АССОЦИИРОВАННАЯ ВАКЦИНА ПРОТИВ ОСПЫ ОВЕЦ И ЧУМЫ МЕЛКИХ ЖВАЧНЫХ ЖИВОТНЫХ Российский патент 2010 года по МПК A61K39/295 A61P31/12 

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к применению вакцинных препаратов для одновременной специфической профилактики оспы овец (OO) и чумы мелких жвачных животных (ЧМЖЖ).

За рубежом для профилактики этих болезней применяют вакцины, изготовленные из штаммов Peregro, RM/65 и Romanian вируса оспы овец [1, 2], а также штаммы «pprv 75/1 L К6 ВК2 Vero 70» и «Nigeria 75/1» вируса чумы мелких жвачных (Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals. PART 2. SECTION 2.1. Chapter 2.1.5. [Электронный ресурс] / OIE.. - www.oie.int/eng/normes/mmanual/A_0028htpn.

В настоящее время для профилактики чумы мелких жвачных животных и оспы овец широко применяются культуральные моновакцины. Так, в России и странах СНГ для конструирования вакцины против оспы овец рекомендованы вакцинные штаммы НИСХИ, ВНИИЗЖ и Б/5-96 [3-5]. Для изготовления вирусвакцины против чумы мелких жвачных используют штамм «45G37/35-К» [6]. Указанные штаммы выращивают в первичных культурах клеток почки ягненка (ПЯ) и перевиваемых культурах клеток почки овцы (ПО) и гонады козы (ГК). С этой же целью используют вакцинный штамм 45G37/35-K вируса ЧМЖ, адаптированный к перевиваемой культуре клеток почки сайги («Науч. осн. произ. ветер, биолог. препар.», 2005, стр.167-170) [7].

Вирусвакцины против оспы овец и чумы мелких жвачных безвредны для овец и коз, создают напряженный иммунитет на 7 и 21 сутки соответственно, продолжительностью не менее 12 месяцев. Прививная доза каждого штамма составляет не менее 1000 ТЦД₅₀.

Раздельное применение этих вакцин не может создать иммунитет у животных одновременно против двух болезней - оспы овец и чумы мелких жвачных, а также требует удвоенного количества материальных и трудовых затрат, оказывает дополнительное стрессовое воздействие на организм животных и, как следствие, снижение продуктивности.

Цель изобретения - создание ассоциированной вакцины против оспы овец и чумы мелких жвачных животных, обладающая высокой иммуногенностью, ареактогенностью, безвредностью для овец и коз и стабильностью при хранении.

Указанная цель достигается смешиванием культуральных вакцинных вирусов оспы овец (штамм Б/5-96) и чумы мелких жвачных животных (штамм 45G37/35-К), инфекционная активность которых составляет не менее 4,75 lg ТЦД₅₀/см³, со стабилизатором со следующим содержанием компонентов в вакцине (об.%): культуральный вирус оспы овец - 22,0-27,0; чумы мелких жвачных животных - 22,0-27,0; лактозо-пептонный либо ГЛА-сахарозо-желатиновый стабилизатор - 40,0-44,0, дистиллированная вода - остальное.

Вируссодержащий культуральный материал объединяют с лактозо-пептонным либо с ГЛА-сахарозо-желатиновым стабилизатором и лиофилизируют. Инфекционная активность каждого вируса в лиофилизированной ассоциированной вакцине составляет не менее 4,5 lg ТЦД₅₀/см³, что соответствует 30 прививным дозам. В одной прививной дозе содержится не менее 3,0 lg ТЦД₅₀/см³ вакцинного штамма каждого вируса. Расчет количества прививных доз проводят по вирусу, имеющего в ассоциированной вакцине наименьшую биологическую активность.

Предлагаемая ассоциированная вакцина создает иммунитет у однократно привитых овец и коз на 21 сутки одновременно против оспы овец и чумы мелких жвачных, при этом по иммуногенности она аналогична моновакцинам, применяемым против этих болезней, и стабильна при хранении.

Примеры конкретного выполнения

Пример 1.

К 22,0 мл культурального вируса оспы овец штамм Б/5-96 с активностью 4,75 lg ТЦД₅₀/см³ добавляют 22,0 мл культурального вируса чумы жвачных штамм 45G37/35-K с активностью 5,0 lg ТЦД₅₀/см³ и 40,0 мл лактозо-пептонного стабилизатора (лактоза - 4,0%, пептон - 20,0%) и 16,0 мл дистиллированной воды.

Смесь перемешивают, фасуют в ампулы по 1,0 мл и лиофилизируют до содержания массовой доли влаги в пределах 2,0-4,0%. Отпайку ампул проводят под вакуумом.

Пример 2.

К 27,0 мл культурального вируса оспы овец штамм Б/5-96 с активностью 4,75 lg ТЦД₅₀/см³ добавляют 27,0 мл культурального вируса чумы жвачных штамм 45G37/35-K с активностью 5,0 lg ТЦД₅₀/см³ и 44,0 мл ГЛА-сахарозо-желатинового стабилизатора (сахароза - 10,0%, желатин - 2,0%) и 2,0 мл дистиллированной воды.

Смесь перемешивают, фасуют в ампулы по 1,0 мл и лиофилизируют до содержания массовой доли влаги в пределах 2,0-4,0%.

Биологические свойства и физико-химические показатели приготовленной таким образом 3-х серий ассоциированной вакцины представлены в табл.1.

Таблица 1 Биологические и физико-химические показатели ассоциированной вакцины Характеристика вакцины Результаты определения биологических и физико-химических свойств вакцины по сериям Серия №1 Серия №2 Серия №3 Титр вируса OO, lg ТЦД₅₀/см³ 4,5 4,5 4,66 Титр вируса ЧМЖ, lg ТЦД₅₀/см³ 4,83 4,75 4,75 Массовая доля влаги, % 2,7 3,2 3,0 Количество доз в 1,0 см³ 30 30 45 Цвет и форма таблетки Гомогенная таблетка светло-коричневого цвета Гомогенная таблетка светло-коричневого цвета Гомогенная таблетка светло-желтого цвета

Лиофилизированная вакцина представляет собой гомогенную пористую таблетку от светло-желтого до светло-коричневого цвета с массовой долей влаги от 2,7 до 3,2%. Титр вакцинного вируса оспы овец и чумы мелких жвачных составляет 4,5-4,75 lg ТЦД₅₀/см³ и 4,75-4,83 lg ТЦД₅₀/см³ соответственно.

В 1,0 см³ (ампуле) ассоциированного препарата содержится от 30 (серия №1 и №2) до 45 (серия №3) прививных доз вакцины.

Пример 3.

В экспериментах на овцах показано, что ассоциированная вакцина по иммуногенности отвечает требованиям МЭБ к моновакцинам против оспы овец и чумы мелких жвачных животных. Иммуногенность вакцины оценивали по результатам контрольного заражения овец вирулентным вирусом ОО штамм «Монгольский» и по уровню ВН-антител к вирусам ЧМЖЖ и ОО.

Результаты проверки иммуногенности ассоциированной вакцины серия 1 приведены в табл.2.

Таблица 2 Иммуногенность ассоциированной и моновакцин против оспы овец и чумы мелких жвачных животных Группа и кол-во
животных Кол-во доз вак-ны Температурная реакция на прививку (°С) Титр ВН-антител (14-21 сут) Реакция на контрольное заражение длит. темп. р-ии (сут) макс. темп. (°С) вирус OO вирус ЧМЖЖ Вирусвакцина против оспы овец сухая культуральная. ТУ 9384-014-00495549-98 I (2 гол.) 1 ПВД - - 1:2-1:4 - Отсутствует Вирусвакцина против чумы мелких жвачных животных сухая культуральная. ТУ 9384-06-00495549-04 II (2 гол.) 1 ПВД 1 40.3 (5 сут) - 1:16-1:64 Отсутствует Ассоциированная вакцина против оспы и чумы мелких жвачных животных III (4 гол.) 1 ПВД 2 40.4 1:2-1:4 1:32-1:128 Отсутствует IV (2 гол.) 10 ПВД 3 40.6 1:4-1:8 1:64 На 4-6 сут у одного ягненка подъем t° тела до 40,5°С V (2 гол.) Контроль         Угнетение, анарексия, папулезно-пустулезные поражения на коже, кератит, t° на 4-12 сут до 41,6°С

Таким образом, испытуемая серия вакцины отвечала требованиям МЭБ, предъявляемым к монопрепаратам против этих болезней, индуцировала образование в защитных титрах ВН-антител к BOO и ВЧМЖ (1:64-128) и предохраняла животных от заражения вирулентным BOO штамм «Монгольский». Вакцина безвредна для овец в 10-кратной прививной дозе.

Пример 3.

В течение 12 месяцев хранения была изучена сохраняемость ассоциированной вакцины при различных температурных режимах. Результаты этих опытов приведены в табл.3.

Таблица 3 Инфекционная активность штаммов в составе вакцины при различных температурных режимах хранения Серия вакцины Вакцинный вирус Исходный титр, lg ТЦД₅₀/см³ Температура хранения (°С) Активность при хранении 3 мес 6 мес 12 мес 1 OO 4,5 4,0±4,0 4,5 4,5 4,5 20,0±2,0 4,5 4,25 3,75 ЧМЖЖ 4,83 4,0±4,0 4,83 4,83 4,83 20,0±2,0 4,75 4,5 4,0 2 OO 4,5 4,0±4,0 4,5 4,5 4,5 20,0±2,0 4,5 3,75 3,75 ЧМЖЖ 4,75 4,0±4,0 4,75 4,75 4,75 20,0±2,0 4,5 4,0 3,5

Как видно из табл.3, при рекомендуемой температуре хранения (4,0±4,0)°С вакцина, штаммы вируса оспы овец и чумы мелких жвачных животных сохраняют исходную активность в течение 12 мес. В то же время при хранении вакцины при (20,0±2,0)°С уже через 3 мес наблюдалось снижение ее активности.

Иммунобиологические свойства вакцины подтверждены во внутриинститутских комиссионных испытаниях.

Источники информации

1. Fassi - Fehri M Etude experimentale de 1 immunitete anticlavelense post-vaccinale / Ann. Rech. Vet. 1984, v.15, №1, p.59-64.

2. Jadhan К. M., Pandey A.K., Radatin N.S. Field observation on sheep pox tissue culture vaccine. / Indian vet. J. 1989, v.66, №10, p.908-912.

3. Иванющенков В.Н., Кореба О.В., Кекух В.Г., Уфимцева Т.Н., Уфимцев К.П., Зайцев В.А., Курченко Ф.П. Биологические свойства вакцинного штамма НИСХИ вируса оспы овец / Ветеринария, 1990, №8, с.22-24.

4. Диев В.И. Оспа овец и ее профилактика вакциной из штамма ВНИИЗЖ / Современные аспекты патологии животных: докл. конф., посвящ. 40-лет. ВНИИЗЖ. - Владимир, 1988, с.111-124.

5. Балышев В.М. и др. Вирусвакцина против оспы овец сухая культуральная, результаты разработки и производственных испытаний / Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными, экзотическими и зооантропонозными болезнями животных. Сб. ст.: Материалы Международной науч.-практ. конф., посвященной 75-летию со дня рождения И.А.Бакулова / ГНУ ВНИИВВиМ. - Покров, 2000, с.131-133.

6. Патент РФ №2284193 от 27.09.2006 г., авторы: Курченко Ф.П., Евсеев A.M., Балышев В.М., Жестерев В.И., Горшкова Т.Ф., Калантаенко Ю.Ф., Луницин А.В., Уфимцев К.П., Михалкин И.П.

7. В.М. Балышев, Михалкин И.П., Т.Ф. Горшкова, А.Н. Жуков, Ф.А. Бадаев. Изучение иммунобиологических свойств аттенуированного штамма «45G37/36-K вируса чумы мелких жвачных, выращенных в перевиваемой культуре клеток почки сайги / Науч. основы произ. ветер.биолог.преп.: матер. Международной науч.-практ. конф., посвященной 35-летию ин-та. Щелково, 2005, с.167-170.

Изобретение относится к области ветеринарии. Вакцина содержит суспензию культуральных вакцинных штаммов Б/5-96 вируса оспы овец и 45G37/35-K вируса чумы мелких жвачных животных с активностью не менее 4,5 lg ТЦД₅₀/см³, лактозо-пептонный или сахарозо-желатиновый стабилизатор и деминерализованную воду при следующем содержании компонентов, об.%: вакцинный штамм Б/5-96 вируса оспы овец 22,0-27,0, вакцинный штамм 45G37/35-K вируса чумы мелких жвачных животных - 22,0-27,0, лактозо-пептонный или сахарозо-желатиновый стабилизатор - 40,0-44,0 деминерализованная вода - остальное. Вакцина обладает высокой иммуногенностью и ареактогенностью, безвредна и стабильна при хранении. 3 табл.

Ассоциированная вакцина против оспы овец и чумы мелких жвачных животных, отличающаяся тем, что она содержит суспензию культуральных вакцинных штаммов Б/5-96 вируса оспы овец и 45G37/35-K вируса чумы мелких жвачных животных с активностью не менее 4,5 lg ТЦД₅₀/см³, лактозо-пептонный или сахарозо-желатиновый стабилизатор и деминерализованную воду при следующем содержании компонентов, об.%:
вакцинный штамм Б/5-96 вируса оспы овец 22,0-27,0 вакцинный штамм 45G37/35-K вируса чумы   мелких жвачных животных 22,0-27,0 лактозо-пептонный или сахарозо-желатиновый   стабилизатор 40,0-44,0 деминерализованная вода остальное