СПОСОБ ОЦЕНКИ АКТИВНОСТИ ЛОКАЛЬНОГО ВОСПАЛЕНИЯ ПРИ ФОНОВЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ШЕЙКИ МАТКИ Российский патент 2010 года по МПК G01N33/48 

Описание патента на изобретение RU2405145C1

Изобретение относится к области медицины - к практической и экспериментальной, может быть использовано в гинекологии и в клинической лабораторной диагностике для изучения активности локального воспаления слизистой оболочки шейки матки для выбора адекватного метода лечения.

Известно, что возрастание частоты предраковых и злокачественных новообразований шейки матки, особенно у молодых женщин, обусловлено сочетанием фоновой патологии с хроническим цервицитом [Этиология, патогенетические аспекты, оптимизация диагностики и терапии хронических цервицитов / Э.А.Казачкова, Е.Л.Казачков, Б.И.Медведев // Материалы VI Всероссийского форума «Мать и дитя». - Москва, 2004. - С.367-368].

Частота цервицитов, обусловленных бактериальным инфицированием, составляет 40-50%. В последнее десятилетие для воспаления шейки матки характерно отсутствие четко выраженной клинической картины, склонность к длительному течению, рецидивированию, что приводит к формированию морфологических изменений как на поверхности шейки матки, так и в ее толще [Влияние инфекций на репродуктивную систему женщин / В.И.Краснопольский, О.Ф.Серова, В.А.Туманова и др. // Российский вестник акушера-гинеколога. - 2004. - №5. - С.39-41]. Воспаление в ответ на хроническую инфекцию приводит к продукции неспецифических защитных противомикробных оксидантов, вызывающих окислительное повреждение ДНК клеток хозяина. [Микробиоценоз влагалища и патология шейки матки. Возможности коррекции дисбиотических состояний / И.Б.Манухин, Г.Н.Минкина, B.C.Калинина // Поликлиническая гинекология. Клинические лекции / Под ред. проф. В.Н.Прилепской. - 2-е изд., доп. - М.: МЕДпресс-информ, 2005. - С.37-46]. Параллельно с воспалением развивается вторичный местный иммунодефицит клеточных и гуморальных иммунных реакций [Роль воспаления в диагностике и лечении патологии шейки матки / М.Н.Костава // Гинеколог. - 2005. - №12. - С.27-30].

Эктопия шейки матки также относится к фоновой патологии и занимает одно из первых мест в структуре гинекологической заболеваемости [Рудакова Е.Б. Псевдоэрозия шейки матки / Практическая гинекология. Клинические лекции / Под ред. акад. РАМН В.И.Кулакова, проф. В.Н.Прилепской. - 3-е изд., доп. - М.: МЕДпресс-информ, 2006. - С.40-48].

Известны разные способы диагностики, оценки, исследования фоновых заболеваний шейки матки в виде запатентованных медицинских технологий: [патент RU на изобретение №2134535 «Способ диагностики воспалительных заболеваний шейки матки», основан на воздействии знакопеременным током на клетки исследуемого органа в фоновой среде - молочной кислоте, разведенной в дистиллированной воде, при полном прекращении биокинетики спустя 20 минут диагностируют воспалительное заболевания шейки матки; патент RU на изобретение №2240040 «Способ диагностики воспалительных заболеваний шейки матки», основан на цветовом допплеровском картировании маточных и влагалищных артерий; патент RU на изобретение №2240041 «Способ диагностики воспалительных заболеваний шейки матки», основан на дополнительной расширенной кольпоскопии при выявлении объемных включений в толще шейки при двухмерной сонографии и выявлении в них капсулы при трехмерной сонографии].

Однако по всем описанным выше способам по установлению воспалительного заболевания шейки матки нельзя судить о степени его активности и состоянии местного иммунитета шейки матки.

Недостатком всех названных способов является отсутствие информации о степени активности диагностируемого воспаления.

Известен также «Способ диагностики эктопии шейки матки у женщин репродуктивного возраста» [патент RU на изобретение №2306569], основанный на исследовании фолликулостимулирующего гормона, лютеинизирующего гормона, эстрадиола, прогестерона в сыворотке крови иммуноферментным методом.

Однако данным методом иммуноферментного анализа ИФА исследуют содержание гормонов в крови, данный способ позволяет диагностировать только неосложненную гормонзависимую эктопию.

Известна также оценка состояния иммунитета с использованием цитокинов. В настоящий момент диагностическая значимость оценки уровня цитокинов заключается в констатации самого факта повышения или понижения их концентрации у данного больного с конкретным заболеванием. Центральную роль в локальном и системном, остром и хроническом воспалении наряду с интерлейкином-6 играет ннтерлейкин-1β - ИЛ1β, который входит в группу провоспалительных цитокинов [Сравнение наборов реагентов для определения интерлейкина 1 бета и интерлейкина 6 двух различных производителей / Т.Г.Рябичева, Н.А.Вараксин, Н.В.Тимофеева // Журнал «Цитокины и воспаление». - 2007. - №2. - С.70-72].

Известен способ исследования концентрации провоспалительного цитокина интерлейкина-1β методом твердофазного ИФА с помощью двойных антител и пероксидазной реакции в периферической крови у больных дисплазией и раком шейки матки [Цитокины и экспрессия тканевого фактора моноцитами как критерий прогноза течения заболевания и тромботических осложнений у больных дисплазией и раком шейки матки / Т.Е.Белокриницкая, Ю.А.Витковский, Ю.Н.Пономарев // Акушерство и гинекология. - 2001. - №6 - С.36-39].

Однако по концентрации цитокина в периферической крови нельзя судить о состоянии локального иммунитета шейки матки.

Известен способ определения содержания ИЛ1β в вагинальных смывах при генитальном кандидозе [Альтернативные подходы к терапии урогенитальных заболеваний с целью сохранения репродуктивного здоровья / С.Б.Рыбалкин, А.К.Мирзабаева // Методические рекомендации для врачей-клиницистов. - СПб., 2000. - С.37].

Известен также способ исследования уровней ИЛ1β в вагинальном отделяемом у пациенток с фоновыми заболеваниями шейки матки [Кореева Н.В. Оптимизация комплексного лечения фоновых заболеваний шейки матки у женщин репродуктивного возраста: Автореф. дис. канд. мед. наук / Российский государственный медицинский университет. - М., 2007. - 21 с.].

Известен также способ исследования содержания ИЛ1β во влагалищном отделяемом методом твердофазного ИФА при эктопии шейки матки, ассоциированной с папилломавирусной инфекцией [Олина О.А. Комплексный анализ клинико-иммунологических особенностей при эктопии шейки матки, ассоциированной с папилломавирусной инфекцией, как основа оптимизации терапии: Автореф. дис. канд. мед. наук / Пермская государственная медицинская академия им. акад. Е.А.Вагнера. - г.Пермь, 2007. - 21 с.].

Однако исследование цитокинов в вагинальных смывах не дает достоверной информации о состоянии локального иммунитета шейки матки, т.к. в вышеперечисленных способах забор биоматериала производят достаточно далеко от патологического очага. Защитная роль провоспалительных цитокинов проявляется локально, в очаге воспаления, поэтому целесообразно измерять их уровни в соответствующих тканях.

Известен также способ исследования содержания ИЛ1β в цервикальном секрете при дисплазии шейки матки на фоне генитальных инфекций [Содержание цитокинов в цервикальном секрете при дисплазии шейки матки на фоне генитальных инфекций / Т.Е.Белокриницкая, Ю.Н.Пономарева, Н.М.Ладыгина, Е.Н.Бунина // Журнал акушерства и женских болезней. - 2006. - Т. LV, Вып.2. - С.64-67].

Однако при данном исследовании цитокинов в цервикальном содержимом данные могут быть искажены при наличии воспалительных заболеваний верхнего отдела гениталий.

Наиболее близким по технической сущности является способ исследования содержания ИЛ1β методом твердофазного ИФА в цервикальном секрете у больных урогенитальным хламидиозом. Материал для исследования забирали стерильной градуированной стеклянной пипеткой в силиконизированные пробирки, пробирки центрифугировали 10 мин при 800 об., супернатант отбирали в стерильные пробирки типа Эппендорф и замораживали при -20°C [Система провоспалительных цитокинов в цервикальном секрете у женщин с урогенитальным хламидиозом / О.А.Гизингер, И.И.Долгушин // Журнал «Цитокины и воспаление». - 2006. - Т.5 №4. - С.13-16].

Однако при исследовании цитокинов в цервикальном содержимом данные могут быть искажены при наличии воспалительных заболеваний верхнего отдела гениталий.

Задачей заявляемого изобретения является повышение простоты осуществления способа при сохранении высокой точности результата. Сущность заявляемого способа оценки активности локального воспаления при фоновых заболеваниях шейки матки характеризуется тем, что после клинического обследования и верификации диагноза больных производят с максимальной полнотой и атравматично сбор исследуемого продукта, подводя средство для снятия нативного материала к наружному зеву шейки матки непосредственно к поверхности зоны трансформации шейки матки и патологического очага, не вводя средство внутрь цервикального канала, затем помещают собранный материал до полного погружения в плотно закрывающуюся пробирку, заполненную 1,0 мл 0,155М раствором хлорида натрия, смесь встряхивают в центрифуге вортекс в течение 10 мин, исследуют полученные материалы методом твердофазного иммуноферментного анализа ИФА на планшетах с помощью набора реагентов «Вектор-Бест», спектрофотометрически осуществляют определение концентрации цитокина интерлейкина-1β в исследуемых пробах, судят об активности локального воспаления по полученной концентрации интерлейкина-1β в сравнении с нормальной его концентрацией, равной значениям до 70 пг/мл у здоровых лиц из эталонной группы, и при значении выше 70 пг/мл до 150 пг/мл судят о наличии хронически протекающего воспалительного процесса, при значении выше 150 пг/мл - судят о наличии активно протекающего воспалительного процесса и выраженном иммунном ответе.

Заявляется также способ с вышеописанными признаками, в котором в случае наличия рубцовых изменении на поверхности шейки матки сбор исследуемого материала осуществляют с поверхности зоны трансформации с помощью полосок фильтровальной бумаги-аппликатора размером 1×0,4 см.

Кроме того, заявляется также способ с вышеописанными признаками, в котором сбор нативного материала с зоны патологического очага с максимальной полнотой и атравматично осуществляют с помощью средства, имеющего съемное покрытие из высокогигроскопического материала, помещенного на вращающийся валик, который перемещают по поверхности торцевой стороны в зоне наружного зева шейки матки, причем валик выставляют в положение параллельно держателю при выходе из влагалища, чтобы не касаться последнего с помощью манипулятора в ручке, а после полного выхода из гениталий осуществляют съем высокогигроскопического покрытия с нативным материалом и помещают его в раствор.

Технический результат заявляемого изобретения заключается в том, что повышение точности в оценке активности воспаления шейки матки производят с учетом информации с нативной пробы, получаемой непосредственно с участка патологии, которая дает большую достоверность исследования. Это отсутствовало в наиболее близком аналоге. Достигается этот результат технически: проба встряхивается с использованием центрифуги вортекс, процесс исследуют ИФА с применением технических средств. Фильтровальная бумага-аппликатор - средство сбора нативного материала, а также другие используемые в способе средства - технические атрибуты заявляемого способа.

Особенности сбора исследуемого материала имеют техническую сущность - сколько собрать и чем материал для исследования, а также как его обработать до ИФА, а главное какую естественную жидкость выбрать для исследования. В подавляющем большинстве для исследования данного органа - шейки матки - при данной патологии используют для ИФА исследование крови, реже содержимое цервикального канала, в заявляемом решении исследуется отделяемое цервикальных желез с поверхности зоны трансформации шейки матки.

Поскольку способ основан на использовании цитокина интерлейкин-1β, который является локальным показателем, целесообразно измерять его уровень непосредственно в изучаемых тканях, в данном случае в ткани шейки матки.

Измененное количество цитокина интерлейкин-1β служит признаком иммунодефицитного состояния и показателем течения заболевания. В данной заявке изучалась иммуноактивность конкретного органа, конкретной патологической зоны органа - очаге воспаления шейки матки методом иммуноферментного анализа, который осуществлялся на заранее произведенных планшетах ЗАО «Вектор-Бест» г.Новосибирск, Россия. Учет результатов - спектрофотометрический на длине волны 450 нм. Для выяснения значений нормальной концентрации интерлейкина-1β был проведен анализ практически здоровых доноров - женщин репродуктивного возраста от 25 до 44 лет, представительниц различных социальных групп без любых заболеваний гениталий в настоящем времени и в прошлом, в первую очередь шейки матки. Все названные до данной фазы способа признаки, входящие в приемы осуществления способа, носят технический характер, например как сам ИФА, так и особенности его осуществления.

Активность и точность локализации воспалительного процесса шейки матки подтверждаются неоспоримо, например, при наличии нескольких воспалительных процессов вяло и/или активно текущих одновременно в одном организме. Например, наличие осложненной эктопии и отита или флегмонозного заболевания одновременно в одном организме другими методами, например анализом крови даже на цитокины, не позволяет оценить активность воспалительного заболевания шейки матки отдельно от других сопутствующих заболеваний.

Подробное описание способа

Первоначально осуществляют клиническое обследование больной с помощью стандартных методов, т.е. с оценкой жалоб и соматического статуса, детальным сбором анамнеза с выявлением факторов, влияющих на иммунный статус, гинекологическое обследование с осмотром шейки матки с помощью зеркал, бимануальным исследованием, расширенной кольпоскопией, цитологическим исследованием соскоба с шейки матки. Затем дополнительно обследуют на наличие инфекций гениталий, т.е. осуществляют микроскопию окрашенных мазков из урогенитального тракта, бактериологическое исследование содержимого цервикального канала. Методом полимеразной цепной реакции обследуют на инфекции, передающиеся преимущественно половым путем. Проводят верификацию диагноза, критериями исключения из исследования являлись: беременность и лактация, воспалительные заболевания органов малого таза и наружных половых органов в стадии обострения, наличие инфекций, передающихся половым путем, в т.ч. папилломавирусной инфекции, наличие также цервикальной интраэпителиальной неоплазии и рака шейки матки, наличие тяжелой экстрагенитальной патологии и признаков острых инфекционных заболеваний.

После клинического обследования больных и подтверждения наличия неспецифического воспаления шейки матки производят сбор биоматериала с поверхности патологического очага и зоны трансформации. Сбор биоматериала осуществляют следующим образом: больную располагают на гинекологическом кресле, шейку матки обнажают в зеркалах Куско. Стерильным сухим ватным тампоном удаляют влагалищное отделяемое с поверхности шейки матки. Затем производят с максимальной полнотой и атравматично сбор исследуемого продукта, подводя средство для снятия нативного материала к наружному зеву шейки матки непосредственно к поверхности зоны трансформации шейки матки и патологического очага, не вводя средство внутрь цервикального канала. Таким средством может быть цитощетка, шпатель, а также другие технические устройства для забора исследуемого материала, в том числе описанное в подаваемой заявке в п.2 формулы данного изобретения средство, оно имеет съемное покрытие из высокогигроскопического материала, помещенного на вращающийся валик, который перемещают по поверхности торцевой стороны в зоне наружного зева шейки матки. Валик выставляют в положение параллельно держателю при выходе из влагалища, чтобы не касаться последнего с помощью манипулятора в ручке, а после полного выхода из гениталий осуществляют съем высокогигроскопического покрытия с нативным материалом и помещают его в раствор.

Средством для сбора исследуемого материала может также быть фильтровальная бумага-аппликатор соответствующих размеров. Сорбирующую способность фильтровального материала на максимальное его впитывание предварительно оценивают в контрольных исследованиях. Полоску фильтровального материала взвешивают до и после пропитывания на аналитических весах. Средство для сбора исследуемого продукта - полоску мягкого фильтровального материала размером 1,0×0,4 см с помощью пинцета плотно фиксируют к поверхности патологического очага, деликатным нежным надавливанием пинцетом дают возможность фильтровальному материалу впитать в себя воспалительный секрет цервикальных желез и компоненты поврежденных тканей в течение 15-20 секунд, а такой размер фильтровального материала, как правило, позволяет получить до 5,0±0,5 мг нативного материала. Это средство применяется в случае наличия рубцовых изменений на поверхности шейки матки, с помощью него осуществляют сбор исследуемого материала в виде отделяемого цервикальных желез с поверхности зоны трансформации.

Описанные в данной заявке приемы снятия нативного материала обеспечивают максимальную полноту сбора и атравматичность в отличие от наиболее близкого аналога, когда цервикальный секрет берут из цервикального канала, а не с зоны патологического очага и с зоны трансформации, как в заявляемом способе.

Затем пробу помещают в пронумерованную пробирку до полного погружения, заполненную 1,0 мл 0,155М раствором хлорида натрия, закрывают крышкой. Смыв биоматериала с поверхности фильтровального материала осуществляют в центрифуге вортекс CM 70М-07, Elmi в течение 10 мин в режиме встряхивания. Затем пробирку помещают в штатив.

Исследуемым тестируемым материалом является отделяемое со слизистой оболочки шейки матки, разведенное 1:200 в 0,155М растворе хлорида натрия.

Образцы тестируют методом твердофазного иммуноферментного анализа ИФА. Исследуемый образец в количестве 100 мкл вносят в лунку планшета с помощью автоматической пипетки. На первой стадии анализа ИЛ1β, содержащийся в калибровочных и исследуемых образцах, связывается с первыми антителами, иммобилизованными на внутренней поверхности лунок планшета. На второй стадии анализа иммобилизованный И1β взаимодействует с конъюгатом вторых антител с биотином. Количество связавшегося конъюгата прямо пропорционально количеству ИЛ1β в исследуемом образце. На третьей последней стадии анализа в лунки вносят стректавидин с пероксидазой хрена. Во время инкубации с субстратной смесью - раствором хромогена тетраметилбензидина происходит окрашивание раствора в лунках. Степень окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся меченных антител. После измерения оптической плотности раствора в лунках с помощью иммуноферментного анализатора «Stat Fax-2100» на длине волны 450 нм на основании калибровочного графика, полученного при исследовании калибровочных проб, имеющихся в наборе реактивов, рассчитывают концентрацию ИЛ1β в анализируемых образцах. Результаты выражают в пг/мл. Общее время проведения анализа 90-100 мин.

Методом твердофазного ИФА тестируют свежеприготовленные образцы. Если это невозможно, то для исключения бактериального пророста пробирки с образцами помещают в морозильную камеру и осуществляют хранение при t -20°C. При этом не допускают даже однократного оттаивания образцов.

Для получения количественного значения эталонной нормы концентрацию интерлейкина-1β заблаговременно определяли в отделяемом со слизистой шейки матки у 20 практически здоровых лиц - женщин репродуктивного возраста 25-44 лет и осуществляли построение градуировочной кривой. Концентрация полученных значений для них составила до 70 пг/мл. У большей части здоровых лиц величина составила в пределах значения 22,8 пг/мл.

У 20 пациенток с острым воспалением или обострением хронического воспалительного процесса возраста от 25 до 44 лет диапазон полученных измеренных значений концентрации ИЛ1β составил: 150-235 пг/мл.

У 20 пациенток с длительным и вялотекущим хроническим воспалительным процессом того же возраста от 25 до 44 лет диапазон полученных измеренных концентраций ИЛ1β составил 70-150 пг/мл.

На основании полученных данных можно сделать обобщения, с помощью которых можно определять активность течения воспаления шейки матки или хронически текущие воспаления у больных. В зависимости от сделанной оценки больным назначается разное лечение. Опыт показывает, что и при правильной оценке состояния воспаления шейки матки и адекватном лечении наступает выздоровление больных как с остропротекающим воспалением, так и с длительно затянувшимся хроническим процессом воспаления.

Предложенный способ проиллюстрирован следующими клиническими примерами.

Пример 1. Пациентка Д-ва С.В., 28 лет. Обратилась на консультативный прием с диагнозом: Осложненная эктопия шейки матки на фоне бактериального неспецифического цервицита. Умеренная рубцовая деформация шейки матки. После клинического обследования и верификации диагноза больной произведено фильтровальной бумагой-аппликатором снятие нативного материала непосредственно с поверхности эктопии с максимальной полнотой и атравматично. Собранный материал до полного погружения был помещен в пробирку Эппендорф, заполненную 1,0 мл 0,155М раствором хлорида натрия. Пробирка помещена в центрифугу вортекс CM 70М-07, Elmi, установлен режим встряхивания на 10 мин. Бумага извлечена из пробирки с помощью пинцета, исследуемый образец материала в количестве 100 мкл с помощью автоматической одноканальной пипетки внесен в лунку планшета из набора «ИЛ1β-ИФА-БЕСТ», произведено исследование образца методом твердофазного ИФА. Рассчитана концентрация ИЛ1β - 168,3 пг/мл, произведено ее сравнение со значениями: для нормы, активно и хронически протекающими воспалительными процессами. Дано заключение: активно протекающий воспалительный процесс, выраженный иммунный ответ.

Пример 2. Пациентка М-я С.Ю., 34 года. Обратилась на консультативный прием с диагнозом: Осложненная эктопия шейки матки на фоне хронического неспецифического цервицита. После клинического обследования и верификации диагноза больной произведено фильтровальной бумагой-аппликатором снятие нативного материала непосредственно с поверхности эктопии с максимальной полнотой и атравматично. Собранный материал до полного погружения был помещен в пробирку Эппендорф, заполненную 1,0 мл 0,155М раствором хлорида натрия. Пробирка помещена в центрифугу вортекс CM 70М-07, Elmi, установлен режим встряхивания на 10 мин. Бумага извлечена из пробирки с помощью пинцета, исследуемый образец в количестве 100 мкл с помощью автоматической одноканальной пипетки внесен в лунку планшета из набора «ИЛ1β-ИФА-БЕСТ», произведено исследование образца методом твердофазного ИФА. Рассчитана концентрация ИЛ1β - 110,6 пг/мл, произведено ее сравнение со значениями: для нормы, активно и хронически протекающими воспалительными процессами. Дано заключение: хронически протекающий воспалительный процесс. Назначено адекватное лечение с включением иммуномодуляторов локально в виде свечей на первом этапе, далее лечение по стандартной схеме.

Пример 3. Пациентка Ф-ва К.Ю., 36 лет. Обратилась на прием с целью профосмотра. После клинического обследования и верификации диагноза больной произведено средством для забора исследуемого биологического материала с поверхности шейки матки снятие нативного материала непосредственно с поверхности зоны трансформации с максимальной полнотой и атравматично путем прокатывания валика рабочей частью по поверхности экзоцервикса. Средство извлекли из влагалища, избегая касания стенок. Произвели снятие покрытия валика с помощью пинцета и поместили его до полного погружения в пробирку Эппендорф, заполненную 1,0 мл 0,155М раствором хлорида натрия. Пробирка помещена в центрифугу вортекс CM 70М-07, Elmi, установлен режим встряхивания на 10 мин. Покрытие валика извлечено из пробирки с помощью пинцета, с отжатием избытка жидкости путем прижимания к стенке пробирки. Исследуемый образец в количестве 100 мкл с помощью автоматической одноканальной пипетки внесен в лунку планшета из набора «ИЛ1β-ИФА-БЕСТ», проведено исследование образца методом твердофазного ИФА. Рассчитана концентрация ИЛ1β - 84,6 пг/мл, проведено ее сравнение со значениями: для нормы, активно и хронически протекающими воспалительными процессами. Дано заключение: хронически протекающий воспалительный процесс шейки матки.

Способ апробирован в клинике акушерства и гинекологии педиатрического факультета Саратовского государственного медицинского университета на базе женской консультации ММУ «10 Городская клиническая больница» г.Саратова и Центральной научно-исследовательской лаборатории Саратовского государственного медицинского университета.

Таким образом, заявляемый способ оценки активности локального воспаления слизистой шейки матки при фоновых заболеваниях, основанный на определении уровня ИЛ1β в отделяемом с поверхности патологического очага позволяет:

- на основании полученных данных оценить активность локального воспаления;

- на основании полученных результатов осуществить своевременное адекватное патогенетическое лечение.

Данный способ обладает следующими преимуществами: высокой чувствительностью, позволяющей выявлять концентрации до 0,05 нг/мл; возможностью использовать минимальные объемы исследуемого материала; стабильностью при хранении всех ингредиентов, необходимых для проведения ИФА (до года и более); простотой проведения реакции; наличием как инструментального, так и визуального учета; возможностью автоматизации всех этапов реакции; относительно низкой стоимостью диагностических наборов.

Отличия в достигаемом результате - достоинства заявляемого изобретения.

Для проверки достоверности результатов в оценке активности воспаления шейки матки осуществляют параллельно подсчет числа лейкоцитов в поле зрения мазка с поверхности экзоцервикса. Была произведена микроскопия окрашенного мазка с подсчетом количества лейкоцитов. Для нормы количество лейкоцитов составляет до 10 клеток в поле зрения, 15-20-25 клеток в поле зрения свидетельствует о бессимптомно протекающем хроническом воспалительном процессе, 30-35-40 клеток в поле зрения - о хронически вялопротекающем воспалительном процессе, 45-50-55 клеток в поле зрения - об активно остропротекающем воспалительном процессе. Эти данные совпали с выводами, сделанными по заявляемому способу - о наличии активно и хронически протекающего воспаления.

Увеличение числа лейкоцитов в мазке было характерно для картины активно протекающего острого процесса, и наоборот, - уменьшение числа лейкоцитов характеризовало наличие хронического воспалительного процесса.

На основании этих проверочных данных подтверждается вывод на деление больных с активно и хронически протекающим воспалением шейки матки при условии значения концентрации цитокина, полученного изложенным способом с известным набором реактивов ИФА, с учетом особенностей взятия пробы на начальном этапе и обработки проб на последующих этапах.

Похожие патенты RU2405145C1

название год авторы номер документа
СПОСОБ ОЦЕНКИ АКТИВНОСТИ ЛОКАЛЬНОГО ВОСПАЛЕНИЯ ПРИ ФОНОВЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ШЕЙКИ МАТКИ 2009
  • Грибова Светлана Николаевна
  • Захарова Наталья Борисовна
  • Хрипунова Галина Ивановна
RU2385460C1
СПОСОБ ОЦЕНКИ АКТИВНОСТИ ЛОКАЛЬНОГО ВОСПАЛЕНИЯ ПРИ ФОНОВЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ШЕЙКИ МАТКИ И УСТРОЙСТВО ДЛЯ СНЯТИЯ НАТИВНОГО МАТЕРИАЛА С ПОВЕРХНОСТИ ШЕЙКИ МАТКИ 2009
  • Грибова Светлана Николаевна
  • Захарова Наталья Борисовна
  • Хрипунова Галина Ивановна
RU2402779C1
СПОСОБ ЛОКАЛЬНОЙ ИММУНОКОРРЕКЦИИ ИНФЕКЦИОННО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ УРОГЕНИТАЛЬНОГО ТРАКТА ЖЕНЩИН, ВЫЗВАННЫХ МИКРООРГАНИЗМАМИ, ПЕРЕДАВАЕМЫМИ ПОЛОВЫМ ПУТЁМ 2009
  • Долгушин Илья Ильич
  • Колесников Олег Леонидович
  • Гизингер Оксана Анатольевна
  • Ишпахтина Кира Геннадьевна
  • Летяева Ольга Ивановна
RU2455037C2
СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ЭКТОПИИ ШЕЙКИ МАТКИ 2014
  • Хворостухина Наталия Федоровна
  • Новичков Денис Анатольевич
  • Михеева Юлия Вадимовна
  • Столярова Ульяна Владимировна
  • Степанова Наталья Николаевна
RU2568768C1
СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ЭКТОПИИ ШЕЙКИ МАТКИ У ДЕВУШЕК-ПОДРОСТКОВ 2006
  • Богатова Ирина Константиновна
  • Сотникова Наталья Юрьевна
  • Соколова Елена Алексеевна
  • Семененко Светлана Сергеевна
RU2311184C2
Способ профилактики постинфекционных репродуктивных нарушений 2018
  • Кшнясева Светлана Константиновна
  • Жеребятьева Ольга Олеговна
  • Махалова Галина Олеговна
  • Михайлова Елена Алексеевна
  • Константинова Ольга Дмитриевна
  • Киргизова Светлана Борисовна
  • Азнабаева Лилия Мидехатевна
  • Фомина Марина Викторовна
  • Махалов Вадим Юрьевич
  • Миронов Андрей Юрьевич
  • Ляшенко Ирина Эдуардовна
RU2686302C1
СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ХРОНИЧЕСКОГО АДЕНОИДИТА У ДЕТЕЙ 2011
  • Терскова Наталья Викторовна
  • Вахрушев Сергей Геннадиевич
  • Шнайдер Наталья Алексеевна
  • Кривопалов Александр Александрович
  • Пилюгина Марина Сергеевна
RU2488399C1
Способ оценки активности воспалительного процесса при хроническом абактериальном простатите/синдроме хронической тазовой боли 2019
  • Долгов Алексей Борисович
  • Чураков Алексей Аркадьевич
  • Захарова Наталья Борисовна
  • Попков Владимир Михайлович
RU2713911C1
Способ прогноза эрозии слизистой влагалища после хирургической коррекции пролапса гениталий с использованием сетчатых имплантатов у женщин в постменопаузе 2020
  • Михельсон Анна Алексеевна
  • Лазукина Мария Валерьевна
  • Вараксин Анатолий Николаевич
RU2737651C1
СПОСОБ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ ПОСЛЕРОДОВОГО ЭНДОМЕТРИТА 2011
  • Лебедева Ольга Петровна
  • Пахомов Сергей Петрович
  • Чурносов Михаил Иванович
  • Попов Василий Николаевич
  • Федорин Дмитрий Николаевич
  • Калуцкий Павел Вячеславович
  • Самборская Наталья Ивановна
  • Ивашова Олеся Николаевна
  • Довгий Павел Григорьевич
RU2477861C1

Реферат патента 2010 года СПОСОБ ОЦЕНКИ АКТИВНОСТИ ЛОКАЛЬНОГО ВОСПАЛЕНИЯ ПРИ ФОНОВЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ШЕЙКИ МАТКИ

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии. При оценке активности локального воспаления при фоновых заболеваниях шейки матки проводят сбор исследуемого биоматериала, подводя средство для снятия нативного материала к наружному зеву шейки матки непосредственно к поверхности патологического очага, не вводя средство для снятия внутрь цервикального канала. Помещают собранный материал до полного погружения в пробирку, заполненную 1,0 мл 0,155М раствором хлорида натрия и встряхивают в центрифуге вортекс в течение 10 мин. Исследуют полученные материалы методом твердофазного иммуноферментного анализа ИФА и спектрофотометрически осуществляют определение концентрации цитокина интерлейкина-1β в исследуемых пробах. При значении выше 70 пг/мл до 150 пг/мл судят о наличии хронически протекающего воспалительного процесса, при значении выше 150 пг/мл - судят о наличии активно протекающего воспалительного процесса и выраженном иммунном ответе. Способ позволяет исключить травматизацию слизистой оболочки органа и повысить качество исследуемого нативного материала без усложнения процесса исследования. 2 з.п. ф-лы.

Формула изобретения RU 2 405 145 C1

1. Способ оценки активности локального воспаления при фоновых заболеваниях шейки матки, характеризующийся тем, что после клинического обследования и верификации диагноза больных производят с максимальной полнотой и атравматично сбор исследуемого продукта, подводя средство для снятия нативного материала к наружному зеву шейки матки, непосредственно к поверхности зоны трансформации шейки матки и патологического очага, не вводя средство внутрь цервикального канала, затем помещают собранный материал до полного погружения в плотно закрывающуюся пробирку, заполненную 1,0 мл 0,155М раствором хлорида натрия, смесь встряхивают в центрифуге вортекс в течение 10 мин, исследуют полученные материалы методом твердофазного иммуноферментного анализа ИФА на планшетах с помощью набора реагентов «Вектор-Бест», спектрофотометрически осуществляют определение концентрации цитокина интерлейкина-1β в исследуемых пробах, судят об активности локального воспаления по полученной концентрации интерлейкина-1β в сравнении с нормальной его концентрацией, равной значениям до 70 пг/мл у здоровых лиц из эталонной группы, и при значении выше 70 пг/мл до 150 пг/мл судят о наличии хронически протекающего воспалительного процесса, при значении выше 150 пг/мл судят о наличии активно протекающего воспалительного процесса и выраженном иммунном ответе.

2. Способ по п.1, характеризующийся тем, что в случае наличия рубцовых изменений на поверхности шейки матки сбор исследуемого материала осуществляют с поверхности зоны трансформации с помощью полосок фильтровальной бумаги-аппликатора размером 1×0,4 см.

3. Способ по п.1, характеризующийся тем, что сбор нативного материала с зоны патологического очага с максимальной полнотой и атравматично осуществляют с помощью средства, имеющего съемное покрытие из высокогигроскопического материала, помещенного на вращающийся валик, который перемещают по поверхности торцевой стороны в зоне наружного зева шейки матки, причем валик выставляют в положение параллельно держателю при выходе из влагалища, чтобы не касаться последнего, с помощью манипулятора в ручке, а после полного выхода из гениталий осуществляют съем высокогигроскопического покрытия с нативным материалом и помещают его в раствор.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2010 года RU2405145C1

ГИЗИНГЕР О.А
и др
Система провоспалительных цитокинов в цервикальном секрете у женщин с урогенитальным хламидиозом
Ж.: «Цитокины и воспаление», 2006, т.5, №4, с.13-16
КИСЛИЦКИЙ А
и др
Эрозия (дисплазия слизистой оболочки) шейки матки, 17.01.2008, найдено On-line 04.02.2010, http://materinstvo.org/articles/cervix.php
Устройство для забора цитологического материала с шейки матки 1991
  • Галичанин Иван Архипович
SU1779334A1

RU 2 405 145 C1

Авторы

Грибова Светлана Николаевна

Захарова Наталья Борисовна

Хрипунова Галина Ивановна

Даты

2010-11-27Публикация

2009-03-16Подача