СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОКАЗАНИЯ ДЛЯ БИОПСИИ ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ Российский патент 2010 года по МПК A61B10/00 

Изобретение относится к области медицины, а именно к урологии, и найдет применение для определения показания для биопсии предстательной железы.

Разработка способов определения показания для биопсии предстательной железы, пригодной для массовых скрининговых обследований, является одной из главных задач современной урологии.

В США ежегодно выявляется 300 тыс. новых случаев рака предстательной железы (РПЖ). 30 тысяч мужчин в год в США погибают от этой болезни. Проблема определения показания для биопсии предстательной железы крайне актуальна и в России, где ежегодно выявляется около 20000 новых случаев РПЖ. Заболеваемость составляет 25,6 на 100 тысяч населения. Годовой прирост составил 63,9% (Б.Я.Алексеев, К.М.Нюшко. Гормональная терапия больных раком предстательной железы. Ж. «Онкоурология», 2007-2008, М., спецвыпуск, с.2-5).

Существует множество способов определения показания для биопсии предстательной железы. Современный способ определения показания для биопсии предстательной железы основан на совместном применении определения простатоспецифического антигена (ПСА) и пальцевого ректального исследования (ПРИ), в сочетании с трансректальным ультразвуковым исследованием (ТРУЗИ) простаты. При сочетании этих методик биопсия предстательной железы является показанной у 80% пациентов. Но общепризнанно, что ПСА - стандартный, простатоспецифичный маркер, с канцерспецифичностью до 20% (Pannek J., Partin A.W., Prostate-specific antigen: whats new in 1997. Oncology (Williston Park) 1997; 11: 1273-82). Диагностическая ценность показателей, таких как соотношение свободного ПСА к общему, скорость увеличения ПСА, плотность и диапазон нормативных возрастных показателей ПСА, находится на стадии изучения.

Чувствительность ПРИ составляет не более 50%. Многие урологи находят данное исследование оправданным лишь для технического обеспечения биопсии.

Биопсия предстательной железы - единственный надежный инструмент для обнаружения существующего рака простаты (Чибичян М.Б., Коган М.И. Феномен миграции стадии рака предстательной железы после радикальной простатэктомии. Ж. «Вестник южного научного центра», Ростов-на-Дону, 2009, Том 5, № 1, стр.11-17). Однако даже при 10-12 точечной биопсии предстательной железы 10-35% мужчин при отрицательной первичной биопсии имеют рак при повторной биопсии. Урологи вынуждены повторять дискомфортные для пациентов биопсии предстательной железы, сопровождающиеся у 25% больных выраженным болевым синдромом, гематоспермией, гематурией (Djavan В, et al. J Urol 2000; 163:1144-9; Roehl KA, et al. J Urol 2002; 167:2435-9); Heidenreich A, et al. EurUrol 2008; 53:68-80 (EAU guidelines on prostate cancer 2008).

Несмотря на то, что биопсия остается «золотым стандартом» для выявления рака предстательной железы, для принятия решения о необходимости биопсии требуется разработка новых способов определения показания для биопсии предстательной железы.

Проведенными исследованиями по научно-медицинской и патентной литературе найдены различные способы определения показания для биопсии предстательной железы.

В исследовании I.Rehman, A.R.Azzouzi, J.W.F.Catto, S.Alien, S.S.Cross, K.Feely, M.Meuth, F.C.Hamdy Proteomic analysis of voided urine after prostatic massage from patients with prostate cancer: a pilot study. Urology 64:1238-1243, 2004, описан способ определения показания для биопсии предстательной железы, где у пациентов с подозрением на РПЖ исследовали мочу после массажа предстательной железы. Мочу центрифугировали для удаления клеток и инородных тел, проводили разделение и выделение белков-маркеров методом двумерного электрофореза в полиакриламидном геле и идентифицировали белки-маркеры. При обнаружении в моче белка Calgranulin B/MRP-14 биопсию предстательной железы считали показанной.

В том же исследовании описан другой способ определения показания для биопсии предстательной железы, где аналогичным способом исследовали мочу пациента, и при наличии в ней белка Transferrin chain A (36 kDa) биопсию предстательной железы считали показанной.

Недостатками вышеуказанных способов является малая специфичность маркеров, сложность технологической платформы: необходимость специального оборудования и штата специально обученного персонала, недостаточная достоверность.

Наиболее близким техническим решением, принятым нами в качестве прототипа, является способ определения показания для биопсии предстательной железы, описанный Bussemakers MJG, et al. (Cancer Res 1999; 59:5975-9), US Patent No. 5185439, при котором проводят исследование биологического материала - третьей порции мочи, после массажа предстательной железы. Способ основан на технологии амплификации нуклеиновых кислот, которая служит для выявления мРНК Простатического специфического гена 3 (Prostate Cancer Gene 3 (РСА3)) в образцах мочи мужчин. Мочу обрабатывают, добавляя Транспортную Среду для Мочи (ТСМ), с помощью которой происходит лизис клеток и стабилизация РНК. Далее в результате анализа рассчитывают количество РСА3 и мРНК PSA и по соотношению РСА3/мРНК PSA определяют индекс РСА3. При индексе РСА 3 более 100 - биопсию предстательной железы считают показанной.

Недостатком данного способа определения показания для биопсии предстательной железы является его сложность, дороговизна исследования, что препятствует возможности широкомасштабного внедрения в практику, недостаточная достоверность способа - 89%.

Целью настоящего изобретения является упрощение способа определения показания для биопсии предстательной железы, снижение стоимости его осуществления, повышение достоверности определения показания для биопсии предстательной железы.

Указанная цель достигается путем определения в биологической жидкости пациента - секрете предстательной железы активности (мкмоль × мин^-1 × л^-1) калликреина (КК) и активности (мкмоль × мин^-1 × л^-1) ангиотензин-превращающего фермента (АПФ). При выполнении условий 18,20≤КК≤58,62 и 32,16≤АПФ≤51,20 биопсию предстательной железы считают показанной.

Предлагаемый способ определения показания для биопсии предстательной железы осуществляют следующим образом.

У пациента после массажа предстательной железы осуществляют забор секрета предстательной железы, в котором определяют активность (мкмоль × мин^-1 × л^-1) калликреина (КК) и активности (мкмоль × мин^-1 × л¹) ангиотензин-превращающего фермента (АПФ).

Перед началом исследования секрет предстательной железы разводят в соотношении 1:9 физиологическим раствором до объема не менее 0,5 мл.

Активность калликреина определяют спектрофотометрическим методом по скорости гидролиза N-бензоил-1-аргинин этилового эфира (БАЭЭ) (Пасхина Т.С., Кринская А.В. Упрощенный метод определения калликреиногена и калликреина в сыворотке (плазме) крови человека в норме и при некоторых патологических состояниях. Вопросы медицинской химии. 1974; 20(6): 660-663).

Активность калликреина выражают в (мкмоль × мин^-1 × л^-1).

Активность ангиотензин-превращающего фермента (АПФ) определяют спектрофотометрическим методом с использованием синтетического субстрата АПФ - фурилакрилоилфенилаланил-глицилглицина (ФАГОТ) (Голиков П.П., Николаева Н.Ю. Экспресс-метод определения активности ангиотензин-превращающего фермента в сыворотке крови // Клин. Лаб. Диагностика. - 1998. - 1. - C.11-13).

Активность АПФ выражают в мкмоль × мин^-1 × л^-1.

Практическая реализуемость заявляемого способа определения показания для биопсии предстательной железы подтверждается примером из клинической практики.

Пример

Пациент Барсуков С.Л., 59 лет, поступил на амбулаторное обследование в клинику урологии Ростовского Госмедуниверситета (РостГМУ) с предварительным диагнозом - гиперплазия предстательной железы.

Жалобы: на учащенное и болезненное, затрудненное мочеиспускание. Анамнез болезни: указанные в жалобах симптомы имеют место в течение 2 лет.

Результаты проведенного ПРИ показали: границы предстательной железы нечеткие; железа - умеренно увеличена, уплотнена, неоднородна.

Оценка нарушений мочеиспускания по международной шкале оценки простатических симптомов (IPPS) - 18 баллов.

Общий анализ мочи - норма. Лабораторная диагностика: ПСА=9,426 нг/мл. Результаты ТРУЗИ предстательной железы: объем простаты - 26,3 см³; объем остаточной мочи - 70 см³.

Для определения показания к биопсии предстательной железы пациенту было проведено исследование согласно заявляемому способу.

У пациента после массажа предстательной железы осуществили забор секрета предстательной железы, в котором определяли активность концентрацию калликреина (КК) и активность ангиотензин-превращающего фермента (АПФ).

Перед началом исследования полученный секрет предстательной железы пациента развели в соотношении 1:9 физиологическим раствором до объема 0,5 мл.

Активность калликреина (КК) определяли спектрофотометрическим методом по скорости гидролиза N-бензоил-1-аргинин этилового эфира (БАЭЭ) (Пасхина Т.С., Кринская А.В. Упрощенный метод определения калликреиногена и калликреина в сыворотке (плазме) крови человека в норме и при некоторых патологических состояниях. Вопросы медицинской химии 1974; 20(6):660-663).

Активность калликреина выражали в мкмоль × мин^-1 × л^-1. Было получено значение КК=34,48 мкмоль × мин^-1 × л^-1.

Активность ангиотензин-превращающего фермента (АПФ) определяли спектрофотометрическим методом с использованием синтетического субстрата АПФ - фурилакрилоилфенилаланил-глицилглицина (ФАПГГ) (Голиков П.П., Николаева Н.Ю. Экспресс-метод определения активности ангиотензинпревращающего фермента в сыворотке крови // Клин. Лаб. Диагностика. - 1998. - 1. - C.11-13).

Активность АПФ выражали в мкмоль × мин^-1 × л^-1. Было получено значение АПФ=50,14 мкмоль × мин^-1 × л^-1.

Поскольку были выполнены условия

18,20≤КК=34,48≤58,62 и

32,16≤АПФ=50,14≤51,20,

биопсию предстательной железы посчитали показанной.

Пациенту была проведена биопсия предстательной железы. По результатам морфологическеого исследования биоптатов пациенту был поставлен диагноз - аденокарцинома предстательной железы T1cN0M0.

Поставленный диагноз подтвердил целесообразность и необходимость проведения у данного пациента биопсии предстательной железы.

В клинике урологии РостГМУ нами было проведено исследование согласно заявляемому способу 20 амбулаторным пациентам с подозрением на рак предстательной железы.

У всех пациентов полученные значения активности КК и активности АПФ соответствовали выполнению условий 18,20≤КК≤58,62 и 2,16≤АПФ≤51,20, поэтому согласно заявляемому способу биопсия предстательной железы им всем была показана.

19 пациентам по данным морфологического исследования был поставлен диагноз: рак предстательной железы. Таким образом, достоверность заявляемого способа определения показаний для биопсии предстательной железы составила 95%. Стоимость проведения исследования согласно заявляемому способу составила две тысячи рублей на одного пациента. Предлагаемый способ не требует штата специально обученного персонала, может проводиться в амбулаторных условиях и, следовательно, может быть широко внедрен в клиническую практику.

Стоимость проведения исследования по определению показаний для биопсии предстательной железы согласно прототипу составляет 350-400 евро. Достоверность метода - 89% (Groskopf J., S.M.Aubin, J.Mathis, J.Pham, P.Hodge, M.L.Macairan, L.S.Marks, and H.Rittenhouse. 2006. APTIMA PCA3 Molecular Urine Test: Development of a Method to Aid in the Diagnosis of Prostate Cancer. Clin Chem. 52: 1089-95; Shappel S.B. Clinical utiliti of prostate carcinoma molecular diagnostic tests. Rev Urol. 2008; 10(1): 44-69). Способ сложен в реализации, недостаточно достоверен, что препятствует возможности его широкомасштабного внедрения в практику.

Таким образом, по сравнению с прототипом предлагаемый способ определения показаний для биопсии предстательной железы более достоверен, прост в реализации и существенно экономически выгоден.

Изобретение относится к области медицины, а именно к урологии. Для определения показания для биопсии предстательной железы проводят исследование секрета предстательной железы. Определяют активность (мкмоль × мин^-1 × л^-1) калликреина (КК) и активность (мкмоль × мин^-1 × л^-1) ангиотензин-превращающего фермента (АПФ). При выполнении условий 18,20≤КК≤58,62 и 32,16≤АПФ≤51,20 биопсию предстательной железы считают показанной. Способ повышает достоверность определения показания для биопсии предстательной железы, прост в реализации и не требует значительных материальных затрат.

Способ определения показания для биопсии предстательной железы, предусматривающий исследование биологического материала, отличающийся тем, что в секрете предстательной железы определяют активность (мкмоль · мин^-1 · л^-1) калликреина (КК) и активность (мкмоль · мин^-1 · л^-1) ангиотензин-превращающего фермента (АПФ) и при выполнении условий 18,20≤КК≤58,62 и 32,16≤АПФ≤51,20 биопсию предстательной железы считают показанной.