КОМПОЗИЦИЯ, ВКЛЮЧАЮЩАЯ ОРИДОНИН И ПРЕДНАЗНАЧЕННАЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНЫХ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ОПУХОЛЕЙ Российский патент 2012 года по МПК A61K31/353 A61K31/352 A61K31/121 A61P35/00 

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к лечению неоплазий, резистентных к терапевтическому лечению. В частности, хотя и не исключительно, настоящее изобретение относится к сочетанию активных ингредиентов и способу, применимому для лечения злокачественных опухолей человека, резистентных к таксолу.

Уровень техники

Рак является основной причиной страданий и смертности во всем мире, и ожидается возрастание его распространения, поскольку современные технологии увеличивают предполагаемую продолжительность жизни. Иногда в течение жизни клетки происходят незначительные альтернации ДНК, известные как мутации. Некоторые виды таких мутаций, которые известны как «молчащие мутации», не приводят к каким-либо физическим изменениям в функции клеток, однако другие могут изменять образ жизнедеятельности клеток.

Существует ряд механизмов для защиты клетки, в которой произошла мутация, от продолжения ее в клеточном цикле, и если генетическая ошибка не будет устранена, клетка «уничтожит себя» способом, известным как апотоптоз. Однако если мутация происходит в белке, задействованном в регулировании клеточного цикла, она может привести к быстрой неуправляемой пролиферации клеток, известной как неоплазия, которая, в свою очередь, может приводить к развитию рака.

Раковые клетки, как правило, оказывают неблагоприятное воздействие на организм. Рак может распространяться посредством инвазии прилежащих тканей клетками злокачественных неопластических опухолей и посредством процесса, известного как метастазирование, при котором клетки злокачественного новообразования диссоциируют из опухоли и разносятся к удаленным сайтам. Сам по себе рак проявляется в различных формах, в различных типах тканей и может характеризоваться степенью инвазивности и агрессивностью.

Рак может лечиться различными способами, включая хирургическое вмешательство, радиотерапию и химиотерапию. Правильный выбор используемой терапии может зависеть от одного или нескольких факторов, например, стадии развития, которой достиг рак, степени и области его распространенности и влияний на стиль жизни, которые могут иметь место.

Для достижения повышенного терапевтического действия могут совместно применяться различные способы лечения. Например, опухоль может удаляться хирургически и затем применяться химиотерапия или радиотерапия для целевого поражения оставшихся раковых клеток. Однако различные способы с хорошими результатами могут применяться и сами по себе.

Химиотерапия включает введение лекарственных средств, зачастую направленное на быстро делящиеся клетки. Большое количество химиотерапевтических лекарственных средств воздействуют на репликацию ДНК до деления клеток. Однако, несмотря на то, что достигнуты большие успехи в области разработки химиотерапевтических лекарственных средств, генетическая нестабильность раковых клеток, в особенности в случаях запущенного рака, приводит к высокой частоте появления раковых заболеваний, резистентных к лекарственному средству и даже полирезистентных к лекарственным средствам (MDR).

Для лечения рака IV стадии, наиболее запущенной стадии рака, а также рецидивирующего ракового заболевания используется сочетание двух разрешенных химиотерапевтических лекарственных средств - таксола и цисплатина. Очевидно, что неспособность реагировать на любое из этих лекарственных средств или даже на комбинированное применение обоих ограничивает выбор онкологов при подборе терапевтических лекарственных средств для продолжения лечения.

Было бы полезно предоставить в распоряжение терапевтическое лекарственное средство или сочетание терапевтических средств, применимое для лечения рака, резистентного к терапевтическим лекарственным средствам.

Таким образом, предметом настоящего изобретения является предоставление лекарственных средств, применимых для лечения раковых заболеваний, резистентных к терапевтическим лекарственным средствам.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В соответствии с первым аспектом настоящее изобретение предоставляет применение соединения, имеющего структурную формулу I:

Формула I

или его фармацевтически приемлемых солей и сложных эфиров, селективно замещенных аналогов, или сочетания одного или нескольких из перечисленных выше соединений с одним или несколькими соединениями, выбранными из:

соединения, имеющего структурную формулу II

Формула II

где R¹ представляет собой водород, C₁-C₆ алкил; R² представляет собой водород, C₁-C₆ алкил или C₂-C₆ ацил; и R³-R¹⁰ независимо представляют собой водород, гидроксильную группу, C₁-C₆ алкил, C₁-C₆ алкокси-группу или C₂-C₆ ацил при условии, что, по меньшей мере, четыре заместителя из R³-R¹⁰ представляют собой водород, его фармацевтически приемлемых солей и сложных эфиров, селективно замещенных аналогов, или сочетания одного или нескольких из перечисленных выше соединений; и

соединения структурной формулы IV

где R¹¹-R¹³ независимо представляют собой водород или C₁-C₆алкил; и R¹⁴-R²⁰ независимо представляют собой водород, C₁-C₆алкил, C₁-С₆алкокси или С₂-С₆ацил при условии, что, по меньшей мере, три заместителя из R¹⁴-R²⁰ представляют собой водород, его фармацевтически приемлемых солей и сложных эфиров, селективно замещенных аналогов, или сочетания одного или нескольких из перечисленных выше соединений.

Неоплазия, подлежащая лечению, может быть злокачественной или доброкачественной и в предпочтительном варианте осуществления может быть выбрана из группы гормон-зависимых раковых заболеваний. В частности, предпочтительная неоплазия, подлежащая лечению лекарственными средствами согласно настоящему изобретению, может представлять собой одну или несколько неоплазий, выбранных из группы, включающей рак предстательной железы, рак молочной железы, эндометриальный рак, рак ободочной кишки, рак легкого, рак мочевого пузыря, рак яичка, рак яичника, рак щитовидной железы или рак кости. Предпочтительно неоплазии, подлежащие лечению, представляют собой раковые заболевания человека.

В одном особенно предпочтительном варианте осуществления изобретения лекарственные средства согласно изобретению могут применяться для лечения резистентного к таксолу рака яичника или рака молочной железы.

Соединение, имеющее структурную формулу II, предпочтительно является замещенным таким образом, что R¹ представляет собой метил, R² представляет собой водород и R³-R¹⁰ независимо представляют собой водород, метил, этил, метокси-группу, этокси-группу, ацетил или пропионил при условии, что, по меньшей мере, пять заместителей из R³-R¹⁰ представляют собой водород.

Соединение, имеющее структурную формулу II, наиболее предпочтительно является замещенным таким образом, что оно имеет структурную формулу III

Формула III

Соединение, имеющее структурную формулу IV, предпочтительно является замещенным таким образом, что R11-R14 представляют собой водород и R15-R20 независимо представляют собой водород, метил, этил, метокси-группу, этокси-группу, ацетил или пропионил при условии, что, по меньшей мере, четыре из R15-R20 представляют собой водород.

Соединение, имеющее структурную формулу IV, наиболее предпочтительно является замещенным таким образом, что оно имеет структурную формулу V.

Резистентные раковые заболевания, подлежащие лечению лекарственными средствами согласно настоящему изобретению, могут представлять собой раковые заболевания, резистентные к таксолу или цисплантину.

В предпочтительных вариантах осуществления изобретения резистентные раковые заболевания, подлежащие лечению лекарственными средствами согласно настоящему изобретению, представляют собой раковые заболевания, резистентные к таксолу.

Настоящее изобретение предоставляет также композицию для лечения резистентного к лекарственным средствам ракового заболевания, включающую фармацевтически эффективное количество соединения, соответствующего формуле I, его фармацевтически приемлемых солей и сложных эфиров, селективно замещенных аналогов или сочетания одного или нескольких из перечисленных соединений с одним или несколькими соединениями, выбранными из:

соединения формулы II, его фармацевтически приемлемых солей и сложных эфиров, селективно замещенных аналогов, или сочетания одного или нескольких из перечисленных выше соединений; и

соединения формулы IV, его фармацевтически приемлемых солей и сложных эфиров, селективно замещенных аналогов, или сочетания одного или нескольких из перечисленных соединений.

Предпочтительно композиция содержит соединение формулы III.

Предпочтительно композиция содержит соединение формулы V.

В предпочтительных вариантах осуществления изобретения композиции согласно настоящему изобретению могут дополнительно одновременно включать соединение формулы II и соединение формулы IV, их фармацевтически приемлемые соли и сложные эфиры, их селективно замещенные аналоги или сочетание двух или большего количества из перечисленных соединений.

Лекарственные средства согласно изобретению могут включать соединения, имеющие формулу III и формулу V.

Лекарственные средства согласно изобретению могут дополнительно включать любое число дополнительных химиотерапевтических лекарственных средств или лекарственных средств, которые могут вводиться совместно с химиотерапевтическими средствами для повышения их действия, например факторами роста, такими как TNFα, ингибиторы каспасов или любое другое средство, способное повышать терапевтическое действие, которое должно быть получено в помощью лекарственного средства согласно настоящему изобретению.

Лекарственные средства согласно настоящему изобретению могут принимать форму таблетки, капсулы, подлежащего введению раствора, имплантируемой матрицы или имплантируемого устройства с медленным высвобождением действующего вещества либо устройства или любой другой формы, известной в данной области техники.

Соединения для применения в качестве активных ингредиентов в лекарственных средствах согласно настоящему изобретению могут быть получены для обеспечения, например, сайт-направленного применения, стойкости к разложению в желудочно-кишечном тракте и/или улучшенных фармакокинетических свойств.

Лекарственные средства согласно настоящему изобретению также могут принимать форму порошка для прямого вдыхания, свечи или раствора, который может подходить для чрезкожного введения. Например, одно лекарственное согласно изобретению может просто включать раствор активного ингредиента (S) в диметилсульфоксиде.

Лекарственные средства согласно изобретению могут быть произведены с использованием любых способов, известных в данной области техники. Например, композиции могут подвергаться измельчению сухим способом и смешиваться перед таблетированием, поэтому композиция может обязательно содержать другие фармацевтически приемлемые наполнители, такие как добавка, повышающая скольжение, выбранная из группы, включающей стеарат кальция, стеарат магния, стеарат цинка, стеариновую кислоту, тальк и их смеси, связующий агент, выбранный из группы, включающей гидроксипропилметилцеллюлозу, гидроксиэтилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, метилцеллюлозу и поливинилпирролидон (PVP).

Лекарственные средства согласно изобретению могут содержать любые фармацевтически приемлемые наполнители, такие как связующие вещества, разбавители, пигменты, дезинтегрирующие вещества, добавки, повышающие скольжение, смачивающие агенты, буферы и другие наполнители, традиционно используемые в фармацевтической и химической областях техники. Некоторые примеры наполнителей для применения в лекарственных средствах согласно настоящему изобретению включают микрокристаллическую целлюлозу, лактозу, крахмал, коллоидный диоксид кремния, тальк, сложные эфиры глицерина, стеарилфумарат натрия и диоксид титана.

Способы

В соответствии с дополнительным аспектом настоящее изобретение предоставляет также способ лечения человека, нуждающегося в лечении неоплазии, резистентной к терапевтическому лечению, способ включает введение композиции, содержащей примерно 0,05% (мас./мас.) или большее количество соединения, имеющего структурную формулу I:

или его фармацевтически приемлемых солей и сложных эфиров, селективно замещенных аналогов или сочетания одного или нескольких из перечисленных выше соединений с одним или несколькими соединениями, выбранными из:

соединения, имеющего структурную формулу II

где R¹ представляет собой водород, C₁-C₆алкил; R² представляет собой водород, C₁-C₆алкил или С₂-С₆ацил; и R³-R¹⁰ независимо представляют собой водород, гидроксильную группу, C₁-C₆алкил, C₁-С₆ алкокси-группу или C₂-C₆ацил при условии, что, по меньшей мере, четыре заместителя из R³-R¹⁰ представляют собой водород, его фармацевтически приемлемых солей и сложных эфиров, селективно замещенных аналогов или сочетания одного или нескольких их перечисленных выше соединений; и соединения, имеющего структурную формулу IV

где R¹¹-R¹³ независимо представляют собой водород или C₁-C₆алкил; и R¹⁴-R²⁰ независимо представляют собой водород, C₁-C₆алкил, C₁-C₆алкокси или C₂-C₆ацил при условии, что, по меньшей мере, три заместителя из R¹⁴-R²⁰ представляют собой водород, его фармацевтически приемлемых солей и сложных эфиров, селективно замещенных аналогов или сочетания одного или нескольких из перечисленных соединений.

Неоплазия, подлежащая лечению способом согласно настоящему изобретению, может быть злокачественной или доброкачественной и в предпочтительных вариантах осуществления изобретения может быть выбрана из группы гормон-зависимых раковых заболеваний. В частности, предпочтительная неоплазия, подлежащая лечению способом согласно настоящему изобретению, может быть одной неоплазией или несколькими неоплазиями, выбранными из группы, включающей рак предстательной железы, рак молочной железы, эндометриальный рак, рак ободочной кишки, рак легкого, рак мочевого пузыря, рак яичка, рак яичника, рак щитовидной железы рак или рак кости. Предпочтительно неоплазии, подлежащие лечению, представляют собой раковые заболевания человека. В одном особенно предпочтительном варианте осуществления изобретения лекарственные средства согласно изобретению могут применяться для лечения резистентного к таксолу рака яичника или рака молочной железы. Соединение, имеющее структурную формулу II, предпочтительно является замещенным таким образом, что R¹ представляет собой метил, R² представляет собой водород и R³-R¹⁰ независимо представляют собой водород, метил, этил, метокси-группу, этокси-группу, ацетил или пропионил при условии, что, по меньшей мере, пять из R³-R¹⁰ представляют собой водород.

Соединение, имеющее структурную формулу II, наиболее предпочтительно является замещенным таким образом, что оно имеет структурную формулу III

Формула III

Соединение, имеющее структурную формулу IV, предпочтительно является замещенным таким образом, что R11-R14 представляют собой водород и R15-R20 независимо представляют собой водород, метил, этил, метокси-группу, этокси-группу, ацетил или пропионил при условии, что, по меньшей мере, четыре из R15-R20 представляют собой водород.

Соединение, имеющее структурную формулу IV, наиболее предпочтительно является замещенным таким образом, что оно имеет структурную формулу V.

Формула V

Резистентные к терапевтическим лекарственным средствам раковые заболевания, подлежащие лечению способом согласно настоящему изобретению, могут представлять собой раковые заболевания, резистентные к таксолу или цисплантину. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения способ согласно изобретению может применяться для лечения резистентного к таксолу рака яичника.

Способ согласно настоящему изобретению предпочтительно включает в себя введение соединений формул I, II и V.

Композиции

Настоящее изобретение предоставляет также композицию, включающую примерно 0,5% (мас./мас.) из расчета на общую массу композиции или более соединения, имеющего структурную формулу I:

Формула I

его фармацевтически приемлемых солей и сложных эфиров, селективно замещенных аналогов или сочетания одного или нескольких из перечисленных соединений с одним или несколькими соединениями, выбранными из:

примерно 0,5% (мас./мас.) из расчета на общую массу композиции или более соединения, имеющего структурную формулу II

где R¹ представляет собой водород, C₁-C₆алкил; R² представляет собой водород, C₁-C₆алкил или C₂-C₆ацил; и R³-R¹⁰ независимо представляют собой водород, гидроксильную группу, C₁-C₆алкил, C₁-C₆ алкокси-группу или C₂-C₆ацил при условии, что, по меньшей мере, четыре заместителя из R³-R¹⁰ представляют собой водород, его фармацевтически приемлемых солей и сложных эфиров, селективно замещенных аналогов или сочетания одного или нескольких их перечисленных соединений; и примерно 0,5% (мас./мас.) или более из расчета на общую массу композиции соединения, имеющего структурную формулу IV

где R¹¹-R¹³ независимо представляют собой водород или C₁-C₆алкил; и R¹⁴-R²⁰ независимо представляют собой водород, C₁-C₆алкил, C₁-C₆ алкокси-группу или C₂-C₆ацил при условии, что, по меньшей мере, три заместителя из R¹⁴-R²⁰ представляют собой водород, его фармацевтически приемлемых солей и сложных эфиров, селективно замещенных аналогов или сочетания одного или нескольких из перечисленных соединений. Соединение, имеющее структурную формулу II, предпочтительно является замещенным таким образом, что R¹ представляет собой метил, R² представляет собой водород и R³-R¹⁰ независимо представляют собой водород, метил, этил, метокси-группу, этокси-группу, ацетил или пропионил при условии, что, по меньшей мере, пять из R³-R¹⁰ представляют собой водород.

Соединение, имеющее структурную формулу II, наиболее предпочтительно является замещенным таким образом, что оно имеет структурную формулу III

Соединение, имеющее структурную формулу IV, предпочтительно является замещенным таким образом, что R¹¹-R¹³ представляют собой водород и R¹⁴-R²⁰ независимо представляют собой водород, метил, этил, метокси-группу, этокси-группу, ацетил или пропионил при условии, что, по меньшей мере, четыре заместителя из R¹⁴-R²⁰ представляют собой водород.

Соединение, имеющее структурную формулу IV, наиболее предпочтительно является замещенным таким образом, что оно имеет структурную формулу V.

Формула V

Композиции согласно настоящему изобретению могут преимущественно использоваться для лечения гормон-зависимых раковых заболеваний. В частности, раковые заболевания, подлежащие лечению лекарственными средствами и композициями согласно настоящему изобретению, могут быть выбраны из рака предстательной железы, рака молочной железы, эндометриального рака, рака ободочной кишки, рака легкого, рака мочевого пузыря, рака яичка, рака яичника, рака щитовидной железы или рака кости.

Композиции согласно изобретению предпочтительно содержат соединения формул I, III и V.

При применении способа и композиций согласно изобретению соединения предпочтительно присутствуют в синергически эффективных количествах. В таких бинарных сочетаниях два ингредиента присутствуют в синергически эффективных количествах относительно друг друга. В таких сочетаниях трех или большего числа активных ингредиентов активные ингредиенты могут присутствовать в синергически эффективных количествах относительно друг друга и/или композиция может быть синергической в целом.

Композиции и лекарственные средства согласно изобретению могут дополнительно включать известные противораковые лекарственные средства и иммуностимуляторы. Предпочтительно противораковые лекарственные средства для применения в способе, композициях и лекарственных средствах согласно изобретению могут быть выбраны из индирубина, таксола, цисплатина, камптотекана, винкристина, монокроталина, майтансина, гомогаррингтонина, колхицина, ирисквинона А, инисквинона В, ирисквинона С, кроницина, матрина, оксиматрина, куркумина, парицина, парифиллина или сочетания, включающего одно или несколько из указанных лекарственных средств и другие известные противораковые лекарственные средства.

Предпочтительно иммуностимулятор для применения в способе, композициях и лекарственных средствах согласно изобретению может быть выбран из гинсеносида, феруловой кислоты, маннана, синантрина, элеутеросида А, элеутеросида В, элеутеросида С, элеутеросида D, элеутеросида Е, гиносида, бета-пахимана, инулина, гликопротеинов, интерферонов, γ-глобулина, экстракта Ganoderma lucidum, экстракта Coriolus versicolor, экстракта Poria cocos или сочетания, включающего один или нескольких из них и другие известные иммуностимуляторы.

Композиции или лекарственные средства согласно изобретению для перорального введения могут вводиться с любым инертным разбавителем или любым съедобным носителем. Они могут вводиться непосредственно в пищу или напитки, составляющие часть рациона питания пациента. Композиции или лекарственные средства согласно изобретению могут вводиться в препарат с наполнителями и применяться в форме съедобных таблеток, таблеток для трансбуккального введения, лепешек, капсул, эликсиров, суспензионных сиропов, вафель и т.п.

Таблетки, лепешки, пилюли, капсулы и т.п. могут содержать указанные выше наполнители и в некоторых случаях могут также содержать подслащивающие вещества, такие как сахароза, глюкоза, аспартам или сахарин, вкусовые добавки, такие как эфирные масла мяты, мяты перечной, мяты курчавой или любые другие походящие вкусовые добавки. Когда лекарственная форма стандартной дозы представляет собой капсулу, она может дополнительно содержать жидкий носитель в виде масла или буферного водного раствора.

Лекарственные средства и композиции согласно изобретению могут вводиться в рецептуру с фосфолипидами или жирными кислотами или другими синтетическими наночастицами в качестве носителей.

Лекарственные средства и композиции согласно изобретению могут принимать форму препаратов для парентерального введения и могут включать стерильные водные растворы или дисперсии или принимать форму стерильных порошков для приготовления стерильных растворов или дисперсий для инъекций. Растворы или дисперсии могут также содержать буферы, разбавители и другие подходящие добавки, которые могут разрабатываться для способствования клеточному поглощению активных ингредиентов композиций, например липосомы.

Фармацевтические препараты для местного введения могут быть особенно полезны для локализованного лечения. Препараты для местного применения включают мази, спреи, гели, суспензии, лосьоны, кремы и т.п. Препараты для местного введения могут включать известные носители, такие как изопропанол, глицерин, парафин, стеариловый спирт, полиэтиленгликоль и т.п. Фармацевтически приемлемый носитель может также включать известный химический промотор абсорбции, или препарат может конкретно разрабатываться для облегчения чрезкожного применения. Промоторы абсорбции включают, например, трихлорэтанол, трифторэтанол и некоторые спирты и их смеси согласно GB 1001949 (Meyer) и GB 1464975 (AstraLakemedel).

Лекарственные средства и композиции согласно изобретению, подходящие для ректального или вагинального введения, могут быть представлены в виде свечи, которая может включать один или несколько подходящих наполнителей или носителей, не оказывающих раздражающего действия, в том числе, например, масло какао, полиэтиленгликоль, воск для свечей или салицилат, которые являются твердыми при комнатной температуре, но жидкими при температуре тела и, следовательно, будут плавиться в прямой кишке или вагинальной полости и высвобождать активное соединение.

Препараты согласно настоящему изобретению, которые подходят для вагинального введения, включают также пессарии, тампоны, кремы, гели, пасты, пены или спреи, содержащие такие носители, которые, как известно в данной области техники, являются подходящими.

В данном изобретении патентуются лекарственные средства, композиции и способы лечения неоплазии и рака у человека, нуждающегося в таком лечении. Термин «пациент, нуждающийся в лечении», когда используется в настоящем описании, означает пациента с диагностированным раком или пациента, желающего предотвратить или замедлить начало развития рака, например пациента с раком в семейном анамнезе. Рак может представлять собой гормон-связанный рак, такой как, например, рак предстательной железы, рак молочной железы, эндометриальный рак, рак ободочной кишки, рак легкого, рак мочевого пузыря, рак яичка, рак яичника, рак щитовидной железы или рак кости.

В одном особенно предпочтительном варианте осуществления изобретения неоплазия, подлежащая лечению, может представлять собой рак яичника или рак молочной железы, резистентный к таксолу.

При этерификации сложный эфир соединения формулы IV или V предпочтительно представляет собой гликозид. Нет никакого ограничения выбора моносахарида или полисахарида, используемого для образования гликозида, и подходящие моносахариды включают, например, глюкозу, глюкуроновую кислоту, маннозу, фруктозу, галактозу, арабинозу, галактуроновую кислоту, ксилозу, рутинозу, рамнозу и т.п. и сочетания, включающие один или нескольких из перечисленных выше моносахаридов.

Аналоги соединений формул IV и V могут представлять собой флоретин, 4,2,4'-тригидроксихалкон и т.п. или сочетание, включающее одно или несколько таких соединений.

Экстракт Glycyrrhiza uralensis или Glycyrrhiza glabra может использоваться в качестве источника соединений формул IV и V.

Способы синтеза или выделения соединений формулы IV и V, их фармацевтически приемлемые соли или сложные эфиры и их селективно замещенные аналоги известны в данной области техники (см., например, S. K. Srivastava et al., Indian J. Chem., Sect. B (1981), 2OB (4): 347-8; F. A. Macias et al., Phytochemistry (1998), 50(1) : 35-46).

Термин «лечение», когда используется в настоящем описании, относится к снижению тяжести и/или частоты симптом, устранению симптомов и/или основной причины, профилактику проявления симптом и/или их основной причины и положительную динамику или коррекцию нарушения здоровья. Таким образом, например, термин «лечение», когда используется в выражении «способ лечения согласно настоящему изобретению», включает профилактику расстройства и лечение расстройства у клинически симптоматического пациента.

Термин «фармацевтически приемлемый носитель» включает материал, который не является биологически или иначе нежелательным. Вместе с выбранным активным ингредиентом может вводиться большое количество материала, не вызывающего каких бы то ни было нежелательных эффектов или неблагоприятного взаимодействия с любым из других компонентов фармацевтической композиции, в которой они содержатся.

Некоторые аспекты настоящего изобретения далее будут пояснены с помощью примеров. Эксперименты, подробно описанные ниже, приведены только в качестве примеров и не предназначены для ограничения области настоящего изобретения, которая определена в прилагаемой формуле изобретения.

Примеры

В настоящем исследовании используют два типа раковых клеток: А2780 и РТХ-10. А2780 является типичным видом из большинства видов раковых заболеваний яичника человека и, как известно, не является резистентным к лекарственным средствам. РТХ-10 является разновидностью А2780, резистентной к таксолу. Эти два типа клеток предоставляют модель для сравнения эффективности композиций согласно настоящему изобретению в отношении типичного рака яичника человека, для лечения которого применим таксол, и в отношении линии клеток опухоли, для лечения которой таксол не применим.

Условия эксперимента едины для всех трех опытов и описаны ниже:

Клеточные линии: А2780 и РТХ от Национального института здоровья (Bethsda, MD).

Культура клеток: обе клеточные линии выращивают в RPMI 1640, снабженном 10% фетальной телячьей сывороткой, L-глютамином и антибиотиками, в соответствии с методом Halicka et al. (Int. J. Oncology 1:437-48, 1997). Все среды, добавки и антибиотики получают от Life Technologies (Grand Island, NY). Культуры периодически проверяют на зараженность микоплазмой.

Для поддержания асинхронного экспоненциального роста клетки равномерно высевают в количестве 3×10⁵ в Т-75 колбе, инкубируют при 37°С в 5% СО₂ в течение 5-6 дней и затем разбавляют в соотношении 1:10 трипсинацией (0,25% трипсина/1 мМ EDTA). Морфологические изменения и количество контрольных и обработанных раковых клеток определяют с помощью микроскопа. Во всех экспериментах используют только экспоненциально и асинхронно растущие клетки.

Система определения ингибирования роста и оценки жизнеспособности клеток AssASYS: МТТ набор реагентов для определения количества жизнеспособных клеток получают от Boehringer Mannheim (Roche Diagnosis Corp., Indiapolis, Indiana). Татразолониевый краситель (МТТ) расщепляется метаболически активными клетками с образованием формазана и дает четкую красную абсорбционную полосу в области 550-618 нм. Методика опыта определения жизнеспособности клеток предоставлена изготовителем и модифицирована в лаборатории заявителя, как описано ниже.

Клетки рака яичника высевают в 96-луночные микропланшеты в концентрации 6×10³ клеток на лунку в 100 мкл клеточной культуральной среды. Спустя 24 часа 20 мкл аликвоты соединений различных концентраций добавляют к прикрепленным клеткам. Каждую концентрацию добавляют в три лунки для получения средних значений. Для устранения любого влияния растворителя к контрольным клеткам в каждую лунку добавляют 20 мкл растворителя, используемого для получения наивысшей концентрации соединений (максимум 0,5% об. ДМСО).

Микропланшеты инкубируют при 37°С в СО₂ в течение 72 часов. В конце третьего дня культуральную среду осторожно удаляют, не тревожа клетки, и заменяют ее 100 мкл свежей клеточной среды. В каждую лунку добавляют 10 мкл МТТ реагента и микропланшеты снова инкубируют в инкубационной камере с СО₂ при 37°С в течение 4 часов. В каждую лунку добавляют 100 мкл SDS-солюбилизирующего реагента (от Boechringer Mannheim). Микропланшет оставляют в течение ночи в инкубационной камере с СО₂ и затем считывают с помощью ELISA Reader (EL800, Bio-Tek Instruments, Inc.) при длине волны 570 нм. Жизнеспособность клеток, выраженную в процентах, вычисляют в соответствии с уравнением, представленным ниже:

100% (абсорбция контрольных клеток - абсорбция обработанных клеток)/абсорбция контрольных клеток.

По определению, жизнеспособность контрольных клеток из необработанных культур принимается равной 100%.

Для обработки клеток двух типов используют три различные композиции, и результаты этих экспериментов подробно описаны ниже.

Эксперимент 1

Антипролиферативную активность соединения согласно формулы I исследуют в отношении двух линий клеток рака яичника человека - одной чувствительной (А2780) и другой резистентной (РТХ-10) к таксолу. Кривые «доза-эффект» показывают, что клеточная линия А2780 является более чувствительной к соединению согласно формуле I, чем клеточная линия РХТ-10.

Эксперимент 2

Антипролиферативную активность соединения формулы V исследуют на клетках рака яичника человека двух линий - одной чувствительной (А2780) и другой резистентной (РТХ-10) к таксолу. Кривые «доза-эффект» показывают, что клеточная линия РХТ-10 является более чувствительной к соединению согласно формуле V, чем клеточная линия А2780.

Эксперимент 3

Антипролиферативную активность соединения формулы III исследуют на клетках рака яичника человека двух линий - одной чувствительной (А2780) и другой резистентной (РТХ-10) к таксолу. Кривые «доза-эффект» показывают, что клеточная линия РХТ-10 является немного более чувствительной к соединению согласно формуле III, чем клеточная линия А2780.

Эксперимент 4

Вторую серию экспериментов проводят для выявления синергического действия соединений в препаратах согласно изобретению. Результаты экспериментов немного отличаются от результатов, представленных выше, поскольку экспериментальное исследование проводились в разных лабораториях и несколько различающихся условиях. Во второй серии экспериментов набор МТТ реагентов получают от Sigma-Aldridge и ввиду ограничения по времи клетки инкубируют только в течение ночи перед взаимодействием с лекарственными средствами. Клеточные линии также получают из другого источника (вторая серия получена непосредственно от Dr Marianne Poruch NIH, Bethesda Marylend, USA), и они могли подвергаться воздействию других условий при хранении.

В таблице 1 представлены значения IC50, выраженные в микромолях, которые получены при испытании в новой системе в условиях второй серии экспериментов.

Таблица 1 Соединение А2780 РТХ10 Соединение формулы I 0,81±0,13 4,72±3,7 Соединение формулы V 2,4±0,42 0,30±0,13 Соединение формулы III 0,67±0,23 0,59±0,38

Соединения показывают синергизм, который определяют с использованием для вычисления программного обеспечения CalcuSyn' software for dose effect analysis' Biosoft© 2005.

Метод комбинированных индексов основан на методе, описанном Chou и Talalay и компьютерном программном обеспечении Chou и Chou и CalcuSyn™. Интервалы значений комбинированного индекса (CI) и символы уточняют с использованием значений, описанных ранее Chou. Значения CI<1, =1 и >1 показывают синергизм, суммарное действие и антагонизм, соответственно.

В таблицах ниже представлены значения CI при ED90 для клеточных линий А2780 и РТХ-10 при обработке их различными сочетаниями соединений согласно настоящему изобретению.

Таблица 2 Соединение А2780 РТХ10 I+V 1,01 0,31 I+III 0,14 0,38 V+III 1,67 0,45

Таблица 3 Интервал значений CI A2780
РТХ10 <0,1 Очень сильный синергизм 0,1-0,3 Сильный синергизм 0,3-0,7 Синергизм 0,7-0,85 Умеренный синергизм 0,85-0,90 Слабый синергизм 0,90=1,10 Почти аддитивное действие

Анализ данных, представленных в таблице 2, относительно интервалов значений показателей комбинирования, представленных в таблице 3, показывает, что множество значений, близких к 0,3, находится на границе между 'синергизмом' и 'сильным синергизмом'. Смеси соединений I+V, I+III и III+V проявляют 'сильный синергизм' или 'синергизм' при применении в отношении линии PTX-10, указывая на то, что все сочетания лекарственных средств проявят синергетические эффекты в отношении клеток, резистентных к таксолу.

Результаты показывают, что такие сочетания соединений являются более эффективными для лечения неоплазий, резистентных к таксолу, чем для лечения раковых заболеваний, чувствительных к лечению таксолом. Фактически некоторые сочетания на клеточной линии раковых клеток, чувствительных к таксолу, показывают скорее антагонистическое, чем синергическое действие.

Большое количество исследований проводят таким образом, что соединения присутствуют в соотношении примерно 1:1 относительно IC50. Результаты, полученные при использовании соединений в соотношении 1:1, показывают сильный синергизм, и поэтому предпочтительная композиция содержит соединения формул I, V и III в соотношениях примерно 1:1:1. Во время эксперимента отмечено, что некоторые другие относительные количества компонентов являются особенно эффективными. Сочетания соединений формул I, V и III в соотношениях 4:4:1 и 9:1:2 являются особенно преимущественными.

Предпочтительные композиции согласно изобретению содержат компоненты в соотношениях, указанных выше. В способах лечения активные соединения предпочтительно вводятся пациентам, нуждающимся в таком лечении, в количествах, соответствующих этим соотношениям. Компоненты композиции согласно изобретению могут вводиться одновременно или последовательно таким образом, чтобы относительное содержание компонентов в плазме приблизительно соответствовало соотношениям, представленным выше.

Примеры композиций

Сироп для перорального введения

25 мг соединения формулы I, 2,5 мг соединения формулы III и 25 мг соединения формулы V смешивают с моногидратом лимонной кислоты (105 мг), гидроксидом натрия (18 мг), вкусовой добавкой перечной мяты и к полученной смеси добавляют дистиллированную воду, доводя общий объем до 100 мл, с получением сиропа, подходящего для перорального введения.

Препарат для инъекций

25 мг соединения формулы I, 2,5 мг соединения формулы III и 25 мг соединения формулы V смешивают с моногидратом декстрозы (q.s.) для придания раствору изотоничности, моногидратом лимонной кислоты (10,5 мг), гидроксидом натрия (1,8 мг), к полученной смеси добавляют воду для инъекций (q.s.), доводя общий объем до 10,0 мл, с получением препарата, подходящего для инъекций.

Таблетка А

25 мг соединения формулы I, 2,5 мг соединения формулы III и 25 мг соединения формулы V смешивают с лактозой (55 мг), кукурузным крахмалом (30 мг), микрокристаллической целлюлозой (35 мг) и поливинилпирролидоном (PVP) (15 мг). Смесь просеивают, обрабатывают дополнительным количеством кукурузного крахмала (60 мг) и водой с получением гранулята, который сушат и просеивают. Добавляют натрий-карбоксиметиловый крахмал (23 мг) и стеарат магния (2 мг), смешивают и полученную смесь прессуют с получением таблеток.

Таблетки В

25 мг соединения формулы I и 25 мг соединения формулы V смешивают с лактозой (52,5 мг), кукурузным крахмалом (30 мг), микрокристаллической целлюлозой (35 мг) и поливинилпирролидоном (PVP) (15 мг). Смесь просеивают, обрабатывают дополнительным количеством кукурузного крахмала (60 мг) и водой с образованием гранулята, который сушат и просеивают. Добавляют натрий-карбоксиметиловый крахмал (23 мг) и стеарат магния (2 мг), смешивают и полученную смесь прессуют с получением таблеток.

Таблетки С

25 мг соединения формулы I и 2,5 мг соединения формулы III смешивают с лактозой (40 мг), кукурузным крахмалом (20 мг), микрокристаллической целлюлозой (35 мг) и поливинилпирролидоном (PVP) (15 мг). Смесь просеивают, обрабатывают дополнительным количеством кукурузного крахмала (60 мг) и водой с получением гранулята, который сушат и просеивают. Добавляют натрий-карбоксиметиловый крахмал (23 мг) и стеарат магния (2 мг), полученную смесь прессуют с получением таблеток.

Подразумеваются также и другие препараты, применимые для имплантирования, например, в полость, остающуюся после хирургического удаления опухоли яичника или опухоли молочной железы. Квалифицированный специалист данной области техники смог бы изготовить такой препарат, используя знания, которыми он уже располагает, без внесения собственного изобретательского вклада.

Выражение благодарности

Изобретатель и заявитель хотели бы выразить благодарность доктору Marianne Poruch (Национальный институт здоровья, Мериленд) за предоставление некоторых клеточных линий, использованных в экспериментальной части.

Предложены: применение синергически эффективных количеств соединений формул I (оридонина), II (в частности, вогонина) и IV (в частности, 2,4,4'-тригидроксихалкона) для приготовления лекарственного средства для лечения неоплазии, резистентной к терапевтическому лекарственному средству, выбранной из группы, включающей рак предстательной железы, рак молочной железы, эндометриальный рак, рак ободочной кишки, рак легкого, рак мочевого пузыря, рак яичка, рак яичника, рак щитовидной железы и рак кости; соответствующие композиция и способ лечения. Показано: сильный синергизм компонентов композиции согласно настоящему изобретению. Это позволяет применять их в относительно низких количествах для лечения рака IV стадии или рецидивирующего рака, который может обладать развитой резистентностью к традиционным химиотерапевтическим агентам. Соединения и способы согласно изобретению особенно применимы для лечения раковых заболеваний человека, резистентных к таксолу, в особенности, рака шейки матки и рака молочной железы. 3 н. и 17 з.п. ф-лы, 3 табл.

1. Применение синергически эффективных количеств соединения, имеющего структурную формулу I

его фармацевтически приемлемых солей и сложных эфиров или сочетания одного или нескольких из перечисленных выше соединений, и
одного или нескольких соединений, выбранных из соединения, имеющего структурную формулу II

где R¹ представляет собой водород, C₁-С₆алкил; R² представляет собой водород, C₁-С₆алкил или C₁-С₆ацил; и R³-R¹⁰ независимо представляют собой водород, гидроксильную группу, C₁-С₆алкил, C₁-С₆алкокси или C₂-С₆ацил, при условии, что, по меньшей мере, четыре заместителя из R³-R¹⁰ представляют собой водород, его фармацевтически приемлемых солей и сложных эфиров или сочетания одного или нескольких из перечисленных выше соединений; и
соединения, имеющего структурную формулу IV

где R¹¹-R¹³ независимо представляют собой водород или C₁-С₆алкил; и R¹⁴-R²⁰ независимо представляют собой водород, C₁-С₆алкил, C₁-С₆алкокси или C₂-С₆ацил, при условии, что, по меньшей мере, три заместителя из R¹⁴-R²⁰ представляют собой водород, его фармацевтически приемлемых солей и сложных эфиров или сочетания одного или нескольких из перечисленных выше соединений,
для приготовления лекарственного средства для лечения неоплазии, резистентной к терапевтическому лекарственному средству, выбранной из группы, включающей рак предстательной железы, рак молочной железы, эндометриальный рак, рак ободочной кишки, рак легкого, рак мочевого пузыря, рак яичка, рак яичника, рак щитовидной железы и рак кости.

2. Применение по п.1, где неоплазия, подлежащая лечению, является раком яичника или молочной железы, резистентным к таксолу.

3. Применение по п.1 или 2, где соединение, имеющее структурную формулу II, является замещенным таким образом, что R¹ представляет собой метил, R² представляет собой водород и R³-R¹⁰ независимо представляют собой водород, метил, этил, метокси-группу, этокси-группу, ацетил или пропионил, при условии, что, по меньшей мере, пять заместителей из R³-R¹⁰ представляют собой водород.

4. Применение по п.3, где соединение, имеющее структурную формулу II, является замещенным таким образом, что имеет структурную формулу III

5. Применение по п.1, где соединение, имеющее структуру формулы IV, является замещенным таким образом, что R¹¹-R¹³ представляют собой водород и R¹⁴-R²⁰ независимо представляют собой водород, метил, этил, метокси-группу, этокси-группу, ацетил или пропионил, при условии, что, по меньшей мере, четыре заместителя из R¹⁴-R²⁰ представляют собой водород.

6. Применение по п.5, где соединение, имеющее структурную формулу IV, является замещенным таким образом, что оно имеет структурную формулу V

7. Применение по п.1, где соединения, соответствующие формулам III и V, оба присутствуют в лекарственном средстве.

8. Композиция для лечения неоплазии, резистентной к терапевтическому лекарственному средству, выбранной из группы, включающей рак предстательной железы, рак молочной железы, эндометриальный рак, рак ободочной кишки, рак легкого, рак мочевого пузыря, рак яичка, рак яичника, рак щитовидной железы и рак кости, включающая более чем приблизительно 0,5% (масс./масс.) соединения, соответствующего формуле I, его фармацевтически приемлемых солей и сложных эфиров или сочетания одного или нескольких из перечисленных выше соединений, и одного или нескольких соединений, выбранных из:
более 0,5% (масс./масс.) соединения, соответствующего формуле II, с заместителями, которые определены выше, его фармацевтически приемлемых солей и сложных эфиров или сочетания одного или нескольких из перечисленных выше соединений; и
более 0,5% (масс./масс.) соединения, соответствующего формуле IV, с заместителями, которые определены выше, его фармацевтически приемлемых солей и сложных эфиров или сочетания одного или нескольких из перечисленных выше соединений,
где соединения присутствуют в синергически эффективных количествах.

9. Композиция по п.8, где соединение, соответствующее формуле II, представляет собой соединение, соответствующее формуле III, его фармацевтически приемлемые соли и сложные эфиры или сочетания одного или нескольких из перечисленных выше соединений.

10. Композиция по п.8 или 9, где соединение, соответствующее формуле IV, представляет собой соединение, соответствующее формуле V, его фармацевтически приемлемые соли и сложные эфиры или сочетание одного или нескольких из перечисленных выше соединений.

11. Композиция по п.8, где соединения, соответствующие формулам III и V, оба присутствуют в лекарственном средстве.

12. Способ лечения человека, нуждающегося в лечении неоплазии, резистентной к терапевтическому лекарственному средству, выбранной из группы, включающей рак предстательной железы, рак молочной железы, эндометриальный рак, рак ободочной кишки, рак легкого, рак мочевого пузыря, рак яичка, рак яичника, рак щитовидной железы и рак кости, включающий введение композиции, включающей около 0,5% (масс./масс.) или более соединения, имеющего структурную формулу I, его фармацевтически приемлемых солей и сложных эфиров или сочетания одного или нескольких из перечисленных выше соединений, и одно или несколько соединений, выбранных из:
более 0,5% (масс./масс.) соединения, соответствующего формуле II, с заместителями, определенными выше, его фармацевтически приемлемых солей и сложных эфиров или сочетания одного или нескольких из перечисленных выше соединений, и
более 0,5% (масс./масс.) соединения, соответствующего формуле IV, с заместителями, определенными выше, его фармацевтически приемлемых солей и сложных эфиров или сочетания одного или нескольких из перечисленных выше соединений,
где соединения вводятся в синергически эффективных количествах.

13. Способ по п.12, где неоплазия, подлежащая лечению, представляет собой рак яичника, резистентный к таксолу.

14. Способ по п.12 или 13, где соединение, соответствующее формуле II, представляет собой соединение, соответствующее формуле III, его фармацевтически приемлемые соли и сложные эфиры или сочетание одного или нескольких из перечисленных выше соединений.

15. Способ по п.12, где соединение, соответствующее формуле IV, представляет собой соединение, соответствующее формуле V, его фармацевтически приемлемые соли и сложные эфиры или сочетание одного или нескольких из перечисленных выше соединений.

16. Способ по п.12, где композиция дополнительно включает одно или несколько противораковых лекарственных средств, выбранных из индирубина, таксола, цисплатина, камптотекана, винкристина, монокроталина, майтансина, гомогаррингтонина, колхицина, ирисквинона А, ирисквинона В, ирисквинона С, кроницина, матрина, оксиматрина, куркумина, парицина, париффиллина.

17. Способ по п.12, где композиция дополнительно включает один или несколько иммуностимуляторов, выбранных из гинсеносида, феруловой кислоты, маннана, синантрина, элеутеросида А, элеутеросида В, элеутеросида С, элеутеросида D, элеутеросида Е, гиносида, бета-пахимана, инулина, глико-протеинов, интерферонов, γ-глобулина, экстракта Ganoderma lucidum, экстракта Coriolus versicolor, экстракта Poria cocos.

18. Композиция по п.8, где композиция представлена в препарате в форме пессария, свечи или чрезкожного пластыря.

19. Применение по п.1, где лекарственное средство дополнительно включает одно или несколько противораковых лекарственных средств, выбранных из индирубина, таксола, цисплатина, камптотекана, винкристина, монокроталина, майтансина, гомогаррингтонина, колхицина, ирисквинона А, ирисквинона В, ирисквинона С, кроницина, матрина, оксиматрина, куркумина, парицина, париффиллина.

20. Применение по п.1, где лекарственное средство дополнительно включает один или несколько иммуностимуляторов, выбранных из гинсеносида, феруловой кислоты, маннана, синантрина, элеутеросида А, элеутеросида В, элеутеросида С, элеутеросида D, элеутеросида Е, гиносида, бета-пахимана, инулина, гликопротеинов, интерферонов, γ-глобулина, экстракта Ganoderma lucidum, экстракта Coriolus versicolor, экстракта Poria cocos.