СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ УВЕИТОВ ПРИ БОЛЕЗНИ БЕХТЕРЕВА И РЕВМАТОИДНОМ АРТРИТЕ Российский патент 2012 года по МПК G01N33/573 

Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и предназначено для дифференциальной диагностики ревматических увеитов.

Существуют различные формы увеитов при ревматических заболеваниях (ревматоидном артрите, болезни Бехтерева, синдроме Рейтера и др.). Диагностика таких увеитов носит сложный и длительный характер, включающий сбор анамнеза, лабораторные и рентгенологические исследования, проведение компьютерной томографии, в дальнейшем - консультацию ревматолога, что часто затягивает постановку диагноза на длительное время. Кроме того, нередко поражения глаз являются дебютом и появляются за несколько лет до развития симптомов системного ревматического заболевания.

Диагностика ревматических заболеваний и сопровождающих их увеитов основана на выявлении различных специфических аутоантител в сыворотке крови больных (Мальханов В.Б., 1997; Biglino А., 1996). Известны способы диагностики ревматоидного артрита (Swedler W. et al, 1997) и увеита (Азнабаев М.Т., Мамбеткулова Г.К., 2001; Дроздова Е.А., 2006) путем выявления методом иммуноферментного анализа аутоантител к иммуноглобулину G (IgG) так называемого ревматоидного фактора (РФ). С диагностической целью Swedler W. et al. (1997) предлагают определять уровень аутоантител к IgG в сыворотке крови и при его титре, превышающем 1:80, диагностировать ревматоидный артрит. Недостатком способа является его инвазивность, трудоемкость и дороговизна, так как предусматривается двукратный забор крови для проведения иммуноферментного анализа - выявление серопозитивных по РФ сывороток, далее определение концентрации IgG путем титрования.

Известен способ диагностики ревматоидного увеита путем определения аутоантител к нативной ДНК (нДНК) и к IgG (РФ) (Катаргина Л.А. и соавторы, «Клинические вариации и иммунологические особенности ревматоидных увеитов у детей разного возраста», Вестник офтальмологии, 2001, №1, с.30-33). Способ заключается в исследовании состояния межорганного иммунитета у детей с ревматоидным увеитом, включает определение РФ, антинуклеарных антител, в том числе антител к нативной и денатурированной ДНК, в сыворотке крови и слезной жидкости. Недостатком указанного метода является низкая частота диагностики и невозможность диагностировать нозологические формы ревматических увеитов.

При постановке диагноза ревматического увеита (Азнабаев М.Т., Мамбеткулова Г.К., 2001; Дроздова Е.А., 2006) диагностическое значение имеет повышение содержания циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК). Однако авторами не связывается величина их уровня с тем или иным видом ревматического увеита.

Трудности в диагностике увеитов при ревматических заболеваниях связаны с возможностью выявления не только различных видов аутоантител, но и с обнаружением одних и тех же аутоантител при различных заболеваниях (Потехин О.Е., Малышев B.C., 2005).

Прототипом изобретения является способ диагностики ревматических увеитов, заключающийся в том, что в острый период болезни в сыворотке крови больного увеитом определяют аутоантитела к IgG и к нативной ДНК, а также уровень ЦИК. При обнаружении аутоантител к IgG на фоне отсутствия аутоантител к нативной ДНК или при обнаружении аутоантител к IgG на фоне уровня циркулирующих иммунных комплексов от 190 до 335 усл. ед. диагностируют ревматоидный увеит, при выявлении аутоантител к нативной ДНК на фоне отсутствия аутоантител к IgG или выявлении аутоантител к нативной ДНК на фоне уровня циркулирующих иммунных комплексов от 65 до 189 усл. ед. - увеит при болезни Бехтерева (патент RU 2314534, 2008 г.).

Задачей изобретения является расширение арсенала средств дифференциальной диагностики ревматических увеитов.

Техническим результатом изобретения является повышение частоты диагностики ревматических увеитов, уменьшение инвазивности способа.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе дифференциальной диагностики увеита при ревматоидном артрите и болезни Бехтерева, включающем определение иммунологического показателя в биологической жидкости в острый период заболевания, согласно изобретению в качестве иммунологического показателя определяют в слезной жидкости концентрации интерферона-α и интерферона-γ, после чего определяют отношение концентрации интерферона-α к концентрации интерферона-γ и при его значении в интервале 1,4-2,0 диагностируют увеит ревматоидной этиологии, в пределах 4,5-6,5 - увеит при болезни Бехтерева.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.

В острый период болезни с помощью микрокапилляра собирают слезную жидкость из конъюнктивальной полости пациентов, не касаясь роговой и слизистой оболочек глазного яблока. Определение содержания интерферонов-α и -γ в слезной жидкости больных проводят твердофазным «сэндвич»-вариантом иммуноферментного анализа с использованием тест-систем «Вектор-Бест» (г. Новосибирск).

В микропланшет с иммобилизованными антителами вносят по 100 мкл стандартов интерферонов-α и -γ, в остальные - по 100 мкл исследуемых образцов слезной жидкости. Планшет инкубируют 2 часа при +18 - +25°С при непрерывном встряхивании, затем 5 раз промывают буфером. Проводят полную аспирацию оставшейся жидкости.

В каждую ячейку микропланшета вносят по 100 мкл конъюгата. Планшет инкубируют в течение 60 мин при +18 - +25°С при непрерывном встряхивании. Жидкость из ячеек удаляют и 5 раз промывают буфером. Планшет сушат путем постукивания по поверхности лабораторного стола, покрытого фильтровальной бумагой.

Во все лунки планшета вносят по 100 мкл раствора субстрата с красителем. Микропланшет инкубируют в течение 25 минут при комнатной температуре в защищенном от прямых лучей месте на шейкере. Наблюдается развитие голубой окраски. Реакцию останавливают добавлением 100 мкл стоп-реагента в каждую лунку. Общее время постановки исследования 4,5 часа.

Учет результатов проводят с использованием автоматического фотометра «Multiscan» при длине волны 450 нм. Результаты выражают в пг/мл. Нормальный уровень исследуемых цитокинов в слезной жидкости у практически здоровых лиц (контрольная группа), как правило, не превышает 8,4 пг/мл для интерферона-α и 28,6 пг/мл - интерферона-γ.

Нами проведено исследование слезной жидкости в остром периоде заболевания у 17 больных увеитом, ассоциированным с системным ревматическим заболеванием, с целью определения соотношения уровней интерферонов-α и -γ. У 12 из 17 пациентов в анамнезе имелся ревматоидный артрит, у 5 - болезнь Бехтерева.

В острый период болезни с помощью микрокапилляра собирали слезную жидкость из конъюнктивальной полости пациентов, не касаясь роговой и слизистой оболочек глазного яблока. Определение содержания интерферонов-α и -γ в слезной жидкости больных проводили твердофазным «сэндвич»-вариантом иммуноферментного анализа с использованием тест-систем «Вектор-Бест» (г. Новосибирск).

В микропланшет с иммобилизованными антителами вносили по 100 мкл стандартов интерферонов-α и -γ, в остальные - по 100 мкл исследуемых образцов слезной жидкости. Планшет инкубировали 2 часа при +18 - +25°С при непрерывном встряхивании, затем 5 раз промывали буфером. Проводили полную аспирацию оставшейся жидкости.

В каждую ячейку микропланшета вносили по 100 мкл конъюгата. Планшет инкубировали в течение 60 мин при +18 - +25°С при непрерывном встряхивании. Жидкость из ячеек удаляли и 5 раз промывали буфером. Планшет сушили путем постукивания по поверхности лабораторного стола, покрытого фильтровальной бумагой.

Во все лунки планшета вносили по 100 мкл раствора субстрата с красителем. Микропланшет инкубировали в течение 25 минут при комнатной температуре в защищенном от прямых лучей месте на шейкере. Наблюдалось развитие голубой окраски. Реакцию останавливали добавлением 100 мкл стоп-реагента в каждую лунку. Общее время постановки исследования 4,5 часа.

Учет результатов проводили с использованием автоматического фотометра «Multiscan» при длине волны 450 нм. Результаты выражали в пг/мл. Подтверждением предлагаемого нами способа дифференциальной диагностики является совпадение показателей соотношения концентраций исследуемых цитокинов в слезной жидкости с прогнозируемым клиническим диагнозом увеита в 69,2% случаев.

В группе контроля (практически здоровые лица) значение соотношения концентраций интерферонов альфа/гамма в слезной жидкости, по нашим данным, составляет 3,4±0,3.

Преимуществом предлагаемого способа дифференциальной диагностики увеитов, ассоциированных с ревматоидным артритом (РА) или болезнью Бехтерева (ББ), является однократное определение содержания интерферонов-α и -γ только в слезной жидкости в остром периоде (на 7-10 дни) заболевания, экономия (более чем в 2 раза) времени на заготовку исследуемых образцов, расхода дорогостоящих реактивов и неинвазивность методики.

Преимуществом предлагаемого способа дифференциальной диагностики ревматических увеитов является высокая эффективность предлагаемого метода: у 9 из 12 больных (75,0%) при значении соотношения уровней интерферона-α/интерферона-γ в интервале 1,4-2,0 диагностируют увеит ревматоидной этиологии, а у 4 из 5 больных (80%) при значении соотношения уровней интерферона-α/интерферона-γ в интервале 4,5-6,5 - увеит при болезни Бехтерева, то есть в целом диагноз был правилен в 76,5% случаев.

Предлагаемый способ иллюстрируется следующими клиническими примерами.

Пример 1. Больная С., 58 лет (и/б №2237, 2010 г.), поступила в клинику с диагнозом: острый передний увеит левого глаза на фоне ревматоидного артрита. Из анамнеза: ревматоидный артрит в течение 7 лет. В слезной жидкости больной на 9-й день заболевания установлено значение соотношения уровней интерферона-α/интерферона-γ (14,8/8,2 пг/мл), равное 1,8. Предлагаемый способ диагностики подтвердил диагноз увеита, протекающего на фоне ревматоидного артрита.

Пример 2. Больная С., 37 лет (и/б №1973, 2010 г.), поступила в клинику с диагнозом: рецидив переднего увеита правого глаза, предположительно на фоне ревматоидного артрита. Из анамнеза: периодически боли в мелких суставах кистей, припухлость. В слезной жидкости больной на 7-й день заболевания установлено соотношение уровней интерферона-α/интерферона-γ (54,3/36,2 пг/мл) равное 1,5. Согласно предложенному способу дифференциальной диагностики было сделано предположение о возможном диагнозе - ревматоидном атрите, который позже был подтвержден ревматологом. Таким образом, предлагаемый способ диагностики подтвердил диагноз увеита, протекающего на фоне ревматоидного артрита.

Пример 3. Больной С., 38 лет (и/б №423, 2008 г.), поступил в клинику УфНИИ глазных болезней с диагнозом: рецидив хронического увеита левого глаза при болезни Бехтерева. Из анамнеза: болезнь Бехтерева в течение 3 лет. Согласно предлагаемому способу на 8-й день болезни проведено исследование слезной жидкости. Соотношение уровней интерферона-α/интерферона-γ (134,6/25,9 пг/мл) в слезной жидкости было равно 5,2. Действительно, предлагаемый способ дифференциальной диагностики ревматического увеита подтвердил правильность поставленного диагноза.

Пример 4. Больной П., 38 лет (и/б №2186, 2010 г.), поступил в Уфимский НИИ глазных болезней с диагнозом: рецидив хронического увеита левого глаза предположительно при болезни Бехтерева. Из анамнеза: боли и скованность в позвоночнике, наличие антигена HLA В27. На 10-й день болезни исследовали слезную жидкость и вычислили соотношение уровней интерферона-α/интерферона-γ (215,6/44,0 пг/мл) в слезной жидкости, которое составило 4,9. Больной был направлен на консультацию к ревматологу. После обследования ему выставлен диагноз: болезнь Бехтерева. Предлагаемый способ дифференциальной диагностики ревматического увеита подтвердил наши предположения.

Таким образом, предлагаемый способ делает достоверной дифференциальную диагностику ревматических увеитов, а именно при ревматоидном увейте - у 9 больных из 12, при увеите, протекающем на фоне болезни Бехтерева, - у 4 из 5, то есть в целом диагноз правилен у 13 из 17 пациентов (76,5%). Использование данного способа дифференциальной диагностики увеитов на фоне ревматических заболеваний повышает ее частоту и устанавливает нозологическую форму увеита при ревматоидном артрите и при болезни Бехтерева.

Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики увеита при ревматоидном артрите и болезни Бехтерева. Для этого в острый период болезни в слезной жидкости больного увеитом определяют соотношение концентраций интерферона-α и интерферона-γ. При его значении в интервале 1,4-2,0 диагностируют увеит ревматоидной этиологии, в пределах 4,5-6,5 - увеит при болезни Бехтерева. Изобретение повышает точность дифференциальной диагностики ревматических увеитов. 4 пр.

Способ дифференциальной диагностики увеита при ревматоидном артрите и болезни Бехтерева, включающий определение иммунологического показателя в биологической жидкости в острый период заболевания, отличающийся тем, что в качестве иммунологического показателя определяют концентрации интерферона-α и интерферона-γ в слезной жидкости, после чего определяют отношение концентрации интерферона-α к концентрации интерферона-γ и при его значении в интервале 1,4-2,0 диагностируют увеит ревматоидной этиологии, в пределах 4,5-6,5 - увеит при болезни Бехтерева.