КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ ЭПОПРОСТЕНОЛ, И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ Российский патент 2011 года по МПК A61K31/557 A61K31/5585 A61K47/02 A61K47/16 A61K47/26 A61J3/00 A61K9/08 A61K9/19 A61P9/00 

Данная заявка претендует на приоритет Предварительных заявок на патент США №60/764,769, подана 3 февраля 006; №60/772,563, подана 13 февраля 2006; и №60/783,6429, подана 20 марта 2006; которые в полном объеме включены в настоящее описание в качестве ссылки.

Область техники, к которой относится изобретение

Данное изобретение относится к стабильным содержащим эпопростенол композициям, которые можно комбинировать с имеющимися в продаже вводимыми внутривенно жидкостями, для парентерального применения в условиях окружающей среды при приблизительно 15-30°С в течение более 24 часов.

Предшествующий уровень техники

Сердечно-сосудистые расстройства и заболевания, а также связанные с ними осложнения, являются основной причиной нетрудоспособности и смерти пациентов в Соединенных Штатах и Западной Европе. Например, в последние годы более 500000 смертельных исходов в год в одних только Соединенных Штатах происходят в результате болезни коронарных артерий, и кроме того, 700000 пациентов госпитализируются с инфарктом миокарда.

Происходит непрерывный поиск эффективного долгосрочного лечения расстройств и заболеваний сердца и артерий, таких как атеросклероз, артериосклероз, застойная сердечная недостаточность, стенокардия и другие расстройства и заболевания, связанные с сердечно-сосудистой системой. Предшествующие способы лечения таких расстройств и заболеваний включают, например, применение сосудорасширяющих средств, пластики сосудов и операции по шунтированию. Такие способы лечения встречали неодобрение по причине уровня риска по сравнению с пользой, полученной при разнообразных способах лечения. Кроме того, такие способы лечения имеют серьезные недостатки, касающиеся эффективности при длительном применении. Применение сосудорасширяющих лекарств и механического вмешательства при острых и хронических окклюзионных заболеваниях сосудов сердца, центральной и периферической сердечно-сосудистой системы до настоящего момента является неэффективным для получения благоприятных долгосрочных результатов. Применяемые в настоящее время способы лечения в минимальной степени влияют на исход заболевания, поскольку способы лечения в большей степени направлены на происходящие при заболевании процессы, чем на изначальную молекулярную причину заболевания или расстройства.

Например, разумным объяснением действия вазоактивных лекарственных композиций является понижение кровяного давления путем прямого или опосредованного воздействия на гладкие мышцы сосудов и/или сердца, тем самым уменьшая сопротивление сосудов и нарушение кровотока. Такие лекарства не лечат изначальную причину повышенного давления и нарушения кровотока. Скорее, они пытаются уменьшить влияние заболевания или расстройства. Такие лекарства активируют симпатическую нервную систему через барорецепторный рефлекс, что увеличивает частоту сердечных сокращений и силу сокращений миокарда, что не всегда является необходимым для достижения положительного воздействия. Другие побочные эффекты таких лекарств включают головную боль, сердцебиение, тревожность, легкую степень депрессии, сухость во рту, неприятный вкус во рту, тошноту, рвоту, стенокардию, инфаркт миокарда, застойную сердечную недостаточность, пониженный минутный объем сердца, задержку жидкости, утомление, слабость и другие. Фармакологическое лечение большинства заболеваний не является очень специфичным по своему действию на изначальную молекулярную причину течения болезни, и лечат очень ограниченный спектр эффектов при заболеваниях, которые являются многофакторными.

В качестве дополнительного примера такой улучшенный исход при атеросклерозе сосудов наблюдается при понижении уровня холестерина и при лекарственном лечении заболеваний, связанных с липидами. Однако данные способы лечения не лечат нарушения свертываемости крови, связанные с данными заболеваниями, которые, как известно, являются проксимальными явлениями, вызывающими сердечный приступ и инсульт. Они не предотвращают клеточные или молекулярные реакции, относящиеся к тромбоцитам, макрофагам, нейтрофилам, лимфоцитам, клеткам гладких мышц, а также другими типами клеток, которые, как известно, вовлечены в атеросклероз и осложнения данного заболевания.

Подобным образом тромболитическая терапия, пластика сосудов и операция по шунтированию имеют минимальный успех в долгосрочном периоде. Применяемые в настоящее время механические и фармакологические способы лечения сосредоточены на частном случае частичной или полной окклюзии или закупоренном сосуде, в конкретном месте при этом либо устраняют закупоривание, либо сосуд шунтируют при помощи соединяющих сосудов. Данные способы лечения не могут быть направлены на физиологические нарушения в нормальных гомеостатических системах, которые позволяют окклюзионным процессам начинаться и развиваться. Подобным образом они не могут быть направлены на мультицентровую природу гомеостатических нарушений. Данные недостатки часто приводят к рецидивирующей окклюзии в первоначально вылеченном сосуде и к микроэмболии из-за неполного растворения тромба при лечении в месте окклюзии. Не существует никакого лечения для мест, предположительно неправильно окклюдированных или стенотизированных, которые предположительно должны поддаваться имеющимся в настоящее время грубым технологиям.

Существует огромная потребность в способе лечения, который предотвращает неуспех нормального гомеостатического контроля и который восстанавливает этот контроль при начале развития нарушений.

Возвращение внутренних регулятивных систем и клеточных доменов к здоровому состоянию могло бы предотвратить стеноз, окклюзию, тромбоз и тромбоэмболические процессы, которые имеют место вследствие данных нарушений. Постоянное и эпизодическое восстановление контроля в нормальных молекулярных процессах, которые в конечном итоге регулируют гомеостаз, могут предотвратить атеросклероз, его варианты, гипертонию, застойную сердечную недостаточность, макро- и микротромбоз и тромбоэмболию, а также осложнения при данных заболеваниях, включающие (но не органичивающиеся ими) инфаркт миокарда, инсульт, связанное с ними заболевание почек, связанные с ними заболевания центральной и периферической нервной системы, а также связанные с ними заболевания других систем клеток. Дополнительно, быстрое восстановление гомеостатического контроля при ускорении и накоплении поражающих процессов может свести к минимуму как степень, так и длительность последствий на атомном, молекулярном уровнях, уровнях мембраны, клетки, и органа.

Эпопростенол (PGI₂, PGX, простациклин), метаболит арахидоновой кислоты, представляет собой природный простагландин, обладающий потенциальным сосудорасширяющим действием, а также ингибирующим действием относительно агрегации тромбоцитов. Эпопростенол представляет собой (5Z,9(альфа),11(альфа),13Е,15S)-6,9-эпокси-11,15-дигидроксипроста-5,13-диен-1-оевую кислоту. Эпопростенол натрия имеет молекулярную массу 374,45 и молекулярную формулу C₂₀H₃₁NaO₅ и был одобрен Управлением по продовольствию и лекарствам США (U.S. FDA) как Flolan (продававшийся GlaxoSmithKline) 20 сентября 1995 для лечения пациентов с сердечно-сосудистым обструктивным заболеванием легких.

Flolan для инъекций представляет собой стерильную натриевую соль эпопростенола, составленную для внутривенного (IV) введения. Каждая ампула лиофилизорованного Flolan содержит эпопростенол натрия в количестве, эквивалентном 0,5 мг или 1,5 мг эпопростенола, 3,76 мг глицина, 2,93 мг хлорида натрия и 50 мг маннита. Также может быть добавлен гидроксид натрия для регулирования рН.

Flolan представляет собой белый или желтоватый порошок, который должен быть восстановлен стерильным разбавителем для Flolan. Стерильный разбавитель для Flolan поставляется в стеклянных ампулах, содержащих 94 мг глицина, 73,5 мг хлорида натрия, гидроксид натрия (добавлен для регулирования рН) в 50 мл воды для инъекций, USP. Восстановленный раствор Flolan имеет рН от 10,2 до 10,8 и является тем нестабильнее, чем ниже рН.

Эпопростенолнатрий (Формула I), экзоциклический виниловый простой эфир, быстро гидролизуется, согласно определяемой рН зависимости, до 6-кето-PGF (Формула II). Формула I и формула II представлены ниже:

Химическая природа эпопростенола, особенно потенциальная гидролитическая неустойчивость, делает очень трудной разработку содержащей его устойчивой композиции. Винилэфирное производное PGI₂-Na лучше всего стабилизируется в растворе посредством использования буферного раствора в условиях щелочной среды (>рН 8,8). Время полужизни эпопростенола натрия в воде, т.е. время, за которое теряется 50% его эффективности в виде зависимости от рН представлен ниже в таблице 1:

Таблица 1 Стабильность эпопростенола в растворе при рН от 7,2 до 9,3 Температура (С) РН Время полураспада 0 8,9 21,0 23 8,9 4,4 23 9,3 10,33 23 7,2 0,033

Как показано в таблице, 1,50% эпопростенола разлагается приблизительно за 10 часов при рН 9,3 при 23°С. Для того чтобы изготовить стерильную лекарственную форму, соединение должно не терять эффективности, по меньшей мере, в течение 12 часов предпочтительно в условиях окружающей среды. Если это является недостижимым, соединение должно быть стабильно при 4°С приблизительно в течение 12 часов для его использования в условиях охлаждения.

Flolan поставляют в лиофилизированном виде в ампуле вместе с ампулой, которая содержит 50 мл стерильного разбавителя, буферизованного глицином и сделанного изотоническим при помощи хлорида натрия. рН изотонического раствора регулируется в интервале от 10,2 до 10,8 при помощи гидроксида натрия. Ампулу с лиофилизированным содержимым восстанавливают при помощи специального разбавителя и используют для пациентов, страдающих сердечно-сосудистыми заболеваниями.

Flolan следует восстанавливать только данным стерильным разбавителем для Flolan. Восстановленные растворы Flolan не следует разбавлять или применять с другими парентеральными растворами или медикаментами. Восстановленные растворы Flolan следует защищать от света и хранить в холодильнике при 2-8°С (36-46°F), в том случае, если их не используют немедленно. Находящийся в холодильнике раствор, однако, может храниться только в течение двух дней, после истечения этого срока его следует выбросить. Кроме того, восстановленный раствор нельзя замораживать, если раствор был заморожен, его следует выбросить.

Таким образом, остается потребность в содержащих эпопростенол композициях, которые можно восстанавливать при помощи имеющихся в продаже внутривенно вводимых жидкостей и которые после восстановления до их применения не нужно хранить в холодильнике.

Краткое описание изобретения

Автор данного изобретения неожиданно обнаружил, что раствор эпопростенола в присутствии подщелачивающего средства при высоких рН (>11) по сравнению с Flolan является очень стабильным. Соответственно, одна из задач настоящего изобретения заключается в том, чтобы предложить фармацевтические композиции, содержащие эпопростенол или его соль, а также, по меньшей мере, одно подщелачивающее средство с рН>11. Композиция характеризуется повышенной стабильностью после восстановления при помощи имеющихся в продаже внутривенно вводимых (IV) жидкостей. При восстановлении и/или разбавлении при помощи имеющихся в продаже внутривенно вводимых жидкостей стабильность данной композиции характеризуется, по меньшей мере, 90% от стабильности исходного эпопростенола, сохраняясь после 24-48 часов при 15-30°С.

Другой задачей настоящего изобретения является предложить способы получения лиофилизированных фармацевтических композиций, содержащих эпопростенол и подщелачивающее средство. Такая лиофилизированная композиция при восстановлении имеет рН>11.

Еще одна задача настоящего изобретения заключается в том, чтобы предложить способы введения восстановленных лиофилизированных фармацевтических композиций, содержащих эпопростенол и подщелачивающее средство с высоким рН. Восстановленный раствор предпочтительно применяют для лечения сердечно-сосудистых заболеваний, таких как атеросклероз, артериосклероз, застойная сердечная недостаточность, стенокардия, сердечно-сосудистое обструктивное заболевание легких и гипертония.

Главные преимущества настоящего изобретения включают гемосовместимость и самосохранение (способность проходить тест на эффективность консервирования Фармакопеи США (USP) без присутствия консервантов) восстановленного и/или разбавленного раствора. Как правило, когда химическое вещество вводят внутривенно, оно должно быть совместимо с кровью и не должно вызывать разрушение клеток крови. Обычно композиции с высоким рН и/или гипотонические растворы при введении вызывают разрушение клеток крови. Поскольку из-за присутствия эпопростенола композицию вводят при высоком рН (>11), следует ожидать разрушение клеток крови. Однако автор с удивлением обнаружил, что разрушения клеток крови не наблюдается и что раствор эпопростенола, согласно настоящему изобретению, обладает такой же гемосовместимостью, как и изотонический раствор в данных исследованиях. Дополнительно, восстановленный и/или разбавленный раствор обладает высокой устойчивостью к микроорганизмам и может проходить тест на эффективность консервирования Фармакопеи США (USP).

Подробное описание изобретения

Композиция, согласно настоящему изобретению, содержит эпопростенол или его соль и подщелачивающее средство. Применяемый в описании термин "эпопростенол" относится или к свободной кислоте, или к соли эпопростенола. Массовое соотношение эпопростенол:подщелачивающее средство составляет предпочтительно примерно от 1:25 до 1:200, более предпочтительно примерно от 1:25 до 1:100, наиболее предпочтительно 1:33,3. Наиболее предпочтительные композиции содержат или 0,5 мг эпопростенола и 50 мг аргинина, или 1,5 мг эпопростенола и 50 мг аргинина на ампулу. Композиция предпочтительно содержит также достаточно основания, чтобы восстановленный и/или разбавленный раствор имел рН>11.

Использованный в описании термин «подщелачивающее средство» означает средство, которое обеспечивает щелочную среду (рН>7), когда эпопростенол растворяют в воде вместе с подщелачивающим средством. Дополнительно, хотя подщелачивающее средство обеспечивает щелочную среду, оно не содержит основных гидроксильных групп, но может содержать, по меньшей мере, одну функциональную группу, которая принимает протон из воды при растворении в воде или смеси вода/органические растворители. Подщелачивающее средство должно иметь, по меньшей мере, один рК_а более 9,0. Предпочтительно, подщелачивающее средство находится в твердой фазе и растворимо в водной среде. Подщелачивающие средства могут представлять собой, но не ограничиваясь ими, аргинин, лизин, меглумин, N-метилглюкозамин, любую другую аминокислоту с рК_а 9,0 или выше, щелочные фосфаты, такие, как тринатрийфосфаты, неорганические карбонаты, такие как карбонаты натрия, натриевые соли карбоновых кислот, такие как тетранатрий-EDTA, или их комбинации. Наиболее предпочтительные подщелачивающие средства представляют собой аргинин и карбонат натрия.

В некоторых вариантах реализации подщелачивающее средство может представлять собой общеизвестные буферы, включающие (но не ограничивающиеся ими) различные солевые, кислотные или основные формы следующих анионов: цитрата, фосфата, тартрата, сукцината, адипата, малеата, лактата, ацетата, бикарбоната, пирувата и карбоната. Типичные соли этих буферов, которые могут применяться, представляют собой натриевую и калиевую формы до тех пор, пока соль и ее количество являются физиологически совместимыми в композиции для инъекций. Также могут применяться смеси данных буферов.

Высокий рН (>11) композиции (при восстановлении) предпочтительно достигают посредством добавления неорганического основания. Используемый в описании термин «неорганическое основание» определяется как химическое вещество, содержащее свободный гидроксидион, который может самопроизвольно принимать протон из воды, и применяется для регулирования рН основной массы раствора до желаемого уровня. Предпочтительные неорганические основания представляют собой гидроксид натрия, гидроксид калия, другие щелочные гидроксиды, двухвалентные гидроксиды, такие как гидроксид магния, и летучий гидроксид, такой как гидроксид аммония. Также могут применяться органические основания, такие как первичные, вторичные и третичные амины, ароматические амины (такие, как анилин) и ароматический спирт (такой, как фенол). Комбинация органического и неорганического оснований также является подходящей для настоящего изобретения. Предпочтительно, основание добавляют таким образом, чтобы рН основной массы раствора составлял более 11, предпочтительно более 12, и, наиболее предпочтительно более 13. Предпочтительным основанием для применения в настоящем изобретении является гидроксид натрия.

Композиция предпочтительно является лиофильной, полученной путем сублимационной сушки (лиофилизации) основной массы раствора, содержащего эпопростенол или его соль и аргинин. рН основной массы раствора предпочтительно регулируют до уровня примерно 12,5-13,5, наиболее предпочтительно 13 посредством добавления гидроксида натрия.

Термин "лиофилизировать" в отношении данных фармацевтических композиций означает сублимационную сушку при пониженном давлении множества ампул, каждая из которых содержит стандартную дозу содержащей эпопростенол композиции, согласно настоящему изобретению. Лиофильные сушки, с помощью которых осуществляют описанную выше лиофилизацию, имеются в продаже и являются легко доступными для специалиста в данной области техники. Предпочтительный способ лиофилизации содержит три цикла: цикл замораживания, первичный цикл сушки и вторичный цикл сушки. Цикл замораживания содержит следующее стадии:

1. Охлаждение на полке приблизительно до -30°С или ниже со скоростью приблизительно 0,5-0,7°С/мин и выдерживание полки при данной температуре в течение приблизительно 30-40 мин или до тех пор, пока температура композиции не достигнет приблизительно -25°С или ниже.

2. Понижение температуры полки приблизительно до -45°С±2°С или ниже до тех пор, пока температура композиции не достигнет приблизительно -38°С±2°С или ниже.

3. Выдерживание продукта при данной температуре в течение приблизительно шести часов или дольше.

4. Применение вакуумирования до тех пор, пока давление в камере не достигнет от 50 миллиТорр или меньше.

5. Поддерживание температуры полки приблизительно -45°С±2°С приблизительно в течение 45 минут или более, даже после применения вакуумирования.

После цикла замораживания композицию высушивают в первичном цикле сушки, который включает следующее стадии:

1. Повышение температуры полки приблизительно до 0°С±2°С со скоростью нагревания приблизительно 20±2°С/час в вакууме и продолжение высушивания до тех пор, пока температура композиции не достигнет приблизительно -3±2°С или выше.

2. Повышение температуры полки приблизительно до 25±2°С и продолжение цикла сушки в вакууме, продолжение сушки до тех пор, пока температура композиции не достигнет приблизительно 20±2°С или выше.

После первичного цикла сушки композицию далее высушивают в вакууме во вторичном цикле сушки путем повышения температуры полки приблизительно до 45±2°С со скоростью приблизительно 3±2°С/час и продолжают сушку до тех пор, пока композиция не достигнет 38±2°С или выше. Здесь предпочтительно устанавливают очень медленную скорость сушки так, чтобы время, за которое достигается приблизительно 40±2°С от 25±2°С, составляло приблизительно 5 часов.

В композиции могут применяться также и другие фармацевтически приемлемые наполнители. Данные наполнители могут включать (не ограничиваясь ими) консерванты (присутствующие в количестве приблизительно 0,1-0,5%), носители (присутствующие в количестве приблизительно 1-5%), средства, модифицирующие тоничность (в количестве, достаточном для того, чтобы сделать раствор изотоническим), наполнители (присутствующие в количестве приблизительно 1-10%) и другие общепринятые компоненты, применяемые для составления фармацевтических композиций. Предпочтительно, данные наполнители не оказывают влияния на основные характеристики композиции.

Конкретные консерванты, предполагаемые для применения, могут включать бензиловый спирт, парабены, фенол, производные фенола, хлорид бензалкония и их смеси. В зависимости от того, какой конкретный консервант используют, количество консерванта может меняться. Предпочтительно, консервант присутствует приблизительно в количестве 0,1-0,5%, более предпочтительно 0,2%.

Типичные примеры средств, модифицирующих тоничность, включают хлорид натрия, манит, декстрозу, глюкозу, лактозу и сахарозу. Количество средства, модифицирующего тоничность, должно быть достаточным, чтобы приводить раствор в состояние изотонического. Данное количество меняется в зависимости от раствора и типа средства, модифицирующего тоничность. Однако специалист в данной области техники должен быть способен определить количество средства, модифицирующего тоничность, достаточное, чтобы привести раствор в состояние изотонического.

Типичные примеры наполнителей включают, но не ограничиваются ими, гидроксиэтилкрахмал (HES); сахара, такие как сорбит, лактоза, декстран, мальтоза, манноза, рибоза, сахароза, маннит, трегалоза, циклодекстрин; другие моно- или полисахариды; глицин; поливинилпирролидон (PVP); или их комбинации. Наполнитель может присутствовать в количестве приблизительно 1-10%, предпочтительно 1-5%, наиболее предпочтительно 5%.

В предпочтительном варианте реализации стабильная лиофилизированная композиция содержит эпопростенол (или его соль, такую как эпопростенол натрия), маннит и аргинин. Соотношение эпопростенол:аргинин составляет приблизительно от 1:25 до 1:200, более предпочтительно приблизительно от 1:25 до 1:100, наиболее предпочтительно приблизительно 1:33,3. Соотношение аргинин:маннит составляет приблизительно от 5:1 до 1:5, предпочтительно приблизительно от 3:1 до 1:3. Предпочтительные композиции содержат или 0,5 мг эпопростенола и по 50 мг аргинина и маннита, или 1,5 мг эпопростенола и по 50 мг аргинина и маннита на ампулу. Основная масса раствора для лиофилизации содержит или 0,5 мг эпопростенола и по 50 мг маннита и аргинина, или 1,5 мг эпопростенола и по 50 мг аргинина и маннита на мл. рН основной массы раствора регулируется до уровня >11 при помощи гидроксида натрия перед лиофилизацией.

В другом варианте реализации состав настоящей композиции содержит эпопростенол (или его соль, такую как эпопростенол натрия) и аргинин. Композиция может также включать основание, которое может являться неорганическим основанием, таким как гидроксид натрия, или органическим основанием, или комбинацией органического и неорганического оснований. Основание добавляют таким образом, чтобы рН основной массы раствора был более 11, предпочтительно более 12, и, наиболее предпочтительно 13 или выше.

В другом варианте реализации настоящего изобретения разработана стабильная лиофилизированная композиция, содержащая эпопростенол (или его соль, такую как эпопростенол натрия), маннит и основание, предпочтительно в соотношении приблизительно от 1:25 до 1:200 (эпопростенол:маннит), более предпочтительно 1:100, наиболее предпочтительно 1:33,3. Предпочтительно, композиции содержат или 0,5 мг эпопростенола и 50 мг маннита, или 1,5 мг эпопростенола и 50 мг маннита на ампулу. Основная масса раствора для лиофилизации содержит или 0,5 мг эпопростенола и 50 мг маннита, или 1,5 мг эпопростенола и 50 мг маннита на мл. рН основной массы раствора регулируется до уровня 13,0 при помощи основания.

Лиофилизированная композиция может быть восстановлена при помощи имеющихся в продаже внутривенно вводимых жидкостей. Данные растворы включают, но не ограничиваются ими, воду для инъекций (WFI), включая бактериостатическую WFI и стерильную WFI, 0,9-процентный раствор хлорида натрия (изотонический раствор); раствор Рингера с лактатом; раствор Рингера; раствор карбоната натрия; раствор бикарбоната; раствор аминокислоты; а также аналогичные легкодоступные фармацевтические разбавители. Предпочтительным разбавителем является изотонический раствор или раствор Рингера с лактатом. После восстановления и/или разбавления рН восстановленного раствора составляет более 11, предпочтительно более 11,3, более предпочтительно более приблизительно 11,5, и наиболее предпочтительно более приблизительно 11,8.

Фармацевтическая композиция, согласно настоящему изобретению, составлена в виде стандартной дозы или мультидозированной формы и может быть в виде инъекций или в виде вливаний, таких как раствор, суспензия или эмульсия. Предпочтительно, ее получают в виде сухого лиофилизированного порошка, который может быть восстановлен с образованием жидкого раствора, суспензии или эмульсии перед применением посредством любого из различных способов, предусматривающего внутривенное введение. Предпочтительно, для введения лиофилизированный состав восстанавливают до 100-10 мкг/мл, предпочтительно 10 мкг/мл. Разбавленный раствор имеет стабильность 90% (сохраняется 90% исходного эпопростенола) при 15-30°С по истечении 24-48 часов.

Без дополнительного описания предполагается, что обычный специалист в данной области техники может, используя предшествующее описание и нижеследующие пояснительные примеры, получать и применять соединения, согласно настоящему изобретению, а также применять заявленные способы. Следующие примеры даны для пояснения настоящего изобретения. Следует понимать, что настоящее изобретение не ограничивается специальными условиями или подробностями, описанными в данных примерах.

Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения

Пример 1. Стабильность Flolan для инъекций

Для того чтобы определить стабильность имеющегося в настоящее время в продаже варианта эпопростенола (Flolan), авторы изобретения получили ампулы лиофилизированного эпопростенола и разбавителя согласно составу, данному в Настольном справочнике врача (Physician's Desk Reference (PDR)). Flolan для инъекций представляет собой стерильную натриевую соль, составленную для внутривенного (IV) введения. Каждая ампула лиофилизированного Flolan содержит количество эпопростенола натрия, эквивалентное 0,5 мг или 1,5 мг эпопростенола, 3,76 мг глицина, 2,93 мг хлорида натрия и 50 мг маннита. Для регулирования рН может также быть добавлен гидроксид натрия. Авторы настоящего изобретения получали моделирующие Flolan составы по данной формуле.

Flolan может быть восстановлен при помощи стерильного разбавителя, изготовленного специально для Flolan. Стерильный разбавитель для Flolan поставляют в стеклянных ампулах, содержащих 94 мг глицина, 73,5 мг хлорида натрия, гидроксид натрия (добавлен для регулирования рН) в 50 мл воды для инъекций, USP. Интервал рН разбавителя, приведенный в PDR, составляет от 10,2 до 10,8, следовательно, авторы изобретения получили разбавитель, согласно указанному выше, и отрегулировали рН разбавителя до уровня 10,5. Ампулы с моделирующим составом восстанавливали при помощи разбавителя согласно инструкциям, данным в PDR, и наблюдали стабильность разбавителя при 5±1°С. Данные о стабильности собраны в таблице 2, приведенной ниже. В PDR также описано, что разбавленный раствор следует применять при <25°С. Поскольку лекарство вводят непрерывно посредством инфузионного насоса, мешок для раствора обычно держат в пузыре со льдом, который нужно менять каждые 8 часов.

Таблица 2 Стабильность композиции Flolan в растворе при 5°С, рН 10,5 ВРЕМЯ (ЧАСЫ) Анализ эпопростенола по площади, в % Площадь, 6-кето-PGF и ост. примесей, в % начало 100,0 0,21 2,5 99,7 0,31 5,0 99,3 0,39 7,5 98,9 0,44 10,0 98,5 0,55 12,5 98,0 0,61 15,0 97,5 0,71 18,0 97,1 0,80 39,0 86,7 4,49 53,0 80,3 6,59 77,0 61,6 12,9

Как показано в таблице 2, состав разрушается со скоростью приблизительно от 0,5 до 1% за каждые три часа в течение первых 39 часов; следовательно, в течение 24 часов он разрушится приблизительно на 4-8%. В последующее время наблюдается даже большая скорость разрушения.

Авторы также изучили стабильность композиции Flolan при 29±1°С. Композиция Flolan разрушилась более чем на 4% за 1 час (представлено в таблице 3), тогда как композиция, согласно настоящему изобретению, теряла более 2% лекарства в течение 24 часов (представлено в таблице 7).

Таблица 3 Стабильность композиции Flolan в растворе, рН 10,5, при 29±1°С ВРЕМЯ (ЧАСЫ) Анализ эпопростенола по площади, в % Площадь, 6-кето-PGF и ост. примесей, в % начало 100,0 0,08 1 95,2 1,48 2 91,2 2,54 3 87,1 3,54 4 83,4 4,41 5 80,4 5,39

Пример 2. Стабильность эпопростенола с аргинином

Получили раствор эпопростенола, содержащий 50 мг/мл аргинина, и определили его стабильность при 5°С. Полученные данные представлены в Таблице 4:

Таблица 4 Стабильность эпопростенола в растворе в присутствии 50 мг/мл аргинина, рН 11,9, при 5±1°С ВРЕМЯ (ЧАСЫ) Анализ эпопростенола по площади, в % Площадь, 6-кето-PGF и ост. примесей, в % начало 100,0 0,15 2 99,9 0,19 4 99,8 0,19 6 99,7 0,21 8 99,6 0,22 10 99,6 0,23 12,5 99,6 0,25 14,5 99,5 0,26 39 98,6 0,63 53 92,7 1,15 77 92,5 2,05 100 92,5 2,10 124   2,25

Как показано в таблице 4, содержание действующего вещества в композиции снижается только на 1,4% за 53 часа, в то время как в композиции Flolan (таблица 2) снижается приблизительно 20% содержания активного вещества за данное время. Эти данные предполагают, что раствор эпопростенола можно непрерывно применять в течение 5 дней без замены раствора в резервуаре, допускающем большой объем и гарантированную стерильность. Это является значительным улучшением по сравнению с Flolan, поскольку раствор Flolan в резервуаре насоса необходимо заменять каждые 12 часов.

Стабильность той же композиции исследовали также при рН 11,2; данные приведены в таблице 5 ниже:

Таблица 5 Стабильность эпопростенола в растворе в присутствии 50 мг/мл аргинина, рН 11,2, при 5±1°С ВРЕМЯ (ЧАСЫ) Анализ эпопростенола по площади, в % Площадь, 6-кето-PGF и ост. примесей, в % начало 100,0 - 4,0 99,5 0,28 7,0 99,0 0,39 10,0 98,6 0,53 11,5 98,3 0,57 17,5 97,3 0,80

Данные показывают, что даже при рН 11,2 стабильность композиции по изобретению выше, чем у композиции Flolan (таблца 2).

Пример 3. Стабильность восстановленного лиофилизата

В следующей серии экспериментов рН раствора, содержащего эпопростенол и аргинин, отрегулировали до уровня 13,0 при помощи гидроксида натрия, после чего раствор лиофилизировали. После восстановления лиофилизата при помощи 1 мл воды для инъекций восстановленный раствор содержал 50 мг/мл аргинина и 0,5 мг/мл эпопростенола. рН раствора составлял 13,0. Данные о стабильности при 5°С представлены ниже в таблице 6, при 29°С - в таблице 7:

Таблица 6 Стабильность эпопростенола в растворе в присутствии 50 мг/мл аргинина, при 5±1°С, рН 13,0 ВРЕМЯ (ЧАСЫ) Анализ эпопростенола по площади, в % Площадь, 6-кето-PGF и ост. примесей, в % начало 100,0 0,16 14,5 99,8 0,20 53 98,8 0,29 124 98,0 0,40 148 97,6 0,45 192 97,3 0,47 240 96,9 0,61 480 96,6 0,70

Таким образом, в настоящем изобретении показано, что происходит потеря только 3,4% активного вещества за 480 часов или, в среднем, по 0,007%/час при постоянной температуре 5°С.

Дополнительно, преимуществом настоящего изобретения является то, что композиция не требует специального разбавителя. Лиофилизированный состав может быть восстановлен при помощи воды для инъекций до концентрации, достигающей 5 нг/мл, при этом рН раствора все еще поддерживается на уровне выше 11,0 благодаря буферной емкости аргинина с основным рК_а=13,2 и 10,8, а также дополнительному основанию, добавленному для регулирования рН.

Таблица 7 Стабильность эпопростенола в растворе в присутствии 50 мг/мл аргинина, рН 13,0, при 29±1°С ВРЕМЯ (ЧАСЫ) Анализ эпопростенола по площади, в % Площадь, 6-кето-PGF и ост. примесей, в % начало 100,0 0,072 1 100,0 0,087 5 99,8 0,18 7 99,3 0,21 8 99,2 0,25 9 99,1 0,29 10 98,8 0,28 11 98,6 0,29 12 98,5 0,30 13 98,1 0,38 14 98,0 0,37 15 97,8 0,39 24 97,5 0,39 36 97,5 0,45

Наконец, поскольку наблюдалось только 1,5% разрушения за 12 часов при 29°С, данную композицию можно получать в устройстве для парентерального введения без охлаждения основной массы раствора до 5°С. Это было бы невозможно для имеющегося в настоящее время в продаже состава, поскольку рН основной массы раствора составляет 10,5, и состав следовало бы получать при 5°С в течение 12 часов, иначе имеет место значительное разрушение.

Пример 4. Сравнение с различными содержащими эпопростенол композициями

На следующей стадии разработки авторы изобретения отобрали несколько лиофилизированных составов с рН основной массы раствора для лиофилизации, отрегулированной на уровне от 10,5 до 13,0 в присутствии различных наполнителей. Состав изученных композиций подробно представлен в таблице 8, данные о стабильности собраны в таблице 9, приведенной ниже.

Таблица 8 Стабильность некоторых композиций-прототипов, содержащих эпопростенол Номер серии Количество (мг) наполнителя, применяемого в композиции ЕРР Трегалоза Аргинин Манит HES NaCl Глицин Na₂CO₃ рН осн. мас. раст. ЕРР-7 0,5   50           13 ЕРР-8 0,5     50   3 3,75   10,5 ЕРР-10 0,5   50   50       13 ЕРР-12 0,5             100 13 ЕРР-13 0,5   50   50       13 ЕРР-14 0,5       50       13 ЕРР-19 0,5     50         12 ЕРР-20 0,5     50         13 ЕРР-23 0,5     50 50       13 ЕРР-24 0,5     50 50       11 ЕРР-25 0,5   50 50         12 ЕРР-26 0,5   50 50         13 ЕРР-27 0,5   50           12 ЕРР-30 0,5     100     97,76   11 ЕРР-31 0,5     100     97,76   12 ЕРР-32 0,5 50         97,76   11 ЕРР-33 0,5 50             12 ЕРР-38 0,5   50           13 ЕРР: эпопростенолнатрий; HES: гидроксиэтилкрахмал; рН осн. мас.раст.: рН основной массы раствора.

Таблица 9 Стабильность композиций-прототипов, содержащих эпопростенол Номер серии Стабильность (% от начала) при хранении при 40°С   15 дней 30 дней 60 дней 90 дней ЕРР-7 99 97 NP NP ЕРР-8 40 0 NP NP ЕРР-10 99 99 99 100 ЕРР-12 76 NP NP NP ЕРР-13 99 98 99 97 ЕРР-14 100 96 97 83 ЕРР-19 (25%)* 87 NP NP NP ЕРР-20 (40%) 29 NP NP NP ЕРР-23 94   96   ЕРР-24 0       ЕРР-25 60 35 24   ЕРР-26 (11%) 100 101 100   ЕРР-27 60       ЕРР-30 88 96     ЕРР-31 90 74     ЕРР-32 76 100     ЕРР-33 95       ЕРР-38 (13%) 94       * цифры в круглых скобках означают содержание воды в лиофилизате. NP: не производилось.

Во время лиофилизации несколько партий были лиофилизированы вместе, что привело к разным содержаниям влаги. Также было измерено содержание влаги в выбранных образцах (ЕРР-19, 20, 26 и 38). Как показано в таблице 8, приведенной выше, стабильность эпопростенола больше при рН 13, по сравнению с образцами с более низким рН. Композиции, содержащие маннит/HES, или маннит/аргинин, или HES/карбонат натрия демонстрировали превосходную стабильность.

На следующей стадии для лиофилизации были выбраны композиции, содержащие аргинин/маннит, с рН основной массы раствора, отрегулированной до 13. Поскольку содержание влаги варьируется от партии к партии, цикл лиофилизации был оптимизирован таким образом, чтобы единообразно давать содержание влаги менее 12% при помощи предусматривающего три цикла способа лиофилизации, который обсуждался выше. С помощью применения оптимизированного способа лиофилизации был получены следующие композиции:

1. Три партии композиции, содержащей на каждую ампулу эпопростенол (0,5 мг)/аргинин (50 мг)/маннит (50 мг)/рН 13.

2. Одна партия композиции, содержащей на каждую ампулу эпопростенол (0,5 мг)/аргинин (50 мг)/маннит (50 мг)/рН 12.

3. Две партии композиции, содержащей на каждую ампулу эпопростенол (0,5 мг)/аргинин (50 мг)/трегалоза (50 мг)/рН 13.

4. Одна партия композиции, содержащей на каждую ампулу эпопростенол (0,5 мг)/аргинин (50 мг)/трегалоза (50 мг)/рН 12.

5. По одной партии каждой из композиций Flolan с рН, отрегулированным до 12 и 13.

Содержание влаги для каждой из данных партий находилось в пределах 7-10%.

Данные о стабильности в твердом состоянии при хранении в течение трех месяцев для выбранных композиций представлены в таблицах 10-18, приведенных ниже:

Таблица 10 Партия №ЕХ-01: ЕРР/маннит/аргинин/рН::0,5/50/50/13* Температура хранения Время анализа ЕРР, мг/ампулу ЕРР, в % 6-PGF, мг/ампулу 6-PGF, в% Дополнительные пики Площадь, в % 40°С начало 0,49 100 нуль нуль Нет данных   15 дней 0,49 100 нуль нуль Нет данных   1 месяц 0,50 102 нуль нуль 0,2   2 месяца 0,48 98 0,003 0,65 0,72   3 месяца 0,48 98 0,002 0,49 0,78 25°С 3 месяца 0,48 98 0,00034 0,07 0,12 * ЕРР/маннит/аргинин/рН:: 0,5/50/50/13=0,5 мг/ампулу эпопростенола, 50 мг/ампулу маннита, 50 мг/ампулу аргинина, и рН 13.

Таблица 11 Партия №ЕХ-02: ЕРР/маннит/аргинин/рН::0,5/50/50/13 Температура хранения Время анализа ЕРР, мг/ампулу ЕРР, в % 6-PGF, мг/ампулу 6-PGF, в % Дополнительные пики Площадь, в % 40°С начало 0,49 100 нуль нуль Нет данных   15 дней 0,49 100 нуль нуль Нет данных   1 месяц 0,50 102 нуль нуль 0,2   2 месяца 0,48 98 0,003 0,64 0,73   3 месяца 0,49 100 0,0041 0,84 0,87 25°С 3 месяца 0,49 100 0,0004 0,08 0,12

Таблица 12 Партия №ЕХ-03: EPP/маннит/аргинин/pH::0,5/50/50/13 Температура хранения Время анализа ЕРР, мг/ампулу ЕРР, в % 6-PGF, мг/ампулу 6-PGF, в % Дополнительные пики Площадь, в % 40°С начало 0,49 100 нуль нуль Нет данных   15 дней 0,49 100 нуль нуль Нет данных   1 месяц 0,50 102 нуль нуль 0,2   2 месяца 0,50 102 0,0021 0,41 0,66   3 месяца 0,48 98 0,0041 0,84 1,07 25°С 3 месяца 0,49 100 0,00044 0,09 0,12

Таблица 13 Партия №ЕХ-07: ЕРР/маннит/аргинин/рН::0,5/50/50/12 Температура хранения Время анализа ЕРР, мг/ампулу ЕРР, в % 6-PGF, мг/ампулу 6-PGF, в % Дополнительные пики Площадь, в % 40°С начало 0,47 100 0,002 0,36 0,08   15 дней 0,013 2,8 0,07 14,8 0,76   1 месяц 0,008 1,7 0,072 15,4 0,66

Таблица 14 Партия №EX-04: EPP/трегалоза/аргинин/рН::0,5/50/50/13 Температура хранения Время анализа ЕРР, мг/ампулу ЕРР, в % 6-PGF, мг/ампулу 6-PGF, в % Дополнительные пики Площадь, в % 40°С начало 0,52 100 0,0006 0,11 0,08   15 дней 0,52 100 0,0007 0,13 0,08   1 месяц 0,52 100 нуль нуль 0,12   2 месяца 0,49 94 0,007 1,4 0,38   3 месяца 0,49 94 0,0114 2,2 0,80 25°С 3 месяца 0,52 100 0,0006 0,12 0,17

Таблица 15 Партия №EX-06: ЕРР/аргинин/трегалоза/рН::0,5/50/50/13 Температура хранения Время анализа ЕРР, мг/ампулу ЕРР, в % 6-PGF, мг/ампулу 6-PGF, в % Дополнительные пики Площадь, в % 40°С начало 0,52 100 0,0006 0,12 0,08   15 дней 0,52 100 0,0006 0,12 0,08   1 месяц 0,50 96 нуль нуль 0,11   2 месяца 0,48 92 0,011 2,08 0,31   3 месяца 0,49 94 0,012 2,3 0,87 25°С 3 месяца 0,51 98 0,0001 0,02 0,17

Таблица 16 Партия №EX-05: EPP/трегалоза/аргинин/рН::0,5/50/50/12 Температура хранения Время анализа ЕРР, мг/ампулу ЕРР, в % 6-PGF, мг/ампулу 6-PGF, в % Дополнительные пики Площадь, в % 40°С начало 0,51 100,0 нуль нуль 0,15   15 дней 0,51 100,0 0,003 0,57 0,2   1 месяц 0,40 78 0,003 0,74 0,45   2 месяца 0,32 63 0,004 0,82 1,33

Таблица 17 Партия №ЕХ-08: Композиция, моделирующая Flolan*: рН 12 Температура хранения Время анализа ЕРР, мг/ампулу ЕРР, в % 6-PGF, мг/ампулу 6-PGF, в % Дополнительные пики Площадь, в % 40°С начало 0,50 100,0 0,0014 0,28 0,11   15 дней 0,03 6,0 0,072 14,4 1,56   1 месяц 0,011 2,2 0,032 6,4 0,78 * Термин «Композиция, моделирующая Flolan», относится к композиции, идентичной имеющемуся в продаже Flolan, продаваемому GlaxoSmithKline, за исключением того, что рН отрегулирован до указанного уровня рН.

Таблица 18 Партия №ЕХ-09: Композиция, моделирующая Flolan*: рН 13 Температура хранения Время анализа ЕРР, мг/ампулу ЕРР, в % 6-PGF, мг/ампулу 6-PGF, в % Дополнительные пики Площадь, в % 40°С начало 0,50 100 0,001 0,2 0,12   15 дней 0,50 100 0,0012 0,24 0,12   2 месяца 0,44 88 0,003 0,6 0,82   3 месяца 0,45 90 0,0083 1,7 0,3 25°С 3 месяца 0,48 96 0,00074 0,15 нуль

Как можно видеть из приведенных выше данных, эпопростенол наиболее стабилен в композициях, содержащих маннит/аргинин, в которых рН основной массы раствора отрегулирован до 13. За данными составами следуют композиции, содержащие аргинин/трегалозу, в которых основная масса раствора для лиофилизации отрегулирована до рН 13. Композиции, содержащие вместе с аргинином или трегалозой, или маннит в условиях более низкого рН, являются менее стабильными при 40°С, по сравнению с композициями, где рН 13. Композиция, моделирующая Flolan, почти полностью разрушалась в течение одного месяца при 40°С и рН 12. При рН 13 она обладала лучшей стабильностью, но не такой хорошей, как композиция, содержащая маннит/аргинин с рН 13.

Пример 5. Стабильность различных восстановленных композиций эпопростенола, разбавленных до 10 мкг/мл

Также были проведены исследования разбавления, для того чтобы определить, пригодны ли композиции, согласно настоящему изобретению, для внутривенного введения при комнатной температуре. Исследования стабильности проводили при температуре от 25°С до 30°С, для того чтобы имитировать температуру введения в течение более 24 часов при большом объеме растворов для парентерального введения.

С этой целью лиофилизат эпопростенола восстановили и разбавили до 10 мкг/мл изотоническим раствором, и определяли стабильность в течение 48 часов при 25°С и 30°С. Стабильность при разбавлении для всех трех партий первичных композиций определяли при разбавлении изотоническим раствором при 25°С и 30°С. Дополнительно к данным исследованиям для одной случайным образом выбранной партии первичной композиции были проведены исследования стабильности при 25°С и 30°С при разбавлении 5-процентным раствором декстрозы (D5W), WFI (собственного производства) и раствором Рингера с лактатом.

Для исследований при разбавлении содержимое каждой ампулы восстанавливали 5 мл разбавителя. Прозрачный раствор поместили в 50 мл мерную колбу. Ампулу три раза промыли 5 мл разбавителя, и использованные для промывания порции разбавителя поместили в колбу. Затем содержимое колбы разбавили разбавителем и при помощи разбавителя довели до отметки. рН разбавленного раствора измерили и записали. Содержимое колбы выдержали при температурах, которые были отмечены, и анализ проводили в течение заданных интервалов времени. Данные о стабильности при разбавлении различными разбавителями представлены ниже в таблицах 19-30.

Исследования разбавления изотоническим раствором

Таблица 19 Стабильность при разбавлении эпопростенола солевым раствором, партия №ЕХ-01 при 25°С, рН 11,58 Время анализа ЕРР (мкг/мл) % от исходного 6-PGF* (мкг/мл) % ЕРР (исходный) Дополнительные пики Площадь, в % Начало 10,10 100,0 Нуль Нуль Нуль 6 часов 10,06 99,6 Нуль Нуль Нуль 12 часов 10,02 99,2 Нуль Нуль Нуль 18 часов 9,95 98,5 Нуль Нуль Нуль 24 часа 9,81 97,1 0,12 1,19 Нуль 30 часов 9,71 96,1 0,32 3,17 Нуль 36 часов 9,62 95,2 0,40 3,96 Нуль 42 часа 9,52 94,3 0,48 4,75 Нуль 48 часов 9,46 93,7 0,52 5,14 Нуль * 6-PGF - 6-кето-PGF.

Таблица 20 Стабильность при разбавлении эпопростенола солевым раствором, партия №ЕХ-01 при 30°С Время анализа ЕРР (мкг/мл) % от исходного 6-PGF* (мкг/мл) % ЕРР (исходный) Дополнительные пики Площадь, в % Начало 10,10 100,0 Нуль Нуль Нуль 6 часов 10,05 99,5 Нуль Нуль Нуль 12 часов 9,92 98,2 Нуль Нуль Нуль 18 часов 9,79 96,9 0,37 3.65 Нуль 24 часа 9,62 95,3 0,59 5,89 Нуль 30 часов 9,37 92,8 0,76 7,52 Нуль 36 часов 9,21 91,2 0,83 8,22 Нуль 42 часа 9,02 89,3 1,30 12,87 Нуль 48 часов 8,94 88,5 1,34 13,27 Нуль

Таблица 21 Стабильность при разбавлении эпопростенола солевым раствором, партия №ЕХ-02 при 25°С, рН 11,58 Время анализа ЕРР (мкг/мл) % от исходного 6-PGF* (мкг/мл) % ЕРР (исходный) Дополнительные пики Площадь, в % Начало 10,30 100,0 Нуль Нуль Нуль 6 часов 10,24 99,4 Нуль Нуль Нуль 12 часов 10,20 99,0 Нуль Нуль Нуль 18 часов 10,00 97,1 Нуль Нуль Нуль 24 часа 9,96 96,7 0,07 0,68 Нуль 30 часов 9,85 95,6 0,27 2,62 Нуль 36 часов 9,76 94,8 0,34 3,30 Нуль 42 часа 9,68 94,0 0,44 4,27 Нуль 48 часов 9,58 93,0 0,48 4,66 Нуль

Таблица 22 Стабильность при разбавлении эпопростенола солевым раствором, партия №ЕХ-02 при 30°С Время анализа ЕРР (мкг/мл) % от исходного 6-PGF* (мкг/мл) % ЕРР (исходный) Дополнительные пики Площадь, в % Начало 10,20 100,0 Нуль Нуль Нуль 6 часов 10,13 99,3 Нуль Нуль Нуль 12 часов 10,03 98,3 Нуль Нуль Нуль 18 часов 9,82 96,3 0,32 3,14 Нуль 24 часа 9,70 95,1 0,52 5,10 Нуль 30 часов 9,47 92,8 0,70 6,90 Нуль 36 часов 9,29 91,1 0,79 7,74 Нуль 42 часа 9,10 89,2 1,21 11,86 Нуль 48 часов 9,02 88,4 1,27 12,45 Нуль

Таблица 23 Стабильность при разбавлении эпопростенола солевым раствором, партия №ЕХ-03 при 25°С, рН 11,6 Время анализа ЕРР (мкг/мл) % от исходного 6-PGF* (мкг/мл) % ЕРР (исходный) Дополнительные пики Площадь, в % Начало 10,30 100,0 Нуль Нуль Нуль 6 часов 10,20 99,0 Нуль Нуль Нуль 12 часов 10,20 99,0 Нуль Нуль Нуль 18 часов 10,00 97,1 Нуль Нуль Нуль 24 часа 9,94 96,5 0,09 0,87 Нуль 30 часов 9,82 95,3 0,29 2,81 Нуль 36 часов 9,71 94,3 0,37 3,59 Нуль 42 часа 9,61 93,3 0,46 4,47 Нуль 48 часов 9,53 92,5 0,51 4,95 Нуль

Таблица 24 Стабильность при разбавлении эпопростенола солевым раствором, партия №ЕХ-03 при 30°С Время анализа ЕРР (мкг/мл) % от исходного 6-PGF* (мкг/мл) % ЕРР (исходный) Дополнительные пики Площадь, в % Начало 10,20 100,0 Нуль Нуль Нуль 6 часов 10,10 99,0 Нуль Нуль Нуль 12 часов 9,96 97,6 Нуль Нуль Нуль 18 часов 9,77 95,8 0,33 3,24 Нуль 24 часа 9,61 94,2 0,58 5,69 Нуль 30 часов 9,44 92,5 0,75 7,35 Нуль 36 часов 9,30 91,2 0,83 8,14 Нуль 42 часа 9,10 89,2 1,30 12,75 Нуль 48 часов 8,96 87,8 1,33 13,04 Нуль

Как показано в таблицах 19-24, разбавленные растворы эпопростенола были вполне стабильны при 25°С и 30°С, сохраняя более чем 90% активного вещества в течение периода времени, по меньшей мере, 24 часа. Все изученные партии имели минимальные колебания стабильности от партии к партии при обеих температурах. Единственный наблюдавшийся продукт деградации представлял собой 6-кето-PGF.

Исследования разбавления D5W:

Таблица 25 Стабильность при разбавлении эпопростенола D5W, партия №ЕХ-03 при 25°С, рН 10,9 Время анализа ЕРР (мкг/мл) % от исходного 6-PGF* (мкг/мл) % ЕРР (исходный) Дополнительные пики Площадь, в % Начало 10,20 100,0 Нуль Нуль Нуль 2 часа 9,83 96,4 Нуль Нуль Нуль 4 часа 9,40 92,2 0,03 0,29 Нуль 6 часов 9,08 89,0 0,04 0,39 Нуль 8 часов 8,81 86,4 0,07 0,69 Нуль

Таблица 26 Стабильность при разбавлении эпопростенола D5W, партия №ЕХ-03 при 30°С Время анализа ЕРР (мкг/мл) % от исходного 6-PGF* (мкг/мл) % ЕРР (исходный) Дополнительные пики Площадь, в % Начало 10,20 100,0 Нуль Нуль Нуль 2 часа 9,76 95,7 Нуль Нуль Нуль 4 часа 9,40 92,2 0,04 0,39 Нуль 6 часов 9,04 88,6 0,04 0,39 Нуль 8 часов 8,60 84,3 0,08 0,80 Нуль

Эпопростенол в 5% растворе декстрозы (D5W) разрушался сильнее, чем в солевом растворе. Уровни 6-кето-PGF были очень низкими, других пиков не наблюдалось. В данном случае приблизительно 84% лекарства деградировало за 8 часов, но никаких других пиков, свидетельствующих о продукте деградации, не обнаружено.

Нестабильность в D5W может быть отчасти связана со значительным падением рН, поскольку падение рН было больше, чем ожидалось. В случае такого падения рН D5W не может применяться для восстановления/разбавления, согласно настоящему изобретению.

Исследование стабильности эпопростенола при разбавлении водой для инъекций

Таблица 27 Стабильность при разбавлении эпопростенола WFI, партия №ЕХ-03 при 25°С, рН 11,55 Время анализа ЕРР (мкг/мл) % от исходного 6-PGF* (мкг/мл) % ЕРР (исходный) Дополнительные пики Площадь, в % Начало 9,04 100,0 Нуль Нуль Нуль 6 часов 8,97 99,2 Нуль Нуль Нуль 12 часов 8,86 98,0 Нуль Нуль Нуль 18 часов 8,77 97,0 Нуль Нуль Нуль 24 часа 8,68 96,0 0,11 1,20 Нуль 30 часов 8,60 95,1 0,12 1,30 Нуль 36 часов 8,60 95,0 0,41 4,54 Нуль 42 часа 8,43 93,3 0,46 5,10 Нуль 48 часов 8,41 93,0 0,80 8,90 Нуль

Таблица 28 Стабильность при разбавлении эпопростенола WFI, партия №ЕХ-03 при 30°С Время анализа ЕРР (мкг/мл) % от исходного 6-PGF* (мкг/мл) % ЕРР (исходный) Дополнительные пики Площадь, в % Начало 9,04 100,0 Нуль Нуль Нуль 6 часов 8,93 98,8 0,06 0,7 Нуль 12 часов 8,78 97,1 0,09 1,04 Нуль 18 часов 8,25 91,3 0,21 2,30 Нуль 24 часа 7,27 80,4 0,48 5,32 Нуль 30 часов 5,75 64,0 0,78 8,60 Нуль 36 часов 3,37 37,3 1,76 19,5 Нуль 42 часа 1,64 18,1 3,20 35,0 21,1 48 часов 0,79 8,73 4,30 47,2 26,2

Интересно, что стабильность эпопростенола в воде и изотоническом растворе при 25°С была близкой. Однако в воде при 30°С эпопростенол разрушался быстрее, чем в изотоническом растворе. Однако в течение более чем 18 часов поддерживался уровень активного вещества более 90%. Деградация ускорялась после прохождения момента времени 24 часа.

Исследование стабильности при разбавлении раствором Рингера с лактатом

Также были проведены исследования стабильности при разбавлении раствором Рингера с лактатом, и данные представлены ниже в таблицах 29-30:

Таблица 29 Стабильность при разбавлении эпопростенола раствором Рингера с лактатом, партия №ЕХ-03 при 25°С, рН 11,63 Время анализа ЕРР (мкг/мл) % от исходного 6-PGF* (мкг/мл) % ЕРР (исходный) Дополнительные пики Площадь, в % Начало 10,50 100,0 Нуль Нуль Нуль 6 часов 10,43 99,3 0,17 1,6 Нуль 12 часов 10,20 97,1 0,24 2,3 0,9 18 часов 10,08 96,0 0,25 2,4 2,0 24 часа 9,98 95,1 0,17 1,6 3,6 30 часов 9,94 94,7 0,19 1,8 3,5 36 часов 9,82 93,5 0,19 1,8 3,4 42 часа 9,74 92,8 0,18 1,7 3,2 48 часов 9,61 91,5 0,35 3,3 3,1

Таблица 30 Стабильность при разбавлении эпопростенола раствором Рингера с лактатом, партия №ЕХ-03 при 30°С Время анализа ЕРР (мкг/мл) % от исходного 6-PGF* (мкг/мл) % ЕРР (исходный) Дополнительные пики Площадь, в % Начало 10,50 100,0 Нуль Нуль Нуль 6 часов 10,34 98,5 0,09 0,83 2,59 12 часов 10,31 98,2 0,13 1,22 3,85 18 часов 10,20 97,1 0,09 0,87 6,04 24 часа 9,82 93,5 0,11 1,00 6,00           1,04 30 часов 9,62 91,6 0,15 1,40 5,76 42 часов 9,26 88,2 0,18 1,72 6,24

Стабильность эпопростенола в растворе Рингера с лактатом сравнима со стабильностью в изотоническом растворе при обеих исследованных температурах.

Хотя некоторые представленные предпочтительные варианты реализации настоящего изобретения описаны здесь особо, специалисту в области техники, к которой относится настоящее изобретение, очевидно, что варианты и модификации различных вариантов реализации, представленные и описанные здесь, могут быть сделаны без отклонения от сущности и объема настоящего изобретения. Соответственно, изобретение ограничивается только рамками прилагаемой формулы изобретения и применимыми нормами закона.

Изобретение относится к способу получения композиции, в том числе лиофилизированной, содержащей эпопростенол, который включает получение раствора эпопростенола или его соли и аргинина и доведение рН раствора до более 12 путем добавления гидроксида калия или гидроксида натрия. Изобретение также относится к фармацевтической композиции и стабильному раствору для лечения сердечно-сосудистых заболеваний, которые содержат эпопростенол или его соль и аргинин и имеют рН более 12. Также раскрыт способ лечения пациента, страдающего сердечнососудистым заболеванием, который включает введение эффективного количества указанной выше композиции. Изобретение обеспечивает получение гемосовместимых, устойчивых к микроорганизмам и стабильных композиций эпопростенола. 4 н. и 42 з.п. ф-лы, 30 табл.

1. Способ получения композиции, содержащей эпопростенол, включающий стадии:
(a) получение раствора эпопростенола, содержащего (i) эпопростенол или его соль, и (ii) аргинин; и
(b) доведение рН раствора до более чем 12;
где стадию (b) осуществляют добавлением неорганического основания, выбранного из группы, состоящей из гидроксида натрия и гидроксида калия.

2. Способ по п.1, дополнительно включающий стадию:
(c) лиофилизация раствора.

3. Способ по п.2, в котором стадия (с) включает цикл замораживания с последующими первичным циклом сушки и вторичным циклом сушки.

4. Способ по п.3, в котором цикл замораживания включает:
(i) помещение раствора на полку в камере лиофилизации;
(ii) охлаждение полки до -30°С или ниже со скоростью 0,5-0,7°С/мин;
(iii) выдерживание при -30°С или ниже, приблизительно, 30 мин или до тех пор, пока температура раствора не достигнет -25°С или ниже;
(iv) понижение температуры полки до -45°С±2°С до тех пор, пока температура раствора не достигнет приблизительно -38°С±2°С;
(v) выдерживание раствора при -38°С±2°С в течение шести часов или дольше;
(vi) применение вакуумирования до тех пор, пока давление в камере не достигнет приблизительно 50 мТорр или менее; и
(vii) поддерживание температуры полки -45°С±2°С в течение 45 мин или более после применения вакуумирования.

5. Способ по п.3, в котором первичный цикл сушки включает:
(i) повышение температуры полки до 0°С±2°С со скоростью нагревания (20±2)°С/ч и продолжение высушивания в вакууме до тех пор, пока температура композиции не достигнет -3°С±2°С или выше; и
(ii) повышение температуры полки до (25±2)°С и продолжение цикла сушки до тех пор, пока температура композиции не достигнет 20°С или выше.

6. Способ по п.3, где вторичный цикл сушки включает:
(i) повышение температуры полки до (45±2)°С со скоростью (3±2)°С/ч и продолжение сушки до тех пор, пока температура композиции не достигнет (38±2)°С или выше;
(ii) отключение вакуума и повышение давления в камере при помощи азота; и
(iii) когда давление в камере достигнет атмосферного давления, прекращение притока азота и герметизация композиции в атмосфере азота.

7. Способ по п.1, в котором соотношение эпопростенола или его соли к аргинину составляет от 1:25 до 1:200.

8. Способ по п.1, в котором раствор дополнительно содержит наполнитель.

9. Способ по п.8, в котором наполнитель выбирают из группы, состоящей из гидроксиэтилкрахмала (HES), сорбита, лактозы, декстрана, мальтозы, маннозы, рибозы, сахарозы, маннита, трегалозы, циклодекстрина, глицина и поливинилпирролидона (PVP).

10. Способ по п.8, в котором наполнитель выбирают из группы, состоящей из декстрана, сахарозы и маннита.

11. Способ по п.8, в котором наполнителем является сахароза.

12. Способ по п.8, в котором наполнителем является маннит.

13. Способ по п.8, в котором наполнитель присутствует в количестве от 1 до 10%.

14. Способ по п.1, где соль представляет собой эпопростенол натрия.

15. Способ по п.1, где стадия (b) завершается добавлением гидроксида натрия.

16. Способ по п.1, где рН раствора доводят до 13 или выше.

17. Фармацевтическая композиция для лечения сердечно-сосудистых заболеваний, содержащая (а) эпопростенол или его соль, и (b) аргинин, и (с) основание, рН которой после восстановления составляет более чем 12, и в которой основанием является основание, выбранное из группы, состоящей из гидроксида натрия и гидроксида калия.

18. Композиция по п.17, где соотношение эпопростенола к аргинину составляет приблизительно от 1:25 до 1:200.

19. Фармацевтическая композиция по п.17, дополнительно содержащая наполнитель.

20. Композиция по п.19, где наполнитель выбирают из группы, состоящей из гидроксиэтилкрахмала (HES), сорбита, лактозы, декстрана, мальтозы, маннозы, рибозы, сахарозы, маннита, трегалозы, циклодекстрина, глицина и поливинилпирролидона (PVP).

21. Композиция по п.19, в которой наполнитель выбирают из группы, состоящей из декстрана, сахарозы и маннита.

22. Композиция по п.19, в которой наполнителем является сахароза.

23. Композиция по п.19, в которой наполнителем является маннит.

24. Композиция по п.19, в которой наполнитель присутствует в количестве от 1 до 10%.

25. Композиция по п.17, где соль представляет собой эпопростенол натрия.

26. Композиция по п.17, где основание представляет собой гидроксид натрия.

27. Композиция по п.17, которая является лиофилизорованной композицией.

28. Композиция по п.17, которая составлена в виде стандартной дозы или мультидозированной формы.

29. Композиция по п.17, в которой рН восстановленного раствора 13 или выше.

30. Стабильный раствор для лечения сердечно-сосудистых заболеваний, содержащий (а) эпопростенол или его соль, (b) аргинин, (с) воду и (d) основание, имеющий рН более чем 12, и в котором основанием является неорганическое основание, выбранное из группы, состоящей из гидроксида натрия и гидроксида калия.

31. Раствор по п.30, где соотношение эпопростенола к аргинину составляет от 1:25 до 1:200.

32. Раствор по п.30, дополнительно содержащий наполнитель.

33. Раствор по п.32, где наполнитель выбирают из группы, состоящей из гидроксиэтилкрахмала (HES), сорбита, лактозы, декстрана, мальтозы, маннозы, рибозы, сахарозы, маннита, трегалозы, циклодекстрина, глицина и поливинилпирролидона (PVP).

34. Раствор по п.32, в котором наполнитель выбирают из группы, состоящей из декстрана, сахарозы и маннита.

35. Раствор по п.32, в котором наполнителем является сахароза.

36. Раствор по п.32, в котором наполнителем является маннит.

37. Раствор по п.32, в котором наполнитель присутствует в количестве от 1 до 10%.

38. Раствор по п.30, где соль представляет собой эпопростенол натрия.

39. Раствор по п.30, где основание представляет собой гидроксид натрия.

40. Раствор по п.30, имеющий рН 13 или выше.

41. Способ лечения пациента, страдающего от заболевания, выбранного из группы, состоящей из атеросклероза, артериосклероза, застойной сердечной недостаточности, стенокардии и гипертонии, включающий стадию введения пациенту эффективного количества композиции по п.17.

42. Способ по п.41, дополнительно включающий восстановление композиции при помощи первого разбавителя, перед стадией введения для получения восстановленного раствора.

43. Способ по п.42, где первый разбавитель представляет собой воду для инъекций, 0,9%-ный раствор хлорида натрия, раствор Рингера с лактатом, раствор Рингера, раствор карбоната натрия или раствор бикарбоната.

44. Способ по п.42, дополнительно включающий стадию разбавления восстановленного раствора вторым разбавителем с образованием разбавленного раствора.

45. Способ по п.44, где разбавленный раствор является гемосовместимым.

46. Способ по п.42, где восстановленный раствор является стабильным.