СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ КЛЕЩЕЙ ДОМАШНЕЙ ПЫЛИ СЕМЕЙСТВА PYROGLYPHIDAE Российский патент 2010 года по МПК C12N1/00 

Изобретение относится к области биотехнологии, а также к медицине, а именно к получению питательной среды для культивирования клещей домашней пыли (семейство Pyroglyphidae), и может быть использовано для получения маточных и производственных культур пироглифидных клещей, для приготовления аллергенных экстрактов для дифференциальной диагностики гиперчувствительности к клещам домашней пыли и проведения специфической иммунотерапии (СИТ).

Известен способ получения питательной среды для культивирования клещей семейства Pyroglyphidae, представляющей собой смесь аминокислот и биологически активных добавок. (Lang J.D., Mulla M.S. A chemically-defined diet for the American house dust mite, Dermatophagoides farinae. Ann. Entomol. Soc. Am. 1978, v.71, p.785-787).

Наиболее близкой является питательная среда для культивирования клещей домашней пыли семейства Pyroglyphidae, представляющая собой утильные волосы из электробритв. (см. Антропова А.Б. и др. Динамика численности микромицетов и клещей домашней пыли семейства Pyroglyphidae в лабораторных культурах. Материалы Четвертого Всероссийского конгресса по медицинской микологии. Успехи медицинской микологии, М., Национальная Академия Микологии, 2006, т.VII, гл.2, с.36-38).

Однако использование указанной питательной среды приводит к постепенному заражению среды культивирования грибами, которые привносятся на кутикулах и в кишечниках клещей. В результате снижаются качественные характеристики аллергенных экстрактов, полученных после культивирования клещей на такой питательной среде.

Задачей, на решение которой направлено данное изобретения, является создание новой питательной среды для культивирования клещей семейства Pyroglyphidae, способствующей простым и эффективным способом получению маточных или производственных культур клещей семейства Pyroglyphidae.

Техническим результатом является предотвращение заражения культуральной среды клещей семейства Pyroglyphidae грибами и грибными антигенами на всех этапах культивирования клещей и получения аллергенных экстрактов клещей, приводящих к повышению степени специфичности получаемых из культуральной среды аллергенных экстрактов и не влияющих на развитие популяции клещей.

Для решения указной задачи в способе получения питательной среды для культивирования клещей домашней пыли семейства Pyroglyphidae на основе утильных волос из электробритв, согласно изобретению утильные волосы из электробритв заливают смесью эфира и этилового спирта, взятых в соотношении 1:1, надосадочную жидкость фильтруют, полученный осадок высушивают и обрабатывают растворенным в стерильном физиологическом растворе амфотерицином В, причем амфотерицин В и утильные волосы из электробритв берут в соотношении соответственно 1:100, тщательно перемешивают смесь и высушивают ее при температуре 37-40°С до образования сыпучей массы.

Приготовление питательной среды для культивирования клещей домашней пыли рода Dermatofagoidas - Dermatofagoidas pteronyssinus и Dermatofagoidas farinae.

100 г Утильных волос из электробритв заливают 1000 мл смеси эфира и этилового спирта (1:1), оставляют на 1 час, сливают надосадочную жидкость, фильтруют через бумажный фильтр (Whatmann), обработку проводят троекратно, осадок (утильные волосы) высушивают при 40°С, к полученной массе прибавляют 1 г амфотерицина В, предварительно растворенного в 150 мл стерильного физиологического раствора, тщательно перемешивают, высушивают при 37-40°С до образования сыпучей массы. Готовую питательную среду заселяют клещами, культивируют при 25±1°С и влажности 73±2% в течение 2-4 месяцев. Проводят микологический анализ на присутствие грибов в культуральной среде. Полученное сырье может быть использовано как в качестве маточной культуры клещей, так и для приготовления аллергенного экстракта клещей.

Изобретение иллюстрируется на следующих примерах:

Пример 1. Приготовление питательной среды для культивирования клещей домашней пыли Dermatofagoidas pteronyssinus

5 г утильных волос из электробритв заливают 50 мл смеси эфира и этилового спирта (1:1), оставляют на 1 час, сливают надосадочную жидкость, фильтруют через бумажный фильтр (Whatmann), обработку проводят троекратно, высушивают осадок при 40°С, к полученной массе прибавляют 0,05 г амфотерицина В, растворенного в 7,5 мл физиологического раствора, тщательно перемешивают, высушивают при 37°С до образования сыпучей массы.

Готовый пищевой субстрат заселяют клещами, культивируют при 24°С и влажности 71% в течение 4 месяцев.

При проведении микологического анализа присутствие грибов в культуральной среде не обнаружено.

Полученное сырье может быть использовано как в качестве маточной культуры клещей, так и для приготовления аллергенного экстракта клещей, не содержащего грибных антигенов.

Пример 2. Приготовление питательной среды для культивирования клещей домашней пыли Dermatofagoidas farinae

5 г утильных волос из электробритв заливают 50 мл смеси эфира и этилового спирта (1:1), оставляют на 1 час, сливают надосадочную жидкость, фильтруют через бумажный фильтр (Whatmann), обработку проводят троекратно, высушивают осадок при 40°С, к полученной массе прибавляют 0,05 г амфотерицина В, растворенного в 7,5 мл физиологического раствора, тщательно перемешивают, высушивают при 40°С до образования сыпучей массы.

Готовый пищевой субстрат заселяют клещами, культивируют при 26°С и влажности 75% в течение 2 месяцев.

При проведении микологического анализа присутствие грибов в культуральной среде не обнаружено.

Полученное сырье может быть использовано как в качестве маточной культуры клещей, так и для приготовления аллергенного экстракта клещей, не содержащего грибных антигенов.

Таким образом, заявленный способ получения питательной среды для культивирования клещей домашней пыли семейства Pyroglyphidae является простым и эффективным способом получения маточных или производственных культур пироглифидных клещей, не зараженных грибами, не влияет на развитие популяции пироглифидных клещей и приводит к повышению степени специфичности аллергенных экстрактов.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения маточных и производственных культур пироглифидных клещей для приготовления аллергенных экстрактов при дифференциальной диагностике гиперчувствительности к клещам домашней пыли и проведении специфической иммунотерапии (СИТ). Осуществляют обработку утильных волос из электробритв смесью эфира и этилового спирта, взятых в соотношении 1:1, и надосадочную жидкость фильтруют. Полученный осадок высушивают и обрабатывают растворенным в стерильном физиологическом растворе амфотерицином В, причем амфотерицин В и утильные волосы из электробритв берут в соотношении соответственно 1:100. Смесь тщательно перемешивают и высушивают при температуре 37-40°С до образования сыпучей массы. Это предотвращает заражение культуральной среды клещей семейства Pyroglyphidae грибами и грибными антигенами на всех этапах культивирования клещей и получения аллергенных экстрактов клещей и повышает специфичность получаемых аллергенных экстрактов.

Способ получения питательной среды для культивирования клещей домашней пыли семейства Pyroglyphidae на основе утильных волос из электробритв, отличающийся тем, что утильные волосы из электробритв заливают смесью эфира и этилового спирта, взятых в соотношении 1:1, надосадочную жидкость фильтруют, полученный осадок высушивают и обрабатывают растворенным в стерильном физиологическом растворе амфотерицином В, причем амфотерицин В и утильные волосы из электробритв берут в соотношении соответственно 1:100, тщательно перемешивают смесь и высушивают ее при температуре 37-40°С до образования сыпучей массы.