СПОСОБ ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКИ ГИПЕРПАРАТИРЕОЗА Российский патент 2010 года по МПК A61B5/00 G01N1/28 

Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии, биологии, физиологии, и может быть использовано для диагностики гиперфункции паращитовидных желез - гиперпаратиреоза (ГПТ).

Паращитовидные железы - основные регуляторы обмена кальция и фосфора, осуществляемого с помощью синтезируемого ими гормона- паратгормона (ПТГ).

Основными мишенями ПТГ являются кости, почки, известно его влияние на адсорбцию кальция в кишечнике. Железы располагаются над верхними и нижними полюсами щитовидной железы.

ГПТ возникает при аденоме железы и гиперплазии желез, их карциноме, множественной эндокринной неоплазии I и II типов, что сопровождается гиперпродукцией ПТГ (М.И.Балаболкин. Эндокринология. М., 1998; Дедов И.И., Мельниченко Г.А. Фадеев В.В. Эндокринология, М., 2007).

Клиника ГПТ многообразна и ее диагностика чрезвычайно затруднена. Синдромы заболевания пестры в зависимости от точки приложения ПТГ, вариант: костный, желудочно-кишечный, урологический нервно-психический, стоматологический, сердечно-сосудистый. Известны способы определения паратгормона: сцинтиграфия паращитовидных желез с помощью применения радиоактивного фармпрепарата (РФП) и иммунохемилюминисцентный способ «Сэндвич» (Diagnostic imaging nuclear medicine; Система Адвиа Кентавр ХР (США, фирма Баер).

АНАЛОГ - Стинтиграфия паращитовидных желез с использованием радиоактивного технеция -РФП, активность 99 m Тc МИБИ, 250-550 МБК (Diagnostic imaging nuclear medicine. Авторы: Morton. Clark. Blodgelf. Christensen. O'Malley Sverens. Chinu. Woxman. Nance homson. Droten. Heston. 7 раздел 12 стр. Drawings-Copyrighf 2007 Aminsys Yns.).

В основе способа сцинтиграфии паращитовидных желез РФП лежит дополнительное поглощение митохондриями аденом паращитовидных желез 99 m МИБИ, и его замедленное вымывание из аденомы по сравнению с окружающими тканями щитовидной железы. Использование этого способа позволяет выявить аденому паращитовидной железы в 85-90%.

Исследование состоит из 2 стадий.

Вводят препарат 99 m Tc МИБИ, 250-50 Мбк.

1. Фаза тиреоидная - через 30 мин. после введения 99 m Те МИБИ, происходит включение препарата в щитовидной железе, паращитовидных железах, слюнных железах, миокарде.

2. Фаза гиперпаратиреоидная, отсроченная, через 2 часа (в норме через 2 часа полностью высвобождается РФП из здоровых желез).

3. Фиксация результатов с помощью технического устройства для записи сцинтиграмм.

Недостатки способа.

1. Применение радиоактивного препарата.

2. Лучевая нагрузка на организм человека.

3. Использование дорогостоящего технического устройства.

БЛИЖАЙШИЙ АНАЛОГ - Иммунохемилюминесцентный способ «Сэндвич» (Система Адвиа Кентавр ХР (США, фирма Баер).

В основе способа лежит взаимодействие антигена (аналит в пробе) и антитела, меченого акридиновым эфиром (АЭ). В ходе этой реакции выделяется энергия в виде света, количество которого зависит от количества аналита в пробе.

1. 200 мкл сыворотки помещают в кювету.

2. Добавляют 50 мкл светового реагента, содержащего антитела, меченные акридиновым эфиром. Антитела, меченные акридиновым эфиром, связываются только с аналитспецифичным антигеном, находящимся в пробе.

3. Далее добавляют твердую фазу, содержащую парамагнитные частицы, покрытые антителами, специфичными к антигену, находящемуся в пробе. Кювета инкубируется при температуре - 37,0°С (2.5 мин). Парамагнитные частицы (ПМЧ) связываются с антигенами, которые уже связаны с антителами, мечеными АЭ.

4. Выполняют отмывку и аспирацию (кювета попадает в магнитное поле, которое притягивает парамагнитные частицы магнитом. Пока он удерживает парамагнитные частицы на месте, материал, несвязавшийся с ними, отмывают из кюветы.

5. Добавляют 300 мкл кислоты и щелочи, происходит инициация хемилюминесцентной реакции. Хемилюминометр оценивает эмиссию света в относительных световых единицах. При использовании «Сэндвич» метода, концентрация аналита пропорциональна свечению.

Недостатки способа

1. Использование сыворотки крови человека.

2. Применение дорогостоящих реагентов.

3. Использование дорогостоящей системы - автоматизированного иммунологического анализатора.

4. Автоматическое выполнение результатов, которое может дать «сбой».

Задачи предлагаемого изобретения

1. Обеспечение экспресс - диагностики гиперфункции паращитовидных желез, продуцирующих паратиреоидный гормон.

2. Повышение информативности диагностики.

3. Снижение материально-технических затрат.

В разработке предлагаемого изобретения используют возможность регистрации биологического излучения паращитовидных желез при помощи 1% водного раствора аспарагиновой аминокислоты (АА).

Биологическое информационное излучение от различных объектов (живых, биокосных, косных) - один из общих принципов энергоинформационного взаимодействия в природе (В.И.Вернадский. Химическое строение биосферы Земли и ее окружение. М., 1965; В.П.Казначеев, Л.П.Михайлова. Биоинформационные функции естественных электромагнитных полей. Новосибирск, 1985).

В настоящее время в науке активно разрабатываются принципы информационно-волновой биологии и медицины. Под влиянием фронта информационного волнового излучения исследуемого объекта, аминокислоты, изменяя свою структуру, тем самым передают информацию о структуре источника излучения, в итоге в ней формируется «зеркальное» отражение исследуемого объекта (И.В.Прангишвили. П.П.Гаряев, Г.Г.Тертышный и др. Трехмерная модель процессов эндогенного голографического управления развитием пространственной структуры биосистем. М., 2004; Л.В.Савина. Энергоинформационные взаимодействия. Краснодар, 2008).

Технической новизной предложения является физический метод исследования функции паращитовидных желез - состояние гиперпаратиреоза, отличающийся тем, что в зоны проекции паращитовидных желез локально в области над верхними и нижними полюсами щитовидной железы симметрично помещают четыре стеклянные пластины, на которые в виде дорожки наносят АА - 1% водный раствор аспарагиновой аминокислоты, объемом 0,01-0,03 мл на каждую, выдерживают пластины на протяжении 3-5 минут затем препарат высушивают в термостате при Т=+18-20°С в течение 2-3 минут, затем исследуют под микроскопом в поляризованном свете с кварцевым компенсатором и при наличии в препаратах кристаллов - агрегаций из радиально-лучевых сферолитов диагностируют гиперпаратиреоз.

Преимущества предложенного способа

- Для диагностики гиперфункции паращитовидных желез использован 1% водный раствор аспарагиновой аминокислоты (АА), регистрирующей биологическое излучение желез.

- Способ обеспечивает высокую селективную информативность, эффективность диагностики. Соблюдается физиологичность и нативность способа.

По сравнению с базовыми способами диагностики гиперпаратиреоза время исследования сокращается на 70%, а материальные затраты - на 88-90%.

Способ осуществляют следующим образом.

1. Готовят 1% водный раствор АА.

2. Тарированной пипеткой АА наносят на четыре стеклянные пластины в виде тонкой пленки-дорожки, объемом 0,01-0,03 мл на каждую.

3. Стеклянные пластины с нанесенными на них АА симметрично помещают в зоны проекции паращитовидных желез локально в области над верхними и нижними полюсами щитовидной железы, выдерживают на протяжении 3-5 минут.

4. Препараты высушивают в термостате при Т=+18-20°C в течение 2-3 минут.

5. Образцы исследуют в поляризованном свете с кварцевым компенсатором.

При наличии в препаратах кристаллов - агрегаций из радиально-лучевых сферолитов диагностируют гиперпаратиреоз.

Приводим структуру 1% водного раствора АА, фиг.1, присутствуют кристаллы преимущественно ромбической формы.

На фиг.2 приведен гистологический препарат строения паращитовидной железы здорового человека (В.В.Алмазов, Л.С.Сутулов. Атлас по гистологии и эмбриологии. М., 1978).

На фиг.3 представлена типовая структура АА, полученная при регистрации информации с гормона паращитовидных желез - паратиреоидина. Для этой цели на стеклянную пластину наносят АА и окружают его по периферии валиком из гормона паратиреоидина, выдерживают в нем 3-5 минут, затем сушат при Т=+18-20°С в течение 2-3 минут, затем исследуют в поляризованном свете с кварцевым компенсатором (КК). См. патент изобретения «Способ экспресс-идентификации фарма- и парафармацевтиков, вводимых в организм человека». Авторы: Савина Л.В., Кузнецова Е.А. №2271001. М. 2006. На фиг.3 представлены кристаллы в виде радиально-лучевых сферолитов.

На фиг.4 приведены типовые структуры АА, полученные при регистрации биологического излучения паращитовидных желез здорового человека, для чего четыре стеклянные пластины с нанесенным на них АА помещали в зоны проекции желез - над верхними и нижними полюсами щитовидной железы. Присутствуют единичные кристаллы в виде радиально-лучевых сферолитов. Проведено 189 клинических исследований.

Приводим примеры.

Пример 1, фиг.5. Б-ой А., история болезни (ИБ) №789. Диагноз (Ds): Гиперпаратиреоз. Множественный аденоматоз паращитовидных желез.

На фиг.5 представлены кристаллы в виде агрегаций из радиально-лучевых сферолитов.

Технология. На каждую из четырех стеклянных пластин нанесли по 0,01 мл АА в виде дорожки, поместили в зоны проекции паращитовидных желез (ПЩЖ) локально симметрично в области над верхними и нижними полюсами щитовидной железы (ЩЖ), выдержали в них 3 мин. Пластины высушили при Т=+18°С на протяжении 2 мин, затем исследовали в поляризованном свете с КК. Видны кристаллы агрегации из радиально-лучевых сферолитов.

Одномоментно в сыворотке крови (СК) определили концентрацию паратгормона (ПГ), которая оказалась повышенной и составила 34 пмоль/л (норма - 4,5±1,1 пмоль/л). Диагноз гиперпаратиреоза подтвердился.

Пример 2, фиг.6. Б-ой У. Ds: Гиперпаратиреоз. Солитарная аденома паращитовидной железы. ИБ №1825. На фиг.6 приведены кристаллы агрегации из радиально-лучевых сферолитов.

Технология. На каждую из четырех стеклянных пластин нанесли по 0,02 мл АА в виде дорожки и поместили в зоны проекции ПЩЖ локально симметрично в области над верхними и нижними полюсами ЩЖ, выдержали в них 4 мин, высушили при Т=+19°С на протяжении 3 мин и исследовали в поляризованном свете с КК. Присутствуют кристаллы агрегации из радиально-лучевых сферолитов.

Одномоментно в СК определили уровень ПГ, который оказался повышен - 16,2 пмоль/л. Диагноз гиперпаратиреоза подтвердился.

Пример 3, фиг.7. Б-ая Ш. Ds: Гиперпаратиреоз. Гиперплазия паращитовидных желез. ИБ №243. На фиг.7 приведены кристаллы агрегации из радиально-лучевых сферолитов.

Технология. На каждую из четырех стеклянных пластин нанесли по 0,03 мл АА в виде дорожки и поместили в зоны проекции ПЩЖ локально симметрично в области над верхними и нижними полюсами ЩЖ, выдержали в них 5 мин, высушили при Т=+20°С на протяжении 3 мин и исследовали в поляризованном свете с КК. В препаратах обнаружили кристаллы агрегации из радиально-лучевых сферолитов.

Одномоментно в СК определили уровень ПГ, который оказался повышенным и составил - 15 пмоль/л. Диагноз гиперпаратиреоза подтвердился.

Пример 4, фиг.8. Б-ой И. Ds: Гиперпаратиреоз. Рак околощитовидных желез. ИБ №718. На фиг.8 присутствуют агрегации из радиально-лучевых сферолитов.

Технология. На каждую из четырех стеклянных пластин нанесли по 0,02 мл АА в виде дорожки и поместили в зоны проекции ПЩЖ локально симметрично в области над верхними и нижними полюсами ЩЖ, выдержали 4 мин, высушили при Т=+19°С на протяжении 3 мин, исследовали в поляризованном свете с КК. Присутствуют агрегации из радиально-лучевых сферолитов.

Одновременно в СК определили содержание ПГ, которое оказалось повышенным и составило - 18,8 пмоль/л. Диагноз гиперпаратиреоза подтвердился.

Пример 5, фиг.9. Б-ая Б. Ds: Гиперпаратиреоз. Карцинома паращитовидных желез. ИБ №389. На фиг.9 приведены кристаллы агрегации из радиально-лучевых сферолитов.

Технология. На каждую из четырех стеклянных пластин нанесли по 0,03 мл АА в виде дорожки и поместили в зоны проекции ПЩЖ над верхними и нижними полюсами ЩЖ, выдержали 3 мин, высушили при Т=+18°С на протяжении 2 мин. Препараты исследовали в поляризационном микроскопе с КК. Найдены агрегации из радиально-лучевых сферолитов.

Одномоментно в СК определили уровень ПГ, который оказался повышен и составил - 21,8 пмоль/л. Диагноз гиперпаратиреоза подтвердился.

Изобретение относится к медицине, эндокринологии, биологии, физиологии. Для экспресс-диагностики гиперпаратиреоза в зоны проекции паращитовидных желез локально в области над верхними и нижними полюсами щитовидной железы, симметрично помещают четыре стеклянные пластины, на которые предварительно в виде дорожки наносят 1% водный раствор аспарагиновой аминокислоты объемом 0,01-0,03 мл на каждую пластину. Выдерживают пластины на протяжении 3-5 минут, далее высушивают в термостате при Т=+18-20°С в течение 2-3 минут. Затем исследуют в поляризованном свете с кварцевым компенсатором. При наличии в препаратах кристаллов-агрегаций из радиально-лучевых сферолитов диагностируют гиперпаратиреоз. Способ прост в исполнении, экономичен, повышает информативность диагностики гиперпаратиреоза. 9 ил.

Способ экспресс-диагностики гиперпаратиреоза, включающий физический метод исследования, отличающийся тем, что в зоны проекции паращитовидных желез локально в области над верхними и нижними полюсами щитовидной железы, симметрично помещают четыре стеклянные пластины, на которые в виде дорожки наносят 1%-ный водный раствор аспарагиновой аминокислоты объемом 0,01-0,03 мл на каждую пластину, выдерживают пластины на протяжении 3-5 мин, препараты высушивают в термостате при Т=18-20°С в течение 2-3 мин, затем исследуют в поляризованном свете с кварцевым компенсатором и при наличии в препаратах кристаллов-агрегаций из радиально-лучевых сферолитов диагностируют гиперпаратиреоз.