СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ АУТОИММУННОГО ГАСТРИТА У КРЫС Российский патент 2009 года по МПК G09B23/28 

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной хирургии, и предназначено для моделирования аутоиммунного гастрита у крыс.

Известны различные способы моделирования гастрита, например, путем перевязки желудочно-сальниковой, желудочно-селезеночной и других вен желудка (Норкунас П.И. и др., 1967, 1975) или путем криодеструкции над- или поддиафрагмального отрезка основного ствола блуждающего нерва (Шалимов С.А. и др., 1989). Недостатком первого способа является невозможность создания необходимого времени и силы сдавления лигатур, так как длительное и острое пережатие вен желудка приводит к венозной гиперемии слизистой оболочки, вплоть до образования эрозий и язвы желудка. Недостатками второго способа являются травматичность способа, который всегда должен сопровождаться пилоропластикой, предупреждающей развитие застойных и гнилостных процессов в желудке, а также тяжелая переносимость его животными, приводящая в значительной части к их гибели. Таким образом, эти способы не обеспечивают создания адекватной модели экспериментального гастрита, а тем более его хронического течения.

Кроме того, известен способ моделирования хронического гастрита с явлениями кишечной метаплазии желез (Врублевский П.К., 1983), основанный на систематическом введении животным (собакам) аллогенных или ксеногенных антигенов желудка, полученных из всех слоев его стенки.

Данный способ значительно эффективнее предыдущих, но также имеет ряд существенных недостатков.

1. Чрезвычайно длительные сроки введения антигена.

2. В 60% случаях сопровождается образованием эрозий на слизистой оболочке.

3. Введение антигенов желудка, полученных из всех слоев его стенки, в ряде случаев приводит к перфорации желудка с развитием перитонита и гибели животных.

4. Способ моделирования осуществляется на собаках, что увеличивает себестоимость содержания животных и проводимых научно-исследовательских работ.

Ближайшим аналогом предложенного нами способа является способ моделирования хронического атрофического гастрита аутоиммунного генеза на собаках (Гельфман А.Е и др., 1969), который основан на заборе до 5 г слизистой оболочки желудка путем предварительной лапаротомии и гастротомии. Из слизистой оболочки готовят водно-солевой антиген в количестве 12 мл, смешивают с 4 мл адъюванта Фрейнда и вводят подкожно по 8 мл двукратно с интервалом в 7 дней. Патологический процесс развивается приблизительно через месяц.

Данный метод по сравнению с предыдущим имеет преимущество, которое состоит в том, что иммунизация собак осуществляется аутологичным антигеном из слизистой оболочки желудка, что предотвращает развитие грозного осложнения - перфорации органа с развитием перитонита. Кроме того, использование адъюванта Фрейнда позволяет осуществлять не систематическое введение антигена, а 2-3-кратное.

Однако указанный способ имеет ряд недостатков.

1. Данный метод в качестве экспериментального животного для создания модели предусматривает использование собак, что чрезвычайно отражается на себестоимости всех научно-исследовательских работ и уходе за крупными животными.

2. При моделировании заболеваний с участием иммунного компонента следует учитывать различную видовую чувствительность лабораторных животных к воздействию антигенов. В этом отношении собака относится к одним из наиболее чувствительных животных, что сопровождается 30-40% их гибели в ходе экспериментальных работ.

3. Моделирование заболеваний с использованием собак требует дополнительного персонала для проведения анестезиологического пособия и оперативного вмешательства.

4. Способ является травматичным, сопровождающимся высокой летальностью.

Целью заявляемого изобретения является возможность использования в качестве экспериментального животного для создания модели аутоиммунного гастрита крысы, как наименее чувствительного к воздействию антигенов при моделировании заболеваний с участием иммунного компонента, а также значительное уменьшение себестоимости всех работ (от ухода за животными до проведения исследований).

Описание предлагаемого изобретения.

Способ моделирования аутоиммунного гастрита у крыс осуществляется следующим образом.

На первом этапе осуществляется подготовка животных (крыс) для забора материала (желудок).

За 10-12 часов до операции и забора материала у животных исключают корм, оставляя питье. Для иммунизации 15-20 крыс достаточно произвести забор материала у 5 животных.

На втором этапе осуществляют забор материала для подготовки водно-солевого антигена.

Под эфирным наркозом после обработки операционного поля по Филончикову-Гроссиху производят лапаротомию, гастрэктомию. Материал (желудок) переносят в стерильную чашку Петри. Затем вскрывают желудок по большой кривизне, 2-3 раза опускают в стерильную емкость с физиологическим раствором для удаления остатков пищи. Затем переносят в стерильную ч. Петри, где производят забор слизистой оболочки желудка и гомогенизируют.

На третьем этапе осуществляют подготовку водно-солевого антигена.

Полученный гомогенат слизистой оболочки желудка в соотношении 1:10 смешивают с физиологическим раствором (1 часть гомогената к 10 частям физиологического раствора) и пропускают через кассету (фильтр) с целью избавления от крупных частиц желудочной ткани. Полученный раствор в соотношении 1:4 смешивают с полным адъювантом Фрейнда (1 часть раствора к 4 частям полного адъюванта Фрейнда), ресуспендируют до однородной массы. После чего считают водно-солевой антиген готовым к применению. Перед использованием водно-солевой антиген обязательно в течение 1 минуты ресуспендируют и в этом виде доставляют в операционную для введения животным или хранения при температуре 4-6°С до применения.

На четвертом этапе осуществляют введение животному водно-солевого антигена.

Животное подготавливают к иммунизации, для этого после профилактического осмотра животных под эфирным наркозом обрабатывают место введения антигена (лапки животного) по Филончикову-Гроссиху. Затем осуществляют введение водно-солевого антигена. В объеме 0,2 мл антиген забирается в шприц и вводится в подкожную клетчатку лапки по ее внутренней поверхности. Введение антигена осуществляют трехкратно с интервалом между введениями 5 дней.

Данное изобретение иллюстрируется следующим примером.

Для моделирования аутоиммунного гастрита брали крысу. После профилактического осмотра животного под эфирным наркозом обрабатывали место введения антигена (лапки животного) по Филончикову-Гроссиху. Введение водно-солевого антигена производили после тщательного ресуспендирования с полным адъювантом Фрейнда в разведении 1:4. В объеме 0,2 мл забирали в шприц и вводили в подкожную клетчатку трехкратно с интервалом 5 дней. Через 25-30 дней после введения антигена в указанные промежутки возникает аутоиммунный гастрит. Макроскопически он характеризуется гиперемией, отеком слизистой оболочки, кровоизлияниями (фиг.1).

Гистологически отмечается умеренный стаз микроциркуляторного русла, инфильтрация слизистой оболочки желудка нейтрофилами и лимфоцитами, плазматическими клетками. Деструкция слизистой оболочки желудка отсутствует (фиг.2).

Предлагаемое изобретение было проверено на 30 крысах и достигнут аналогичный результат.

Таким образом, предлагаемое изобретение позволяет использовать в качестве экспериментального животного для создания модели аутоиммунного гастрита крысу, как наименее чувствительного к воздействию антигенов при моделировании заболеваний с участием иммунного компонента, а также добиться значительного уменьшения себестоимости всех работ (от ухода за животными до проведения исследований).

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к экспериментальной гастроэнтерологии, и может быть использовано для моделирования аутоиммунного гастрита у крыс. Для этого осуществляют введение водно-солевого антигена животному, содержащего смесь гомогената аллогенной слизистой оболочки желудка в физиологическом растворе и полного адъюванта Фрейнда, при соотношении компонентов 1:4. Способ обеспечивает возможность получения модели на крысах, что приводит к уменьшению себестоимости исследовательских работ. 5 з.п. ф-лы, 2 ил.

1. Способ моделирования аутоиммунного гастрита у крыс, включающий введение животному водно-солевого антигена, содержащего смесь гомогената аллогенной слизистой оболочки желудка в физиологическом растворе и полного адъюванта Фрейнда при соотношении компонентов смеси 1:4.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что разведение гомогената аллогенной слизистой оболочки желудка в физиологическом растворе равно 1:10.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что однократное введение водно-солевого антигена осуществляют в объеме 0,2 мл.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что водно-солевой антиген перед введением ресуспендируют до однородной массы.

5. Способ по п.1, отличающийся тем, что водно-солевой антиген вводят в подкожную клетчатку лапки крысы по ее внутренней поверхности.

6. Способ по п.1, отличающийся тем, что водно-солевой антиген вводят трехкратно с интервалом между введениями 5 дней.