СПОСОБ ФОРМИРОВАНИЯ ГРУППЫ РИСКА С ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ПОЧЕК Российский патент 2010 года по МПК G01N33/48 

Предложенное техническое решение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике, может быть использовано в диагностике заболеваний почек круг лиц, страдающих мочекаменной болезнью, как на стадии до формирования конкремента в почке, так и с наличием камней в почках, аномалиями развития, скрытыми воспалительными процессами в почках. Способ может быть использован для проведения широкомасштабных скрининговых и мониторинговых обследований для формирования групп риска с заболеваниями почек.

Известен способ определения йодид-иона в моче, заключающийся в том, что аликвоту пробы мочи смешивают с буферным раствором с рН 6,8-7,5, содержащим от 4,2 до 8 мас.% пероксида водорода, в соотношении 1:1 или 1:2, после чего выдерживают в темноте при комнатной температуре в течение не менее одних суток. Затем проводят измерение потенциала йодидселективного электрода непосредственно в растворе законсервированной пробы без отделения мешающих компонентов (патент РФ №2325658, МПК⁷ G01N 33/84, G01N 33/493, опубл. 28.09.2008 г.).

Недостатком известного способа является сложность в химическом и ионометрическом анализе результатов.

Наиболее близким техническим решением к заявляемому является способ диагностики почечной патологии. У больного производят забор 20 мл мочи. Эту пробу помещают в химический стакан, добавляют в нее сернокислое железо до получения раствора с конечной концентрацией 2,5 мМ. Стакан с раствором устанавливают на магнитную мешалку и перемешивают ~ 5 минут до окончания биохимической реакции.

После окончания процесса перемешивания в раствор опускают индикаторную полоску и по интенсивности окраски смоченной части диагностируют функциональное состояние почек. Для этого окрашенную часть полоски сравнивают со стандартными оттенками, представленными в таблице, составленной на основе экспериментальных данных, в которой каждому оттенку окраски соответствует функциональное состояние почек (патент РФ №2178174 С2, МПК G01N 33/48, G01N 33/493, опубл. 10.01.2002).

Недостатком наиболее близкого технического решения является его использование только в функциональной диагностике в уронефрологии.

В настоящее время в РФ урологическая заболеваемость составляет 10-12% от общей заболеваемости. Среди них мочекаменная болезнь составляет 35-40%, пиелонефрит 25-30%.

Патологическим процессам в почках, как правило, предшествует наличие воспалительных процессов. На слизистых оболочках воспаление всегда сопровождается усилением выделения слизи (Общая патология человека:

Руководство для врачей / под ред. Струкова А.И., Серова В.В., Саркисова Д.С.: в 2 т. Т.2. М.: 1990. стр45).

Пусковым механизмом в процессе камнеобразования является повышение количества органических соединений - уромукоидов в моче, формирующих матрицу камня (Тиктинский О.Л., Александров В.П. Мочекаменная болезнь. - СПб: Питер, 2000, стр.58-59).

Задачей предложенного технического решения является разработка способа, позволяющего выявлять в моче повышенный уровень уромукоидов - маркера патологических процессов в почках, упрощение процесса исследования и получение качественного прогнозирования наличия заболеваний почек, для формирования групп риска с заболеваниями почек, подтверждением которых является гелеобразный осадок на дне пробирки.

Поставленная задача заключается в способе диагностики патологических процессов в почках. Берут утреннюю пробу мочи, помещают в центрифужные пробирки, анализируют содержание осадка на дне пробирки при визуальном просмотре, прогнозируют наличие скрытых патологических процессов в почках, при этом дополнительно охлаждают пробу мочи в пробирках при t +5°C, выдерживают в течение 7 часов, анализируют содержание осадка на дне пробирки при визуальном просмотре в виде гелеобразного осадка, прогнозируют наличие патологических процессов в почках по присутствию гелеобразного осадка - «холодовая проба мочи» (фото).

В табл.1 представлены примеры исследования выпадения осадка при охлаждении в зависимости от температуры среды и времени выдерживания.

Анализ таблицы показывает, что пробы мочи, в которых заранее была установлена положительная холодовая проба, разливались в центрифужные пробирки и помещались в холодильники с различными температурными режимами. Моча, помещаемая в холодильник, была прозрачна. С интервалом в 1 час пробы извлекались из холодильников, и визуально проводилась оценка наличия в пробирках появления осадка.

При температурах +23°, 16° и 14°С моча оставалась прозрачной. При +10°С формирование осадка происходило медленно, а пробы 2 и 9 остались прозрачными. Формирование полноценного осадка во всех пробах начиналось при температуре ниже +7°С. Наиболее удобным режимом проведения «холодовой пробы мочи» является температура +3°С, осадок образовывался во всех пробирках через 2 часа. При использовании температуры +5°С формирование осадка в моче во всех пробах заканчивается через 7 часов и может выйти за пределы рабочего времени лаборатории и чтении результата лучше проводить утром следующего дня. При температуре 0° - +1°С образование осадка происходит в течение 1 часа. В пробах №№11 и 16 выпадение осадка происходило быстрее, и объем осадка в них составлял 0,75-1 см³. Уромукоид в пробах №№2 и 9 выпадал в осадок медленнее, чем №№11 и 16, и объем образовавшегося на дне пробирок уромукоида составлял соответственно 0,3-0,5 см³.

Предложенный способ осуществляется следующим образом. Берут утреннюю порцию мочи, помещают в центрифужную пробирку, охлаждают пробу мочи при t +7°С, выдерживают в течение 11 часов, затем анализируют содержание при визуализации наличия гелеобразного осадка. Органиче-

Время суток 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20- 21 22 23 Время действия 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 Т 23°С - - - - - - - - - - - - - - - - Т 16°С - - - - - - - - - - - - - - - - Т 14°С - - - - - - - - - - - - - - - - Т 10°С - - - - - - - -     11,16 11,16 11,16 11,16 11,16 11,16 Т 7°С - - - - - 11,16 11,16 11,16 11,16 11,16 11,16 11,16         2,9 2,9 Т 5°С - 11,16 11,16 11,16 11,16 11,16 11,16 11,16                 2,9 2,9 Т 3°   11,16 11,16                           2,9 Т 0 - +1°С   11,16                             2,9

ские муциноподобные вещества, формирующие структуру матрицы камня, обладают коллоидными свойствами и имеют большую молекулярную массу. Процесс охлаждения снижает тепловое движение макромолекул и коллоидных частиц и усиливает связи между ними, образуя гелеобразный осадок. Переход из состояния золя в гель идет тем легче, чем меньше скорость их движения, т.е. чем ниже температура. Сначала идет процесс помутнения мочи в связи с кристаллизацией растворенных солей и переходом уромукоида из золя в гель, затем на дне пробирки оседает гелеобразный осадок. Кристаллизовавшиеся в моче при охлаждении соли оседают на дно пробирки медленнее, чем образовавшийся гель, и покрывают сверху скопившийся на дне пробирки гелеобразный осадок - уромукоид. Это и подтверждает, т.е. прогнозирует, наличие патологических процессов в почках. В отрицательных пробах моча остается прозрачной (фото, пробирка 1).

Отдельно исследовались пробы мочи, помещаемые в 10 мл центрифужные пробирки, помещаемые в морозилку холодильника при -10°С на 25 мин. Более длительное пребывание в мочи при этой температуре вызывало ее замерзание и невозможность проведения объективной оценки результата охлаждения. В пробирках с положительными пробами происходило помутнение мочи и образование сгустков уромукоида, однако при нахождении пробирок в условиях комнатной температуры 18°- 22°С выпавшие в нахождения в морозилке растворялись и моча вновь становилась прозрачной. Если положительные пробы после их кратковременного нахождения в морозильной камере поместить в холодильник при +5°- 7°С, то в течение 3 часов в них происходит разделение осадка на гелеобразный на дне пробирки и солевой на поверхности геля. Данный способ можно использовать в качестве экспресс-метода.

Основным структурным компонентом уромукоида является гликопротеин, содержащий большое количество углеводов. Качественная реакция Молиша позволяет обнаруживать углеводы в белке. Исследование гелеобразных осадков в моче, образовавшихся после проведения холодовой пробы, дает положительный результат при проведении реакции Молиша - появляется характерное красное окрашивание осадка (Кушманова О.Д., Ивченко Г.М. Руководство к практическим занятиям по биологической химии. изд.второе., - М.: Медицина).

Осадки мочи исследовались с использованием суправитального красителя REASTAIN Urine, ПЛИВА-Лахема. Данная методика рекомендована Европейской группой анализа мочи в рамках Европейской конфедерации лабораторной медицины. Проводя микроскопическое исследования гелеобразных осадков мочи, появившиеся после проведения холодовой пробы, и окрашенных супровитальной краской, обнаруживается большое количество тяжей слизи окрашенных в насыщенно-голубой цвет (Миронова И.И., Романова Л.А. Атлас осадков мочи. - М. - Тверь. 2007. стр 107-137).

Группе из 101 пациента, состоящей из 51 женщин и 50 мужчин, у которых была обнаружена положительная холодовая проба мочи, было проведено ультразвуковое исследование почек. Из них у 46 человек были выявлены конкременты, у 21 человек кальцинаты - всего признаки мочекаменной болезни выявлены у 67 человек. У 32 человек выявлены признаки пиелонефрита, у 16 кисты почек, у 7 человек гидрокаликоз, у 4 человек нефроптоз, у 3 удвоение почки. У 6 человек из 101 патологических изменений в почках не обнаружено. У 26 пациентов наблюдались сочетанные заболевания почек. У 67 пациентов с выявленными камнями и конкрементами почек пиелонефрит обнаружен у 13 человек.

Белок в моче обнаружен у 40 пациентов, повышенное количество лейкоцитов у 48 пациентов, эритроциты у 54 пациентов, гиалиновые цилиндры у 13 человек, слизь у 55 человек.

Сочетание белка в моче и слизи при микроскопическом исследовании обнаружилось только у 12 человек, лейкоцитурия и эритроцитурия у 37 человек. У 32 пациентов с выявленным пиелонефритом белок в моче был обнаружен только у 18 человек.

У 21 пациента с положительной холодовой пробой мочи белок не обнаружен, а микроскопические исследования мочи были в норме. Однако у этих пациентов на УЗИ были выявлены заболевания почек: мочекаменная болезнь у 16 человек, пиелонефрит у 8 человек, кисты у 4 человек, один гидрокаликоз и один нефроптоз. У 8 человек выявлены сочетанные почечные заболевания. Эта группа пациентов согласно лабораторным исследованиям мочи не могла быть отнесена к группе риска с заболеванием почек.

Шесть человек с положительной ХПМ, у которых на УЗИ не выявлена патология, вероятно, находятся на доклинической стадии одного из почечных заболеваний, и им необходимо проводить периодический лабораторный и инструментальный контроль.

Таким образом, предлагаемый способ холодовой пробы мочи можно использовать для формирования группы риска с заболеваниями почек.

Пример 1

Больной Н., возраст 46 лет, № и.б. 9318, поступил на лечение с диагнозом посттравматический анкилоз крестцово-подвздошного сочленения. Сопутствующий диагноз: язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки в стадии ремиссии. В санаторно-курортной карте анализы мочи и крови в пределах нормы. Заключение уролога - норма. Данные объективного исследования мочеполовой системы - без патологии. Общий анализ мочи после поступления: плотность - 1021, прозрачная, реакция кислая, белок - нет, глюкоза - нет, плоский эпителий 4-6 в п.зр, лейкоциты - 10-12 в п.зр., эритроциты неизмененные - 1-3 в п.зр., слизь - много, соли-оксалаты - много. Холодовая проба мочи - положительная. По результату холодовой пробы мочи назначено УЗИ почек. Ультразвуковая диагностика почек: почки обычных размеров, расширение чашечек, тяжистость паренхимы, в среднем и верхнем сегментах правой почки по эхопозитивному образованию по 0,4 см с эхотенями. Признаки пиелонефрита, камни правой почки. Таким образом «холодовая проба мочи» позволяет выявлять заболевания почек, связанные с накоплением в моче уромукоидов, до проявления клинической картины заболевания.

Пример 2

Больная Б., возраст 74 года, и.б. №9304. Поступила на лечение с диагнозом: сахарный диабет II типа инсулинозависимый. Сопутствующий диагноз: атеросклеротическая болезнь сердца, полиартрит в стадии ремиссии, хронический бронхит в стадии ремиссии. В санаторно-курортной карте анализ крови гемоглобин 140 г/л, эритроциты - 4,5 ×10¹², СОЭ - 17 мм/час, анализ мочи: плотность 1018, эпителий плоский 1-2 в п.зр. Данные объективного исследования мочеполовой системы - без патологии. Общий анализ мочи после поступления: плотность - 1020, прозрачная, реакция кислая, белок - нет, глюкоза - нет, плоский эпителий 15-20 в п.зр, лейкоциты - 10-12 в п.зр., эритроциты неизмененные 0-1 в п.зр., слизь - много, соли-оксалаты - умеренно. Холодовая проба мочи - положительная. По результату холодовой пробы мочи назначено УЗИ почек. Больная от исследования отказалась, сознавшись в том, что она скрыла имевшиеся у нее заболевания почек и представила заключение проведенной ранее ультразвуковой диагностики почек: нефроптоз справа - тазовая дистония правой почки, пиелонефрит, мочекаменная болезнь. Таким образом, использование «холодовой пробы мочи» позволяет выявлять скрываемые пациентами заболевания почек, связанные с накоплением в моче уромукоидов.

Пример 3. Больной Б., возраст 69 лет, № и.б. 8889. Поступил на лечение с диагнозом состояние после производственной травмы верхней трети левого бедра. Сопутствующий диагноз: первичный гоноартроз в стадии ремиссии, остеохондроз позвоночника в стадии ремиссии. В санаторно-курортной карте анализы мочи и крови в пределах нормы. Заключение уролога - норма. Данные объективного исследования мочеполовой системы - без патологии. Общий анализ мочи после поступления: плотность - 1023, прозрачная, реакция нейтральная, белок - нет, глюкоза - нет, плоский эпителий 5-7 в п.зр, лейкоциты - 7-8 в п.зр., эритроциты неизмененные - 1-2 в п.зр., слизь - много, соли-оксалаты - много. Холодовая проба мочи - положительная. По результату холодовой пробы мочи назначено УЗИ почек. Ультразвуковая диагностика почек: почки обычных размеров, чашечко-лоханные структуры не расширены. Уплотнены стенки сосудов. На правой почке эхонегативное образование 1,2 см - киста правой почки. Таким образом «холодовая проба мочи» позволяет выявлять аномалии развития почек - кисты.

Пример 4

Больная Я., возраст 61 год, № и.б. 8889. Направлена на лечение с диагнозом полиостеоартроз стадии ремиссии. Сопутствующий диагноз: остеохондроз шейного отдела позвоночника, хронический бронхит в стадии ремиссии. Данные объективного исследования мочеполовой системы - без патологии. Общий анализ мочи после поступления плотность - 1015, прозрачная, реакция кислая, белок - нет, глюкоза - нет, плоский эпителий 8-10 в п.зр, лейкоциты - 3-5 в п.зр., слизь - умеренно, соли отсутствуют. Холодовая проба мочи - положительная. По результату холодовой пробы мочи назначено УЗИ почек. Ультразвуковая диагностика почек: почки обычных размеров, чашечно-лоханочные структуры не расширены. Уплотнены стенки сосудов.

Таким образом «холодовая проба мочи» позволяет выявлять увеличение в моче содержания уромукоида, что является показателем протекающих в почке патологических процессов.

Способ подтверждает простоту исследования, не требует специального оборудования и дает явную картину, подтверждающую наличие патологических процессов в почках, при получении гелеобразного осадка на дне пробирки и позволяет формировать группы риска с заболеваниями почек.

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике. Для формирования группы риска с заболеваниями почек исследуют пробы мочи. Утреннюю порцию мочи охлаждают в пробирке при t° от +1° до +7°С. При t° +3°C охлаждают пробу мочи в течение 2 часов. При t° +7°C охлаждают пробу мочи в течение 11 часов. При t° 0 +1°С охлаждают пробу мочи в течение 1 часа. При t° +5°C охлаждают пробу мочи в течение 7 часов. При выявлении в моче гелеобразного осадка при визуальном осмотре диагностируют скрытые патологические процессы в почках. Способ упрощает процесс лабораторных исследований, позволяет выявлять в моче повышенный уровень уромукоидов и своевременно осуществлять прогнозирование заболеваний почек. 4 з.п. ф-лы, 1 ил., 1 табл.

1. Способ формирования группы риска с заболеваниями почек путем исследования проб мочи, отличающийся тем, что утреннюю порцию мочи в пробирке охлаждают при t° от 1 до 7°С и выдерживают во времени, при выявлении в моче гелеобразного осадка при визуальном осмотре диагностируют скрытые патологические процессы в почках.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что дополнительно охлаждают пробу мочи в пробирках при t° 3°C в течение 2 ч.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что дополнительно охлаждают пробу мочи в пробирках при t° 7°C в течение 11 ч.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что дополнительно охлаждают пробу мочи в пробирках при t° от 0 до 1°С в течение 1 ч.

5. Способ по п.1, отличающийся тем, что дополнительно охлаждают пробу мочи в пробирках при t° 5°C в течение 7 ч.