ЖИДКАЯ КОМПОЗИЦИЯ G-CSF Российский патент 2012 года по МПК A61K38/18 A61K9/08 

Изобретение касается жидких композиций G-CSF, обладающих стабильностью в части хранения, и способа их получения. В частности, изобретение касается жидких композиций, которые содержат G-CSF - в качестве биологически активного вещества, ацетат - в качестве буферного вещества, полисорбат 20 или полисорбат 80 - в качестве поверхностно-активного вещества и дополнительно фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, причем композиции имеют значение рН, лежащее в диапазоне между 4,1 и 4,4.

G-CSF (granulocyte colony stimulating factor) - гранулоцитарный колониестимулирующий фактор является встречающимся в естественных условиях фактором роста, который относится к семейству цитокинов в широком смысле, а здесь к группе факторов, стимулирующих колонию (бактерий). G-CSF играет решающую роль в гематопоэзе и способствует пролиферации и дифференцированию кроветворных клеток-предвестников, а также активированию нейтрофилов. На основании этих свойств композиция G-CSF находит применение в различных медицинских областях, как, например, в восстановлении нормальных популяций клеток крови после химиотерапии или облучения или для стимуляции иммунного ответа по отношению к инфекционным патогенам. Так, например, G-CSF используют в клинике, в основном, в борьбе с опухолями и, в частности, для лечения нейтропении как следствия химиотерапии и, далее, находит также применение при пересадках костного мозга и в лечении инфекционных болезней.

Рекомбинантное получение G-CSF было описано в патентной литературе впервые в 1987 году в WO-A-87/01132. Первый коммерческий препарат G-CSF на основе рекомбинантного G-CSF получил в Германии разрешение на клиническое применение в 1991 году, сейчас изготавливается и продается фирмой "Амген" под торговым наименованием Neupogen® (Нойпоген).

Продукт Neupogen® (Нойпоген) (препарат, готовый для шприцевания) состоит согласно перечню лекарственных средств "ROTE LISTE 2005" из следующих компонентов: G-CSF с концентрацией 600 мкг/мл или 960 мкг/мл, ацетат натрия, сорбитол, полисорбат 80 и вода.

В уровне техники описаны различные патентные документы с фармацевтическими формами приготовления G-CSF. В Европейской заявке на патент - ЕР-А-0373679 описываются композиции G-CSF, в которых протеин стабилизируется за счет присутствия кислоты, кислого значения рН и низкой проводящей способности состава.

В немецкой заявке на патент DE-A-3723781 описываются, в общем, применения G-CSF в комбинации с фармацевтически совместимым поверхностно-активным средством, сахаридом, протеином или фармацевтически совместимым высокомолекулярным соединением.

В заявке WO-A-94/14465 описывается применение мальтозы, целлобиозы, гентиобиозы, изомальтозы, раффинозы, сахарозы и прочих сахаров для стабилизации форм приготовления, содержащих G-CSF.

В заявке WO-A-94/14466 раскрываются формы приготовления, содержащие G-CSF, которые содержат количество поверхностно-активных веществ меньшее, чем использованное количество G-CSF, а также буферное вещество.

В заявке WO-A-93/03744 описываются содержащие G-CSF формы приготовления, которые содержат консервирующее средство, при этом речь идет о хлорбутаноле, бензиловом спирте или о бензалконии.

В европейской заявке ЕР-А-0988861 раскрываются содержащие G-CSF композиции, которые содержат в качестве буферного вещества HEPES, TES или трицин.

В заявке WO-A1-2005/042024 раскрываются фармацевтические композиции G-CSF, в которых значение рН больше 4,0 и которые содержат кислоту и свободны от поверхностно-активных веществ.

Задача предлагаемого изобретения состоит в том, чтобы изготовить композицию G-CSF, которая, находясь в жидкой форме, может храниться длительное время и которая может обходиться без стабилизирующих добавок, таких как - HSA, аминокислоты или консервирующие средства. Таким способом должна приготовляться обладающая стабильностью при хранении жидкая форма приготовления, которая, по возможности, избегает любого риска в части совместимости препарата.

Эта задача решается в соответствии с изобретением с помощью предмета пункта 1 формулы изобретения. Предпочтительные варианты осуществления изобретения определены в зависимых пунктах формулы изобретения.

Было обнаружено, что жидкие составы G-CSF, которые содержат ацетат в качестве буферного вещества и полисорбат 20 и/или полисорбат 80 в качестве поверхностно-активного вещества, имеют значение рН, лежащее в диапазоне между 4,1 и 4,4, также и в случае присутствия HSA, аминокислот или полимерных стабилизаторов в жидкой форме, могут храниться в течение длительного времени, сохраняя стабильность и без того, чтобы дело дошло до значимых потерь этой стабильности.

Таким образом, изобретение касается стабильной при хранении водной композиции G-CSF, которая наряду с рекомбинантным человеческим G-CSF в качестве биологически активного вещества содержит ацетат в качестве буфера и полисорбата 20 (полиоксиэтилен-сорбитан-монолаурат, обозначаемый также как Tween 20), или полисорбата 80 (полиоксиэтилен-сорбитан-моноолеат, обозначаемый также как Tween 80), или их смеси и имеет значение рН, которое располагается между 4,1 и 4,4.

В предпочтительном варианте осуществления изобретения в случае с поверхностно-активным веществом речь идет о полисорбате 20.

Однако было также обнаружено, что сложный алкиловый эфир полиоксиэтиленсорбитана является, равным образом, пригодным для использования в качестве детергена в формах приготовления настоящего изобретения.

Поверхностно-активное вещество содержится обычно в виде концентрации, интервал которой составляет от 0,0005% (w/v) (масса/объем) до 0,05% (w/v) (масса/объем), предпочтительным образом, в интервале от 0,001% (w/v) до 0,01%, (w/v), особенно предпочтительным образом, в интервале от 0,002% (w/v) до 0,008%, (w/v), а самое большое предпочтение отдается диапазону от 0,004% (w/v) до 0,006%, (w/v), по отношению к общему объему раствора. Как правило композиция согласно изобретению содержит поверхностно-активные вещества полисорбат 20 и/или 80 в концентрации от 0,004% (масса/объем), 0,005% (масса/объем) или 0,006% (масса/объем).

Концентрация буферного вещества ацетата выбирается, предпочтительным образом, так, что при значении рН согласно изобретению, равном от 4,1 до 4,4, достигается как действие, стабилизирующее рН, так и достаточная буферная емкость, но одновременно и концентрация ионов и, тем самым проводящая способность удерживается по возможности на минимальном уровне для того, чтобы можно было избежать агрегатного образования. Так принято, что ацетат содержится в концентрации, интервал которой составляет от 0,5 до 150 ммол/л, предпочтительным образом, интервал составляет от 1 до 100 ммоль/л, особенно предпочтительным образом, интервал составляет от 2 до 50 ммоль/л, и самое большое предпочтение отдается диапазону от 5 до 20 ммоль/л. Как правило, концентрация ацетата составляет 10 ммоль/л.

Буферное вещество ацетат может использоваться как в форме свободной кислоты, так и в форме соли. В качестве солей находят применение, в частности, физиологически приемлемые соли, например щелочные соли или аммиачные соли, предпочтение отдается натриевой соли.

Значение рН композиции находится в интервале, который составляет от свыше 4,0 до 4,5, в частности интервал составляет между 4,1 и 4,4, предпочтительным образом, между 4,1 и 4,3 или соответственно между 4,15 и 4,35, особенно предпочтительный интервал составляет между 4,2 и 4,3 или соответственно между 4,25 и 4,35, и самое большое предпочтение отдается значению, равному приблизительно 4,25 или же приблизительно 4,3.

При желании значение рН композиции можно установить еще и с помощью других кислот или оснований на значение рН в диапазоне от свыше 4,0 до 4,5, от 4,1 до 4,4, от 4,1 до 4,3, от 4,15 до 4,35, от 4,2 до 4,3 или соответственно от 4,25 до 4,35, от 4,25 до 4,3 или соответственно от приблизительно 4,25 или приблизительно 4,3. Подходящими кислотами являются, например, соляная кислота, фосфорная кислота, лимонная кислота или гидрофосфат натрия или калия. Подходящими основаниями являются, например, гидроксиды щелочных металлов и гидроксиды щелочно-земельных металлов, карбонаты щелочных металлов, ацетаты щелочных металлов, цитраты щелочных металлов и гидрофосфаты дищелочных металлов, например гидроксид натрия, ацетат натрия, карбонат натрия, цитрат натрия, двунатриевая соль ортофосфорной кислоты и двукалиевая соль ортофосфорной кислоты, а также аммиак.

Предпочтительным образом, значение рН регулируется с помощью NaOH. Поэтому состав по изобретению содержит в форме исполнения далее ионы натрия как следствие регулирования значения рН с помощью NaOH.

В варианте осуществления изобретения композиция содержит далее в качестве фармацевтически приемлемой добавки полиол, в частности сахарный спирт, в части которого речь идет, особенно предпочтительным образом, о маннитоле или сорбитоле. Эти пищевые добавки отличаются особенно хорошей пригодностью в качестве изотонизирующего средства для того, чтобы составы согласно изобретению сделать изотоническими с помощью крови пациента.

Концентрация полиола составляет обычно до 10,0% (w/v), по отношению к общему объему состава. Предпочтительным образом, концентрация составляет до 8,0% (w/v), особенно предпочтительным образом, до 6% (w/v). Особенно предпочтительным является сорбитол или маннитол в концентрации 5,0% (w/v).

Концентрация G-CSF ориентируется на соответствующую желаемую концентрацию биологически активного вещества в готовом шприце, в котором хранится жидкая композиция согласно изобретению, которая, в конце концов, и используется. Продукт Neupogen® (Нойпоген) (КРАСНЫЙ СПИСОК 2005 года, Но. 51038), имеющийся в торговых предприятиях, можно получить, например, в следующих концентрациях: 300 мкг/0,5 мл; 480 мкг/05 мл и 300 мкг/1,0 мл. При этом соответствуют 10 мкг протеина приблизительно 1,0 миллиону международных единиц (IE). В случае торгового продукта Granocyte (граноците) (КРАСНЫЙ СПИСОК, Но. 51036) активность рекомбинантной G-CSF является несколько выше, здесь соответствуют 10 мкг протеина активности 1,28 миллионов IE.

Типичные концентрации G-CSF находятся в рамках настоящего изобретения в пределах между 0,01 и 3,0 мг/мл, предпочтительным образом, в пределах между 0,1 и 2,5 мг/мл, особенно предпочтительным образом, в пределах между 0,5 и 2,0 мг/мл, а самое большое предпочтение имеет интервал от 0,6 до 1,5 мг/мл. Концентрации 0,6 мг/мл и 0,96 мг/мл представляют собой предпочтительные формы осуществления изобретения. При этом эффективность использованного G-CSF составляет, как правило, около 1,0+/-0,6×10⁸ единиц/мг. G-CSF

В исходных растворах, имеющих более высокую концентрацию, которые обозначают как обычный раствор, концентрация биологически активного вещества может быть выше, смотря по обстоятельствам, она может составлять 5 мг/мл и более.

Составы, получаемые в соответствии с изобретением, могут содержать и другие традиционные, в частности физиологически совместимые стабилизирующие средства и/или вспомогательные вещества и добавки. Например, другие поверхностно-активные вещества, изотонирующие средства, восстановители, антиоксиданты, комплексоны, растворители (Cosolventien), разжижающие средства и хаотропные агенты.

Разумеется, предпочтительной является ситуация, когда композиция не содержит полимерных стабилизирующих средств. Таким образом, следует, например, отказаться от полиалкиленгликолей так же как и от полиэтиленгликоля, гидроксиэтилового крахмала, декстранов, циклодекстринов, а также от протеинов, таких как HSA, и других протеинов плазмы или желатинов.

Предпочтительным образом, в качестве растворителя для целей инъекции применяется чистая вода. Но могут быть использованы и другие подходящие для фармацевтических форм приготовления традиционные растворители. Разумеется, предпочтительным образом, отказываются от растворителей, таких как глицерол, полиэтиленгликоль и пропиленгликоль.

Отказываются также от использования буферных веществ, таких как тартрат, сукцинат, HEPES, TES и трицин.

По возможности, также отказываются от аминокислотных стабилизаторов.

В общем, предпочтительным образом, следует поддерживать число различных вспомогательных веществ в композиции на минимальном уровне. Соответственно этому, по возможногсти, следует избегать также и других сахаров, а не только маннитола и сорбитола, а что касается буферных веществ, содержащихся в композиции, то речь идет, предпочтительным образом, исключительно об ацетате.

Компоненты композиции можно брать из обычных источников, например, на фирме Сигма или на фирме Мерк.

Согласно протоколам уровня техники рекомбинантную G-CSF можно изготавливать и очищать.

Что касается G-CSF, то речь идет здесь о биологически активной G-CSF, которая в состоянии способствовать дифференцированию и пролиферации гематопоэтических клеток-предвестников и вызывать активирование зрелых клеток гематопоэтической системы. Таким образом, композиция G-CSF пригодна для лечения показаний, при которых дача препарата G-CSF является полезной. Понимается, что понятие "биологически активная для человека G-CSF" включает в себя также мутантов и модификации G-CSF, чья аминокислотная последовательность изменяется относительно последовательности дикого типа, которая, однако, имеет аналогичную биологическую активность, как например, дикий тип G-CSF; вы можете сравнить, их описание в WO 01/87925 и ЕР 0456200. G-CSF в смысле настоящего изобретения являются также сопряженные связи G-CSF, в которых протеин присутствует в связанной форме, например, с полимерами, а именно полиалкиленгликоли, в частности с полиэтиленгликолем, что является так называемой PEGyliertes G-CSF или же PEG-G-CSF, или гидроксиалкильные крахмалы, в частности с гидроксиэтиленовым крахмалом. G-CSF может быть гликозилированной или негликозилированной. В то время как рекомбинантный протеин, полученный в E.coli, не имеет углеводных структур и экспериментирование идет с N-терминированным остатком метионина, G-CSF, полученный в эвкарионтических клетках, как например СНО-клетках, как правило глюкозилируется.

Предпочтительным образом, в случае G-CSF, содержащейся в жидкой композиции, речь идет о человеческой Met-G-CSF, полученной в клетках E.coli. Для экспрессии в клетках E.coli в торговых точках можно получить различные экспрессионные системы. Пригодными являются, например, человеческая G-CSF под контролем индуцируемого промотора, например, промотора, индуцируемого IPTG, смотри, например, Sambrook and Russel, Molecular Cloning - A Laboratory Manual, 3-е издание 2001 года, Coldspring Harbour Laboratory Press, Coldspring Harbour, NY, глава 15 или находящиеся в обращении протоколы производителя, например, Promega или Stratagene.

Ферментация клеток-хозяев может также происходить в соответствии со стандартными протоколами, как она описана в патентной и научной литературе, как и последующая очистка, включая уборку так называемого Inclusion Bodies (вирусного включения), которые содержат переэкспримированную в E.coli G-CSF, разложение этих вирусных включений, солюбилизацию, обратную складчатость и хроматографическую очистку, для которых найдутся подходящие протоколы как в патентной литературе, так и в стандартных произведениях химии протеинов, а также в лабораторных справочниках.

Например, в описании изобретения к европейской заявке ЕР-А-0719860 описаны выделение и очистка G-CSF, включая солюбилизацию и обратную складчатость. Общие технологии солюбилизации и ренатурирования денатурированных протеинов были описаны в описании к заявке на выдачу патента ЕР-А-0512097, в заявке ЕР-А-0364926, в ЕР-А-0219874, в WO 01/87925 и могут, кроме того, быть заимствованы из научной литературы и стандартных произведений в области химии протеинов.

В заключение складчатый протеин очищается с помощью хроматографических методов, т.е. он отделяется от других протеинов и прочих загрязнений, которые содержатся после солюбилизации и восстановления.

Хроматографической очисткой занимается, кроме всего прочего, уже упомянутое выше описание изобретения к WO 87/01132 А1, в котором впервые было описано получение G-CSF в E.coli-клетках-хозяине. В рамках очистки рекомбинантной G-CSF в описании изобретения к WO 87/01132 A1, в примере 7 проводилась катионообменная хроматография при использовании CM-Cellulose-колонны.

В описании изобретения к Европейскому патенту ЕР 0719860 А1 производится очистка G-CSF вслед за солюбилизацией и оксидированием с помощью Dowex с целью удаления солюбилизирующего агента, за чем следовала анионообменная хроматография и катионообменная хроматография. Также и в описании изобретения к Европейскому патенту ЕР 0719860 А1 для катионообменной хроматографии находит применение CM-Sepharose.

В описании изобретения к патенту WO 03/051922 А1 дается описание способа очистки для G-CSF, в процессе которого проводится металлоаффинная хроматография, точнее говоря, хроматография на иммобилизированном металле (IMAC). Присоединяясь к металлоаффинной хроматографии, в описании изобретения к патенту WO 03/051922 А1 может иметь место катионообменная хроматография и/или гелевая фильтрация.

В описании изобретения к патенту WO 01/04154 А1 дается описание способа очистки G-CSF, при котором сначала проводится гидрофобная взаимодействующая хроматография, а вслед за ней гидроксиапатитная хроматография. Присоединяясь к гидроксиапатитной хроматографии, происходит гидроксиапатитная хроматография.

Чистота G-CSF, которая создается в композиции согласно изобретению, должна составлять, по меньшей мере, 95%, предпочтительным образом, по меньшей мере, 97% и особое предпочтение отдается, по меньшей мере, 99%, а самое большое предпочтение получает чистота, составляющая свыше 99%. При этом чистота может быть проверена с помощью анализов HPLC (высокоэффективной жидкостной хроматографии). Пригодными здесь являются также rp-SEC- и IEX-анализы. Информацию о подходящих материалах и протоколы для проведения анализов rpHPLC или SEC-HPLC специалист может взять из информации о продукте, которую можно получить у продавца, как например, Vydac (http://www.vydac.com) или TOSOH Bioscience (http://www.tosohbiosep.de).

Как правило, в формах приготовления согласно изобретению используются G-CSF с чистотой, равной более 99%, предпочтительным образом, более 99,5%.

Эффективность использованных G-CSF, по возможности, не должна быть ниже 50.000 IE/мкг, особенно подходящими является G-CSF, имеющая активность, равную приблизительно 100.000 IE/мкг или выше.

Определение выхода Met-G-CFS описано также в Herman et al. (1996) Pharm. Biotechnol. 9: 303-328. При этом точное процентное содержание Met-G-CSF определяется путем интеграции площади пика и пересчета на основании коэффициента экстинкции.

После очистки G-CSF может быть проанализирован в части своего количества и своей активности. Качественный анализ может осуществляться через анализ SDS-PAGE с последующей окраской Goomassie-Brilliant-Blue или rpHPLC. В качестве стандарта для анализов можно использовать получаемый коммерческим путем препарат G-CSF. Дополнительно можно проводить Peptide Map или, соответственно, масс-спектроскопию. Активность очищенной G-CSF можно определять посредством различных биологических тестовых способов, какие, например, описаны в Shirafuji et al. (1989) Exp. Hematol. 17 (2): 116-119: Oh-Eda et al. (1990) J. Biol. Chem. 265 (20): 11432-11435; Stute et al. (1992 Blood 79 (11): 2849-2854 и Oshima et al. (2000) Biochem. Biophys. Res. Commun. 267 (3): 924-927.

Впрочем все хроматографии проводятся в соответствии с рекомендациями и протоколами тех, кто предлагает матрицы или, соответственно, колонны (например, относительно скорости течения, объемов колонн, используемых для промывки или, соответственно, для элюирования, диаметров и значений высоты слоя катализатора и т.д.).

Биологическая активность полученной рекомбинантной G-CSF может определяться с помощью Bioassay и может сравниваться с одним из стандартов, а именно с полученной коммерческим способом G-CSF (Neupogen®). Для этого может использоваться мышиная клеточная линия NFS-60, которая ответственна за G-CSF. Для этого эта клеточная линия культивируется в среде RPMI 1640 (Фирма "Бахем", Хайдельберг), которая содержит 1,5 г/л карбоната натрия, 4,5 г/л глюкозы, 10 mM Hepes и 1,0 mM пирувата натрия и дополнена 2 mM глутамина, 10% FCS, 0,05 mM 2-меркаптоэтанола и 60 ng/ml G-CSF.

Для проведения теста активности клетки дважды промывают средой без G-CSF, при концентрации 2×10⁴ клеток на чашку высевают на пластины с 96 чашками и инкубируют в течение трех дней при температуре 37 град. С и 4,5% CO₂ с разными концентрациями очищенного G-CSF и стандарта. После этого их подкрашивают реактивом ХТТ и замеряют абсорбцию при 450 нм в устройстве для считывания информации с микротитровальных пластин. Желательно, чтобы клетки, которые были обработаны полученной G-CSF, так же хорошо росли, как и клетки, которые были обработаны стандартным продуктом (например, торговым продуктом Neupogen®), так как потом можно будет исходить из одинаковой биологической активности обеих проб G-CSF.

Получение композиции осуществляется, равным образом, в соответствии с традиционными методами уровня техники.

Обычно буферные компоненты и компоненты поверхностно-активных веществ, а также, при определенных условиях, другие фармацевтически совместимые вспомогательные вещества сначала в соответствующих количествах растворяют в водном растворителе, обычно - это стерильная вода. Если есть необходимость, то с помощью ацетатного раствора или с помощью других кислот или оснований, какие, например названы выше, устанавливают значение рН. После обычного шага стерилизации, например, фильтрации посредством стерильного фильтра, добавляют G-CSF в желаемой концентрации. Однако можно также сразу, без всяких церемоний поместить G-CSF в водный раствор, а значение рН устанавливать после этого с помощью ацетата или подходящих кислот или оснований, предпочтительным образом, с помощью NaOH, на желаемую величину.

В заключение готовую жидкую композицию наливают в соответствующую емкость, в которой она хранится до момента ее применения. В случае емкости речь идет, в частности, о готовом шприце, о прокалаемых сосудах или об ампулах.

Составы согласно изобретению могут использоваться в различных формах приготовления. Например, пригодными являются формы приготовления в виде раствора для инъекций или растворов для вливаний (инфузий), в частности для внутривенного, внутримышечного и подкожного применения. Но составы могут быть также использованы для получения других форм применения, например трансферсомов, липосомов или гидрогелей.

Жидкая композиция по изобретению предлагает не только преимущества, состоящие в том, что она отказывается от потенциально иммогенных соединений и содержит по возможности незначительное число ингредиентов, но и не требует также ни в одной фазе получения лиофилизации. В результате этого, во-первых, экономят расходы, связанные с лиофилизацией, а во-вторых, появляется возможность избежать рисков, связанных с механическими проблемами, например, если лиофилизат не в полной или не в достаточной степени может восстанавливаться.

Что касается понятия "стабильный в части хранения", то в рамках настоящего изобретения понимается, что содержание активных молекул G-CSF после трехмесячного хранения при 25°С жидкой композиции G-CSF все еще составляет 80% или более от исходной концентрации. Предпочтительным образом, остаточное содержание активности G-CSF после трехмесячного хранения при 25°С составляет еще, по меньшей мере, 85%, предпочтительным образом, по меньшей мере, 90%, и максимальное предпочтение составляет, по меньшей мере, 95% от исходной активности. Активность G-CSF может определяться с помощью обычных тестов активности, какие уже описаны для G-CSF в уровне техники.

Под понятием «жидкая композиция» в рамках настоящего изобретения понимают, что композиция G-CSF вместе с другими веществами, содержащимися в композиции вещества, определяется в отсутствие фазы процесса получения, таким образом, что ни во время или после смешивания вещества лиофилизируют, и композиция используется для внутривенного или подкожного применения в качестве инъекций или инъекционного раствора.

В предпочтительной форме осуществления изобретения композиция содержит наряду с биологически активным веществом G-CSF, поверхностно-активным веществом, выбранным из полисорбата 20, полисорбата 80 или их смесью, ацетат, сорбитол, ионы натрия и воду, и никаких более ингредиентов, и имеет значение рН, составляющее между 4,2 и 4,3 или между 4,25 и 4,35, в частности между 4,25 и 4,3. Особое предпочтение отдается использованию полисорбата 20 как единственного поверхностно-активного вещества в композиции.

Примеры

Следующие примеры должны пояснять изобретение, не ограничивая его. Содержащие G-CSF составы были изготовлены, когда буферное вещество ацетат в форме натриевой соли вместе с полисорбатом 20 или полисорбатом 80 и сорбитолом сначала растворяли в дистиллированной и стерильной воде, а после этого значение рН с помощью NaOH устанавливали на желаемое значение, которое находится между значениями 4,2 и 4,3. Не гликолизированную рекомбинантную человеческую G-CSF (Filgrastim, Met-G-CSF) добавляли при желаемой концентрации. Предпочтительным образом, получение и розлив композиции в готовые шприцы происходили в условиях насыщения азотом.

Конкретные композиции в соответствии с изобретением составов и их значения рН указаны в приводимой ниже таблице. При использовании полисорбата 80 вместо полисорбата 20 обнаружились сравнимые результаты. То же самое касается применения маннитола вместо сорбитола.

Изготовленные в соответствии с изобретением формы композиции вместе с соответствующими композициями, имеющими значение рН, равное 4,0, которые представляют собой уровень техники и которые служили сравнительными композициями, были положены на хранение при разных температурах на разные промежутки времени.

Некоторые данные анализов на длительную стабильность представлены в приложенных изображениях (G-CSF-концентрация соответственно 0,6 мг/мл). Рисунок 1 показывает SEC-анализы, а рисунок 2 - IEX-анализы, в каждом случае при хранении на складе сроком до 6 месяцев при температуре 30°С и, соответственно, 40°С.

В общей сложности, изготовленные в соответствии с изобретением формы композиции показали сравнимые результаты, такие как сравнительная композиция, которая отличается исключительно кислым значением "рН", а именно рН, равным 4,0, от тестовых композиций, изготовленных в соответствии с изобретением.

Настоящее изобретение касается жидких композиций G-CSF (гранулоцитарный колониестимулирующий фактор), и способа их получения. В частности, изобретение касается жидкой композиции, содержащей G-CSF в количестве от 0,01 до 5,0 мг/мл - в качестве биологически активного вещества, ацетат - в качестве буферного вещества, полисорбат 20 и/или полисорбат 80 в качестве поверхностно-активного вещества и необязательно фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, причем композиция имеет значение рН, лежащее в диапазоне между 4,1 и 4,4. Композиция обладает стабильностью при хранении. 2 н. и 15 з.п. ф-лы, 2 ил.

1. Жидкая композиция G-CSF (гранулоцитарный колониестимулирующий фактор), содержащая G-CSF в концентрации от 0,01 до 5,0 мг/мл в качестве биологически активного вещества, ацетат в качестве буферного вещества, полисорбат 20 и/или полисорбат 80 в качестве поверхностно-активного вещества и необязательно фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, причем композиция имеет значение рН 4,1-4,4.

2. Жидкая композиция по п.1, содержащая G-CSF в концентрации от 0,01 до 3,0 мг/мл.

3. Жидкая композиция по п.1, имеющая значение рН 4,1-4,3.

4. Жидкая композиция по п.1, имеющая значение рН 4,2-4,3.

5. Жидкая композиция по п.1, имеющая значение рН 4,25.

6. Композиция по п.1, причем концентрация ацетатного буфера составляет от 2 до 50 ммоль/л.

7. Композиция по п.1, причем концентрация ацетатного буфера составляет 10 ммоль/л.

8. Композиция по п.1, причем композиция содержит в качестве фармацевтически приемлемого вспомогательного вещества сорбитол и/или маннитол.

9. Композиция по п.8, причем композиция содержит сорбитол.

10. Композиция по п.1, которая свободна от консервирующих средств.

11. Композиция по п.1, которая свободна от аминокислот.

12. Композиция по п.1, которая свободна от полимерных стабилизирующих средств.

13. Композиция по п.1, причем значение рН было установлено с помощью NaOH.

14. Композиция по п.13, содержащая ионы натрия.

15. Композиция по одному из пп.1-14, состоящая из G-CSF, полисорбата 20 и/или полисорбата 80, сорбитола, ацетата и натрия.

16. Композиция по одному из пп.1-14, содержащая полисорбат 20 в качестве единственного поверхностно-активного вещества.

17. Способ получения жидкой композиции G-CSF по одному из пп.1-16, включающий смешивание G-CSF-протеина с раствором, включающим ацетат в качестве буферного агента, полисорбат 20 и/или полисорбат 80 в качестве поверхностно-активного вещества и необязательно фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества.