ВАКЦИННЫЕ КОМПОЗИЦИИ, СОДЕРЖАЩИЕ ЛИПОПОЛИСАХАРИДЫ ИММУНОТИПА L2 И/ИЛИ L3, ПРОИСХОДЯЩИЕ ИЗ ШТАММА NEISSERIA MENINGITIDIS IgtB Российский патент 2009 года по МПК A61K39/95 A61K35/74 A61P31/04 

Текст описания приведен в факсимильном виде.

Изобретение относится к вариантам нейссериальных, в частности, менингококковых пузырьковых препаратов и вакцин на основе везикул (или пузырьков) наружной мембраны. Кроме того, описаны предпочтительные способы и вакцинные продукты, основанные на применении новых ЛОС (липоолигосахаридных) иммунотипа L2 и/или ЛОС иммунотипа L3, в том числе субъединичные вакцины или менингококковые вакцины на основе везикул (или пузырьков) наружной мембраны, а также иммуногенная композиция для предупреждения или лечения заболевания, обусловленного нейссериальной инфекцией. Описаны комбинации генов с негативной регуляцией, такие как PorA и OpA, PorA и OpC, OpA и OpC, PorA и OpA и OpC. Альтернативно или дополнительно показано, что IgtB^- представляет собой оптимальную мутацию для эффективности и безопасности использования ЛОС L3 и/или L2 в нейссериальных вакцинных композициях. Описаны также пузырьковые вакцины, полученные из IgtB^-, и менингококковые мутанты, дефектные по капсульному полисахариду, а также предпочтительные способы получения пузырьковых препаратов, где ЛОС должен сохраняться в качестве важного антигена. Полученные по изобретению препараты являются более безопасными и/или более эффективными для применения у людей. 5 н. и 24 з.п. ф-лы, 11 ил., 7 табл.

1. Нейссериальный пузырьковый препарат для предупреждения или лечения заболевания, обусловленного нейссериальной инфекцией, содержащий пузырьки, происходящие из штамма нейссерий IgtB^- с ЛОС (липоолигосахаридом) иммунотипа L2 или ЛОС иммунотипа L3, или комбинацию пузырьков, происходящих из штаммов нейссерий с ЛОС иммунотипа L2 и ЛОС иммунотипа L3, где каждый штамм представляет собой IgtB^-.

2. Нейссериальный пузырьковый препарат по п.1, где штамм(ы) нейссерий представляет(ют) собой штамм(ы) менингококков, предпочтительно серогруппы В.

3. Нейссериальный пузырьковый препарат по п.1 или 2, где штамм(ы) нейссерий не может(гут) синтезировать капсульный полисахарид.

4. Нейссериальный пузырьковый препарат по п.3, где штамм(ы) нейссерий имеет(ют) один из следующих генов капсульного полисахарида, имеющих негативную регуляцию экспрессии и предпочтительно делетированных по сравнению с природным(и) штаммом(ами), из которого(ых) они происходят: ctrA, ctrB, ctrC, ctrD, synA, synB, synC или предпочтительно siaD, и где, в том случае, когда присутствуют пузырьки обоих иммунотипов L2 и L3, штаммы, из которых они происходят, предпочтительно имеют один и тот же ген капсульного полисахарида с негативной регуляцией экспрессии в каждом штамме.

5. Нейссериальный пузырьковый препарат по п.1, где штамм(ы) нейссерий имеет(ют) любой ген или оба гена из следующих генов липида А с негативной регуляцией экспрессии и предпочтительно делетированные по сравнению с природным(и) штаммом(штаммами), из которого(ых) они происходят: msbB или htrB, предпочтительно первый, и где, в том случае, когда присутствуют пузырьки обоих иммунотипов L2 и L3, штаммы, из которых они происходят, предпочтительно имеют один(ни) и тот(те) же ген(ы) липида А с негативной регуляцией экспрессии в каждом штамме.

6. Нейссериальный пузырьковый препарат по п.1, где штамм(ы) нейссерий имеет(ют) 1 или более чем один из следующих генов белков наружной мембраны, имеющих негативную регуляцию экспрессии и предпочтительно делетированных по сравнению с природным(и) щтаммом(штаммами), из которого(ых) они происходят: PorA, PorB, OpA, OpC, pilC или frpB, и где, в том случае, когда присутствуют пузырьки обоих иммунотипов L2 и L3, штаммы, из которых они происходят, предпочтительно имеют один(ни) и тот(те) же ген(ы) белков наружной мембраны с негативной регуляцией экспрессии в каждом штамме.

7. Нейссериальный пузырьковый препарат по п.6, где штамм(ы) нейссерий имеет(ют) любую из следующих комбинаций генов белков наружной мембраны, имеющих негативную регуляцию экспрессии и предпочтительно делетированных по сравнению с природным штаммом(штаммами), из которого(ых) они происходят: PorA и OpA, PorA и OpC, OpA и OpC, PorA и OpA и OpC, PorA и FrpB, OpC и FrpB, OpA и FrpB, PorA и OpA и OpC и FrpB.

8. Нейссериальный пузырьковый препарат по п.1, где штамм(ы) нейссерий имеет(ют) 1 или более чем один из следующих белковых антигенов наружной мембраны, имеющих позитивную регуляцию экспрессии: NspA, TbpA low, TbpA high, Hsf, Hap, OMP85, PilQ, NadA, LbpA, MItA, где, в том случае, когда присутствуют пузырьки обоих иммунотипов L2 и L3, штаммы, из которых они происходят, предпочтительно имеют один или более разных белковых антигенов наружной мембраны, имеющих позитивную регуляцию в каждом штамме.

9. Препарат ЛОС для предупреждения или лечения заболевания, обусловленного нейссериальной инфекцией, включающий ЛОС иммунотипа L2 и/или ЛОС иммунотипа L3, выделенные из по меньшей мере одного штамма нейссерий, из которого(ых) происходят нейссериальные пузырьковые препараты по пп.1-8.

10. Препарат ЛОС по п.9, представляющий собой липосомный препарат.

11. Нейссериальный пузырьковый препарат по любому из пп.1-8 или препарат ЛОС по п.9 или 10, где содержащийся в нем ЛОС конъюгирован с источником Т-хелперных эпитопов, предпочтительно белком или белком наружной мембраны.

12. Нейссериальный пузырьковый препарат по п.11, который получают способом внутрипузырькового поперечного сшивания.

13. Иммуногенная композиция или вакцина для предупреждения или лечения заболевания, обусловленного нейссериальной инфекцией, содержащая нейссериальный пузырьковый препарат по пп.1-8 или препарат ЛОС по п.9 или 10 и фармацевтически приемлемый эксципиент.

14. Вакцина по п.13, дополнительно содержащая адъювант, предпочтительно гидроксид алюминия или комбинацию 3-де-O-ацилированного монофосфориллипида A (3D-MPL) и фосфата алюминия.

15. Вакцина по п.13 или 14, дополнительно содержащая по меньшей мере один конъюгированный капсульный полисахарид или олигосахарид, происходящий из следующих штаммов: менингококка серогруппы А, менингококка серогруппы С, менингококка серогруппы W-135, менингококка серогруппы Y и Н. influenzae типа b.

16. Способ изготовления вакцины, охарактеризованной в п.13, включающий стадии культивирования по меньшей мере одного штамма, из которого происходит нейссериальный пузырьковый препарат по пп.1-8, выделения из этого(их) штамма(ов) пузырьков, возможного комбинирования пузырьков иммунотипов L2 и L3 при необходимости и приготовления пузырьков с фармацевтически приемлемым эксципиентом в виде препарата.

17. Способ по п.16, где стадию выделения осуществляют путем экстракции с использованием 0-0,5, 0,02-0,4, 0,04-0,3, 0,06-0,2 или 0,08-0,15% дезоксихолата, предпочтительно примерно или точно 0,1% дезоксихолата.

18. Способ получения пузырькового препарата с внутрипузырьковой конъюгацией по п.12 из штамма нейссерий, в наружную мембрану которого интегрирован белок наружной мембраны, конъюгированный с ЛОС, включающий стадии;
а) выделения пузырьков из штамма нейссерий, где указанный штамм представляет собой мутант IgtB^-,
б) осуществления химизма, подходящего для конъюгации олигосахаридной группировки ЛОС, присутствующей в пузырьках, с белком наружной мембраны, присутствующим в том же пузырьке,
в) выделения пузырькового препарата с внутрипузырьковой конъюгацией, и
г) при необходимости приготовления пузырькового препарата с внутрипузырьковой конъюгацией с еще одним пузырьковым препаратом с внутрипузырьковой конъюгацией, приготовленным тем же способом, но имеющим ЛОС другого иммунотипа, и/или приготовления пузырькового препарата с фармацевтически приемлемым эксципиентом для изготовления вакцинной композиции.

19. Способ по п.18, где на стадии а) пузырьки экстрагируют с использованием низкой концентрации дезоксихолата, такой как 0-0,3%, предпочтительно примерно или точно 0,1%.

20. Способ по п.18 или 19, где на стадии б) рН поддерживают в интервале от 7 до 9, предпочтительно около рН 7,5.

21. Способ по п.18, где стадию б) проводят в 1-5% сахарозе, предпочтительно примерно 3%.

22. Способ по п.18, где стадию б) осуществляют в условиях с низкой концентрацией NaCl.

23. Способ по п.18, где стадию б) осуществляют со смесью 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида (EDAC) и N-гидросукцинимида (NHS).

24. Способ по п.18, где на стадии а) пузырьки выделяют из штамма менингококков, предпочтительно штамма менингококков серогрупы В.

25. Способ по п.18, где штамм не может продуцировать капсульный полисахарид и предпочтительно представляет собой мутант siaD^-.

26. Способ по п.18, где штамм представляет собой msbB^- и/или htrB^-.

27. Способ по п.18, где штамм имеет ЛОС иммунотипа L2.

28. Способ по п.18, где штамм имеет ЛОС иммунотипа L3.

29. Способ по п.18, где на стадии г) менингококковый пузырьковый препарат с внутрипузырьковой конъюгацией с иммунотипом L2, приготовленный способом по п.27, комбинируют с другим менингококковым пузырьковым препаратом с внутрипузырьковой конъюгацией с иммунотипом L3, приготовленным способом по п.28.