АССОЦИИРОВАННАЯ ВАКЦИНА ПРОТИВ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ И ЧУМЫ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА Российский патент 2006 года по МПК A61K39/07 A61K39/187 A61P31/00 

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к применению биологических препаратов для одновременной специфической профилактики сибирской язвы и чумы крупного рогатого скота.

В настоящее время известна вакцина против сибирской язвы, представляющая собой суспензию живых спор бескапсульного авирулентного вакцинного штамма «55-ВНИИВВиМ» [1].

Известна также культуральная вирусвакцина против чумы крупного рогатого скота, изготовленная из вакцинного штамма «ЛТ» [2, 3].

За рубежом для профилактики этих болезней применяются вакцины, изготовленные из штаммов 34F₂ (Sterne) и Вейбридж возбудителя сибирской язвы, а также из штамма TCRV и Plowright W. вируса чумы крупного рогатого скота [4, 5].

Существующие вакцины используются независимо друг от друга и их применение не может создать иммунитет у животных одновременно против сибирской язвы и чумы КРС. Использование этих вакцин в отдельности требует удвоенного количества трудозатрат и оказывает дополнительное стрессовое воздействие на организм животных.

В литературе описаны результаты исследований по разработке ассоциированных вакцин на основе антигенов бактериальной и вирусной природы: против сибирской язвы и оспы овец с использованием сибиреязвенного вакцинного штамма «ГНКИ» и вакцинного штамма «К» вируса оспы овец [6]: ассоциированной вакцины против сибирской язвы и оспы овец с использованием вакцинного штамма «55-ВНИИВВиМ» сибирской язвы и штамма «НИСХИ» оспы овец [7]; ассоциированной вакцины против сибирской язвы и ящура [8]; инактивированной ассоциированной поливалентной вакцины против ящура и чумы КРС [9].

Материалов по созданию ассоциированной вакцины против сибирской язвы и чумы крупного рогатого скота в доступной литературе не обнаружено.

Цель изобретения - создание ассоциированной вакцины против сибирской язвы и чумы крупного рогатого скота, обладающей высокой иммуно-генностью, ареактогенностью, безвредностью, стабильностью при хранении и индуцирующей формирование равноценного напряженного иммунитета, обеспечивающего защиту животных от заражения культурами вирулентных штаммов возбудителей сибирской язвы и вируса чумы КРС. Применение ее в животноводстве позволит существенно снизить трудозатраты ветеринарных специалистов, уменьшить стрессовое воздействие на организм животных при проведении прививок, в более короткие сроки создавать стойкое благополучие по отношению к инфекционным болезням микробной и вирусной этиологии.

Указанная цель достигается смешиванием суспензии спор вакцинного сибиреязвенного штамма «55-ВНИИВВиМ» с культуральным вируссодержащим сырьем вакцинного вируса чумы крупного рогатого скота штамма «ЛТ» и стабилизатором с последующей лиофилизацией со следующим содержанием компонентов в вакцине (объемных %): споры сибиреязвенного штамма - 6,2-10,0; культуральное сырье вируса чумы КРС - 25,0-30,0; лактозопелтонный стабилизатор - 48,0-50,0; дистиллированная вода - остальное.

Биологическая активность приготовленной таким образом вакцины составляет: по сибиреязвенному компоненту 500-700 млн.спор/см³, по вирусному компоненту не ниже 7,0 lg ТЦД₅₀/см³, что соответствует 20-30 прививным дозам. В одной прививной дозе вакцины содержится 20-25 млн. сибиреязвенных спор и 4,5-5,5 lg ТЦД₅₀ вируса чумы крупного рогатого скота.

В результате проведенных экспериментов установлено, что предлагаемая ассоциированная вакцина против сибирской язвы и чумы крупного рогатого скота, изготовленная из сибиреязвенного штамма «55-ВНИИВВиМ» и культурального штамма «ЛТ» вируса чумы крупного рогатого скота создает иммунитет у однократно привитых животных через 10-12 суток одновременно против сибирской язвы и чумы КРС длительностью не менее 12 месяцев (срок наблюдения). По иммуногенности она не уступает моновакцинам, применяемым при этих болезнях, и стабильна при хранении. Примеры конкретного выполнения:

Пример 1.

К 25,0 мл культурального вируссодержащего сырья вируса чумы крупного рогатого скота штамм «ЛТ», с активностью 7,0 lg ТЦД₅₀/мл, добавляют 6,2 мл суспензии спор штамма «55 ВНИИВВиМ» возбудителя сибирской язвы, 48,0 мл лактозопептонного стабилизатора (пептон - 20%, лактоза - 4%) и 20,8 мл дистиллированной воды. Исходная концентрация сибиреязвенного компонента в готовой смеси составляет 500-700 млн.спор/см³. Смесь перемешивают и лиофильно высушивают до содержания массовой влаги в пределах 1-4%.

Вакцина представляет собой гомогенную пористую таблетку от светло-коричневого до коричневого цвета.

Результаты испытания биологических свойств и физико-химических показателей приготовленных таким образом 4-х серий ассоциированной вакцины приведены в таблице 1.

Таблица 1
Биологические свойства и физико-химические показатели ассоциированной вакциныХарактеристики вакциныРезультаты определения биологических и физико-химических свойств по сериямСерия №1Серия №2Серия №3Серия №4Содержание жизнеспособных спор шт. 55-ВНИИВВиМ.750 млн.500 млн.676 млн.630 млн.спор/см³спор/см³спор/см³спор/см³Содержание вируса7,5 lg6,5 lg7,0 lg7,0 lg(титр) чумы КРС.ТЦД₅₀/см³ТЦД₅₀/см³ТЦД₅₀/см³ТЦД₅₀/см³Массовая доля спор штамма 55-ВНИИВВиМ.98%98%98%98%Массовая доля влаги, %2,82,62,52,6Количество доз в 1 см³ вакцины.30202825

Пример 2.

В экспериментах на морских свинках, кроликах и телятах показано, что ассоциированная вакцина не уступает по иммуногенности моновакцинам против сибирской язвы и чумы крупного рогатого скота, изготовленных из этих штаммов.

Результаты проверки иммуногенности 3-х серий ассоциированной вакцины приведены в таблице 2.

Процент защиты морских свинок, зараженных референсзаражающей культурой возбудителя сибирской язвы штамм М-71 через 10-12 суток после вакцинации, составил для ассоциированного препарата 92,6%, а для сибиреязвенной моновакцины 86,7%. Вакцина предохраняла от заболевания 100% привитых телят, зараженных вирулентным штаммом №76 сибирской язвы и вирулентным штаммом «О» вируса чумы крупного рогатого скота. Аналогичные результаты были получены при контрольном заражении животных через 8 месяцев после иммунизации.

Таблица 2
Сравнительная характеристика показателей иммуногенности моно- и ассоциированной вакцин против сибирской язвы и чумы крупного рогатого скотаВакцинаВид животногоКол - во
животных (голов)Титры антител через 21 сутки после вакцинацииРезультаты контрольного зараженияРНГА (к B.anthracis)РН (к вирусу ЧКРС)Голов% защитыВыжилоПалоАссоциированнаяморские свинки27--25292,6телята11:3201:3:10100кролики6-1:32-1:64---Сибиреязвенная моновакцинаморские свинки30--26486,7телята21:160-1:320-20100Моновакцина против чумы КРСтелята2-1:3220100кролики3 1:32-1:64   Контрольморские свинки15--0150телята2--020

У вакцинированных животных проводили гематологический анализ (общая картина крови и лейкоформула) и получали сыворотку крови для исследования на наличие соответствующих антител. Пробы крови отбирали до вакцинации и через 5, 7, 14 и 21 сутки после нее. Через 21 сутки после введения вакцины у телят титр противосибиреязвенных антител в РНГА составил 1:320, а титр противовирусных антител в РН на культуре клеток ПС равнялся 1:32; у кроликов титр противовирусных антител составлял 1:32-1:64 (на 14-28 сутки).

В результате проведенных экспериментов установлено, что предлагаемая ассоциированная вакцина против сибирской язвы и чумы КРС создает у однократно привитого крупного рогатого скота напряженный иммунитет к этим инфекциям продолжительностью не менее 12 месяцев и не уступает выпускаемым в настоящее время моновакцинам против этих болезней.

Пример 3.

Изучена сохраняемость сухой ассоциированной вакцины при температурах 4±2°С (рекомендуемая температура хранения), 18±2°С и 37±2°С. Результаты приведены в таблице 3.

Как видно из таблицы, при рекомендуемой температуре хранения (4±2°С) компоненты вакцины сохраняют исходную активность в течение 12 месяцев (срок наблюдения). Активность ассоциированного препарата при 18±2°С хранения в течение 4 месяцев остается на исходном уровне, что важно при использовании вакцины в южных регионах России.

Таблица 3
Сохраняемость ассоциированной вакцины при различных
температурных режимах.Серия вакциныКомпонентТемпература хранения °СИсходная активностьАктивность при хранении1 мес.2 мес.4 мес.8 мес.12 мес.14 мес.№3Сибиреязвенный4±2°676±25655±18674±22675±21672±17681±24638±1818±2°676±25650±19637±18644±22574±18453±17323±1437±2°676±25545±22390±14351±17310±14265±12210±12Вирусный4±2°7,07,07,07,07,07,07,018±2°7,07,06,56,55,254,0-37±2°7,06,255,254,0---Примечание: активность сибиреязвенного компонента (шт.55-ВНИИВВиМ) выражена в млн.спор/см³, вирусного (шт.ЛТ) - в lg ТЦД₅₀/см³.

Литература

1. Патент № 2095409, 1997, Бакулов И.А., Гаврилов В.А., Селиверстов В.В. и др. "Способ изготовления вакцины против сибирской язвы жи вотных".

2. ТУ 10-07-081-92 "Вирусвакцина из штамма "ЛТ" против чумы крупного рогатого скота лиофинизированная".

3. Митин Н.И., Петров Ю.И. Лиофилизированная вирусвакцина из штамма «ЛТ» против чумы крупного рогатого скота. Материалы научно-практической конф., Покров, 1992, с.146-147.

4. Г.Г.Онищенко и др. «Сибирская язва: актуальные аспекты микробиологии, эпидемиологии, клиники, диагностики, лечения и профилактики», 1999 - 448 с. "Ветеринария" 1989. - №3. - С.71-72.

5. Plowright W., Ferris R. Cytopathogeniutu of rinder pest virus in tissues culture. Nature, 1957, v.179, N7, p.708-712.

6. Лихачев Н.В., Колосов С.Г., Борисович Ю.Ф., Преснов И.И. "Ассоциированная вакцинация овец против сибирской язвы и оспы". Тр. ГНКИ ветпрепаратов, 1967. - Т.14. - С.35-44.

7. Патент №2181296, 2002, Балышев В.М., Селянинов Ю.О., Бакулов И.А. и др. Ассоциированная вакцина против сибирской язвы и оспы овец.

8. Патент №2056861, 1996, Бакулов И.А., Гаврилов В.А., Собакин А.С. и др. Ассоциированная вакцина против сибирской язвы и ящура и способ профилактики сибирской язвы и ящура.

9. ТУ 9384-102-0049552-94 "Инактивированная ассоциированная поливалентная вакцина против ящура и чумы КРС".

Изобретение относится к области биотехнологии. Вакцина содержит суспензию жизнеспособных спор сибиреязвенного вакцинного штамма «55-ВНИИВВиМ» в исходной концентрации 500-700 млн.спор/см³, культуральное вируссодержащее сырье вакцинного вируса чумы крупного рогатого скота штамма «ЛТ» с активностью не менее 7,0 lg ТЦД₅₀/см³, лактозопептонный стабилизатор и дистиллированную воду при следующем содержании компонентов, %: споры сибиреязвенного штамма «55-ВНИИВВиМ» - 6,2-10,0; культуральное сырье вируса чумы КРС штамма «ЛТ» - 25,0-30,0; лактозопептонный стабилизатор - 48,0-50,0; дистиллированная вода - остальное. В одной прививной дозе вакцины содержится 20-25 млн. сибиреязвенных спор и 4,5-5,5 lg ТЦД₅₀ вируса чумы крупного рогатого скота. Вакцина обладает высокой иммуногенностью, создает у однократно привитого крупного рогатого скота напряженный иммунитет продолжительностью не менее 12 месяцев, ареактогенна, безвредна и стабильна при хранении. 3 табл.

Ассоциированная вакцина против сибирской язвы и чумы крупного рогатого скота, содержащая суспензию жизнеспособных спор сибиреязвенного вакцинного штамма «55-ВНИИВВиМ» в исходной концентрации 500-700 млн спор/см³, культуральное вируссодержащее сырье вакцинного вируса чумы крупного рогатого скота штамма «ЛТ» с активностью не менее 7,0 lg ТЦД₅₀/см³, лактозопептонный стабилизатор и дистиллированную воду при следующем содержании компонентов в вакцине, об.%:

Споры сибиреязвенного штамма «55-ВНИИВВиМ»6,2-10,0Культуральное сырье вируса чумы КРС штамма «ЛТ»25,0-30,0Лактозопептонный стабилизатор48,0-50,0Дистиллированная водаОстальное