СПОСОБ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ ПЕРИНАТАЛЬНЫХ ПОРАЖЕНИЙ ЦНС У ДОНОШЕННЫХ НОВОРОЖДЕННЫХ Российский патент 2010 года по МПК G01N33/50 

Изобретение относится к медицине, а именно к неонатологии, и может быть использовано для ранней диагностики перинатальных гипоксических поражений ЦНС у доношенных новорожденных.

Актуальность определяется тем, что перинатальные поражения ЦНС у новорожденных занимают ведущее место в структуре заболеваемости и смертности. На долю данной патологии приходится до 80% поражений головного мозга, из них гипоксически-ишемические поражения составляют более половины случаев (1). Клинические проявления перинатальных поражений ЦНС при рождении детей не четко выражены, а последствия могут быть тяжелыми, приводящими к инвалидизации детей и нарушению их социальной адаптации (2). В связи с этим разработка способа ранней диагностики перинатальных поражений ЦНС является актуальной, что позволит провести своевременное лечение новорожденных и предупредить развитие тяжелых последствий.

Известен способ ранней диагностики перинатальных гипоксических поражений ЦНС у доношенных новорожденных от женщин с гестозом путем иммунологического исследования пуповинной крови и определения в ней соотношения показателей относительного содержания CD3+HLA-DR+ к CD3+ лимфоцитам и при его значении, равном 8,1% или более, диагностируют перинатальные гипоксические поражения ЦНС при рождении с точностью 89,28% (Патент №2308035. Способ ранней диагностики перинатальных гипоксических поражений ЦНС у доношенных новорожденных от женщин с гестозом. / Сотникова Н.Ю., Панова И.А., Серкина Е.В., Кудряшова А.В. (Россия). // Изобретения. Полезные модели. - 2007. - №28).

Недостатки способа:

1. Данный способ позволяет провести раннюю диагностику гипоксических перинатальных поражений ЦНС только у новорожденных от матерей с гестозом.

2. Для выполнения способа требуется специальное оборудование, дорогостоящие реактивы, специальная подготовка персонала.

3. Данный способ необходимо проводить сразу при рождении ребенка, поскольку исследуется только пуповинная кровь.

Отсрочить исследование невозможно.

Известен способ диагностики перинатальных гипоксических поражений ЦНС у новорожденных детей путем исследования в пуповинной крови комплекса биохимических показателей: нейрон-специфической енолазы (НСЕ) и интерлейкина-6 (ИЛ-6). Увеличение содержания НСЕ, ИЛ-6 в пуповинной крови служит информативным критерием перинатальных гипоксических поражений ЦНС при рождении ребенка [Гончарова О.В., Баканов М.И., Муталов А.Г., Грешилов А.А., Джумагазиев А.А., Юсупова Э.С. Современные биохимические критерии диагностики перинатальных гипоксических поражений ЦНС у новорожденных детей. // Российский педиатрический журнал. - 2007. - №4. - С.13-18].

Недостатки способа:

1. Для выполнения способа исследования проводятся только в пуповинной крови, поэтому исследования необходимо проводить сразу при рождении ребенка. Отсрочить исследования невозможно.

2. Точные критерии исследуемых биохимических показателей для практически здоровых детей в пуповинной крови не установлены.

3. Точность способа неизвестна.

Наиболее близким по техническому решению является способ диагностики тяжелых перинатальных гипоксических поражений ЦНС у новорожденных путем исследования в сыворотке периферической крови концентрации белка S-100 в динамике на 1, 3, 7, 14 и 21 сутки жизни. При повышении содержания белка S-100 относительно исходного уровня, превышающего норму, диагностировались тяжелые перинатальные поражения ЦНС [Голосная Г.С., Петрухин А.С., Маркевич К.А., Трифонова О.Е. Изменение уровня белка S-100 у новорожденных с перинатальным гипоксическим поражением ЦНС. // Педиатрия. - 2004. - №1. - С.10-15.].

Недостатки способа:

1. Уровень белка S-100 достоверно повышается только при тяжелых формах перинатальных поражений ЦНС, что не позволяет использовать его для диагностики перинатальных поражений ЦНС легкой и средней степени тяжести.

2. Для осуществления способа требуется пятикратный забор крови, что наносит болевую травму новорожденному и может отрицательно сказаться на течении основного заболевания.

3. Для выполнения способа требуются дорогостоящие реактивы и оборудование, высококвалифицированные специалисты.

4. Точность способа неизвестна.

Указанные недостатки предлагается устранить в заявляемом способе.

Техническим решением заявляемого способа является повышение точности ранней диагностики перинатальных гипоксических поражений ЦНС у доношенных новорожденных путем определения в периферической крови ребенка концентрации васкуло-эндотелиального фактора роста (VEGF) и VE-кадгерина и дальнейшим расчетом дискриминантной функции (Y), при значении которой меньше нуля диагностируют перинатальные гипоксические поражения ЦНС с точностью 91,1%.

Способ осуществляется следующим образом.

У ребенка в венозной крови проводят определение концентраций биохимических показателей: VEGF и VE-кадгерина. В первые сутки жизни ребенка забирают кровь в количестве 0,5 мл, центрифугируют в течение 15 минут при скорости 3000 об/мин для получения сыворотки крови.

Концентрацию VEGF определяют в 0,05 мл сыворотки крови методом ИФА (набор фирмы «BIOSOURCE»). Результат выражают в пг/мл.

Концентрацию VE-кадгерина определяют в 0,02 мл сыворотки крови методом ИФА (набор фирмы «Bender MedSystems»). Результат выражают в нг/мл.

Новизна способа

Взаимосвязь биохимических показателей VEGF и VE-кадгерина, определяемых в периферической крови новорожденного ребенка, для ранней диагностики перинатальных поражений ЦНС у доношенных новорожденных прослежена впервые. VEGF - белок, который является фактором роста сосудистого эндотелия и маркером регуляции проницаемости кровеносных сосудов (3). VE-кадгерин - трансмембранный белок играет важную роль в функционировании сосудистого эндотелия, в частности, контролирует его проницаемость, а также участвует в процессах адгезии клеток и образования межклеточных соединений (4). Эти белки взаимозависимы, так, VEGF стимулирует рост сосудистого эндотелия, что приводит к максимальному фосфорилированию VE-кадгерина и выполнению его функций (5). По нашим данным снижение концентрации этих белков в крови новорожденного ребенка может вести к нарушению проницаемости сосудистого эндотелия, в том числе и сосудов головного мозга и к развитию перинатального гипоксически-ишемического поражения ЦНС.

Известно, что первые 4 суток жизни новорожденных сопровождаются развитием физиологического отека мозга с повышением гидрофильности церебральной ткани, вследствие чего имеет место нивелирование как очаговых, так и общемозговых симптомов заболевания ЦНС, что особенно актуально при легких перинатальных гипоксически-ишемических поражениях головного мозга (6).

В связи с этим мы считаем, что исследование показателей VEGF и VE-кадгерина у новорожденных позволят не только провести раннюю диагностику перинатального гипоксического поражения ЦНС у новорожденного ребенка, но и дифференцировать транзиторные физиологические и патологические изменения.

Ранее использовалось определение VEGF для диагностики и прогнозирования исходов тяжелых перинатальных гипоксических поражений головного мозга у новорожденных (7), изменения экспрессии VE-кадгерина были описаны при опухолях, воспалительных заболеваниях (8).

Отличительные признаки способа.

Определение в первые сутки жизни концентрации васкуло-эндотелиального фактора роста (VEGF) и VE-кадгерина с дальнейшим расчетом дискриминантной функции (Y) по формуле

Y=-11,991+0,048×X1+0,151×Х2,

где X1 - концентрация VEGF (пг/мл);

Х2 - концентрация VE-кадгерина (нг/мл).

При значении Y меньше нуля диагностируют перинатальное гипоксическое поражение ЦНС.

Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами.

Пример 1. Ребенок П. родился от III беременности, протекавшей на фоне нейроциркуляторной дистонии по гипертоническому типу, отягощенного акушерско-гинекологического анамнеза, осложнившейся нефропатией I степени и фетоплацентарной недостаточностью. Своевремененые роды III в 40 недель. Оценка по шкале Апгар 6-7 баллов. Состояние с рождения расценено как ближе к удовлетворительному, крик громкий, двигательная активность снижена. Отмечается мышечная гипотония, акроцианоз, тремор конечностей, физиологические рефлексы вялые.

В первые сутки жизни по заявляемому способу определяли в сыворотке крови концентрацию VEGF, которая составила 101,6 пг/мл, концентрация VE-кадгерина, равная 27,33 нг/мл. Расчет по формуле

Y=-11,991+0,048×101,6+0,151×27,33,

где 101,6 и 27,33 - количественные характеристики заявляемых параметров - концентрации VEGF и VE-кадгерина.

Y=-3,89, что меньше нуля. По заявляемому способу у ребенка определено перинатальное гипоксическое поражение ЦНС.

На третьи сутки жизни проведена нейросонография. На основании полученных данных и с учетом клинической картины был поставлен диагноз: хроническая внутриутробная гипоксия плода, перинатальное поражение ЦНС, церебральная ишемия I степени гипоксически-ишемического генеза, гипертензивный синдром.

Таким образом, способ ранней диагностики перинатальных гипоксических поражений ЦНС у новорожденных по предложенному методу подтвердился.

Пример 2. Ребенок Б. родился от II беременности, протекавшей на фоне отягощенного акушерско-гинекологического анамнеза, хронического пиелонефрита вне обострения, осложнившейся нефропатией II. Роды в 38 недель. Оценка по шкале Апгар 6-7 баллов. Масса тела при рождении 3000 г, рост 50 см. Большой родничок 1,0×1,0 см. Состояние с рождения расценено как ближе к удовлетворительному, крик громкий, кожные покровы бледно-розовые, акроцианоз, цианоз носогубного треугольника, мышечный тонус снижен, тремор конечностей, физиологические рефлексы снижены.

В первые сутки жизни по заявляемому способу определены в венозной крови концентрация VEGF, которая составила 14,6 пг/мл, концентрация VE-кадгерина составила 2,34 нг/мл. Расчет по формуле

Y=-11,991+0,048×14,6+0,151×2,34,

где 14,6 и 2,34 - количественные характеристики заявляемых параметров - концентрации VEGF и VE-кадгерина.

Y=-10,94, что меньше нуля. По заявляемому способу у ребенка определено перинатальное гипоксическое поражение ЦНС.

На вторые сутки состояние ребенка ухудшилось до средней тяжести, появилась гипервозбудимость, тремор подбородка и рук.

На основании клинической картины и данных нейросонографии был поставлен диагноз: хроническая внутриутробная гипоксия плода, перинатальное поражение ЦНС, церебральная ишемия II степени гипоксически-ишемического генеза, гипертензивный синдром.

Таким образом, способ ранней диагностики перинатальных гипоксических поражений ЦНС у новорожденных по предложенному методу подтвердился.

Пример 3. Ребенок С. родился от II беременности, протекавшей на фоне отягощенного акушерско-гинекологического анамнеза, хронического пиелонефрита вне обострения. Роды в 39 недель. Оценка по шкале Апгар 8-9 баллов. Состояние с рождения расценено как удовлетворительное, крик громкий, кожные покровы бледно-розовые.

В первые сутки жизни по заявляемому способу определено в венозной крови концентрация VEGF, которая составила 224,5 пг/мл, концентрация VE-кадгерина - 45,2 нг/мл. Расчет по формуле

Y=-11,991+0,048×224,5+0,151×45,2,

где 224,5 и 45,2 - количественные характеристики заявляемых параметров - концентрация VEGF и VE-кадгерина.

Y=+5,61, что больше нуля. По заявляемому способу у ребенка не диагностировано перинатальное гипоксическое поражение ЦНС.

На протяжении неонатального периода ребенок наблюдался у неонатолога и невролога. Перинатальной патологии не выявлено.

Таким образом, способ ранней диагностики перинатальных гипоксических поражений ЦНС у новорожденных по предложенному методу подтвердился.

Преимущества способа.

1. Позволяет быстро (в первые сутки жизни ребенка) с высокой точностью провести раннюю диагностику перинатальных гипоксических поражений ЦНС и своевременно начать лечебные мероприятия.

2. Способ может выполняться в любых региональных лабораториях и учреждениях родовспоможения.

3. Предлагаемый способ имеет высокую точность 91,1%, чувствительность 97,5%, специфичность 73,3%.

Результаты исследований представлены в таблице.

Таблица Результаты исследований. Показатель Количество обследованных
детей Всего обследовано доношенных новорожденных 56 Истинно положительный результат 40 Истинно отрицательный результат 11 Ложноположительный результат 4 Ложноотрицательный результат 1 Точность заявляемого способа 91,1 Специфичность заявляемого способа 73,3 Чувствительность заявляемого способа 97,5

Список литературы

1. Барашнев Ю.И. Гипоксически-ишемическая энцефалопатия новорожденных: вклад перинатальных факторов, патогенетическая характеристика и прогноз. // Российский вестник перинатологии и педиатрии. - 1996. - №2. - С.32-33.

2. Перинатальные поражения нервной системы и их последствия у детей. / О.М.Филькина, Т.В.Чаша, Т.В.Самсонова и др. - Иваново, 2007. - 238 с.

3. Бурлев В.А., Зайдиев З.С., Тютюнник В.Л., Ильясова Н.А. Системный и локальный ангиогенез у беременных с акушерской патологией. // Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. - 2007. - Т.6, №6. - С.55-61.

4. Caveda L., Martin-Pfadura I. et al. Inhibition of cultured cell growth by vascularendothelial cadherin (cadherin-5/VE-cadherin) // J.Clin. Invest - 1996. - Vol.98, №4. - P.886-889.

5. Esser S., Lampugnani M.G. et al. Vascular endothelial growth factor induces VE-cadherin tyrosine phophorylation in endothelial cells. // J. Cell. Sci. - 1998. - Vol.111, №13. - P.1853-1865.

6. Лобанова Л.В. Гипоксические поражения головного мозга у доношенных новорожденных - причины, патогенез, клинико-ультразвуковая диагностика, прогноз и тактика ведения детей в раннем возрасте: Автореф. дисс… д.м.н. - Иваново, 2000. - 45 с.

7. Голосная Г.С. Роль ингибиторов апоптоза в диагностике и прогнозировании исходов перинатальных гипоксических поражений головного мозга у новорожденных. // Педиатрия. - 2005. - №3. - С.30-35.

8. Martin-Padura I., De Castellarnau С. et al. Expression of VE (vascular endothelial)-cadherin and other endothelial-specific markers in haemangiomas. // J. Pathol. - 1995. - Vol.175, №1. - P.51-57.

Изобретение относится к медицине, а именно к перинатологии, и может быть использовано для ранней диагностики перинатальных гипоксических поражений ЦНС у доношенных новорожденных. Способ заключается в биохимическом исследовании сыворотки крови новорожденных в первые сутки жизни. При этом определяют в периферической крови концентрацию VEGF и VE-кадгерина и рассчитывают дискриминантную функцию (Y) по формуле Y=-11,991+0,048×X1+0,151×X2, где X1 - концентрация VEGF (пг/мл), Х2 - концентрация VE-кадгерина (нг/мл) и при значении Y меньше нуля диагностируют перинатальное гипоксическое поражение ЦНС. Способ повышает точность ранней диагностики перинатальных гипоксических поражений ЦНС у доношенных новорожденных и своевременно начать лечебные мероприятия. 1 табл.

Способ ранней диагностики перинатальных гипоксических поражений ЦНС у доношенных новорожденных путем биохимического исследования сыворотки крови, отличающийся тем, что в первые сутки жизни определяют концентрацию VEGF и VE-кадгерина и рассчитывают дискриминантную функцию (Y) по формуле:
Y=-11,991+0,048·X1+0,151·X2,
где X1 - концентрация VEGF (пг/мл);
Х2 - концентрация VE-кадгерина (нг/мл) и при значении Y меньше нуля диагностируют перинатальное гипоксическое поражение ЦНС.