НОВОЕ СОЕДИНЕНИЕ И СОДЕРЖАЩАЯ ЕГО ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ ПРОТИВОРАКОВОЙ АКТИВНОСТИ Российский патент 2022 года по МПК C07D487/04 C07D487/16 A61K31/4985 A61K31/343 A61K45/06 A61P35/00 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Настоящее изобретение относится к новому соединению и содержащей его фармацевтической композиции для повышения противораковой активности.

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Рак является одной из наиболее распространенных причин смерти во всем мире, и на его долю приходится примерно 12% смертей.

Химиотерапия, которая является типичной противораковой терапией, в настоящее время используется в качестве наиболее эффективного терапевтического метода лечения рака отдельно или в сочетании с другим терапевтическим методом, таким как радиотерапия. Однако при химиотерапии эффективность противоракового терапевтического средства зависит от его способности уничтожать раковые клетки, но при использовании такого средства существует проблема оказания действия не только на раковые клетки, но также и на здоровые клетки. Между тем, раковые стволовые клетки представляют собой раковые клетки, обладающие неограниченной регенеративной способностью, гипотеза о том, что опухоль происходит из стволовых клеток, была доказана открытием в конце 90-х годов, заключающемся в том, что, когда клетки, способные становиться раковыми стволовыми клетками в остром миелоидном лейкозе, были трансплантированы мышам с подавленным иммунитетом, у мышей развивался человеческий лейкоз, и присутствие стволовых клеток было также подтверждено в солидных карциномах в результате обнаружения присутствия раковых стволовых клеток в злокачественной опухоли молочной железы.

Раковые стволовые клетки представляют собой клетки, которые обладают способностью к самообновлению и способностью к дифференциации в другие клетки, и являются причиной рецидива и метастазирования рака. Определенную группу пациентов считают пациентами с неподдающимся лечению раком, их сложно лечить общепринятыми методами химиотерапии вследствие сильной устойчивости к противоопухолевому средству, так как активируются раковые стволовые клетки. Разнообразная гетерогенность, проявляющаяся в злокачественных опухолях, согласуется с разнообразием дифференциации стволовых клеток и, несмотря на множество вариантов таргетной терапии, постоянно проявляемая лекарственная устойчивость раковых клеток согласуется с основными свойствами стволовых клеток. Раковые стволовые клетки могут стать новой областью таргетной терапии, и для эффективного проведения лечения, направленного только на раковые клетки без повреждения нормальных стволовых клеток, необходимо знание и понимание молекулярно-биологических свойств, важных для поддержания и регуляции раковых стволовых клеток или их регуляторных путей. Несколько способов лечения были разработаны на основе гипотезы о раковых стволовых клетках, и наиболее известным способом является способ с использованием пути самообновления раковых стволовых клеток. Наиболее важным моментом в данных способах лечения является направленность лишь на самообновление раковых стволовых клеток при сохранении самообновления нормальных стволовых клеток. Например, сигнализация Notch осуществляется при помощи фермента, называемого гамма-секретаза, и за счет использования ингибитора гамма-секретазы при избыточно экспрессирующем Notch1 раке молочной железы может быть достигнут эффект ингибирования опухоли. Есть недавнее сообщение о том, что наблюдается противораковый эффект при таргетировании сигнальной системы Hedgehog, и когда циклоpамин, являющийся ингибитором Hedgehog, вводили животным с ксенотрансплантатами опухоли, опухоли резко уменьшались в размерах. Другие способы связаны с сигнальными путями PI3K/AKT, MAPK и JAK2/STAT3.

В связи с этим, в настоящее время проводится ряд исследований, направленных на подавление раковых стволовых клеток, с подавлением раковых стволовых клеток за счет экспериментального подавления непосредственного гена-мишени раковых стволовых клеток или подавления предшествующего в сигнальном пути сигнального белка раковых стволовых клеток. Однако на сегодняшний день существует лишь несколько исследований, посвященных получаемым из природных веществ противораковым средствам или экстрактам, которые непосредственно нацелены на раковые стволовые клетки, и для большинства пациентов с опухолями в экспериментах с таргетингом существует много трудностей вследствие мутаций онкогенов или мутаций белков. Между тем, есть предшествующий результат исследования, который показывает, что важной причиной устойчивости раковых стволовых клеток к противораковому средству является кальциевая АТФаза сарко/эндоплазматического ретикулума (SERCA), которая является белком, участвующим в транспортировке и хранении ионов кальция в клетках. Показано, что при введении противоракового средства, как правило, в обычных раковых клетках индуцируется чрезмерный стресс, ионы кальция избыточно секретируются из эндоплазматического ретикулума (ER), и секретируемые ионы кальция накапливаются в митохондриях, приводя к гибели раковых клеток, в то время как раковые стволовые клетки выживают, при этом концентрация ионов кальция регулируется путем повышения экспрессии SERCA, которая приводит к уменьшению избыточной секреции ионов кальция, а также к возвращению избыточно секретированных ионов кальция в ER при введении противоракового средства. То есть, белок SERCA может играть определенную роль в связанной с выживанием сигнализации в стрессовой сигнализации ER. Если будет разработано вещество, которое может служить ингибитором, нацеленным на белок SERCA, который является причиной устойчивости раковых стволовых клеток к противораковому средству, для избирательного ингибирования роста раковых стволовых клеток, с повышением эффективности химиотерапии противораковым средством, может быть достигнут превосходный противораковый эффект с более низкой дозой средства.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Техническая проблема

Настоящее изобретение относится к получению нового соединения.

Настоящее изобретение также относится к получению фармацевтической композиции для повышения противораковой активности.

Техническое решение

Пункт 1

1. Соединение, представленное формулой 1:

или его фармацевтически приемлемая соль,

где n представляет собой целое число от 0 до 4;

R₁ представляет собой водород, C1-C10 алкил или арил(C1-C4)алкил;

R₃ представляет собой C1-C6 алкил, и в случае наличия нескольких R₃, R₃ являются одинаковыми или разными;

L₁ представляет собой прямую связь или C1-C6 алкилен;

R₂ представляет собой водород, C1-C10 алкил или арил(C1-C4)алкил, и R₄ представляет собой водород, C1-C4 алкил, C3-C8 циклоалкил или арил(C1-C4)алкил, или

R₂ и R₄ связаны, с образованием 4-7-членного кольца; и

каждый из алкила R₁-R₄, арилалкила R₁, R₂ и R₄, циклоалкила R₄, алкилена L₁ независимо является незамещенным или замещенным заместителем, таким как C1-C6 алкильная группа, галогеновая группа, арильная группа, галогеналкильная группа, нитрогруппа, цианогруппа, алкилтиогруппа или арилалкилтиогруппа, и когда соединение замещено множеством заместителей, заместители являются одинаковыми или разными.

2. Соединение по п. 1, где n представляет собой целое число от 0 до 2;

R₁ представляет собой C1-C6 алкил или арил(C1-C2)алкил;

L₁ представляет собой C1-C4 алкилен; и

R₂ представляет собой водород, C1-C6 алкил или арил(C1-C2)алкил, и

R₄ представляет собой водород, C1-C4 алкил, C3-C6 циклоалкил или арил(C1-C2)алкил, или

R₂ и R₄ связаны, с образованием 4-6-членного кольца.

3. Соединение по п. 1, где n представляет собой целое число от 0 до 1;

R₁ представляет собой C1-C6 алкил, фенилметил или фенилэтил;

L₁ представляет собой C1-C2 алкилен;

R₂ представляет собой водород, C1-C6 алкил, фенилметил или фенилэтил, R₄ представляет собой водород, C1-C2 алкил, C5-C6 циклоалкил, фенилметил или нафтилметил, или

R₂ и R₄ связаны, с образованием 5-6-членного кольца.

4. Фармацевтическая композиция для повышения противораковой активности, содержащая соединение, представленное формулой 1:

Формула 1

,

или его фармацевтически приемлемую соль,

где n представляет собой целое число от 0 до 4;

R₁ представляет собой водород, C1-C10 алкил или арил(C1-C4)алкил;

R₃ представляет собой C1-C6 алкил, и в случае наличия нескольких R₃, R₃ являются одинаковыми или разными;

L₁ представляет собой прямую связь или C1-C6 алкилен;

R₂ представляет собой водород, C1-C10 алкил или арил(C1-C4)алкил, и

R₄ представляет собой водород, C1-C4 алкил, C3-C8 циклоалкил или арил(C1-C4)алкил, или

R₂ и R₄ связаны, с образованием 4-7-членного кольца; и

каждый из алкила R₁-R₄, арилалкила R₁, R₂ и R₄, циклоалкила R₄, алкилена L₁ независимо является незамещенным или замещенным заместителем, таким как C1-C6 алкильная группа, галогеновая группа, арильная группа, галогеналкильная группа, нитрогруппа, цианогруппа, алкилтиогруппа или арилалкилтиогруппа, и когда соединение замещено множеством заместителей, заместители являются одинаковыми или разными.

5. Фармацевтическая композиция по п. 4, где n представляет собой целое число от 0 до 2;

R₁ представляет собой C1-C6 алкил или арил(C1-C2)алкил;

L₁ представляет собой C1-C4 алкилен; и

R₂ представляет собой водород, C1-C6 алкил или арил(C1-C2)алкил, и R₄ представляет собой водород, C1-C4 алкил, C3-C6 циклоалкил или арил(C1-C2)алкил, или

R₂ и R₄ связаны, с образованием 4-7-членного кольца.

6. Фармацевтическая композиция по п. 4, где n представляет собой целое число от 0 до 1;

R₁ представляет собой C1-C6 алкил, фенилметил или фенилэтил;

L₁ представляет собой C1-C2 алкилен;

R₂ представляет собой водород, C1-C6 алкил, фенилметил или фенилэтил, R₄ представляет собой водород, C1-C2 алкил, C5-C6 циклоалкил, фенилметил или нафтилметил, или

R₂ и R₄ связаны, с образованием 5-6-членного кольца.

7. Фармацевтическая композиция по п. 4, где повышение противораковой активности представляет собой повышение противораковой активности противоракового средства или облучения.

8. Фармацевтическая композиция по п. 7, где противораковое средство представляет собой по меньшей мере одно из противоракового средства на основе таксена и противоракового средства на основе камптотецина.

9. Фармацевтическая композиция по п. 8, где противораковое средство на основе таксена представляет собой по меньшей мере одно средство, выбранное из группы, состоящей из паклитаксела, доцетаксела и кабазитаксела.

10. Фармацевтическая композиция по п. 8, где противораковое средство на основе камптотецина представляет собой по меньшей мере одно средство, выбранное из группы, состоящей из иринотекана, топотекана и велотекана.

11. Фармацевтическая композиция по п. 4, предназначенная для повышения противораковой активности в отношении резистентного рака.

12. Фармацевтическая композиция по п. 11, где резистентный рак представляет собой рак, резистентный к по меньшей мере одному из противоракового средства на основе таксена и противоракового средства на основе камптотецина.

13. Фармацевтическая композиция по п. 11, где резистентный рак представляет собой рак, резистентный к облучению.

14. Фармацевтическая композиция по п. 11, где резистентный рак представляет собой по меньшей мере один рак, выбранный из группы, состоящей из рака щитовидной железы, рака желудка, колоректального рака, рака яичника, рака молочной железы, рака легкого, саркомы Капоши, рака шейки матки, рака поджелудочной железы, рака головы и шеи, рака прямой кишки, рака толстого кишечника, рака пищевода и рака предстательной железы.

15. Фармацевтическая композиция по п. 4, дополнительно содержащая противораковое средство.

16. Фармацевтическая композиция по п. 15, где противораковое средство представляет собой по меньшей мере одно средство, выбранное из группы, состоящей из азотистого иприта, иматиниба, оксалиплатина, ритуксимаба, эрлотиниба, нератиниба, лапатиниба, гефитиниба, вандетаниба, нилотиниба, семаксаниба, бозутиниба, акситиниба, маситиниба, цедираниба, лестауртиниба, трастузумаба, гефитиниба, бортезомиба, сунитиниба, пазопаниба, тоцераниба, нинтеданиба, регорафениба, семаксаниба, тибозаниба, понатиниба, кабозантиниба, карбоплатина, сорафениба, ренбатиниба, бевацизумаба, цисплатина, цетуксимаба, вискумальбума, аспарагиназы, третиноина, гидроксикарбамида, дазатиниба, эстрамустина, гемтузумаб озогамицина, ибритутомаб тиуксетана, гептапластина, метиламинолевулиновой кислоты, амсакриина, алемтузумаба, прокарбазина, алпростадила, нитрата гольмия, хитозана, гемцитабина, доксифуридина, пеметрекседа, тегафура, капецитабина, гимерацила, отерацила, азацитидина, метотрексата, урацила, цитарабина, 5-фторурацила, флударабина, эноцитабина, флутамида, кефецитабина, децитабина, меркаптопурина, тиогуанина, кладрибина, кармофура, ралтитрексида, доцетаксела, паклитаксела, иринотекана, велотекана, топотекана, винорелбина, этопозида, винкристина, винбластина, тенипозида, доксорубицина, идарубицина, эпирубицина, митоксантрона, митомицина, блеромицина, даунорубицина, дактиномицина, парарубицина, акларубицина, пепромицина, темсиролимуса, темозололмида, бусульфана, ифосфамида, циклофосфамида, мельпарана, альтретмина, декарбазина, тиотепы, бимустина, хлорамбуцила, миторактола, лейковорина, третонина, эксеместана, аминоглутетимида, анагрелида, олапариба, навельбина, панразола, тамоксифена, торемифена, тестолактона, анастрозола, лектрозола, борозола, бикалутамида, ломустина, вориностата, энтиностата и кармустина.

17. Фармацевтическая композиция по п. 15, где соединение, представленное формулой 1, или его фармацевтически приемлемая соль и противораковое средство находятся в соотношении молярных концентраций от 1:0,001 до 1:1000.

18. Способ лечения рака, включающий:

введение субъекту с резистентным раком терапевтически эффективного количества соединения, представленного формулой 1:

,

или его фармацевтически приемлемой соли,

где n представляет собой целое число от 0 до 4;

R₁ представляет собой водород, C1-C10 алкил или арил(C1-C4)алкил;

R₃ представляет собой C1-C6 алкил, и в случае наличия нескольких R₃, R₃ являются одинаковыми или разными;

L₁ представляет собой прямую связь или C1-C6 алкилен;

R₂ представляет собой водород, C1-C10 алкил или арил(C1-C4)алкил, и

R₄ представляет собой водород, C1-C4 алкил, C3-C8 циклоалкил или арил(C1-C4)алкил, или

R₂ и R₄ связаны с образованием 4-7-членного кольца; и

каждый из алкила R₁-R₄, арилалкила R₁, R₂ и R₄, циклоалкила R₄, алкилена L₁ независимо является незамещенным или замещенным заместителем, таким как C1-C6 алкильная группа, галогеновая группа, арильная группа, галогеналкильная группа, нитрогруппа, цианогруппа, алкилтиогруппа или арилалкилтиогруппа, и когда соединение замещено множеством заместителей, заместители являются одинаковыми или разными.

19. Способ по п. 18, где n представляет собой целое число от 0 до 2;

R₁ представляет собой C1-C6 алкил или арил(C1-C2)алкил;

L₁ представляет собой C1-C4 алкилен; и

R₂ представляет собой водород, C1-C6 алкил или арил(C1-C2)алкил, и R₄ представляет собой водород, C1-C4 алкил, C3-C6 циклоалкил или арил(C1-C2)алкил, или

R₂ и R₄ связаны, с образованием 4-6-членного кольца.

20. Способ по п. 18, где n представляет собой целое число от 0 до 1;

R₁ представляет собой C1-C6 алкил, фенилметил или фенилэтил;

L₁ представляет собой C1-C2 алкилен;

R₂ представляет собой водород, C1-C6 алкил, фенилметил или фенилэтил, R₄ представляет собой водород, C1-C2 алкил, C5-C6 циклоалкил, фенилметил или нафтилметил, или

R₂ и R₄ связаны, с образованием 5-6-членного кольца.

21. Способ по п. 18, где резистентный рак представляет собой рак, резистентный к по меньшей мере одному из противоракового средства на основе таксена и противоракового средства на основе камптотецина.

22. Способ по п. 18, где резистентный рак представляет собой рак, резистентный к облучению.

23. Способ по п. 18, где резистентный рак представляет собой по меньшей мере один рак, выбранный из группы, состоящей из рака щитовидной железы, рака желудка, колоректального рака, рака яичника, рака молочной железы, рака легкого, саркомы Капоши, рака шейки матки, рака поджелудочной железы, рака головы и шеи, рака прямой кишки, рака толстого кишечника, рака пищевода и рака предстательной железы.

24. Применение соединения, представленного формулой 1:

Где n представляет собой целое число от 0 до 4;

R₁ представляет собой водород, C1-C10 алкил или арил(C1-C4)алкил;

R₃ представляет собой C1-C6 алкил, и в случае наличия нескольких R₃, R₃ являются одинаковыми или разными;

L₁ представляет собой прямую связь или C1-C6 алкилен;

R₂ представляет собой водород, C1-C10 алкил или арил(C1-C4)алкил, и R₄ представляет собой водород, C1-C4 алкил, C3-C8 циклоалкил или арил(C1-C4)алкил, или

R₂ и R₄ связаны, с образованием 4-7-членного кольца; и

каждый из алкила R₁-R₄, арилалкила R₁, R₂ и R₄, циклоалкила R₄, алкилена L₁ независимо является незамещенным или замещенным заместителем, таким как C1-C6 алкильная группа, галогеновая группа, арильная группа, галогеналкильная группа, нитрогруппа, цианогруппа, алкилтиогруппа или арилалкилтиогруппа, и когда соединение замещено множеством заместителей, заместители являются одинаковыми или разными, для лечения резистентного рака.

25. Применение по п. 24, где n представляет собой целое число от 0 до 2;

R₁ представляет собой C1-C6 алкил или арил(C1-C2)алкил;

L₁ представляет собой C1-C4 алкилен; и

R₂ представляет собой водород, C1-C6 алкил или арил(C1-C2)алкил, и

R₄ представляет собой водород, C1-C4 алкил, C3-C6 циклоалкил или арил(C1-C2)алкил, или

R₂ и R₄ связаны, с образованием 4-6-членного кольца.

26. Применение по п. 24, где n представляет собой целое число от 0 до 1;

R₁ представляет собой C1-C6 алкил, фенилметил или фенилэтил;

L₁ представляет собой C1-C2 алкилен;

R₂ представляет собой водород, C1-C6 алкил, фенилметил или фенилэтил, R₄ представляет собой водород, C1-C2 алкил, C5-C6 циклоалкил, фенилметил или нафтилметил, или

R₂ и R₄ связаны, с образованием 5-6-членного кольца.

27. Применение по п. 24, где резистентный рак представляет собой рак, резистентный к по меньшей мере одному из противоракового средства на основе таксена и противоракового средства на основе камптотецина.

28. Применение по п. 24, где резистентный рак представляет собой рак, резистентный к облучению.

29. Применение по п. 24, где резистентный рак представляет собой по меньшей мере один рак, выбранный из группы, состоящей из рака щитовидной железы, рака желудка, колоректального рака, рака яичника, рака молочной железы, рака легкого, саркомы Капоши, рака шейки матки, рака поджелудочной железы, рака головы и шеи, рака прямой кишки, рака толстого кишечника, рака пищевода и рака предстательной железы.

Полезные эффекты

Композиция, содержащая соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль, способна повышать противораковую активность противоракового средства или облучения и эффективно лечить рак путем ингибирования пролиферации раковых клеток и вызывания клеточной гибели. Композиция, содержащая соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль, способна преодолевать устойчивость рака к противораковому средству или облучению и эффективно лечить резистентный рак.

ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

На ФИГ. 1 показан результат определения изменения числа клеток в зависимости от времени обработки после того, как подобные раковым стволовым клеткам клетки рака щитовидной железы, полученные от пациентов с рецидивом и метастазами после введения паклитаксела, были обработаны только соединением примера получения 1-1; только паклитакселом или сочетанием паклитаксела и соединения примера получения 1-1.

На ФИГ. 2 показан результат определения изменения жизнеспособности клеток в зависимости от концентрации при обработке после того, как подобные раковым стволовым клеткам клетки рака щитовидной железы, полученные от пациентов с рецидивом и метастазами после введения паклитаксела, были обработаны только соединением примера получения 1-1; только паклитакселом или сочетанием паклитаксела и соединения примера получения 1-1.

На ФИГ. 3 показан результат определения изменения объема опухолей с течением времени после того, как модельным мышам с ксенотрансплантатами подобных раковым стволовым клеткам клеток рака щитовидной железы, полученных от пациентов с рецидивом и метастазами после введения паклитаксела, вводили перорально только соединение примера получения 1-1; вводили внутрибрюшинной инъекцией только паклитаксел; или вводили перорально соединение примера получения 1-1, а затем вводили внутрибрюшинной инъекцией паклитаксел.

На ФИГ. 4 показан результат определения изменения числа клеток в зависимости от времени обработки после того, как подобные раковым стволовым клеткам клетки рака желудка, полученные от пациентов с рецидивом и метастазами после введения иринотекана, обрабатывали только соединением примера получения 1-1; только иринотеканом или сочетанием иринотекана и соединения примера получения 1-1.

На ФИГ. 5 показан результат определения изменения объема опухолей с течением времени после того, как модельным мышам с ксенотрансплантатами подобных раковым стволовым клеткам клеток рака желудка, полученных от пациентов с рецидивом и метастазами после введения иринотекана, вводили перорально только соединение примера получения 1-1; вводили перорально только иринотекан или вводили перорально соединение примера получения 1-1 и иринотекан.

На ФИГ. 6 показан результат определения изменения массы опухолей с течением времени после того, как модельным мышам с ксенотрансплантатами подобных раковым стволовым клеткам клеток рака желудка, полученных от пациентов с рецидивом и метастазами после введения иринотекана, вводили перорально только соединение примера получения 1-1; вводили перорально только иринотекан или вводили перорально соединение примера получения 1-1 и иринотекан.

На ФИГ. 7 показан результат определения изменения массы тела мышей с течением времени после того, как модельным мышам с ксенотрансплантатами подобных раковым стволовым клеткам клеток рака желудка, полученных от пациентов с рецидивом и метастазами после введения иринотекана, вводили перорально только соединение примера получения 1-1; вводили перорально только иринотекан или вводили перорально соединение примера получения 1-1 и иринотекан.

На ФИГ. 8 показан результат определения изменения числа клеток в зависимости от времени обработки после того, как подобные раковым стволовым клеткам клетки колоректального рака, полученные от пациентов с рецидивом и метастазами после облучения, обрабатывали только соединением примера получения 1-1; облучением или сочетанием обработки соединением примера получения 1-1 и облучения.

На ФИГ. 9 показан результат определения изменения объема опухолей с течением времени после того, как модельным мышам с ксенотрансплантатами подобных раковым стволовым клеткам клеток колоректального рака, полученных от пациентов с рецидивом и метастазами после облучения, вводили перорально только соединение примера получения 1-1; проводили облучение или использовали сочетание перорального введения соединения примера получения 1-1 и облучения.

На ФИГ. 10 показан результат определения изменения массы опухолей с течением времени после того, как модельным мышам с ксенотрансплантатами подобных раковым стволовым клеткам клеток колоректального рака, полученных от пациентов с рецидивом и метастазами после облучения, вводили перорально только соединение примера получения 1-1; проводили облучение или использовали сочетание перорального введения соединения примера получения 1-1 и облучения.

На ФИГ. 11 показан результат определения изменения массы тела мышей после того, как модельным мышам с ксенотрансплантатами подобных раковым стволовым клеткам клеток колоректального рака, полученных от пациентов с рецидивом и метастазами после облучения, вводили перорально только соединение примера получения 1-1; проводили облучение или использовали сочетание перорального введения соединения примера получения 1-1 и облучения.

На ФИГ. 12 показан результат подтверждения морфологии клеток после того, как каждую из SKOV3, которая представляет собой линию клеток эпителиального рака яичника, и SKOV3-TR, полученную в виде резистентной линии клеток с устойчивостью к противораковому средству паклитакселу, не обрабатывали ни одним из средств (без обработки), обрабатывали этанолом (растворитель для соединения примера получения) или обрабатывали соединением примера получения 1-2.

На ФИГ. 13 представлены изображения, полученные через 72 часа после обработки линии клеток SKOV3-TR только паклитакселом или сочетанием паклитаксела и соединения примера получения 1-2.

На ФИГ. 14 представлены изображения, полученные через 72 часа после обработки линии клеток SKOV3 только паклитакселом или сочетанием паклитаксела и соединения примера получения 1-2.

На ФИГ. 15 показано число клеток через 72 часа после того, как линия клеток SKOV3-TR была оставлена без обработки; была обработана этанолом, а также 2 мкМ каждого из соединений примеров получения.

На ФИГ. 16 показано число клеток через 72 часа после того, как линия клеток SKOV3 была оставлена без обработки; была обработана этанолом, а также 2 мкМ каждого из соединений примеров получения.

На ФИГ. 17 показано число клеток через 72 часа после того, как линия клеток SKOV3-TR была оставлена без обработки; была обработана этанолом; ДМСО (растворитель паклитаксела); только паклитакселом; а также сочетанием паклитаксела и каждого (2 мкМ) из соединений примеров получения.

На ФИГ. 18 показано число клеток через 72 часа после того, как линия клеток SKOV3 была оставлена без обработки; была обработана этанолом; ДМСО (растворитель паклитаксела); только паклитакселом; а также сочетанием паклитаксела и каждого (2 мкМ) из соединений примеров получения.

Варианты осуществления изобретения

Соединение формулы 1, ниже, и/или его фармацевтически приемлемая соль оказывает(ют) ингибирующее действие на белок SERCA, ответственный за связанную с выживанием сигнализацию в стрессовой сигнализации ER. Настоящее изобретение относится к соединению, представленному формулой 1, ниже, или его фармацевтически приемлемой соли:

Формула 1

В формуле 1 R₁ может представлять собой водород, C1-C10 алкил или арил(C1-C4)алкил.

В формуле 1 R₁ может представлять собой C1-C6 алкил или арил(C1-C2)алкил.

В формуле 1 R₁ может представлять собой C1-C6 алкил, фенилметил или фенилэтил.

В формуле 1 каждый из алкила и арилалкила R₁ независимо может быть незамещенным или замещенным заместителем, таким как C1-C6 алкильная группа, галогеновая группа, арильная группа, галогеналкильная группа, нитрогруппа, цианогруппа, алкилтиогруппа или арилалкилтиогруппа. В формуле 1, когда алкил и/или арилалкил R₁ замещен(ы) множеством заместителей, все заместители могут быть одинаковыми или разными.

В формуле 1, когда R₁ представляет собой арилалкил, алкильная группа, галогеновая группа, галогеналкильная группа, цианогруппа, нитрогруппа или фенильная группа могут быть замещены в пара-положении.

Термин «алкил» означает линейную или разветвленную незамещенную или замещенную насыщенную углеводородную группу, и включает, например, метил, этил, пропил, изопропил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, гексил, гептил, октил, нонил, децил, ундецил, тридецил, пентадецил и гептадецил. C1-C10 алкил означает алкил, имеющий C1-C10 алкильных единиц, и когда C1-C10 алкил является замещенным, число атомов углерода заместителя не включено.

Термин «арил» означает полностью или частично ненасыщенное замещенное или незамещенное моноциклическое или полициклическое углеродсодержащее кольцо, например, замещенный или незамещенный фенил.

Термин «арилалкил» означает алкил, замещенный арильной группой, и может означать, например, бензил (фенилметил), фенилэтил или фенилпропил. Арил(C1-C4)алкил означает C1-C4 алкил, замещенный арильной группой. В формуле 1 R₃ может представлять собой C1-C6, C1-C4 или C1-C2 алкил.

В формуле 1 алкил R₃ может быть незамещенным или замещенным заместителем, таким как C1-C6 алкильная группа, галогеновая группа, арильная группа, галоалкильная группа, нитрогруппа, цианогруппа, алкилтиогруппа или арилалкилтиогруппа.

В формуле 1, когда алкил R₃ является замещенным множеством заместителей, заместители могут быть одинаковыми или разными.

В формуле 1 n может представлять собой целое число от 0 до 4, от 0 до 2 или от 0 до 1. Когда n формулы 1 равно 0, это означает, что соединение не замещено R₃.

В формуле 1 R₂ может представлять собой водород, C1-C10 алкил или арил(C1-C4)алкил. В формуле 1 R₂ может представлять собой водород, C1-C6 алкил или арил(C1-C2)алкил.

В формуле 1 R₂ может представлять собой водород, C1-C6 алкил, фенилметил или фенилэтил.

В формуле 1 каждый из алкила и арилалкила R₂ независимо может быть незамещенным или замещенным C1-C6 алкильной группой, галогеновой группой, арильной группой, галоалкильной группой, нитрогруппой, цианогруппой, алкилтиогруппой или арилалкилтиогруппой.

В формуле 1, когда алкил и/или арилалкил R₂ замещен(ы) множеством заместителей, заместители могут быть одинаковыми или разными.

В формуле 1, когда R₂ представляет собой арилалкил, алкильная группа, галогеновая группа, галогеналкильная группа, цианогруппа, нитрогруппа или фенильная группа могут быть замещены в пара-положении.

В формуле 1 R₄ может представлять собой водород, C1-C4 алкил, C3-C8 циклоалкил или арил(C1-C4)алкил.

В формуле 1 R₄ может представлять собой водород, C1-C4 алкил, C3-C6 циклоалкил или арил(C1-C2)алкил.

В формуле 1 R₄ может представлять собой водород, C1-C2 алкил, C5-C6 циклоалкил, фенилметил или нафтилметил.

Термин «циклоалкил» означает не ароматическое, насыщенное или частично ненасыщенное углеводородное кольцо, например, циклоалкил может быть моноциклическим или бициклическим.

В формуле 1 каждый из алкила, арилалкила и циклоалкила R₄ независимо может быть незамещенным или замещенным заместителем, таким как C1-C6 алкильная группа, галогеновая группа, арильная группа, галоалкильная группа, нитрогруппа, цианогруппа, алкилтиогруппа или арилалкилтиогруппа. В формуле 1, когда алкил, арилалкил и/или циклоалкил R₄ замещен(ы) множеством заместителей, заместители могут быть одинаковыми или разными.

В формуле 1, когда R₄ представляет собой алкил, алкилтиогруппа или арилалкилтиогруппа может быть замещенной.

Например, алкилтиогруппа может представлять собой метилтиогруппу или этилтиогруппу.

Например, арилалкилтиогруппа может представлять собой фенилтиогруппу или бензилтиогруппу.

В формуле 1 R₂ и R₄ могут образовывать 4-7-членное кольцо, 4-6-членное кольцо или 5-6-членное кольцо, и могут быть связаны друг с другом. То есть, R₂ и R₄ могут быть связаны, с образованием тетрагонального-гептагонального кольца, тетрагонального-гексагонального кольца или пентагонального-гексагонального кольца.

4-7-членное кольцо, в котором R₂ и R₄ связаны, может содержать 3-6 атомов углерода.

4-6-членное кольцо, в котором R₂ и R₄ связаны, может содержать 3-5 атомов углерода.

5-6-членное кольцо, в котором R₂ и R₄ связаны, может содержать 4-5 атомов углерода.

В формуле 1 L₁ может быть связан прямой связью или может представлять собой C1-C6, C1-C4 или C1-C2 алкилен.

Термин «алкилен» означает двухвалентный остаток, полученный из линейной или разветвленной углеводородной цепи, и может представлять собой, например, метиленовую группу, этиленовую группу, пропиленовую группу, изопропиленовую группу, н-бутиленовую группу, втор-бутиленовую группу, трет-бутиленовую группу, н-пентиленовую группу или н-гексиленовую группу.

Алкилен L₁ может быть незамещенным или замещенным заместителем, таким как C1-C6 алкильная группа, галогеновая группа, арильная группа, галогеналкильная группа, нитрогруппа, цианогруппа, алкилтиогруппа или арилалкилтиогруппа. В формуле 1, когда алкилен L₁ является замещенным множеством заместителей, заместители могут быть одинаковыми или разными.

В формуле 1 n представляет собой целое число от 0 до 4; R₁ представляет собой водород, C1-C10 алкил или арил(C1-C4)алкил; R₃ представляет собой C1-C6 алкил, и в случае наличия нескольких R₃, R₃ могут быть одинаковыми или разными; L₁ представляет собой прямую связь или C1-C6 алкилен; R₂ представляет собой водород, C1-C10 алкил или арил(C1-C4)алкил, и R₄ представляет собой водород, C1-C4 алкил, C3-C8 циклоалкил или арил(C1-C4)алкил, или R₂ и R₄ связаны, с образованием 4-7-членного кольца; и каждый из алкила R₁-R₄, арилалкила R₁, R₂ и R₄, циклоалкила R₄, алкилена L₁ независимо является незамещенным или замещенным заместителем, таким как C1-C6 алкильная группа, галогеновая группа, арильная группа, галогеналкильная группа, нитрогруппа, цианогруппа, алкилтиогруппа или арилалкилтиогруппа, и когда соединение является замещенным множеством заместителей, заместители могут быть одинаковыми или разными.

В формуле 1 n представляет собой целое число от 0 до 2; R₁ представляет собой водород, C1-C6 алкил или арил(C1-C2)алкил; R₃ представляет собой C1-C6 алкил, и в случае наличия нескольких R₃, R₃ являются одинаковыми или разными; L₁ представляет собой C1-C4 алкилен; и R₂ представляет собой водород, C1-C6 алкил или арил(C1-C2)алкил, и R₄ представляет собой водород, C1-C4 алкил, C3-C6 циклоалкил или арил(C1-C2)алкил, или R₂ и R₄ связаны, с образованием 4-6-членного кольца; и каждый из алкила R₁-R₄, арилалкила R₁, R₂ и R₄, циклоалкила R₄ и алкилена L₁ независимо является незамещенным или замещенным заместителем, таким как C1-C6 алкильная группа, галогеновая группа, арильная группа, галогеналкильная группа, нитрогруппа, цианогруппа, алкилтиогруппа или арилалкилтиогруппа, и когда соединение является замещенным множеством заместителей, заместители могут быть одинаковыми или разными.

В формуле 1 n представляет собой целое число от 0 до 1; R₁ представляет собой водород, C1-C6 алкил, фенилметил или фенилэтил; R₃ представляет собой C1-C6 алкил, и в случае наличия нескольких R₃, R₃ могут быть одинаковыми или разными; L₁ представляет собой C1-C2 алкилен; и R₂ представляет собой водород, C1-C6 алкил, фенилметил или фенилэтил, R₄ представляет собой водород, C1-C2 алкил, C5-C6 циклоалкил, фенилметил, фенилэтил или нафтилметил, или R₂ и R₄ связаны, с образованием 5-6-членного кольца; каждый из алкила R₁-R₄, фенилметила, фенилэтила и нафтилметила R₁, R₂ и R₄, циклоалкила R₄ и алкилена L₁ независимо является незамещенным или замещенным заместителем, таким как C1-C6 алкильная группа, галогеновая группа, арильная группа, галогеналкильная группа, нитрогруппа, цианогруппа, алкилтиогруппа или арилалкилтиогруппа, и когда соединение является замещенным множеством заместителей, заместители могут быть одинаковыми или разными.

Соединения формулы 1 могут представлять собой соединения формулы 2, формулы 5, формул 8-9, и формул 13-34 в Таблице 1, ниже.

Таблица 1 Формула № Химическая структура Формула № Химическая структура 2 5 8 9 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34

Фармацевтически приемлемая соль может представлять собой, например, кислотно-аддитивную соль или соль металла.

Кислотно-аддитивная соль может быть образована из неорганической кислоты, такой как соляная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота, серная кислота, бромистоводородная кислота, иодистоводородная кислота, азотистая кислота или фосфорная кислота, или нетоксичных органических кислот, например, алифатические моно- или дикарбоксилаты, фенил-замещенные алканоаты, гидроксиалканоаты или алкандиоаты, ароматических кислот или алифатических и ароматических сульфоновых кислот. Фармацевтически нетоксичная соль может представлять собой сульфат, пиросульфат, бисульфат, сульфит, бисульфит, нитрат, фосфат, моногидрофосфат, дигидрофосфат, метафосфат, пирофосфат, хлорид, бромид, иодид, фторид, ацетат, пропионат, деканоат, каприлат, акрилат, формат, изобутират, капрат, гептаноат, пропиолят, оксалат, малонат, сукцинат, суберат, себакат, фумарат, малеат, бутин-1,4-диоат, гексан-1,6-диоат, бензоат, хлорбензоат, метилбензоат, динитробензоат, гидроксибензоат, метоксибензоат, фталат, терефталат, бензолсульфонат, толуолсульфонат, хлорбензолсульфонат, ксилолсульфонат, фенилацетат, фенилпропионат, фенилбутират, цитрат, лактат, β-гидроксибутират, гликолят, малат, тартрат, метансульфонат, пропансульфонат, нафталин-1-сульфонат, нафталин-2-сульфонат или манделат. Например, кислотно-аддитивная соль соединения, представленного формулой 1, может быть получена путем растворения соединения в избыточном количестве кислого водного раствора и осаждения соли с использованием водного органического растворителя, такого как метанол, этанол, ацетон или ацетонитрил.

Соль металла может представлять собой соль натрия, калия или кальция. Соль металла может быть получена с использованием основания, соль щелочного металла или щелочноземельного металла может быть получена путем, например, растворения соединения в избыточном количестве раствора гидроксида щелочного металла или гидроксида щелочноземельного металла, удаления фильтрованием нерастворимой соли соединения, выпаривания фильтрата и/или высушивания полученного продукта.

Вышеописанное соединение формулы 1 и/или его фармацевтически приемлемая соль может служить в качестве ингибитора белка SERCA, ответственного за связанную с выживанием сигнализацию в стрессовой сигнализации ER.

Кроме того, по настоящему изобретению может быть предложена фармацевтическая композиция для повышения противораковой активности, содержащая вышеописанное соединение, представленное формулой 1, или его фармацевтически приемлемую соль.

Соединение, представленное формулой 1, или его фармацевтически приемлемая соль являются такими, как описано выше.

Повышение противораковой активности может представлять собой повышение противораковой активности противоракового средства или облучения.

Композиция по настоящему изобретению может усиливать действие противораковой терапии, такой как химиотерапия с использованием противоракового средства, радиотерапия или иммунотерапия.

«Противораковая терапия» является способом лечения рака, и может представлять собой, например, терапию посредством резекции опухоли, химиотерапию с использованием противоракового средства, радиотерапию или иммунотерапию.

Термин «лечение» означает любые действия, связанные с облегчением или изменением в лучшую сторону симптомов у субъектов, предположительно имеющих заболевание и имеющих заболевание.

Композиция по настоящему изобретению может быть использована в качестве противоракового адъюванта для противораковой терапии.

Противораковое средство может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из группы, состоящей из противоракового средства на основе таксена и противоракового средства на основе камптотецина.

Противораковое средство на основе таксена может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из группы, состоящей из паклитаксела, доцетаксела и кабазитаксела.

Противораковое средство на основе камптотецина может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из группы, состоящей из иринотекана, топотекана и велотекана.

Композиция по настоящему изобретению может представлять собой фармацевтическую композицию для повышения противораковой активности в отношении резистентного рака.

Композиция по настоящему изобретению может повышать чувствительность раковых клеток к противораковой терапии и преодолевать устойчивость резистентного рака.

Термин «повышенная чувствительность раковых клеток» означает, что концентрация, приводящая к эффектам ингибирования роста и клеточной гибели раковых клеток, имеющих приобретенную устойчивость, достигает такого же уровня, или более, в сравнении с концентрацией, приводящей к эффекту ингибирования роста раковых клеток, не обладающих устойчивостью.

Термин «резистентный рак» означает рак, который не демонстрирует улучшение, облегчение, уменьшение или лечение рака в результате противораковой терапии. Резистентный рак может не обладать исходной устойчивостью к конкретной противораковой терапии, или также может обладать устойчивостью к той же терапии вследствие генетических мутаций в раковых клетках при долгосрочном лечении без проявления исходной устойчивости.

Резистентный рак может представлять собой рак с устойчивостью к радиотерапии посредством облучения, то есть, резистентный к облучению рак.

Резистентный рак может представлять собой рак с устойчивостью к химиотерапии с использованием противоракового средства, то есть, резистентный к противораковому средству рак.

Например, резистентный к противораковому средству рак может представлять собой рак, резистентный к по меньшей мере одному из противоракового средства на основе таксена и противоракового средства на основе камптотецина.

Рак, резистентный к противораковому средству на основе таксена, может возникать вследствие эффекта ингибирования гибели раковых клеток, вызываемой противораковым средством на основе таксена, за счет связанного с выживанием сигнального белка, такого как NF-κB или GRP78. В этом случае фармацевтическая композиция по настоящему изобретению ингибирует экспрессию или активность связанного с выживанием белка, такого как NF-κB или GRP78, вследствие чего преодолевается устойчивость к противораковому средству на основе таксена.

Рак, резистентный к противораковому средству на основе камптотецина, может возникать вследствие эффекта ингибирования гибели раковых клеток, вызываемой противораковым средством на основе камптотецина, за счет связанного с выживанием сигнального белка, такого как PARP или NF-κB. В этом случае фармацевтическая композиция по настоящему изобретению ингибирует экспрессию или активность связанного с выживанием белка, такого как PARP или NF-κB, вследствие чего преодолевается устойчивость к противораковому средству на основе камптотецина.

Рак, резистентный к противораковому средству на основе таксена и/или противораковому средству на основе камптотецина, может возникать вследствие эффекта ингибирования гибели раковых клеток, вызываемого избыточной экспрессией и/или избыточной активацией белка SERCA, ответственного за связанную с выживанием сигнализацию в стрессовой сигнализации ER. То есть, в качестве ингибитора белка SERCA фармацевтическая композиция по настоящему изобретению, которая способна ингибировать экспрессию или активность белка SERCA, может преодолевать устойчивость к противораковому средству на основе таксена и/или противораковому средству на основе камптотецина.

Противораковое средство на основе таксена и противораковое средство на основе камптотецина являются такими, как описано выше.

Резистентный рак может представлять собой по меньшей мере один рак, выбранный из группы, состоящей из рака щитовидной железы, рака желудка, колоректального рака, рака яичника, рака молочной железы, рака легкого, саркомы Капоши, рака шейки матки, рака поджелудочной железы, рака головы и шеи, рака прямой кишки, рака толстого кишечника, рака пищевода и рака предстательной железы. Эти виды рака могут представлять собой виды рака, обладающие устойчивостью к по меньшей мере одному из противоракового средства на основе таксена и противоракового средства на основе камптотецина.

Композиция по настоящему изобретению может быть введена совместно с противораковым средством, и в этом случае может проявлять эффект противоракового адъюванта, который преодолевает устойчивость к лечению противораковым средством или облучением.

Композиция по настоящему изобретению также может содержать соединение, представленное формулой 1, или его фармацевтически приемлемую соль и противораковое средство.

В настоящем документе дополнительное включенное противораковое средство может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из группы, состоящей из азотистого иприта, иматиниба, оксалиплатина, ритуксимаба, эрлотиниба, нератиниба, лапатиниба, гефитиниба, вандетаниба, нилотиниба, семаксаниба, бозутиниба, акситиниба, маситиниба, цедираниба, лестауртиниба, трастузумаба, гефитиниба, бортезомиба, сунитиниба, пазопаниба, тоцераниба, нинтеданиба, регорафениба, семаксаниба, тибозаниба, понатиниба, кабозантиниба, карбоплатина, сорафениба, ренбатиниба, бевацизумаба, цисплатина, цетуксимаба, вискумальбума, аспарагиназы, третиноина, гидроксикарбамида, дазатиниба, эстрамустина, гемтузумаб озогамицина, ибритутомаб тиуксетана, гептапластина, метиламинолевулиновой кислоты, амсакриина, алемтузумаба, прокарбазина, алпростадила, нитрата гольмия, хитозана, гемцитабина, доксифуридина, пеметрекседа, тегафура, капецитабина, гимерацила, отерацила, азацитидина, метотрексата, урацила, цитарабина, 5-фторурацила, флударабина, эноцитабина, флутамида, кефецитабина, децитабина, меркаптопурина, тиогуанина, кладрибина, кармофура, ралтитрексида, доцетаксела, паклитаксела, иринотекана, велотекана, топотекана, винорелбина, этопозида, винкристина, винбластина, тенипозида, доксорубицина, идарубицина, эпирубицина, митоксантрона, митомицина, блеромицина, даунорубицина, дактиномицина, парарубицина, акларубицина, пепромицина, темсиролимуса, темозололмида, бусульфана, ифосфамида, циклофосфамида, мельпарана, альтретмина, декарбазина, тиотепы, бимустина, хлорамбуцила, миторактола, лейковорина, третонина, эксеместана, аминоглутетимида, анагрелида, олапариба, навельбина, панразола, тамоксифена, торемифена, тестолактона, анастрозола, лектрозола, борозола, бикалутамида, ломустина, вориностата, энтиностата и кармустина.

Композиция по настоящему изобретению также может содержать по меньшей мере одно из противоракового средства на основе таксена и противоракового средства на основе камптотецина, помимо соединения, представленного формулой 1, или его фармацевтически приемлемой соли.

Например, композиция по настоящему изобретению также может содержать по меньшей мере одно средство, выбранное из группы, состоящей из паклитаксела, доцетаксела и кабазитаксела.

Например, композиция по настоящему изобретению также может содержать по меньшей мере одно средство, выбранное из группы, состоящей из иринотекана, топотекана и велотекана.

Например, композиция по настоящему изобретению может дополнительно содержать по меньшей мере одно средство, выбранное из группы, состоящей из паклитаксела, доцетаксела, кабазитаксела, иринотекана, топотекана и велотекана.

Композиция по настоящему изобретению также может содержать другое противораковое средство, помимо соединения, представленного формулой 1, или его фармацевтически приемлемой соли; и по меньшей мере одного из противоракового средства на основе таксена и противоракового средства на основе камптотецина.

Отличное от противоракового средства на основе таксена и противоракового средства на основе камптотецина дополнительное противораковое средство может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из группы, состоящей из азотистого иприта, иматиниба, оксалиплатина, ритуксимаба, эрлотиниба, нератиниба, лапатиниба, гефитиниба, вандетаниба, нилотиниба, семаксаниба, бозутиниба, акситиниба, маситиниба, цедираниба, лестауртиниба, трастузумаба, гефитиниба, бортезомиба, сунитиниба, пазопаниба, тоцераниба, нинтеданиба, регорафениба, семаксаниба, тибозаниба, понатиниба, кабозантиниба, карбоплатина, сорафениба, ренбатиниба, бевацизумаба, цисплатина, цетуксимаба, вискумальбума, аспарагиназы, третиноина, гидроксикарбамида, дазатиниба, эстрамустина, гемтузумаб озогамицина, ибритутомаб тиуксетана, гептапластина, метиламинолевулиновой кислоты, амсакриина, алемтузумаба, прокарбазина, алпростадила, нитрата гольмия, хитозана, гемцитабина, доксифуридина, пеметрекседа, тегафура, капецитабина, гимерацила, отерацила, азацитидина, метотрексата, урацила, цитарабина, 5-фторурацила, флударабина, эноцитабина, флутамида, кефецитабина, децитабина, меркаптопурина, тиогуанина, кладрибина, кармофура, ралтитрексида, доцетаксела, паклитаксела, иринотекана, велотекана, топотекана, винорелбина, этопозида, винкристина, винбластина, тенипозида, доксорубицина, идарубицина, эпирубицина, митоксантрона, митомицина, блеромицина, даунорубицина, дактиномицина, парарубицина, акларубицина, пепромицина, темсиролимуса, темозололмида, бусульфана, ифосфамида, циклофосфамида, мельпарана, альтретмина, декарбазина, тиотепы, бимустина, хлорамбуцила, миторактола, лейковорина, третонина, эксеместана, аминоглутетимида, анагрелида, олапариба, навельбина, панразола, тамоксифена, торемифена, тестолактона, анастрозола, лектрозола, борозола, бикалутамида, ломустина, вориностата, энтиностата и кармустина.

Композиция по настоящему изобретению может проявлять улучшенный повышающий противораковую активность эффект за счет дополнительного включения другого противоракового средства, помимо соединения, представленного формулой 1, или его фармацевтически приемлемой соли и по меньшей мере одного из противоракового средства на основе таксена и противоракового средства на основе камптотецина.

Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может содержать соединение, представленное формулой 1, или его фармацевтически приемлемую соль и противораковое средство в соотношении молярных концентраций от 1:0,001 до 1:1000, от 1:0,01 до 1:100, от 1:0,1 до 1:50 или от 1:0,1 до 1:20.

Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть изготовлена в форме капсулы, таблетки, гранулы, инъекции, мази, порошка или напитка.

Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть использована, будучи сформулированной в виде перорального препарата, такого как порошок, гранула, капсула, таблетка или водная суспензия, препарата для наружного применения, суппозитория и инъекционного препарата.

Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может содержать фармацевтически приемлемый носитель. Фармацевтически приемлемый носитель может представлять собой связывающее вещество, смазывающее вещество, разрыхлитель, эксципиент, солюбилизатор, диспергирующее средство, стабилизатор, суспендирующее средство, пигмент или ароматизатор для перорального введения, может быть смешан с буфером, консервантом, обезболивающим средством, солюбилизатором, изотоническим средством или стабилизатором для инъекции, или может представлять собой основу, эксципиент, смазывающее вещество или консервант для локального введения.

Лекарственная форма фармацевтической композиции по настоящему изобретению может быть создана по-разному за счет смешивания с фармацевтически приемлемым носителем. Например, для перорального введения фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть изготовлена в форме таблетки, пастилки, капсулы, эликсира, суспензии, сиропа или облатки, и в случае инъекционной формы, может быть изготовлена в виде ампулы со стандартной дозой или многодозовой лекарственной формы. Кроме того, фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть изготовлена в виде раствора, суспензии, таблетки, капсулы или препарата с замедленным высвобождением.

Носитель, эксципиент и разбавитель для препарата могут представлять собой лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, ксилит, эритрит, мальтит, крахмал, гуммиарабик, альгинат, желатин, фосфат кальция, силикат кальция, целлюлозу, метилцеллюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, воду, метилгидроксибензоат, пропилгидроксибензоат, тальк, стеарат магния, минеральное масло, наполнитель, антикоагулянт, смазывающее вещество, увлажняющее средство, ароматизатор, эмульгатор или консервант.

Путь введения фармацевтической композиции по настоящему изобретению может представлять собой, но не ограничивается ими, пероральный, внутривенный, внутримышечный, внутриартериальный, интрамедуллярный, интратекальный, внутрисердечный, чрескожный, подкожный, внутрибрюшинный, интраназальный, кишечный, локальный, подъязычный или ректальный путь введения.

Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть введена перорально или парентерально, и в случае парентерального введения можно выбирать наружное применение для кожи, внутрибрюшинную инъекцию, ректальную инъекцию, подкожную инъекцию, внутривенную инъекцию, внутримышечную инъекцию или интраторакальную инъекцию.

Доза фармацевтической композиции по настоящему изобретению может варьироваться в зависимости от состояния здоровья и массы тела пациента, тяжести заболевания, типа лекарственного средства, пути введения и продолжительности введения, и может быть соответствующим образом выбрана специалистами в данной области. Например, фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно вводить ежедневно в дозе от 0,0001 до 1000 мг/кг или от 0,001 до 500 мг/кг. Суточную дозу фармацевтической композиции по настоящему изобретению можно вводить один раз или в виде разделенных доз. Доза никоим образом не должна ограничивать объем настоящего изобретения.

Кроме того, настоящее изобретение относится к применению соединения, представленного формулой 1, или его фармацевтически приемлемой соли в лечении резистентного рака.

Резистентный рак, соединение, представленное формулой 1, или его фармацевтически приемлемая соль являются такими, как описано выше, и их подробное описание будет опущено.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способу лечения рака, включающему введение терапевтически эффективного количества соединения, представленного формулой 1, или его фармацевтически приемлемой соли для таргетирования резистентного рака.

Термин «введение» означает введение заранее определенного материала субъекту соответствующим способом.

Резистентный рак, соединение, представленное формулой 1, или его фармацевтически приемлемая соль являются такими, как описано выше, и их подробное описание будет опущено.

Термин «субъект с резистентным раком» относится к субъекту, который нуждается в соответствующем лечении вследствие наличия резистентного рака или вероятности его развития, а также к субъекту, который получал противораковую терапию, например, терапию путем хирургической резекции, химиотерапию с использованием противоракового средства, радиотерапию или иммунотерапию, но не восприимчив к ней и, вследствие этого, имеет рецидив рака.

Субъектом с резистентным раком может быть человек, корова, собака, морская свинка, кролик, курица или насекомое. Кроме того, настоящее изобретение относится способу лечения облучением, включающему: введение соединения, представленного формулой 1, или его фармацевтически приемлемой соли субъекту с резистентным раком; и лечение облучением.

Резистентный рак, субъект с резистентным раком, соединение, представленное формулой 1, или его фармацевтически приемлемая соль являются такими, как описано выше, и их подробное описание будет опущено.

Для лечения облучением можно использовать любой общепринятый способ лечения рака облучением или способ лечения рака облучением, который будет разработан в будущем.

Когда введение соединения, представленного формулой 1, по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли используют в сочетании с лечением облучением, можно добиваться синергического действия на ингибирование роста раковых клеток или раковых стволовых клеток и/или индукцию клеточной гибели, тем самым не только эффективно предотвращая или проводя лечение рака, но также предотвращая устойчивость к облучению, или метастазирование или рецидив рака.

Далее настоящее изобретение будет описано подробно со ссылкой на следующие примеры.

Примеры получения

1. Пример получения 1-1: C101, L19031

Посредством 10-стадийной реакции, описанной ниже, получали 2-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)гексагидро-2H-пиразинo[1,2-a]пиразин-6,9-дион(C101). Способ синтеза на каждой стадии описан подробно.

1) Стадия 1

Схема реакции 1

Как видно на схеме реакции 1, бензофуран (1,0 экв.) охлаждали в тетрагидрофурановом растворителе до -78°С и добавляли 2,5 M раствор н-бутиллития (1,2 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 1 часа, поддерживая температуру -78°С, и по каплям добавляли этилиодид (2,0 экв.), с последующим перемешиванием при 0°С в течение 1 часа. Подтверждали завершение реакции, и реакцию останавливали при помощи водного раствора хлорида аммония и этилацетата. Органический слой промывали дистиллированной водой, сушили над безводным сульфатом магния, а затем концентрировали при пониженном давлении. Остаточный продукт очищали хроматографией на силикагеле, с получением 2-этилбензофурана.

2) Стадия 2

Схема реакции 2

2-этилбензофуран (1,0 экв.) добавляли к метиленхлориду (MC), охлаждали до 0°С, и последовательно добавляли хлорид олова (IV) (1,5 экв.) и дихлорметил метиловый эфир (1,5 экв.), поддерживая температуру 0°С, с последующим перемешиванием в течение 1 часа. Подтверждали завершение реакции, и реакцию останавливали при помощи водного раствора хлорида аммония и метиленхлорида. Органический слой промывали дистиллированной водой, сушили над безводным сульфатом магния и концентрировали при пониженном давлении. Остаточный продукт очищали хроматографией на силикагеле, с получением 2-этилбензофуран-3-карбальдегида.

3) Стадия 3

Схема реакции 3

Добавляли пиперазин-2-карбоновую кислоту (1,0 экв.), диоксан и дистиллированную воду, а затем охлаждали до температуры 5°С или ниже. После этого добавляли ди-трет-бутилдикарбонат (1,1 экв.), поддерживая температуру 10°С или ниже. После перемешивания при комнатной температуре в течение 5 часов добавляли карбонат натрия (1,1 экв.) и перемешивали в течение 5 минут. Добавляли 9-флуоренилметил хлорформиат (1,2 экв.), перемешивали в течение ночи и концентрировали при пониженном давлении. К остаточному продукту добавляли этилацетат и 1 M соляную кислоту для доведения pH до 2-3 и интенсивно перемешивали до полного ресуспендирования остаточного продукта. Органический слой промывали рассолом, сушили над безводным сульфатом магния и концентрировали при пониженном давлении. Полученный продукт перекристаллизовывали с EA, с получением белого порошка, 1-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)-4-(трет-бутоксикарбонил)пиперазин-2-карбоновой кислоты.

4) Стадия 4

Схема реакции 4

1-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)-4-(трет-бутоксикарбонил)пиперазин-2-карбоновую кислоту смешивали с бензиловым спиртом (1,02 экв.) и трифенилфосфином (1,02 экв.) в безводном метиленхлориде, и раствор охлаждали до 0°С в потоке азота. Добавляли диэтилазодикарбоксилат (DEAD; 1,02 экв.), поддерживая температуру 0°С или ниже, и перемешивали в течение 1 часа. Добавляли воду, затем интенсивно перемешивали в течение 20 минут, органический слой сушили над безводным сульфатом магния и концентрировали при пониженном давлении. Остаточный продукт очищали хроматографией на силикагеле, с получением белого порошка, 1-((9H-флуорен-9-ил)метил)-2-бензил-4-(трет-бутил)пиперазин-1,2,4-трикарбоксилата.

5) Стадия 5

Схема реакции 5

Как показано на схеме реакции 5, трифторуксусную кислоту (TFA) (2,0 об.) добавляли к раствору 1-((9H-флуорен-9-ил)метил)-2-бензил-4-(трет-бутил)пиперазин-1,2,4-трикарбоксилата в метиленхлориде (5,0 об.) при комнатной температуре и перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут. Полученный раствор нейтрализовали бикарбонатом натрия и экстрагировали метиленхлоридом, органический слой промывали рассолом. Полученный органический слой сушили над безводным сульфатом магния и концентрировали, с получением 1-((9H-флуорен-9-ил)метил)-2-бензилпиперазин-1,2-дикарбоксилата.

6) Стадия 6

Схема реакции 6

2-этилбензофуран-3-карбальдегид (1,0 экв.), полученный на стадии 2, и 1-((9H-флуорен-9-ил)метил)-2-бензилпиперазин-1,2-дикарбоксилат (1,2 экв.), полученный на стадии 5, добавляли к 1,2-дихлорэтану (DCE) при комнатной температуре и перемешивали в течение 30 минут. Добавляли триацетоксиборогидрид натрия (3,0 экв.) и перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. К реакционному раствору добавляли метиленхлорид и воду, и интенсивно перемешивали в течение 20 минут. Отделенный органический слой промывали рассолом, сушили над безводным сульфатом магния и концентрировали, с получением 1-((9H-флуорен-9-ил)метил)-2-бензил-4-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)пиперазин-1,2-дикарбоксилата.

7) Стадия 7

Схема реакции 7

1-((9H-флуорен-9-ил)метил)-2-бензил-4-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)пиперазин-1,2-дикарбоксилат (1,0 экв.) растворяли в диметилформамиде при комнатной температуре и добавляли пиперидин (10 экв., 25% пиперидин в растворителе), с последующим перемешиванием в течение 1 часа. К реакционному раствору добавляли этилацетат, и пиперидин в растворе вымывали водным раствором хлорида аммония. Полученный продукт сушили над безводным сульфатом магния и концентрировали при пониженном давлении. Остаточный продукт очищали хроматографией на силикагеле, с получением бензил-4-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)пиперазин-2-карбоксилата.

8) Стадия 8

Схема реакции 8

Бензил-4-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)пиперазин-2-карбоксилат (1,0 экв.) и N-(трет-бутоксикарбонил)глицин (1,1 экв.), а также (бензотриазол-1-илокси)трипирролидинфосфоний гексафторфосфат (1,2 экв.) растворяли в диметилформамиде при комнатной температуре и добавляли N, N-диизопропилэтиламин (1,5 экв.), с последующим перемешиванием в течение ночи при комнатной температуре. Водный раствор хлорида аммония и этилацетат использовали для остановки реакции. Полученный органический слой промывали рассолом, сушили над безводным сульфатом магния и концентрировали при пониженном давлении. Остаточный продукт очищали хроматографией на силикагеле, с получением бензил-1-((трет-бутоксикарбонил)глицил)-4-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)пиперазин-2-карбоксилата.

9) Стадия 9

Схема реакции 9

Как показано на схеме реакции 9, бензил-1-((трет-бутоксикарбонил)глицил)-4-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)пиперазин-2-карбоксилат, полученный на стадии 8, растворяли в дихлорметане (5,0 об.) при комнатной температуре и добавляли трифторуксусную кислоту (2,0 об.), с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 30 минут. После завершения реакции реакционный раствор нейтрализовали водным раствором бикарбоната натрия и экстрагировали метиленхлоридом. Полученный раствор сушили над безводным сульфатом магния и концентрировали при пониженном давлении, с получением бензил-4-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)-1-глицилпиперазин-2-карбоксилата.

10) Стадия 10

Схема реакции 10

Бензил-4-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)-1-глицилпиперазин-2-карбоксилат, полученный на стадии 9, растворяли в изопропаноле (5,0 об.) и добавляли уксусную кислоту (1,5 об.), нагревали и перемешивали в течение 1 часа. После завершения реакции полученный раствор нейтрализовали водным раствором бикарбоната натрия. Продукт реакции экстрагировали метиленхлоридом и сушили над безводным сульфатом магния. После концентрация при пониженном давлении остаточный продукт очищали хроматографией на силикагеле, с получением 2-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)гексагидро-2H-пиразинo[1,2-a]пиразин-6,9-диона (формула 2).

Формула 2

2-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)гексагидро-2H-пиразинo[1,2-a]пиразин-6,9-дион (называемый C101, L19031 или кандидатом 1).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ 7,58 (д, J=7,0 Гц, 1H), 7,40 (д, J=7,5 Гц, 1H), 7,24-7,17 (м, 2H), 4,50 (д, J=13,0 Гц, 1H), 4,06 (д, J=11,0 Гц, 1H), 4,00 (с, 2H), 3,64 (дд, J=57,5, 13,0 Гц, 1H), 3,47 (д, J=11,0 Гц, 1H), 2,90 (д, J=11,5 Гц, 1H), 2,71-2,81 (м, 3H), 2,11 (т, J=11,5 Гц, 1H), 2,07-2,01 (м, 1H), 1,30 (т, J=7,5 Гц, 3H);

¹³C-ЯМР (126 МГц, CDCl₃) δ 166,32, 161,99, 158,34, 154,16, 129,60, 123,65, 122,56, 119,87, 110,94, 109,53, 57,18, 56,42, 51,84, 51,58, 44,75, 41,78, 20,18, 13,10; и

МС (ИЭР) m/z для C₁₈H₂₁N₃O₃[M+H]⁺: рассчитано 328,1656, найдено 328,1655.

2. Пример получения 1-2: C101.HCl, L19001

Соль соляной кислоты формулы 3 получали таким же способом, как в примере получения 1-1, за исключением того, что соляную кислоту использовали в конце вышеописанного примера получения 1-1.

Формула 3

2-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)гексагидро-2H-пиразинo[1,2-a]пиразин-6,9-дион гидрохлорид (называемый C101.HCl или L19001).

3. Пример получения 2: C102, L19002

Соль соляной кислоты формулы 4 получали таким же способом, как в примере получения 1-1, за исключением того, что использовали N-(трет-бутоксикарбонил)-L-аланин вместо N-(трет-бутоксикарбонил)глицина, который представляет собой реакционный материал, используемый на стадии 8 вышеописанного примера получения 1-1, и соляную кислоту использовали в конце вышеописанного примера получения 1-1.

Формула 4

2-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)-7-метилгексагидро-2H-пиразинo[1,2-a]пиразин-6,9-дион гидрохлорид (называемый C102 или L19002).

¹H-ЯМР (500 МГц, CD₃OD) δ 7,78-7,72 (м, 1H), 7,53-7,47 (м, 1H), 7,36-7,29 (м, 2H), 4,69 (дд, J=21,3, 12,3 Гц, 1H), 4,60-4,46 (м, 3H), 4,13 (дк, J=13,8, 6,8 Гц, 1H), 3,99-3,91 (м, 1H), 3,66 (с, 1H), 3,20-3,02 (м, 3H), 2,98 (дк, J=7,5, 2,0 Гц, 2H), 1,46 (т, J=7,5 Гц, 3H), 1,38 (т, J=7,5 Гц, 3H);

МС (ИЭР) m/z для C₁₉H₂₃N₃O₃[M+H]⁺: рассчитано 342,1812, найдено 342,1813.

4. Пример получения 3: C105, L19033

Соединение формулы 5 получали таким же способом, как в примере получения 1-1, за исключением того, что использовали N-(трет-бутоксикарбонил)-L-2-циклогексилглицин вместо N-(трет-бутоксикарбонил)глицина, который представляет собой реакционный материал, используемый на стадии 8 вышеописанного примера получения 1-1.

Формула 5

7-циклогексил-2-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)гексагидро-2H-пиразинo[1,2-a]пиразин-6,9-дион (называемый C105 или L19033).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ 7,59 (д, J=7,5 Гц, 1H), 7,40 (д, J=7,5 Гц, 1H), 7,23-7,17 (м, 2H), 4,53 (т, J=12,3 Гц, 1H), 4,06 (ддд, J=20,0, 11,0, 3,0 Гц, 1H), 3,87 (д, J=28,0 Гц, 1H), 3,70 (дд, J=13,0, 5,5 Гц, 1H), 3,58-3,49 (м, 2H), 2,90 (д, J=11,5 Гц, 1H), 2,78 (к, J=7,5 Гц, 2H), 2,75-2,65 (м, 1H), 2,15-1,93 (м, 4H), 1,83-1,60 (м, 4H), 1,48 (дд, J=32,5, 12,0 Гц, 1H), 1,34-1,26 (м, 4H), 1,28-1,04 (м, 3H);

¹³C-ЯМР (126 МГц, CDCl₃) δ 167,02, 166,42, 165,05, 163,54, 158,33, 158,27, 154,16, 129,62, 129,57, 128,75, 127,80, 127,19, 123,64, 123,63, 122,54, 119,90, 119,87, 110,91, 109,63, 109,57, 60,34, 59,95, 57,52, 57,09, 56,57, 56,50, 51,98, 51,89, 51,78, 51,54, 43,67, 42,11, 41,95, 41,52, 29,49, 29,30, 26,78, 26,56, 26,53, 26,39, 26,08, 25,98, 25,87, 20,16, 13,11, 13,10;

МС (ИЭР) m/z для C₂₄H₃₁N₃O₃[M+H]⁺: рассчитано 410,2438, найдено 410,2442.

5. Пример получения 4: C107, L19003

Соль соляной кислоты формулы 6 получали таким же способом, как в примере получения 1-1, за исключением того, что использовали N-(трет-бутоксикарбонил)-L-метионин вместо N-(трет-бутоксикарбонил)глицина, который представляет собой реакционный материал, используемый на стадии 8 вышеописанного примера получения 1-1, и соляную кислоту использовали в конце процесса.

Формула 6

2-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)-7-(2-(метилтио)этил)гексагидро-2H-пиразинo[1,2-a]пиразин-6,9-дион гидрохлорид (называемый C107 или L19003).

¹H-ЯМР (500 МГц, CD₃OD) δ 7,80-7,76 (м, 1H), 7,50-7,47 (м, 1H), 7,34-7,30 (м, 2H), 4,72-4,57 (м, 4H), 4,25-4,21 (м, 1H), 4,00 (т, J=9,8 Гц, 1H), 3,70 (с, 1H), 3,41-3,32 (м, 1H), 3,24-3,07 (м, 2H), 3,00 (дк, J=11,0, 3,9 Гц, 2H), 2,64-2,50 (м, 2H), 2,28-2,18 (м, 1H), 2,14-2,06 (м, 1H), 2,00 (д, J=22,5 Гц, 3H), 1,38 (дт, J=7,5, 3,5 Гц, 3H);

МС (ИЭР) m/z для C₂₁H₂₇N₃O₃S [M+H]⁺: рассчитано 402,1846, найдено 402,1843.

6. Пример получения 5: C108, L19004

Соль соляной кислоты формулы 7 получали таким же способом, как в примере получения 1-1, за исключением того, что использовали N-(трет-бутоксикарбонил)-S-бензил-L-цистеин вместо N-(трет-бутоксикарбонил)глицина, который представляет собой реакционный материал, используемый на стадии 8 вышеописанного примера получения 1-1, и соляную кислоту использовали в конце процесса.

Формула 7

7-((бензилтио)метил)-2-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)гексагидро-2H-пиразинo[1,2-a]пиразин-6,9-дион гидрохлорид (называемый C108 или L19004).

¹H-ЯМР (500 МГц, CD₃OD) δ 7,78-7,69 (м, 1H), 7,49-7,46 (м, 1H), 7,29-7,26 (м, 7H), 4,70-4,64 (м, 1H), 4,59 (с, 1H), 4,53-4,39 (м, 2H), 4,36-4,32 (м, 1H), 3,94 (д, J=10,5 Гц, 1H), 3,71 (д, J=2,5 Гц, 1H), 3,51 (дд, J=42,0, 13,2 Гц, 2H), 3,09 (дд, J=14,5, 4,0 Гц, 2H), 3,03 (дд, J=14,5, 3,5 Гц, 1H), 2,99-2,88 (м, 2H), 2,80 (ддд, J=35,5, 14,5, 3,8 Гц, 2H), 1,36 (дт, J=12,0, 7,5 Гц, 3H);

МС (ИЭР) m/z для C₂₆H₂₉N₃O₃S [M+H]⁺: рассчитано 464,2002, найдено 464,2001.

7. Пример получения 6: C109, L19035

Соединение формулы 8 получали таким же способом, как в примере получения 1-1, за исключением того, что использовали N-(трет-бутоксикарбонил)-L-пролин вместо N-(трет-бутоксикарбонил)глицина, который представляет собой реакционный материал, используемый на стадии 8 вышеописанного примера получения 1-1.

Формула 8

2-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)октагидро-6H-пиразинo[1,2-a]пирроло[1,2-d]пиразин-6,11(2H)-дион (называемый C109 или L19035).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ 7,58 (дд, J=13,0, 7,5 Гц, 1H), 7,39 (д, J=8,0 Гц, 1H), 7,24-7,15 (м, 2H), 4,45 (дд, J=59,0, 13,0 Гц, 1H), 4,13-3,98 (м, 2H), 3,81-3,66 (м, 2H), 3,62-3,37 (м, 3H), 2,96-2,71 (м, 4H), 2,48-2,40 (м, 1H), 2,15-1,82 (м, 5H), 1,30 (дт, J=16,0, 8,0 Гц, 3H);

¹³C-ЯМР (126 МГц, CDCl₃) δ 167,19, 164,43, 163,30, 162,81, 158,31, 158,30, 154,16, 154,13, 129,66, 129,62, 123,63, 123,56, 122,58, 122,48, 119,97, 119,85, 110,90, 110,87, 109,75, 109,49, 61,16, 59,10, 58,76, 57,14, 56,28, 55,82, 52,01, 51,91, 51,67, 51,43, 45,51, 45,42, 42,04, 41,75, 31,82, 30,15, 29,96, 22,89, 22,07, 21,92, 20,19, 20,17, 14,37, 13,10;

МС (ИЭР) m/z для C₂₁H₂₅N₃O₃[M+H]⁺: рассчитано 368,1969, найдено 368,1974.

8. Пример получения 7-1: C111, L19037

Соединение формулы 9 получали таким же способом, как в примере получения 1-1, за исключением того, что использовали N-(трет-бутоксикарбонил)-L-фенилаланин вместо N-(трет-бутоксикарбонил)глицина, который представляет собой реакционный материал, используемый на стадии 8 вышеописанного примера получения 1-1.

Формула 9

7-бензил-2-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)гексагидро-2H-пиразинo[1,2-a]пиразин-6,9-дион (называемый C111 или L19037).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ 7,49 (дд, J=12,5, 7,5 Гц, 1H), 7,40 (дд, J=8,0, 5,0 Гц, 1H), 7,34-7,16 (м, 7H), 4,46 (дд, J=39,5, 13,0 Гц, 1H), 4,34(д, J=26,5 Гц, 1H), 3,83(дд, J=10,5, 2,5 Гц, 0,5H), 3,55(дд, J=62,5, 13,5 Гц, 1H), 3,39 (с, 1H), 3,35(дд, J=13,5, 4,0 Гц, 0,5H), 3,30-3,21(м, 1H), 3,04(дд, J=13,5, 4,0 Гц, 0,5H), 2,97(дд, J=13,5, 4,0 Гц, 1H), 2,86-2,79(м, 1H), 2,76-2,69(м, 3H), 2,59(дд, J=12,5, 3,0 Гц, 0,5H), 2,44(дд, J=12,5, 3,5 Гц, 0,5H), 1,97-1,90(м, 1H), 1,69(дд, J=12,0, 3,0 Гц, 0,5H), 1,28(дт, J=7,5, 7,5 Гц, 3H);

¹³C-ЯМР (126 МГц, CDCl₃) δ 167,02, 166,39, 164,80, 162,84, 158,28, 158,19, 154,13, 135,21, 135,03, 131,16, 130,32, 129,69, 129,63, 128,89, 128,79, 127,89, 127,52, 123,63, 123,59, 122,53, 122,48, 119,88, 119,82, 110,90, 110,88, 109,58, 109,43, 57,62, 56,35, 56,12, 55,96, 55,91, 55,32, 51,77, 51,40, 51,34, 51,30, 41,08, 41,4, 40,73, 20,16, 20,10, 13,10, 13,07;

МС (ИЭР) m/z для C₂₅H₂₇N₃O₃[M+H]⁺: рассчитано 418,2125, найдено 418,2129.

9. Пример получения 7-2: C111.HCl, L19005

Соль соляной кислоты формулы 10 получали таким же способом, как в примере получения 7-1, за исключением того, что соляную кислоту использовали в конце вышеописанного примера получения 7-1.

Формула 10

7-бензил-2-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)гексагидро-2H-пиразинo[1,2-a]пиразин-6,9-дион гидрохлорид (называемый C111.HCl или L19005).

10. Пример получения 8: C121, L19006

Соль соляной кислоты формулы 11 получали таким же способом, как в примере получения 1-1, за исключением того, что использовали N-(трет-бутоксикарбонил)-3-(1-нафтил)-D-аланин вместо N-(трет-бутоксикарбонил)глицина, который представляет собой реакционный материал, используемый на стадии 8 вышеописанного примера получения 1-1, и соляную кислоту использовали в конце процесса.

Формула 11

2-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)-7-(нафтален-1-илметил)гексагидро-2H-пиразинo[1,2-a]пиразин-6,9-дион гидрохлорид (называемый C121 или L19006).

¹H-ЯМР (500 МГц, CD₃OD) δ 8,07 (дд, J=18,8, 8,5 Гц, 1H), 7,84 (дд, J=12,8, 8,0 Гц, 1H), 7,64-7,21 (м, 9H), 4,59 (с, 1H), 4,50-4,43 (м, 1H), 4,40 (д, J=14,0 Гц, 0,5H), 4,23 (уш.с, 1H), 4,18 (д, J=14 Гц, 0,5H), 4,02 (д, J=11,5 Гц, 0,5H), 3,90 (дд, J=14,0, 3,0 Гц, 0,5H), 3,81 (уш.с, 1H), 3,74 (дд, J=14,0, 4,0 Гц, 0,5H), 3,54-3,49 (м, 1H), 3,36-3,20 (м, 1H), 3,09 (дд, J=29,0, 11,5 Гц, 1H), 2,86-2,70 (м, 3,5H), 2,57 (д, J=11,0 Гц, 0,5H), 2,17-2,08 (м, 0,5H), 1,31 (дт, J=17,5, 7,5 Гц, 3H); и

МС (ИЭР) m/z для C₂₉H₂₉N₃O₃[M+H]⁺: рассчитано 468,2282, найдено 468,2284.

11. Пример получения 9: C122, L19007

Соль соляной кислоты формулы 12 получали таким же способом, как в примере получения 1-1, за исключением того, что использовали N-(трет-бутоксикарбонил)-3-(2-нафтил)-D-аланин вместо N-(трет-бутоксикарбонил)глицина, который представляет собой реакционный материал, используемый на стадии 8 вышеописанного примера получения 1-1, и соляную кислоту использовали в конце процесса.

Формула 12

2-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)-7-(нафтален-2-илметил)гексагидро-2H-пиразинo[1,2-a]пиразин-6,9-дион гидрохлорид (называемый C122 или L19007).

¹H-ЯМР (500 МГц, CD₃OD) δ 8,00-7,15 (м, 11H), 4,64 (д, J=15,0 Гц, 1H), 4,59 (с, 1H), 4,52-4,45 (м, 1H), 4,42 (с, 1H), 4,19 (д, J=10,5 Гц, 0,5H), 3,65-3,33 (м, 3,5H), 3,27 (д, J=11 Гц, 0,5H), 3,19-3,06 (м, 2H), 2,96-2,82 (м, 2H), 2,64-2,52 (м, 1,5H), 2,14 (дт, J=12,5, 3,0 Гц, 0,5H), 2,14 (дт, J=12,5, 3,0 Гц, 0,5H) 1,27 (дт, J=27,0, 7,5 Гц, 3H); и

МС (ИЭР) m/z для C₂₉H₂₉N₃O₃[M+H]⁺: рассчитано 468,2282, найдено 468,2283.

12. Пример получения 10: C201, L19008

Соединение формулы 13 получали, дополнительно проводя стадию, показанную на схеме реакции 11, ниже, с использованием соединения (формула 2), полученного в примере получения 1-1, в качестве исходного материала.

Схема реакции 11

Добавляли 2-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)гексагидро-2H-пиразинo[1,2-a]пиразин-6,9-дион, гидрид натрия (2,0 экв.) и диметилформамид при комнатной температуре, перемешивали в течение 1 часа, затем добавляли метилиодид и перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Завершение реакции подтверждали методом ТСХ, и затем реакцию останавливали водным раствором хлорида аммония и этилацетатом. Органический слой промывали водным раствором, сушили над безводным сульфатом магния и концентрировали при пониженном давлении. Остаточный продукт очищали хроматографией на силикагеле, с получением 2-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)-8-метилгексагидро-2H-пиразинo[1,2-a]пиразин-6,9-диона.

Формула 13

2-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)-8-метилгексагидро-2H-пиразинo[1,2-a]пиразин-6,9-дион (называемый C201 или L19008).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ 7,59 (д, J=7,0 Гц, 1H), 7,40 (д, J=7,5 Гц, 1H), 7,25-7,16 (м, 2H), 4,49 (д, J=13,0 Гц, 1H), 4,09-4,03 (м, 1H), 3,97-3,96 (м, 2H), 3,78-3,50 (м, 3H), 2,95 (с, 3H), 2,89 (д, J=11,5 Гц, 1H), 2,80-2,70 (м, 3H), 2,11-1,99 (м, 2H), 1,30 (т, J=7,5 Гц, 3H) ; ¹³C-ЯМР (126 МГц, CDCl₃) δ 163,73, 161,65, 158,36, 154,15, 129,62, 123,62, 122,56, 119,88, 110,91, 109,49, 57,45, 56,85, 51,76, 51,43, 51,40, 41,56, 33,62, 20,18, 13,08; и

МС (ИЭР) m/z для C₁₉H₂₃N₃O₃[M+H]⁺: рассчитано 342,1812, найдено 342,1802.

13. Пример получения 11: C202, L19009

Соединение формулы 14 получали таким же способом, как в примере получения 10, за исключением того, что использовали этилиодид вместо метилиодида, который представляет собой реакционный материал.

Формула 14

8-этил-2-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)гексагидро-2H-пиразинo[1,2-a]пиразин-6,9-дион (называемый C202 или L19009).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ 7,59 (д, J=7,5 Гц, 1H), 7,40 (д, J=7,5 Гц, 1H), 7,23-7,16 (м, 2H), 4,48 (д, J=13,0 Гц, 1H), 4,07-4,03 (м, 1H), 4,01-3,91 (м, 2H), 3,72 (д, J=13,5 Гц, 1H), 3,59-3,52 (м, 2H), 3,50-3,35 (м, 2H), 2,88 (д, J=11,5 Гц, 1H), 2,81-2,70 (м, 3H), 2,08 (т, J=11,5 Гц, 1H), 2,02 (дт, J=11,5, 3,0 Гц, 1H), 1,30 (т, J=7,5 Гц, 3H), 1,15 (т, J=7,3 Гц, 3H);

¹³C-ЯМР (126 МГц, CDCl₃) δ 163,20, 162,05, 158,29, 154,15, 129,63, 123,60, 122,53, 119,90, 110,89, 109,60, 57,54, 56,89, 51,81, 51,39, 48,81, 41,59, 41,12, 20,18, 13,08, 11,83; и

МС (ИЭР) m/z для C₂₀H₂₅N₃O₃[M+H]⁺: рассчитано 356,1969, найдено 356,1955.

14. Пример получения 12: C203, L19010

Соединение формулы 15 получали таким же способом, как в примере получения 10, за исключением того, что использовали бутилбромид вместо метилиодида, который представляет собой реакционный материал.

Формула 15

8-бутил-2-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)гексагидро-2H-пиразинo[1,2-a]пиразин-6,9-дион (называемый C203 или L19010).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ 7,59 (д, J=7,5 Гц, 1H), 7,39 (д, J=8,0 Гц, 1H), 7,24-7,16 (м, 2H), 4,48 (д, J=13,0 Гц, 1H), 4,06 (д, J=11,0 Гц, 1H), 3,95 (д, J=4,5 Гц, 2H), 3,72 (д, J=13,0 Гц, 1H), 3,60-3,52 (м, 2H), 3,37 (т, J=7,5 Гц, 2H), 2,88 (д, J=11,5 Гц, 1H), 2,80-2,69 (м, 3H), 2,07 (т, J=11,5 Гц, 1H), 2,02 (дт, J=11,5, 3,3 Гц, 1H), 1,57-1,49 (м, 2H), 1,36-1,28 (м, 5H), 0,93 (т, J=7,3 Гц, 3H);

¹³C-ЯМР (126 МГц, CDCl₃) δ 163,43, 162,09, 158,28, 154,15, 129,63, 123,59, 122,52, 119,90, 110,88, 109,59, 57,52, 56,94, 51,80, 51,38, 49,34, 45,97, 41,59, 28,63, 20,17, 20,12, 13,95, 13,07; и

МС (ИЭР) m/z для C₂₂H₂₉N₃O₃[M+H]⁺: рассчитано 384,2282, найдено 384,2260.

15. Пример получения 13: C204, L19011

Соединение формулы 16 получали таким же способом, как в примере получения 10, за исключением того, что использовали гексилбромид вместо метилиодида, который представляет собой реакционный материал.

Формула 16

2-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)-8-гексилгексагидро-2H-пиразинo[1,2-a]пиразин-6,9-дион (называемый C204 или L19011).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ 7,59 (д, J=7,5 Гц, 1H), 7,40 (д, J=8,0 Гц, 1H), 7,24-7,16 (м, 2H), 4,48 (д, J=13,0 Гц, 1H), 4,06 (д, J=11,0 Гц, 1H), 3,96 (д, J=5,0 Гц, 2H), 3,72 (д, J=13,5 Гц, 1H), 3,59-3,52 (м, 2H), 3,37 (дд, J=8,8, 6,8 Гц, 2H), 2,88 (д, J=11,0 Гц, 1H), 2,81-2,70 (м, 3H), 2,07 (т, J=11,0 Гц, 1H), 2,02 (дд, J=3,5, 11,5, Гц, 1H), 1,57-1,50 (м, 2H), 1,32-1,26 (т, J=6,1 Гц, 9H), 0,88 (т, J=7,0 Гц, 3H);

¹³C-ЯМР (126 МГц, CDCl₃) δ 163,41, 162,11, 158,30, 154,16, 129,63, 123,60, 122,53, 119,89, 110,89, 109,58, 57,53, 56,95, 51,81, 51,38, 49,36, 46,25, 41,60, 31,63, 26,55, 26,52, 22,73, 20,17, 14,22, 13,07; и

МС (ИЭР) m/z для C₂₄H₃₃N₃O₃[M+H]⁺: рассчитано 412,2595, найдено 412,2566.

16. Пример получения 14: C206, L19012

Соединение формулы 17 получали таким же способом, как в примере получения 10, за исключением того, что использовали бензилбромид вместо метилиодида, который представляет собой реакционный материал.

Формула 17

8-бензил-2-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)гексагидро-2H-пиразинo[1,2-a]пиразин-6,9-дион (называемый C206 или L19012).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ 7,60 (д, J=7,0 Гц, 1H), 7,40 (д, J=7,5 Гц, 1H), 7,36-7,29 (м, 3H), 7,26-7,17 (м, 4H), 4,57 (к, J=14,5 Гц, 2H), 4,46 (д, J=13,0 Гц, 1H), 4,13 (д, J=11,0 Гц, 1H), 3,85 (с, 2H), 3,73 (д, J=13,5 Гц, 1H), 3,62-3,56 (м, 2H), 2,89-2,85 (м, 1H), 2,78 (к, J=7,5 Гц, 2H), 2,73 (дд, J=12,5, 3,5 Гц, 1H), 2,12 (т, J=11,0 Гц, 1H), 2,02 (дд, J=11,5, 3,5 Гц, 1H), 1,30 (т, J=7,5 Гц, 3H);

¹³C-ЯМР (126 МГц, CDCl₃) δ 163,69, 161,91, 158,31, 154,18, 135,15, 129,63, 129,18, 128,72, 128,44, 123,63, 122,55, 119,90, 110,93, 109,59, 57,61, 56,97, 51,82, 51,37, 49,55, 48,77, 41,61, 20,20, 13,10; и

МС (ИЭР) m/z для C₂₅H₂₇N₃O₃[M+H]⁺: рассчитано 418,2153, найдено 418,2093.

17. Пример получения 15: C207, L19013

Соединение формулы 18 получали таким же способом, как в примере получения 10, за исключением того, что использовали 4-метилбензилбромид вместо метилиодида, который представляет собой реакционный материал.

Формула 18

2-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)-8-(4-метилбензил)гексагидро-2H-пиразинo[1,2-a]пиразин-6,9-дион (называемый C207 или L19013).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ 7,59 (д, J=7,5 Гц, 1H), 7,40 (д, J=8,0 Гц, 1H), 7,26-7,17 (м, 2H), 7,14 (с, 4H), 4,52 (дд, J=32,5, 14,0 Гц, 2H), 4,45 (д, J=13,5 Гц, 1H), 4,12 (дд, J=10,5, 2,5 Гц, 1H), 3,84 (с, 2H), 3,73 (д, J=13,5 Гц, 1H), 3,61-3,56 (м, 2H), 2,89-2,85 (м, 1H), 2,78 (к, J=7,5 Гц, 2H), 2,72 (дт, J=12,5, 3,0 Гц, 1H), 2,33 (с, 3H), 2,20 (д, J=11,5 Гц, 1H), 2,01 (дт, J=11,5, 3,0 Гц, 1H), 1,30 (т, J=7,5 Гц, 3H);

¹³C-ЯМР (126 МГц, CDCl₃) δ 163,60, 161,97, 158,30, 154,18, 138,24, 132,11, 129,83, 129,64, 128,77, 123,63, 122,55, 119,90, 110,92, 109,60, 57,62, 56,97, 51,82, 51,37, 49,28, 48,66, 41,59, 21,36, 20,19, 13,10; и

МС (ИЭР) m/z для C₂₆H₂₉N₃O₃S [M+H]⁺: рассчитано 432,2282, найдено 432,2240.

18. Пример получения 16: C208, L19014

Соединение формулы 19 получали таким же способом, как в примере получения 10, за исключением того, что использовали 4-хлорбензилбромид вместо метилиодида, который представляет собой реакционный материал.

Формула 19

8-(4-хлорбензил)-2-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)гексагидро-2H-пиразинo[1,2-a]пиразин-6,9-дион (называемый C208 или L19014).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ 7,59 (д, J=7,0 Гц, 1H), 7,40 (д, J=8,0 Гц, 1H), 7,31 (д, J=8,0 Гц, 2H), 7,25-7,17 (м, 4H), 4,52 (дд, J=23,5, 14,5 Гц, 2H), 4,46 (д, J=13,0 Гц, 1H), 4,12 (дд, J=11,0, 3,0 Гц, 1H), 3,84 (д, J=2,0 Гц, 2H), 3,73 (д, J=13,5 Гц, 1H), 3,61-3,56 (м, 2H), 2,88 (д, J=11,5 Гц, 1H), 2,81-2,70 (м, 3H), 2,10 (т, J=11,0 Гц, 1H), 2,02 (тд, J=11,5, 3,5 Гц, 1H), 1,31 (т, J=8,0 Гц, 3H);

¹³C-ЯМР (126 МГц, CDCl₃) δ 163,78, 161,69, 158,32, 154,18, 134,41, 133,73, 130,09, 129,61, 129,37, 123,65, 122,55, 119,88, 110,94, 109,54, 57,56, 56,89, 51,81, 51,35, 48,96, 48,82, 41,64, 20,19, 13,10; и

МС (ИЭР) m/z для C₂₅H₂₆ClN₃O₃[M+H]⁺: рассчитано 452,1736, найдено 452,1688.

19. Пример получения 17: C209, L19015

Соединение формулы 20 получали таким же способом, как в примере получения 10, за исключением того, что использовали 4-бромбензилбромид вместо метилиодида, который представляет собой реакционный материал.

Формула 20

8-(4-бромбензил)-2-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)гексагидро-2H-пиразинo[1,2-a]пиразин-6,9-дион (называемый C209 или L19015).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ 7,59 (д, J=7,5 Гц, 1H), 7,46 (д, J=8,0 Гц, 2H), 7,40 (д, J=8,0 Гц, 1H), 7,25-7,17 (м, 2H), 7,13 (д, J=8,5 Гц, 2H), 4,55-4,43 (м, 3H), 4,12 (д, J=10,0 Гц, 1H), 3,84 (с, 2H), 3,73 (д, J=13,0 Гц, 1H), 3,61-3,55 (м, 2H), 2,88 (д, J=10,5 Гц, 1H), 2,81-2,69 (м, 3H), 2,10 (т, J=11,0 Гц, 1H), 2,02 (дт, J=11,5, 3,0 Гц 1H), 1,31 (т, J=7,5 Гц, 3H);

¹³C-ЯМР (126 МГц, CDCl₃) δ 163,79, 161,67, 158,32, 154,18, 134,24, 132,33, 130,41, 129,61, 123,65, 122,55, 122,52, 119,88, 110,94, 109,54, 57,55, 56,89, 51,81, 51,35, 49,03, 48,84, 41,64, 20,19, 13,10; и

МС (ИЭР) m/z для C₂₅H₂₆BrN₃O₃[M+H]⁺: рассчитано 496,1230, найдено 496,1192.

20. Пример получения 18: C210, L19016

Соединение формулы 21 получали таким же способом, как в примере получения 10, за исключением того, что использовали 4-фторбензилбромид вместо метилиодида, который представляет собой реакционный материал.

Формула 21

2-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)-8-(4-фторбензил)гексагидро-2H-пиразинo[1,2-a]пиразин-6,9-дион (называемый C210 или L19016).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ 7,59 (д, J=7,5 Гц, 1H), 7,40 (д, J=8,0 Гц, 1H), 7,25-7,17 (м, 4H), 7,02 (т, J=8,5 Гц, 2H), 4,53 (дд, J=32,5, 14,5 Гц, 2H), 4,46 (д, J=13,0 Гц, 1H), 4,12 (дд, J=11,0, 3,0 Гц, 1H), 3,85 (с, 2H), 3,73 (д, J=13,5 Гц, 1H), 3,59 (м, 2H), 2,88 (д, J=11,5 Гц, 1H), 2,81-2,70 (м, 3H), 2,11 (т, J=11,5 Гц, 1H), 2,02 (дт, J=11,5, 3,5 Гц, 1H), 1,30 (т, J=7,5 Гц, 3H);

¹³C-ЯМР (126 МГц, CDCl₃) δ 163,72, 161,75, 158,31, 154,18, 131,07, 131,04, 130,56, 130,50, 129,62, 123,64, 122,55, 119,89, 116,20, 116,03, 110,93, 109,56, 57,58, 56,91, 51,82, 51,36, 48,87, 48,74, 41,62, 20,19, 13,10; и

МС (ИЭР) m/z для C₂₅H₂₆FN₃O₃[M+H]⁺: рассчитано 436,2031, найдено 436,1994.

21. Пример получения 19: C211, L19017

Соединение формулы 22 получали таким же способом, как в примере получения 10, за исключением того, что использовали 4-трифторметилбензилбромид вместо метилиодида, который представляет собой реакционный материал.

Формула 22

2-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)-8-(4-(трифторметил)бензил)гексагидро-2H-пиразинo[1,2-a]пиразин-6,9-дион (называемый C211 или L19017).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ 7,62-7,58 (м, 3H), 7,41 (д, J=7,5 Гц, 1H), 7,37 (д, J=8,0 Гц, 2H), 7,26-7,19 (м, 2H), 4,62 (с, 2H), 4,47 (д, J=13,5 Гц, 1H), 4,15 (дд, J=11,0, 3,0 Гц, 1H), 3,87 (д, J=4,0 Гц, 2H), 3,73 (д, J=13,0 Гц, 1H), 3,62-3,57 (м, 2H), 2,90 (д, J=11,5 Гц, 1H), 2,82-2,71 (м, 3H), 2,12 (т, J=11,0 Гц, 1H), 2,03 (дт, J=11,5, 3,5 Гц, 1H), 1,31 (т, J=7,5 Гц, 3H);

¹³C-ЯМР (126 МГц, CDCl₃) δ 163,93, 161,55, 158,34, 154,18, 139,28, 129,60, 128,92, 126,21, 126,18, 126,15, 126,12, 123,66, 122,56, 119,87, 110,95, 109,52, 57,55, 56,88, 51,81, 51,35, 49,20, 49,03, 41,67, 20,19, 13,08; и

МС (ИЭР) m/z для C₂₆H₂₆F₃N₃O₃[M+H]⁺: рассчитано 486,1999, найдено 486,1958.

22. Пример получения 20: C212, L19018

Соединение формулы 23 получали таким же способом, как в примере получения 10, за исключением того, что использовали 4-цианобензилбромид вместо метилиодида, который представляет собой реакционный материал.

Формула 23

4-((8-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)-1,4-диоксооктагидро-2H-пиразинo[1,2-a]пиразин-2-ил)метил)бензонитрил (называемый C212 или L19018).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ 7,64 (д, J=8,5 Гц, 2H), 7,59 (д, J=7,5 Гц, 1H), 7,40 (д, J=8,0 Гц, 1H), 7,36 (д, J=8,5 Гц, 2H), 7,30 (дт, J=8,0, 1,5 Гц, 1H), 7,19 (дт, J=7,5, 1,5 Гц, 1H), 4,61 (с, 2H), 4,47 (д, J=13,5 Гц, 1H), 4,15 (дд, J=11,0, 3,0 Гц, 1H), 3,88 (д, J=5,5 Гц, 2H), 3,73 (д, J=13,5 Гц, 1H), 3,63-3,56 (м, 2H), 2,90 (д, J=12,0 Гц, 1H), 2,81-2,72 (м, 3H), 2,12 (т, J=11,5 Гц, 1H), 2,04 (дт, J=12,0, 3,5 Гц, 1H), 1,31 (т, J=7,5 Гц, 3H);

¹³C-ЯМР (126 МГц, CDCl₃) δ 164,05, 161,42, 158,33, 154,17, 140,63, 132,98, 129,59, 129,16, 123,66, 122,55, 119,85, 118,57, 112,43, 110,95, 109,48, 57,50, 56,81, 51,80, 51,34, 49,33, 49,20, 41,70, 20,19, 13,09; и

МС (ИЭР) m/z для C₂₆H₂₆N₄O₃[M+H]⁺: рассчитано 443,2078, найдено 443,2043.

23. Пример получения 21: C213, L19019

Соединение формулы 24 получали таким же способом, как в примере получения 10, за исключением того, что использовали 4-нитробензилбромид вместо метилиодида, который представляет собой реакционный материал.

Формула 24

2-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)-8-(4-нитробензил)гексагидро-2H-пиразинo[1,2-a]пиразин-6,9-дион (называемый C213 или L19019).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ 8,20 (д, J=8,5 Гц, 2H), 7,59 (д, J=7,5 Гц, 1H), 7,42 (д, J=8,5 Гц, 2H), 7,40 (д, J=7,5 Гц, 1H), 7,26-7,17 (м, 2H), 4,67 (с, 2H), 4,47 (д, J=13,0 Гц, 1H), 4,17 (дд, J=11,0, 3,0 Гц, 1H), 3,90 (д, J=5,5 Гц, 2H), 3,74 (д, J=13,0 Гц, 1H), 3,63-3,56 (м, 2H), 2,91 (д, J=11,5 Гц, 1H), 2,82-2,73 (м, 3H), 2,13 (т, J=11,0 Гц, 1H), 2,04 (дд, J=11,5, 3,0 Гц, 1H), 1,31 (т, J=7,5 Гц, 3H);

¹³C-ЯМР (126 МГц, CDCl₃) δ 164,10, 161,37, 158,35, 154,18, 148,02, 142,61, 129,59, 129,30, 124,40, 123,67, 122,56, 119,85, 110,96, 109,47, 57,50, 56,81, 51,80, 51,34, 49,26, 49,11, 41,71, 20,19, 13,09; и

МС (ИЭР) m/z для C₂₅H₂₆N₄O₅[M+H]⁺: рассчитано 463,1976, найдено 463,1939.

24. Пример получения 22: C214, L19020

Соединение формулы 25 получали таким же способом, как в примере получения 10, за исключением того, что использовали 4-фенилбензилбромид вместо метилиодида, который представляет собой реакционный материал.

Формула 25

8-([1,1'-бифенил]-4-илметил)-2-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)гексагидро-2H-пиразинo[1,2-a]пиразин-6,9-дион (называемый C214 или L19020).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ 7,61-7,54 (м, 5H), 7,46-7,39 (м, 3H), 7,37-7,31 (м, 3H), 7,24-7,17 (м, 2H), 4,60 (к, J=14,5 Гц, 2H), 4,46 (д, J=13,0 Гц, 1H), 4,14 (, J=11,0 Гц, 1H), 3,90 (с, 2H), 3,73 (д, J=13,5 Гц, 1H), 3,63-3,57 (м, 2H), 2,88 (д, J=12,0 Гц, 1H), 2,81-2,70 (м, 3H), 2,14 (т, J=11,0 Гц, 1H), 2,02 (дт, J=12,0, 3,5 Гц, 1H), 1,31 (т, J=7,5 Гц, 3H);

¹³C-ЯМР (126 МГц, CDCl₃) δ 163,73, 161,91, 158,33, 154,19, 141,46, 140,70, 134,13, 129,65, 129,23, 129,08, 127,93, 127,76, 127,33, 123,65, 122,57, 119,92, 110,94, 109,59, 57,63, 56,97, 51,84, 51,38, 49,29, 48,84, 41,63, 20,21, 13,13; и

МС (ИЭР) m/z для C₃₁H₃₁N₃O₃[M+H]⁺: рассчитано 494,2438, найдено 494,2394.

25. Пример получения 23: C215, L19021

Соединение формулы 26 получали таким же способом, как в примере получения 10, за исключением того, что использовали фенилэтилбромид вместо метилиодида, который представляет собой реакционный материал.

Формула 26

2-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)-8-фенэтилгексагидро-2H-пиразинo[1,2-a]пиразин-6,9-дион (называемый C215 или L19021).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ 7,59 (д, J=7,0 Гц, 1H), 7,40 (д, J=8,0 Гц, 1H), 7,31-7,16 (м, 7H), 4,44 (д, J=13,0 Гц, 1H), 4,02 (дд, J=11,0, 3,5 Гц, 1H), 3,78 (д, J=7,0 Гц, 2H), 3,70 (д, J=13,5 Гц, 1H), 3,65-3,54 (м, 3H), 3,51 (д, J=11,0 Гц, 1H), 2,91-2,85 (м, 3H), 2,78 (к, J=7,5 Гц, 2H), 2,71 (дт, J=12,5, 3,0 Гц, 1H), 2,03-1,95 (м, 2H), 1,30 (т, J=7,5 Гц, 3H);

¹³C-ЯМР (126 МГц, CDCl₃) δ 163,53, 161,89, 158,30, 154,17, 138,14, 129,64, 128,97, 128,94, 127,06, 123,63, 122,55, 119,91, 110,92, 109,59, 57,48, 56,86, 51,82, 51,41, 50,13, 48,14, 41,60, 33,08, 20,19, 13,12; и

МС (ИЭР) m/z для C₂₆H₂₉N₃O₃[M+H]⁺: рассчитано 432,2282, найдено 432,2239.

26. Пример получения 24: C216, L19022

Соединение формулы 27 получали таким же способом, как в примере получения 10, за исключением того, что использовали 4-фторфенэтилбромид вместо метилиодида, который представляет собой реакционный материал.

Формула 27

2-((2-этилбензофуран-3-ил)метил)-8-(4-фторфенэтил)гексагидро-2H-пиразинo[1,2-a]пиразин-6,9-дион (называемый C216 или L19022).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ 7,58 (д, J=7,0 Гц, 1H), 7,39 (д, J=8,0 Гц, 1H), 7,23-7,17 (м, 2H), 7,17-7,12 (м, 2H), 6,97 (т, J=8,5 Гц, 2H), 4,44 (д, J=13,0 Гц, 1H), 4,01 (дд, J=11,0, 3,0 Гц, 1H), 3,82 (д, J=6,0, 2H), 3,69 (д, J=13,5 Гц, 1H), 3,63-3,47 (м, 4H), 2,88-2,83 (м, 3H), 2,79-2,70 (м, 3H), 2,01-1,95 (м, 2H), 1,29 (т, J=7,8 Гц, 3H);

¹³C-ЯМР (126 МГц, CDCl₃) δ 163,57, 161,78, 158,32, 154,16, 133,74, 133,72, 130,41, 130,34, 129,62, 123,63, 122,54, 119,89, 115,88, 115,71, 110,92, 109,55, 57,45, 56,82, 51,80, 51,41, 50,00, 47,95, 41,61, 32,20, 20,18, 13,10; и

МС (ИЭР) m/z для C₂₆H₂₈FN₃O₃[M+H]⁺: рассчитано 450,2188, найдено 450,2155.

27. Пример получения 25: C302, L19023

Соединение формулы 28 получали таким же способом, как в примере получения 1-1, за исключением того, что использовали метилиодид вместо этилиодида, который представляет собой реакционный материал на стадии 1 (схема реакции 1).

Формула 28

2-((2-метилбензофуран-3-ил)метил)гексагидро-2H-пиразинo[1,2-a]пиразин-6,9-дион (называемый C302 или L19023).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ 7,57 (д, J=7,0 Гц, 1H), 7,39 (д, J=7,8 Гц, 1H), 7,24-7,17 (м, 2H), 4,50 (д, J=13,5 Гц, 1H), 4,06 (д, J=11,0 Гц, 1H), 4,00 (с, 2H), 3,64 (дд, J=52,0, 13,5 Гц, 2H), 3,46 (д, J=11,5 Гц, 1H), 2,90 (д, J=11,5 Гц, 1H), 2,75 (тд, J=12,5, 3,0 Гц, 1H), 2,42 (с, 3H), 2,12 (т, J=11,5 Гц, 1H), 2,06-2,02 (тд, J=11,5, 3,0 Гц, 1H);

¹³C-ЯМР (126 МГц, CDCl₃) δ 166,24, 161,97, 154,13, 153,42, 129,60, 123,64, 122,61, 119,68, 110,83, 110,45, 57,17, 56,34, 51,95, 51,60, 44,76, 41,75, 12,48; и

МС (ИЭР) m/z для C₁₇H₁₉N₃O₃[M+H]⁺: рассчитано 314,1499, найдено 314,1508.

28. Пример получения 26: C303, L19024

Соединение формулы 29 получали таким же способом, как в примере получения 1-1, за исключением того, что приобретали и использовали 2-бутилбензофуран вместо 2-этилбензофурана, полученного на стадии 1 (схема реакции 1).

Формула 29

2-((2-бутилбензофуран-3-ил)метил)гексагидро-2H-пиразинo[1,2-a]пиразин-6,9-дион (называемый C303 или L19024).

¹H NMR (500 МГц, CDCl₃) δ 7,59 (д, J=7,5 Гц, 1H), 7,39 (д, J=8,0 Гц, 1H), 7,24-7,16 (м, 2H), 4,50 (д, J=13,0 Гц, 1H), 4,07 (д, J=11,0 Гц, 1H), 4,00 (с, 2H), 3,65 (дд, J=66,0, 13,5 Гц, 2H), 3,47 (д, J=11,5 Гц, 1H), 2,89 (д, J=11,5 Гц, 1H), 2,77-2,71 (м, 3H), 2,12 (т, J=11,0 Гц, 1H), 2,03 (тд, J=11,5, 3,0 Гц, 1H), 1,74-1,67 (м, 2H), 1,42-1,33 (м, 2H), 0,94 (т, J=7,4 Гц, 3H);

¹³C-ЯМР (126 МГц, CDCl₃) δ 166,35, 161,98, 157,33, 154,18, 129,57, 123,61, 122,52, 119,88, 110,92, 110,24, 57,20, 56,51, 51,96, 51,56, 44,76, 41,79, 30,60, 26,44, 22,63, 14,10; и

МС (ИЭР) m/z для C₂₀H₂₅N₃O₃[M+H]⁺: рассчитано 356,1969, найдено 356,1979.

29. Пример получения 27: C304, L19025

Соединение формулы 30 получали таким же способом, как в примере получения 1-1, за исключением того, что использовали гексилбромид вместо этилиодида, который представляет собой реакционный материал на стадии 1 (схема реакции 1).

Формула 30

2-((2-гексилбензофуран-3-ил)метил)гексагидро-2H-пиразинo[1,2-a]пиразин-6,9-дион (называемый C304 или L19025).

¹H NMR (500 МГц, CDCl₃) δ 7,59 (д, J=7,0 Гц, 1H), 7,39 (д, J=8,0 Гц, 1H), 7,24-7,16 (м, 2H), 4,65 (с, 1H), 4,47 (д, J=13,5 Гц, 1H), 4,04 (д, J=11,0 Гц, 1H), 3,96 (с, 2H), 3,64 (дд, J=70,0, 13,0 Гц, 2H), 3,46 (д, J=11,5 Гц, 1H), 2,88 (д, J=11,5 Гц, 1H), 2,76-2,72 (м, 3H), 2,10 (д, J=11,0 Гц, 1H), 2,01 (тд, J=11,5, 3,0 Гц, 1H), 1,75-1,66 (м, 2H), 1,37-1,28 (м, 5H), 0,88 (т, J=7,0 Гц, 3H);

¹³C-ЯМР (126 МГц, CDCl₃) δ 166,27, 162,03, 157,39, 154,18, 129,59, 123,62, 122,53, 119,88, 110,93, 110,20, 57,18, 56,51, 51,94, 51,52, 44,72, 41,78, 31,79, 29,23, 28,48, 26,75, 22,79, 14,32; и

МС (ИЭР) m/z для C₂₂H₂₉N₃O₃[M+H]⁺: рассчитано 384,2282, найдено 384,2292.

30. Пример получения 28: C306, L19026

Соединение формулы 31 получали таким же способом, как в примере получения 1-1, за исключением того, что использовали бензилбромид вместо этилиодида, который представляет собой реакционный материал на стадии 1 (схема реакции 1).

Формула 31

2-((2-бензилбензофуран-3-ил)метил)гексагидро-2H-пиразинo[1,2-a]пиразин-6,9-дион (называемый C306 или L19026).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ 7,64 (д, J=7,0 Гц, 1H), 7,41 (д, J=8,0 Гц, 2H), 7,31-7,19 (м, 6H), 4,47 (д, J=13,0 Гц, 1H), 4,14 (с, 2H), 4,05 (д, J=11,0 Гц, 1H), 4,01 (с, 2H), 3,69 (дд, J=73,0, 13,5 Гц, 2H), 3,49 (д, J=11,0 Гц, 1H), 2,87 (д, J=11,5 Гц, 1H), 2,70 (дт, J=12,5, 3,0 Гц, 1H), 2,13 (т, J=11,5 Гц, 1H), 2,00 (дт, J=11,5, 3,0 Гц, 1H);

¹³C-ЯМР (126 МГц, CDCl₃) δ 166,27, 162,01, 154,96, 154,40, 137,71, 129,45, 128,86, 128,79, 126,93, 124,06, 122,73, 120,07, 111,55, 111,23, 57,16, 56,58, 51,92, 51,58, 44,77, 41,73, 33,09; и

МС (ИЭР) m/z для C₂₃H₂₃N₃O₃[M+H]⁺: рассчитано 390,1812, найдено 390,1820.

31. Пример получения 29: C308, L19027

Соединение формулы 32 получали таким же способом, как в примере получения 1-1, за исключением того, что использовали 4-хлорбензилбромид вместо этилиодида, который представляет собой реакционный материал на стадии 1 (схема реакции 1).

Формула 32

2-((2-(4-хлорбензил)бензофуран-3-ил)метил)гексагидро-2H-пиразинo[1,2-a]пиразин-6,9-дион (называемый C308 или L19027).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ 7,62 (д, J=7,5 Гц, 1H), 7,40 (д, J=8,0 Гц, 1H), 7,26-7,15 (м, 6H), 4,48 (д, J=13,0 Гц, 1H), 4,09 (с, 2H), 4,05-4,00 (м, 3H), 3,69 (дд, J=58,0, 13,5 Гц, 2H), 3,46 (д, J=11,0 Гц, 1H), 2,87 (д, J=11,5 Гц, 1H), 2,70 (дт, J=12,5, 3,0 Гц, 1H), 2,09 (т, J=11,0 Гц, 1H), 2,02 (дт, J=11,5, 3,0 Гц, 1H);

¹³C-ЯМР (126 МГц, CDCl₃) δ 166,01, 161,93, 154,40, 154,29, 136,14, 132,75, 130,12, 129,30, 128,96, 124,23, 122,83, 120,07, 111,75, 111,24, 57,12, 56,48, 51,88, 51,69, 44,80, 41,73, 32,43; и

МС (ИЭР) m/z для C₂₃H₂₂ClN₃O₃[M+H]⁺: рассчитано 424,1423, найдено 424,1423.

32. Пример получения 30: C310, L19028

Соединение формулы 33 получали таким же способом, как в примере получения 1-1, за исключением того, что использовали 4-фторбензилбромид вместо этилиодида, который представляет собой реакционный материал на стадии 1 (схема реакции 1).

Формула 33

2-((2-(4-фторбензил)бензофуран-3-ил)метил)гексагидро-2H-пиразинo[1,2-a]пиразин-6,9-дион (называемый C310 или L19028).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ 7,65-7,61 (м, 2H), 7,38 (д, J=7,5 Гц, 1H), 7,25-7,18 (м, 3H), 6,97 (т, J=8,5 Гц, 2H), 4,47 (д, J=13,0 Гц, 1H), 4,10 (с, 2H), 4,02 (д, J=11,0 Гц, 1H) 3,97 (с, 2H), 3,69 (дд, J=50,5, 13,5 Гц, 2H), 3,47 (д, J=10,5 Гц, 1H), 2,88 (д, J=11,0 Гц, 1H), 2,74-2,67 (м, 1H), 2,10 (т, J=11,5 Гц, 1H), 2,032,06-2,00 (м, 1H);

¹³C-ЯМР (126 МГц, CDCl₃) δ 165,41, 162,72, 162,33, 160,77, 154,50, 154,25, 133,36, 133,34, 130,22, 130,15, 129,28, 124,01, 122,68, 120,06, 115,59, 115,43, 111,60, 111,03, 57,08, 56,42, 51,79, 51,68, 44,65, 41,55, 32,13; и

МС (ИЭР) m/z для C₂₃H₂₂FN₃O₃[M+H]⁺: рассчитано4 08,1718, найдено 408,1723.

33. Пример получения 31: C315, L19030

Соединение формулы 34 получали таким же способом, как в примере получения 1-1, за исключением того, что использовали фенилэтилбромид вместо этилиодида, который представляет собой реакционный материал на стадии 1 (схема реакции 1).

Формула 34

2-((2-фенэтилбензофуран-3-ил)метил)гексагидро-2H-пиразинo[1,2-a]пиразин-6,9-дион (называемый C315 или L19030).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ 7,59 (д, J=7,5 Гц, 1H), 7,46 (д, J=8,0 Гц, 1H), 7,28-7,24 (м, 3H), 7,23-7,18 (м, 2H), 7,15 (д, J=7,0 Гц, 2H), 4,41 (д, J=11,5 Гц, 1H), 4,04 (д, J=11,0 Гц, 1H), 4,00 (с, 2H), 3,45 (дд, J=84,0, 13,5 Гц, 2H), 3,42 (д, J=11,0 Гц, 1H), 3,03-3,09 (м, 4H), 2,69-2,63 (м, 2H), 2,04 (т, J=11,0 Гц, 1H), 1,87-1,80 (м, 1H);

¹³C-ЯМР (126 МГц, CDCl₃) δ 166,24, 161,90, 155,71, 154,27, 141,08, 129,43, 128,72, 128,70, 126,49, 123,84, 122,62, 120,06, 111,15, 110,98, 57,17, 56,49, 51,75, 51,27, 44,77, 41,74, 34,57, 29,10; и

МС (ИЭР) m/z для C₂₄H₂₅N₃O₃[M+H]⁺: рассчитано 404,1969, найдено 404,1972.

Структуры соединений формул 2-34, синтезированных в вышеприведенных примерах получения, представлены в Таблице 2, ниже.

Таблица 2 Формула № Химическая структура Формула № Химическая структура 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 - -

Экспериментальные примеры

1. Эффект повышения противораковой терапевтической активности у соединения примера получения 1-1

1-1. Эффект повышения активности паклитаксела

1-1-1. Эффект повышения активности против раковых клеток

После того, как подобные раковым стволовым клеткам клетки рака щитовидной железы, полученные от пациентов с рецидивом и метастазами после введения паклитаксела (ATC), были обработаны только соединением примера получения 1-1 (150 нМ); только паклитакселом (12 нМ) или сочетанием паклитаксела (5 нМ) и соединения примера получения 1-1 (70 нМ), было подтверждено изменение числа клеток с течением времени. Кроме того, изменение жизнеспособности клеток в зависимости от используемой для обработки концентрации паклитаксела, соединения примера получения 1-1 или сочетания паклитаксела или соединения примера получения 1-1 показано на ФИГ. 1. Кроме того, определяли изменение жизнеспособности клеток в зависимости от используемой для обработки концентрации паклитаксела, соединения примера получения 1-1 и их сочетания, и результат представлен на ФИГ. 2.

Как показано на ФИГ. 1 и 2, при обработке устойчивых к противораковому средству клеток рака щитовидной железы только паклитакселом, в сравнении с отрицательным контролем, отсутствовало изменение числа раковых клеток и жизнеспособности раковых клеток, но когда клетки были обработаны соединением примера получения 1-1 и паклитакселом, было подтверждено, что число и жизнеспособность подобных стволовым клеткам клеток рака щитовидной железы были значительно снижены.

1-1-2. Анализ изменения размера опухолей у мышей с ксенотрансплантатом раковых клеток

После культивирования in vitro подобных раковым стволовым клеткам клеток рака щитовидной железы, полученных от пациентов с рецидивом и метастазами после введения паклитаксела, культивированные клетки вводили подкожной инъекцией в верхнюю часть левого бока «голым» самкам мышей BALB/c в количестве 2,0 × 10⁷ клеток/мышь. Через 7 дней мышей разделяли на группы по 10 в каждой, и животным в каждой группе перорально вводили только соединение примера получения 1-1 (60 мг/кг); вводили внутрибрюшинной инъекцией только паклитаксел (25 мг/кг); или перорально вводили соединение примера получения 1-1 (27 мг/кг), а затем вводили внутрибрюшинной инъекцией паклитаксел (11 мг/кг). Мышей анестезировали для определения изменения в объеме опухолей при помощи штангенциркуля ежедневно в течение 60 дней, и результат представлен на ФИГ. 3. Объем опухоли оценивали с использованием следующего уравнения 1.

Уравнение 1

Объем опухоли=L × S²/2

(где L является самым длинным диаметром, и S является самым коротким диаметром).

Как показано на ФИГ. 3, когда модельным мышам с ксенотрансплантатом устойчивых к противораковому средству клеток рака щитовидной железы вводили только паклитаксел, в сравнении с отрицательным контролем, отсутствовало изменение объема опухолей. Однако, когда модельным мышам вводили соединение примера получения 1-1 и паклитаксел, можно было убедиться, что объем опухолей значительно уменьшался.

1-2. Эффект повышения активности иринотекана

1-2-1. Эффект повышения активности против раковых клеток

После того, как подобные раковым стволовым клеткам клетки рака желудка, полученные от пациентов с рецидивом и метастазами после введения иринотекана, были обработаны только соединением примера получения 1-1 (170 нМ); только иринотеканом (8,9 мкМ) или сочетанием иринотекана (4,5 мкМ) и соединения примера получения 1-1 (75 нМ), определяли изменение числа клеток в зависимости от времени обработки, и результат представлен на ФИГ. 4.

Как показано на ФИГ. 4, когда устойчивые к противораковому средству клетки рака желудка обрабатывали только иринотеканом, в сравнении с отрицательным контролем, отсутствовало изменение числа раковых клеток. Однако, когда раковые клетки обрабатывали соединением примера получения 1-1 и иринотеканом, можно было убедиться, что число раковых клеток заметно уменьшалось.

1-2-2. Анализ изменения размера опухолей у мышей с ксенотрансплантатом раковых клеток

После культивирования in vitro подобных раковым стволовым клеткам клеток рака желудка, полученных от пациентов с рецидивом и метастазами после введения иринотекана, культивированные клетки вводили подкожной инъекцией в верхнюю часть левого бока «голым» самкам мышей BALB/c в количестве 2,0 × 10⁷ клеток/мышь. Через 7 дней мышей разделяли на группы по 10 в каждой, и животным в каждой группе перорально вводили только соединение примера получения 1-1 (70 мг/кг); перорально вводили только иринотекан (75 мг/кг) или перорально вводили соединение примера получения 1-1 (32 мг/кг) и иринотекан (55 мг/кг). Мышей анестезировали для определения изменения в объеме опухолей при помощи штангенциркуля ежедневно в течение 40 дней, и результат представлен на ФИГ. 5. Объем опухоли рассчитывали с использованием вышеприведенного уравнения 1. Кроме того, через 40 дней измеряли массу опухолей, и результат представлен на ФИГ. 6, а также в течение 41 дня ежедневно измеряли массу тела мышей, и результат представлен на ФИГ. 7.

Как показано на ФИГ. 5 и 6, когда модельным мышам с ксенотрансплантатом устойчивых к противораковому средству клеток рака желудка вводили только иринотекан, в сравнении с отрицательным контролем, отсутствовало изменение объема или массы опухолей. Однако, когда модельным мышам вводили иринотекан и соединение примера получения 1-1, можно было убедиться, что объем и масса опухолей значительно уменьшались.

Кроме того, как показано на ФИГ. 7, когда модельным мышам вводили соединение примера получения 1-1 отдельно или в сочетании с иринотеканом, в сравнении с отрицательным контролем, можно было видеть, что отсутствовало изменение массы тела у мышей, это свидетельствовало о том, что отсутствовала проблема токсичности.

1-3. Эффект повышения эффективности лечения облучением

1-3-1. Эффект повышения эффективности против раковых клеток

После того, как подобные раковым стволовым клеткам клетки колоректального рака, полученные от пациентов с рецидивом и метастазами после радиотерапии, обрабатывали только соединением примера получения 1-1 (150 нМ); рентгеновскими лучами Faxitron™ (Faxitron Biopticс, AZ, USA) при интенсивности 5 Гр (РТ); или соединением примера получения 1-1 (75 нМ) и рентгеновскими лучами при интенсивности 5 Гр, определяли изменение числа раковых клеток в зависимости от времени обработки, и результат представлен на ФИГ. 8.

Как показано на ФИГ. 8, при обработке устойчивых к облучению клеток колоректального рака только методом радиотерапии, в сравнении с отрицательным контролем, отсутствовало изменение числа раковых клеток. Однако, когда раковые клетки обрабатывали методом радиотерапии и соединением примера получения 1-1, можно было убедиться, что число раковых клеток заметно уменьшалось.

1-3-2. Анализ изменения объема опухолей у мышей

После культивирования in vitro подобных раковым стволовым клеткам клеток колоректального рака, полученных от пациентов с рецидивом и метастазами после радиотерапии, культивированные клетки вводили подкожной инъекцией в верхнюю часть левого бока «голым» самкам мышей BALB/c в количестве 2,0 × 10⁷ клеток/мышь. Через 7 дней мышей разделяли на группы по 10 в каждой, и животным в каждой группе перорально вводили соединение примера получения 1-1 (60 мг/кг); проводили облучение рентгеновскими лучами Faxitron™ (Faxitro Biopticс, AZ, USA) при интенсивности 5 Гр или перорально вводили соединение примера получения 1-1 (27 мг/кг) и проводили облучение рентгеновскими лучами при интенсивности 5 Гр. Мышей анестезировали для определения изменения в объеме опухолей при помощи штангенциркуля ежедневно в течение 40 дней, и результат представлен на ФИГ. 9. Объем опухоли рассчитывали с использованием вышеприведенного уравнения 1. Кроме того, через 40 дней определяли массу опухолей, и результат представлен на ФИГ. 10, а также в течение 41 дня ежедневно измеряли массу тела мышей, и результат представлен на ФИГ. 11.

Как показано на ФИГ. 9 и 10, когда модельных мышей с ксенотрансплантатом устойчивых к облучению клеток колоректального рака лечили только радиотерапией, в сравнении с отрицательным контролем, отсутствовали изменения в объеме или массе опухолей, при этом, если модельных мышей лечили радиотерапией и соединением примера получения 1-1, можно было убедиться, что объем и масса опухолей значительно уменьшались. Кроме того, как показано на ФИГ. 11, когда модельных мышей лечили соединением примера получения 1-1 отдельно или в сочетании с радиотерапией, в сравнении с отрицательным контролем, можно было видеть, что отсутствовало изменение массы тела у мышей, это свидетельствовало о том, что отсутствовала проблема токсичности.

2. Эффекты повышения противораковой терапевтической активности соединений примеров получения

2-1. Экспериментальный способ

Для подтверждения эффектов повышения противораковой терапевтической активности у соединений примеров получения использовали соединения или соли, полученные в примерах получения 1-1-31 (далее в тексте настоящего документа, соединения примеров получения), и проводили клеточные эксперименты с клетками линии SKOV3 эпителиального рака яичника и полученными из них клетками SKOV3-TR в качестве линии клеток, обладающих устойчивостью к противораковому средству паклитакселу.

Клетки двух линий, растущие в 12-луночных планшетах, обрабатывали только 2 мкМ соединением каждого из примеров получения; только паклитакселом (0,2 мкМ для SKOV3, 5 мкМ для SKOV3-TR) или сочетанием паклитаксела и соединения каждого из примеров получения для определения числа живых клеток через 72 часа. При совместной обработке паклитакселом и соединением каждого из примеров получения, после первоначальной 4-часовой предварительной обработки 2 мкМ каждым из соединений примеров получения проводили обработку паклитакселом в концентрации 5 мкМ для линии клеток SKOV3-TR и 0,2 мкМ для линии клеток SKOV3.

Для морфологического анализа клеток через 24, 48 и 72 часа после обработки паклитакселом получали изображения клеток «без обработки» (необработанный образец), обработанных «ДМСО» (растворитель паклитаксела), «этанолом» (растворитель для соединений примеров получения), «паклитакселом», сочетаниями «паклитаксел+этанол» и «паклитаксел+соединение примера получения 1-2 (L19001)». Кроме того, для анализа жизнеспособности клеток через 72 часа после обработки только паклитакселом или соединением каждого из примеров получения, или после совместной обработки паклитакселом и соединением каждого из примеров получения, определяли количество живых клеток при помощи анализа ImageJ.

2-2. Анализ клеточной морфологии

При морфологическом анализе клеток в случае групп, обработанных только ДМСО и этанолом, соответственно, в сравнении с необработанной группой (без обработки), поскольку отсутствовали конкретные различия, можно было сделать вывод, что количество растворителя, используемого в данном эксперименте, не влияло на клетки. Кроме того, одна обработка каждым из соединений примеров получения не приводила к конкретным морфологическим изменениям в случае клеток SKOV3-TR и SKOV3. На ФИГ. 12 представлены изображения, полученные через 24, 48 и 72 часа в вариантах без обработки или обработки этанолом и соединением примера получения 1-2 (L19001, 2 мкМ).

Кроме того, чтобы установить, способны ли соединения примеров получения повышать противораковую эффективность паклитаксела, за 4 часа до обработки паклитакселом проводили предварительную обработку соединениями примеров получения, а затем оценивали эффект паклитаксела на гибель раковых клеток. При обработке паклитакселом было подтверждено уменьшение количества живых клеток, вызванное индукцией клеточной гибели, и ингибирование роста клеток в случае SKOV3-TR и SKOV3.

В частности, в случае линии клеток SKOV3-TR резистентного рака эти явления становятся более выраженными при обработке соединениями примеров получения без исключения, в то время как в случае линии клеток SKOV3 обычного рака синергический эффект паклитаксела на гибель раковых клеток за счет обработки соединениями примеров получения не был четко продемонстрирован, как в случае SKOV3-TR. На ФИГ. 13 и 14 представлены изображения, полученные через 72 часа после того, как два вида линий клеток были обработаны только паклитакселом или сочетанием паклитаксел+соединение примера получения 1-2 (L19001).

2-3. Анализ жизнеспособности клеток

Жизнеспособность клеток для двух видов линий клеток рака анализировали путем измерения количества живых клеток с использованием программы ImageJ.

Как показано на ФИГ. 15-18, в случае групп, обработанных только ДМСО и этанолом, соответственно, в сравнении с необработанной группой (без обработки), поскольку отсутствовали конкретные различия в жизнеспособности клеток, можно было сделать вывод, что количество растворителя, используемого в данном эксперименте, не влияло на жизнеспособность клеток.

Чтобы установить, влияет ли соединение примера получения на жизнеспособность клеток, через 72 часа после обработки линий клеток SKOV3-TR и SKOV3 2 мкМ каждым из соединений примеров получения определяли количество клеток. В результате, когда линии клеток были обработаны только каждым из соединений примеров получения, отсутствовал значительный эффект на жизнеспособность клеток в случае линий клеток SKOV3-TR и SKOV3. На ФИГ. 15 и 16 показаны количества клеток через 72 часа после того, как линии клеток SKOV3-TR и SKOV3 были оставлены без обработки, или были обработаны этанолом и каждым из соединений примеров получения.

Кроме того, чтобы установить, способны ли соединения примеров получения повышать противораковую эффективность паклитаксела, за четыре часа до обработки паклитакселом проводили предварительную обработку 2 мкМ каждым из соединений примеров получения, а затем оценивали эффект паклитаксела на гибель раковых клеток. В результате, в сравнении с обработкой одним паклитакселом, в случае обработки паклитакселом после предварительной обработки соединениями примеров получения было подтверждено уменьшение количества клеток в случае линий клеток SKOV3-TR и SKOV3 в результате индукции клеточной гибели и ингибирования роста клеток. В частности, в сравнении с линией клеток SKOV3 обычного рака, эти явления становятся более выраженными при обработке соединениями примеров получения без исключения. На ФИГ. 17 и 18 показано количество клеток, определенное через 72 часа после того, как линии клеток SKOV3-TR и SKOV3 были оставлены без обработки, или были обработаны ДМСО, этанолом и только паклитакселом, а также были предварительно обработаны каждым из соединений примеров получения, а затем обработаны паклитакселом.

Изобретение относится к соединению, представленному формулой 1, или к его фармацевтически приемлемой соли, где n представляет собой целое число 0; R₁ представляет собой C1-C10 алкил или С6 арил(C1-C4)алкил; L₁ представляет собой C1-C6 алкилен; R₂ представляет собой водород, C1-C10 алкил или C6 арил(C1-C4)алкил, и R₄ представляет собой водород, C1-C4 алкил, C6 циклоалкил или C6-C10 арил(C1-C4)алкил, или R₂ и R₄ связаны с образованием 5-членного кольца; и каждый из алкила R₄, арилалкила R₁ и R₂ независимо является незамещенным или замещенным заместителем, таким как C1-C6 алкильная группа, галогеновая группа, фенильная группа, галоген C1-C6 алкильная группа, нитрогруппа, цианогруппа, C1-C6 алкилтиогруппа или C6 арил(C1-C6)алкилтиогруппа, R₂ и R₄ не являются одновременно водородом. Изобретение также относится к фармацевтической композиции для повышения противораковой активности противоракового средства или облучения на основе соединения формулы 1. Технический результат – получено новое соединение и фармацевтическая композиция на его основе, которые могут найти применение в медицине для повышения противораковой активности противоракового средства или облучения, что приводит к эффективному лечению рака. 2 н. и 7 з.п. ф-лы, 18 ил., 2 табл., 31 пр.

1. Соединение, представленное формулой 1

или его фармацевтически приемлемая соль,

где n представляет собой целое число 0;

R₁ представляет собой C1-C10 алкил или С6 арил(C1-C4)алкил;

L₁ представляет собой C1-C6 алкилен;

R₂ представляет собой водород, C1-C10 алкил или C6 арил(C1-C4)алкил, и

R₄ представляет собой водород, C1-C4 алкил, C6 циклоалкил или C6-C10 арил(C1-C4)алкил, или

R₂ и R₄ связаны с образованием 5-членного кольца; и

каждый из алкила R₄, арилалкила R₁ и R₂ независимо является незамещенным или замещенным заместителем, таким как C1-C6 алкильная группа, галогеновая группа, фенильная группа, галоген C1-C6 алкильная группа, нитрогруппа, цианогруппа, C1-C6 алкилтиогруппа или C6 арил(C1-C6)алкилтиогруппа,

R₂ и R₄ не являются одновременно водородом.

2. Соединение по п. 1, где

R₁ представляет собой C1-C6 алкил, бензил, фторбензил, хлорбензил, фенилметил или фенилэтил;

L₁ представляет собой C1-C6 алкилен;

R₂ представляет собой водород, C1-C6 алкил, бензил, метилбензил, хлорбензил, бромбензил, фторбензил, трифторметилбензил, цианобензил, нитробензил или фенилбензил,

R₄ представляет собой водород, метил, циклогексил, метилтиоэтил, бензил, нафтилметил или бензилтиометил, или R₂ и R₄ связаны с образованием 5-членного кольца.

3. Соединение по п. 1,

где соединение выбрано из группы, состоящей из:

Формула № Химическая структура Формула № Химическая структура 5 8 9 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27

4. Фармацевтическая композиция для повышения противораковой активности, содержащая эффективное количество соединения, представленного формулой 1

или его фармацевтически приемлемой соли,

где n представляет собой целое число 0;

R₁ представляет собой C1-C10 алкил или С6 арил(C1-C4)алкил;

L₁ представляет собой C1-C6 алкилен;

R₂ представляет собой водород, C1-C10 алкил или C6 арил(C1-C4)алкил, и

R₄ представляет собой водород, C1-C4 алкил, C6 циклоалкил или C6-C10 арил(C1-C4)алкил, или

R₂ и R₄ связаны, с образованием 5-членного кольца; и

каждый из алкила R₄, арилалкила R₁ и R₂, независимо является незамещенным или замещенным заместителем, таким как C1-C6 алкильная группа, галогеновая группа, фенильная группа, галоген C1-C6 алкильная группа, нитрогруппа, цианогруппа, C1-C6 алкилтиогруппа или C6 арил(C1-C6)алкилтиогруппа,

R₂ и R₄ одновременно не являются водородом,

при этом повышение противораковой активности представляет собой повышение противораковой активности противоракового агента или облучения, и

противораковое средство представляет собой по меньшей мере одно средство, выбранное из группы, состоящей из паклитаксела и иринотекана.

5. Фармацевтическая композиция по п. 4,

где R₁ представляет собой C1-C6 алкил, бензил, фторбензил, хлорбензил, фенилметил или фенилэтил;

L₁ представляет собой C1-С6 алкилен;

R₂ представляет собой водород, C1-C6 алкил, бензил, метилбензил, хлорбензил, бромбензил, фторбензил, трифторметилбензил, цианобензил, нитробензил или фенилбензил;

R₄ представляет собой водород, метил, циклогексил, метилтиоэтил, бензил, нафтилметил или бензилтиометил, или R₂ и R₄ связаны, с образованием 5-членного кольца.

6. Фармацевтическая композиция по п. 4,

где соединение выбрано из группы, состоящей из:

Формула № Химическая структура Формула № Химическая структура 5 8 9 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27

7. Фармацевтическая композиция по п. 4, предназначенная для повышения противораковой активности в отношении резистентного рака.

8. Фармацевтическая композиция по п. 7, где резистентный рак представляет собой по меньшей мере один рак, выбранный из группы, состоящей из рака щитовидной железы, рака желудка, колоректального рака, рака яичника, рака молочной железы, рака легкого, саркомы Капоши, рака шейки матки, рака поджелудочной железы, рака головы и шеи, рака прямой кишки, рака толстого кишечника, рака пищевода и рака предстательной железы.

9. Фармацевтическая композиция по п. 4, где соединение, представленное формулой 1, или его фармацевтически приемлемая соль и противораковое средство содержатся в соотношении молярных концентраций от 1:0,001 до 1:1000.