - 14,8%, в легких - 7,2% от общей активности. Через 24 ч после введения в сердце зафиксировалось 2,3%, в печени - 23,6%, в селезенке - 8,3%, в легких - 5,4% от общей активности.

Предлагаемый способ применен у 10 пациентов с ишемической болезнью сердца и позволяет эффективно пометить мононуклеарные клетки красного костного мозга 99mTc-эксаметазимом и оценить их распределение в организме пациента после инфузии.

Используемая литература

1. Peters A.M., Danpure H.J., Osman S., et al. Preliminary clinical experience with 99mTc-hexamethylpropylene-amineoxime for labelling leucocytes and imaging infection. // Lancet. - 1986. V.1. - P.945-949.

2. Orlic D., Kajstura J., Chimenti S., et al. Bone marrow cells regenerate infracted myocardium. // Nature. - 2001. V.410. - P.701-705.

3. Tomita S., Mickle D.A., Weisel R.V. et al. Improved heart function with myogenesis and angiogenesis after autologous porcine marrow stromal cell transplantation. // J. Thorac cardiovasc surg. - 2002. V.123. - P.1132-1135.

4. Гольдберг Е.Д. Справочник по гематологии Томск: Изд-во Томского гос. университета. 1989. С.370.

5. Neirinckx R.D., Burke J.F., Harrison R.C., et al. The retention mechanism of technetium-99m HMPAO: intracellular reaction with glutathione. // J. Cereb. Blood Flow Metab. 1988. V8. S4 (Suppl).

6. McAfee J.G., Subramanian G., Gagne G. // Technique of leukocyte harvesting and labeling: problems and perspectives. 1984. V 14(2). P.83-106.

Похожие патенты RU2343933C1

название год авторы номер документа
СПОСОБ МЕЧЕНИЯ АКТИВИРОВАННЫХ ЛИМФОЦИТОВ IN VITRO КОМПЛЕКСНЫМ СОЕДИНЕНИЕМ 2019
  • Михайловский Николай Васильевич
  • Абакушина Елена Вячеславовна
  • Гельм Юлия Витальевна
  • Спиченкова Ольга Николаевна
  • Сигов Михаил Александрович
  • Давыдов Герман Анатольевич
  • Иванов Сергей Анатольевич
RU2708458C2
СРЕДСТВО И СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ПРОЦЕССОВ 2005
  • Килина Оксана Юрьевна
  • Завадовская Вера Дмитриевна
  • Дамбаев Георгий Цыренович
  • Куражов Алексей Петрович
  • Зоркальцев Максим Александрович
RU2290952C1
СПОСОБ РАДИОНУКЛИДНОЙ МАРКИРОВКИ БАКТЕРИЙ КИШЕЧНОЙ ПАЛОЧКИ ДЛЯ СЦИНТИГРАФИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ 2005
  • Салато Олег Викторович
  • Галеев Юрий Маратович
  • Попов Михаил Васильевич
  • Коваль Елена Владимировна
  • Лепехова Светлана Александровна
  • Фадеева Татьяна Владимировна
RU2290643C1
СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЬНЫХ ИШЕМИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНЬЮ СЕРДЦА, ПЕРЕНЕСШИХ ИНФАРКТ МИОКАРДА 2005
  • Ахмедов Шамиль Джаманович
  • Бабокин Вадим Егорович
  • Варваренко Виктор Иванович
  • Суслова Татьяна Евгеньевна
  • Ворожцова Ирина Николаевна
  • Буховец Ирина Львовна
  • Чернов Владимир Иванович
RU2308982C2
СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ОЧАГОВ ВОСПАЛЕНИЯ С ПОМОЩЬЮ МЕТОДИКИ ПОЛИОРГАННОЙ СЦИНТИГРАФИИ 2017
  • Мигунова Екатерина Валентиновна
  • Кудряшова Наталья Евгеньевна
  • Колесниченко Владимир Геннадьевич
  • Серых Алина Владимировна
  • Никишина Алла Юрьевна
  • Сорокин Борис Альбертович
  • Кобзева Елена Николаевна
  • Михайлов Игорь Петрович
  • Пинчук Алексей Валерьевич
RU2648877C1
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СВЯЗЫВАНИЯ РАДИОФАРМПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ ЦИПРОФЛОКСАЦИНА, МЕЧЕННОГО Tc C БАКТЕРИЯМИ 2013
  • Лишманов Юрий Борисович
  • Сазонова Светлана Ивановна
  • Ильюшенкова Юлия Николаевна
  • Варламова Наталья Валерьевна
  • Карпова Мария Ростиславовна
RU2558929C2
СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ОСТРОГО ИНФАРКТА МИОКАРДА С ПОДЪЕМОМ СЕГМЕНТА ST 2004
  • Рябов В.В.
  • Марков В.А.
  • Суслова Т.Е.
  • Крылов А.Л.
  • Попов С.В.
  • Ахмедов Ш.Д.
  • Карпов Р.С.
RU2266125C1
СПОСОБ НЕИНВАЗИВНОГО КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИОКАРДИАЛЬНОГО КРОВОТОКА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ КОРОНАРНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ 2010
  • Кривоногов Николай Георгиевич
  • Лишманов Юрий Борисович
  • Донской Михаил Александрович
  • Минин Станислав Михайлович
  • Кузнецова Алла Владимировна
  • Крылов Александр Любомирович
RU2428930C1
Биомедицинский клеточный препарат 2017
  • Брюховецкий Игорь Степанович
  • Брюховецкий Андрей Степанович
RU2647429C1
СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ИЗ КОСТНОГО МОЗГА ДЛЯ ВНУТРИСОСУДИСТОГО ВВЕДЕНИЯ 2012
  • Немков Александр Сергеевич
  • Белый Сергей Алексеевич
  • Осутин Сергей Владимирович
RU2496871C1

Иллюстрации к изобретению RU 2 343 933 C1

Реферат патента 2009 года СПОСОБ МЕТКИ МОНОНУКЛЕАРНЫХ КЛЕТОК КРАСНОГО КОСТНОГО МОЗГА С ПОМОЩЬЮ Тс-ЭКСАМЕТАЗИМА

Изобретение относится к медицине, а именно к радионуклидной диагностике, и может найти применение в кардиологии и кардиохирургии. Заявлен способ мечения мононуклеарных клеток красного костного мозга при помощи 99mТс-эксаметазима, характеризующийся получением клеточной суспензии, инкубации клеточной суспензии с 4 мл 99mТс-эксаметазима в течении 10 мин при комнатной температуре с последующей отмывкой, центрифугированием 5 мин при 150g, сбором надосадка, ресуспензированием осадка, содержащего меченные 99mТс-эксаметазимом мононуклеарные клетки костного мозга, при этом инкубирование проводят с 1500-2000 мБк 99mTc-эксаметазима, отмывку проводят 10 мл изотонического раствора натрия хлорида, а ресуспензирование в 10 мл изотонического раствора натрия хлорида. Заявленное изобретение позволяет метить мононуклеарные клетки красного костного мозга, а также за счет использования изотонического раствора натрия хлорида дает возможность избежать забора дополнительного количества крови с целью получения бесклеточной плазмы для отмывки клеток. 1 ил.

Формула изобретения RU 2 343 933 C1

Способ мечения мононуклеарных клеток красного костного мозга при помощи 99mТс-эксаметазима, характеризующийся получением клеточной суспензии, инкубации клеточной суспензии с 4 мл 99mТс-эксаметазима в течение 10 мин при комнатной температуре, с последующей отмывкой, центрифугированием 5 мин при 150g, сбором надосадка, ресуспензированием осадка, содержащего меченные 99mТс-эксаметазимом мононуклеарные клетки красного костного мозга, при этом инкубирование проводят с 1500-2000 мБк 99mТс-эксаметазима, отмывку проводят 10 мл изотонического раствора натрия хлорида, а ресуспензирование в 10 мл изотонического раствора натрия хлорида.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2009 года RU2343933C1

Tomita S
et al
Improved heart function with myogenesis and angiogenesis after autologous porcine bone marrow stromal cell transplantation
J
Thorac
Cardiovasc
Surg
Топчак-трактор для канатной вспашки 1923
  • Берман С.Л.
SU2002A1
Hung J.C
et al
Прибор, замыкающий сигнальную цепь при повышении температуры 1918
  • Давыдов Р.И.
SU99A1
Nucl
Med
Commun.

RU 2 343 933 C1

Авторы

Сазонова Светлана Ивановна

Чернов Владимир Иванович

Лишманов Юрий Борисович

Ахмедов Шамиль Джаманович

Даты

2009-01-20Публикация

2007-05-28Подача