СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ АУТОИММУННОЙ ЯЗВЫ ЖЕЛУДКА У КРЫС Российский патент 2009 года по МПК G09B23/28 

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной хирургии, и предназначено для моделирования экспериментальной язвы желудка у крыс.

Известны различные способы моделирования язвы желудка путем внутримышечного введения преднизолона (С.М.Липовский, 1970) или путем ежедневного введения в желудок кофеина и мышьяка (К.А.Мещерская, 1970). Недостатками первого способа является постоянное, без прекращения, ежедневное внутримышечное введение преднизолона, так как после его отмены язва быстро заживает. Недостатками второго способа является длительная работа (в течение 14 дней) с ядовитым веществом (мышьяк), а также 80% гибель животных на 7-12 день после развития язвы, а сохранившиеся животные живут недолго (34-36 дней), что затрудняет проведение и интерпретацию результатов исследования в отдаленные сроки.

Очевидно, что эти способы не обеспечивают длительного по времени существования язвенного процесса, что затрудняет исследование ее многообразных патогенетических механизмов и рациональных методов лечения.

Также известен способ воспроизведения язвы желудка (S.Okabe и S.Pfeiffer., 1971), основанный на нанесении на участок наружной поверхности желудка до 0,05 мл ледяной уксусной кислоты. Данный способ значительно эффективнее предыдущих, но также имеет ряд существенных недостатков:

1) требует оперативного вмешательства - лапаротомии;

2) в 70% случаев осложняется перфорацией желудка с пенетрацией в печень или в свободную брюшную полость с развитием перитонита;

3) развитие острого ожога всех слоев желудка с развитием коагуляционного некроза;

4) развитие спаечного процесса в брюшной полости, что затрудняет дальнейшую работу.

Ближайшим аналогом предложенного способа является способ воспроизведения аутоиммунного повреждения слизистой оболочки желудка у собак (А.Е.Гельфман и др., 1969; О.Я.Гриншпун, 1969), который основан на иммунизации животных водно-солевыми антигенами аутологичной или аллогенной слизистой оболочки желудка в смеси с адъювантом Фрейнда. Метод подготовки включает в себя оперативное вмешательство - лапаротомию, резекцию 2/3 желудка с целью забора слизистой оболочки, формирование Павловского желудочка. Затем слизистую оболочку гомогенизируют в разведении 1:10 (стерильным физиологическим раствором) смешивают с адъювантом Фрейнда с последующим внутрибрюшинным введением, дважды с промежутками в 7 дней.

Этот метод имеет преимущество по сравнению с предыдущим методом, которое состоит в том, что эрозивно-язвенное поражение слизистой оболочки протекает с выраженным иммунопатологическим компонентом, что по своему клинико-анатомическому проявлению близко к язвенной болезни человека.

Однако указанный способ имеет ряд недостатков:

1) метод является травматичным, так как связан с предварительным оперативным вмешательством с целью формирования Павловского желудочка;

2) метод включает формирование Павловского желудочка у собак, что требует дополнительного времени для ухода и восстановления;

3) исследования на собаках не позволяют в достаточно полном объеме и на длительных сроках оценить результаты исследовательских работ из-за высокой себестоимости всех подготовительных и проводимых процедур с этими животными;

4) предложенный водно-солевой антиген подходит только для формирования аутоиммунного повреждения слизистой оболочки желудка у собак и не может использоваться для воздействия на крыс.

В то же время моделирование заболеваний с участием иммунного компонента на собаках, чья высокая видовая чувствительность к воздействию антигенов сопровождается 30-40% летальностью, предопределяют необходимость использования в экспериментальных моделях с иммунным компонентом крыс как наиболее выносливых животных к воздействиям антигена и более пригодных для проведения серийных исследований.

Таким образом, целью заявляемого способа является возможность использования для создания модели экспериментальной (аутоиммунной) язвы желудка крыс, что позволяет в полном объеме и на достаточном количестве животных проводить исследования язвенного поражения желудка, протекающего с участием иммунопатологического компонента, снизить финансовые затраты на содержание животных и проводимые исследовательские работы, а также не требует дополнительного персонала.

Описание предлагаемого изобретения.

Экспериментальная модель аутоиммунной язвы желудка у крыс осуществляется следующим образом.

На первом этапе осуществляется подготовка животных (крыс) для забора материала (желудок).

За 10 часов до операции и забора желудка у животных убирают корм, оставляя питье. Для иммунизации 15 крыс трехкратно достаточно забрать материал (слизистую оболочку желудка) у 5 животных.

На втором этапе осуществляют забор материала для подготовки водно-солевого антигена

Под эфирным наркозом после обработки операционного поля по Филончикову - Гроссиху производят лапаротомию, гастрэктомию. Материал (желудок) переносят в стерильную чашку Петри. Затем вскрывают желудок по большой кривизне, дважды опускают в стерильную емкость с физиологическим раствором. После чего желудок переносят в стерильную чашку Петри, где скальпелем производят забор (соскабливанием) слизистой оболочки желудка и гомогенизируют его.

На третьем этапе осуществляют подготовку водно-солевого антигена.

Полученный гомогенат слизистой оболочки желудка в соотношении 1:4 смешивают с физиологическим раствором (1 часть гомогената к 4 частям физиологического раствора) и пропускают через фильтр с целью удаления крупнодисперсных частиц ткани желудка. Полученную раствор в соотношении 1:2 смешивают с полным адъювантом Фрейнда (1 часть раствора к 2 частям полного адъюванта Фрейнда) и ресуспендируют. Также смесь в соотношении 1:1 смешивают с неполным адъювантом Фрейнда (1 часть раствора к 1 части неполного адъюванта Фрейнда) и ресуспендируют.

Перед использованием водно-солевого антигена обязательно в течение 1 минуты ресуспендируют для эффективного смешивания с адъювантом Фрейнда и образования однородной массы и в этом виде доставляют в операционную для введения (иммунизации) или хранения при температуре 4-6°С до применения.

На четвертом этапе осуществляют введение животному водно-солевого антигена.

Ход операции

1. Подготовка к иммунизации животных. После профилактического осмотра животного с целью исключения различных заболеваний под эфирным наркозом обрабатывают одну из передних лапок животного по Филончикову-Гроссиху.

2. Введение водно-солевого антигена. Производится после предварительного тщательного ресуспендирования его с полным адъювантом Фрейнда в разведении 1:2 и неполным адъювантом Фрейнда в разведении 1:1. Затем в объеме 0,3 мл водно-солевой антиген с адъювантом Фрейнда вводится в подкожную клетчатку предварительно обработанной области. Включающий двукратное введение животному в 1 и 10 дни водно-солевого антигена и дополнительное введение животному на 15 день в том же объеме 0,3 мл, но в разведении 1:1 с неполным адъювантом Фрейнда. После подкожного введения в течение 30 секунд место инъекции умеренно прижимают асептическим спиртовым шариком с целью исключения обратного тока смеси и гемостаза, после чего обрабатывают раствором повидон-йод.

Данное изобретение иллюстрируется следующим примером.

Для моделирования аутоиммунной язвы желудка брали крысу. После профилактического осмотра животного с целью исключения различных заболеваний под эфирным наркозом обрабатывают одну из передних лапок животного по Филончикову-Гроссиху. Затем производили после предварительного тщательного ресуспендирования его с полным адъювантом Фрейнда в разведении 1:2. Затем в объеме 0,3 мл вводили в подкожную клетчатку предварительно обработанной области. Включающий двукратное введение животному в 1 и 10 дни водно-солевого антигена и дополнительное введение животному на 15 день в том же объеме 0,3 мл, но в разведении 1:1 с неполным адъювантом Фрейнда. После подкожного введения место инъекции в течение 30 секунд умеренно прижимали асептическим спиртовым шариком с целью исключения обратного тока смеси и гемостаза, после чего обрабатывали раствором повидон-йод. Через 30-35 суток после введения антигена в указанные сроки возникала аутоиммунная язва. Макроскопически она глубокая с изрытыми неровными краями, вокруг язвы выраженный отек и гиперемия. Дно язвы покрыто некротическим детритом и фибрином (фиг.1). Гистологически язва характеризуется наличием дефекта слизистой оболочки и подслизистого слоя с выраженной инфильтрацией клеточными элементами, преимущественно лимфоцитами и нейтрофилами. Слизистая оболочка язвенного дефекта отсутствует, подлежащий подслизистый слой отечный, также имеется лимфоидная инфильтрация, ход коллагеновых волокон неупорядочен и деструктивно изменен (фиг.2).

Заявленный способ был осуществлен на 15 крысах, и был достигнут аналогичный результат.

Таким образом, предлагаемое изобретение позволяет использовать для создания модели экспериментальной (аутоиммунной) язвы желудка крыс, что позволяет в полном объеме и на достаточном количестве животных проводить исследования язвенного поражения желудка, протекающего с участием иммунопатологического компонента, снизить финансовые затраты на содержание животных и проводимые исследовательские работы. Также разработан водно-солевой антиген для успешного моделирования аутоиммунной язвы желудка у крыс.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к экспериментальной хирургии, и предназначено для моделирования аутоиммунной язвы желудка у крыс. Для этого осуществляют двукратное введение животному в 1 и 10 дни водно-солевого антигена, содержащего смесь гомогената аллогенной слизистой оболочки желудка в физиологическом растворе и полного адъюванта Фрейнда, при соотношении компонентов смеси 1:2. Дополнительно вводят животному на 15 день водно-солевой антиген, содержащий смесь гомогената аллогенной слизистой оболочки желудка в физиологическом растворе и неполного адъюванта Фрейнда, при соотношении компонентов смеси 1:1. Способ обеспечивает адекватное воспроизведение модели. 3 з.п. ф-лы, 2 ил.

1. Способ моделирования аутоиммунной язвы желудка у крыс, включающий двукратное введение животному в 1 и 10 дни водно-солевого антигена, содержащего смесь гомогената аллогенной слизистой оболочки желудка в физиологическом растворе и полного адъюванта Фрейнда, при соотношении компонентов смеси 1:2 и дополнительное введение животному на 15 день водно-солевого антигена, содержащего смесь гомогената аллогенной слизистой оболочки желудка в физиологическом растворе и неполного адъюванта Фрейнда, при соотношении компонентов смеси 1:1.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что разведение гомогената аллогенной слизистой оболочки желудка в физиологическом растворе равно 1:4.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что однократное введение водно-солевого антигена как с полным, так и неполным адьювантом Фрейнда осуществляют в объеме 0,3 мл.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что водно-солевой антиген с полным и неполным адьювантом Фрейнда перед введением ресуспендируют до однородной массы.