ОДНОДОМЕННЫЕ АНТИТЕЛА, НАПРАВЛЕННЫЕ ПРОТИВ ФАКТОРА НЕКРОЗА ОПУХОЛЕЙ АЛЬФА, И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ Российский патент 2012 года по МПК C07K16/28 C07K16/46 C12N15/13 A61K39/395 A61P37/00 A61P43/00 

Текст описания приведен в факсимильном виде.

Изобретение относится к иммунологии и биотехнологии. Предложены варианты полипептида против фактора некроза опухолей альфа, в котором число однодоменных антител на основе тяжелых цепей, равно двум. Описана кодирующая нуклеиновая кислота. Раскрыты варианты композиций, набор на основе полипептида, а также варианты его применений. Описан способ получения полипептида с использованием нуклеиновой кислоты. Использование изобретения обеспечивает значительное увеличение цитотоксичности IC₅₀ (порядка 10^-9), что может найти дальнейшее применение в терапии расстройств, опосредованных TNFα. 16 н. и 36 з.п. ф-лы, 18 ил., 11 табл., 9 пр.

1. Полипептид, способный связывать TNF-альфа, содержащий, по меньшей мере, одно однодоменное антитело против TNF-альфа, выбранное из:
(a) однодоменного антитела против TNF-альфа, содержащего последовательность, представленную любой из SEQ ID NO: 1-5 и 14,
(b) однодоменного антитела против TNF-альфа, содержащего последовательность, которая более чем на 85% идентична любой из последовательностей, представленных SEQ ID NO: 1-5 и 14, и
в котором число однодоменных антител против TNF-альфа равно, по меньшей мере, двум.

2. Полипептид по п.1, дополнительно содержащий, по меньшей мере, одно однодоменное антитело, направленное против сывороточного белка.

3. Полипептид по п.2, где указанный сывороточный белок представляет собой любой белок из числа сывороточного альбумина, сывороточных иммуноглобулинов, тироксинсвязывающего белка, транферрина или фибриногена.

4. Полипептид по п.2, в котором, по меньшей мере, одно однодоменное антитело против сывороточного белка содержит последовательность, любую из SEQ ID NO: 26-29 и 85-97.

5. Полипептид по п.1, содержащий, по меньшей мере, одно однодоменное антитело против TNF-альфа, которое имеет IC50, равное 100 нМ или более низкое при колориметрическом способе анализа с использованием МТТ.

6. Полипептид по п.1, дополнительно содержащий, по меньшей мере, одно однодоменное антитело, выбранное из группы, состоящей из однодоменного антитела против IFN-гамма, однодоменного антитела против рецептора TNF-альфа и однодоменного антитела против рецептора IFN-гамма.

7. Полипептид по п.1, содержащий, по меньшей мере, одно однодоменное антитело против TNF-альфа, включающее последовательность, которая более чем на 85% идентична SEQ ID NO: 1.

8. Полипептид по п.1, где, по меньшей мере, одно однодоменное антитело представляет собой гуманизированное VHH Camelidae.

9. Полипептид по п.8, в котором, по меньшей мере, одно гуманизированное VHH Camelidae содержит последовательность, любую из SEQ ID NO: 17-19 и 21-24.

10. Полипептид по п.6, где, по меньшей мере, одно однодоменное антитело против IFN-гамма содержит последовательность, любую из SEQ ID NO: 44-72.

11. Полипептид по п.1, где, по меньшей мере, одно однодоменное антитело представляет собой VHH Camelidae.

12. Полипептид по любому из пп.1-11, пригодный для лечения и/или предупреждения, и/или облегчения расстройств, связанных с воспалительными процессами.

13. Полипептид по п.12, где указанные расстройства представляют собой любое расстройство из числа воспаления, ревматоидного артрита, болезни Крона, неспецифического язвенного колита, синдрома воспаленной толстой кишки, рассеянного склероза, болезни Аддисона, аутоиммунного гепатита, аутоиммунного паротита, диабета типа I, эпидидимита, гломерулонефрита, болезни Грейвса, синдрома Гийена-Барре, болезни Хасимото, гемолитической анемии, системной красной волчанки, мужского бесплодия, астенического бульбарного паралича, пузырчатки, псориаза, ревматической лихорадки, саркоидоза, склеродермы, синдрома Шегрена, спондилоартропатий, тиреоидита и васкулита.

14. Полипептид по любому из пп.1-11, пригодный для лечения и/или предупреждения, и/или облегчения расстройства, чувствительного к модуляции веществом, модулирующим TNF-альфа, способным проходить через среду желудка без инактивации вещества.

15. Полипептид по п.14, где указанные расстройства представляют собой любое расстройство из числа воспаления, ревматоидного артрита, болезни Крона, неспецифического язвенного колита, синдрома воспаленной толстой кишки, рассеянного склероза, болезни Аддисона, аутоиммунного гепатита, аутоиммунного паротита, диабета типа I, эпидидимита, гломерулонефрита, болезни Грейвса, синдрома Гийена-Барре, болезни Хасимото, гемолитической анемии, системной красной волчанки, мужского бесплодия, астенического бульбарного паралича, пузырчатки, псориаза, ревматической лихорадки, саркоидоза, склеродермы, синдрома Шегрена, спондилоартропатий, тиреоидита и васкулита.

16. Полипептид по любому из пп.1-11, пригодный для лечения и/или предупреждения, и/или облегчения расстройства, чувствительного к модуляции веществом, модулирующим TNF-альфа, доставляемым во влагалище или прямую кишку.

17. Полипептид по п.16, где указанные расстройства представляют собой любое расстройство из числа воспаления, ревматоидного артрита, болезни Крона, неспецифического язвенного колита, синдрома воспаленной толстой кишки, рассеянного склероза, болезни Аддисона, аутоиммунного гепатита, аутоиммунного паротита, диабета типа I, эпидидимита, гломерулонефрита, болезни Грейвса, синдрома Гийена-Барре, болезни Хасимото, гемолитической анемии, системной красной волчанки, мужского бесплодия, астенического бульбарного паралича, пузырчатки, псориаза, ревматической лихорадки, саркоидоза, склеродермы, синдрома Шегрена, спондилоартропатий, тиреоидита и васкулита.

18. Полипептид по любому из пп.1-11, пригодный для лечения и/или предупреждения, и/или облегчения расстройства, чувствительного к модуляции веществом, модулирующим TNF-альфа, доставляемым в нос, верхние дыхательные пути и/или легкие.

19. Полипептид по п.18, где указанные расстройства представляют собой любое расстройство из числа воспаления, ревматоидного артрита, болезни Крона, неспецифического язвенного колита, синдрома воспаленной толстой кишки, рассеянного склероза, болезни Аддисона, аутоиммунного гепатита, аутоиммунного паротита, диабета типа I, эпидидимита, гломерулонефрита, болезни Грейвса, синдрома Гийена-Барре, болезни Хасимото, гемолитической анемии, системной красной волчанки, мужского бесплодия, астенического бульбарного паралича, пузырчатки, псориаза, ревматической лихорадки, саркоидоза, склеродермы, синдрома Шегрена, спондилоартропатий, тиреоидита и васкулита.

20. Полипептид по любому из пп.1-11, пригодный для лечения и/или предупреждения, и/или облегчения расстройства, чувствительного к модуляции веществом, модулирующим TNF-альфа, доставляемым в слизистую оболочку кишечника, где указанное расстройство повышает проницаемость слизистой оболочки кишечника.

21. Полипептид по п.20, где указанные расстройства представляют собой любое расстройство из числа воспаления, ревматоидного артрита, болезни Крона, неспецифического язвенного колита, синдрома воспаленной толстой кишки, рассеянного склероза, болезни Аддисона, аутоиммунного гепатита, аутоиммунного паротита, диабета типа I, эпидидимита, гломерулонефрита, болезни Грейвса, синдрома Гийена-Барре, болезни Хасимото, гемолитической анемии, системной красной волчанки, мужского бесплодия, астенического бульбарного паралича, пузырчатки, псориаза, ревматической лихорадки, саркоидоза, склеродермы, синдрома Шегрена, спондилоартропатий, тиреоидита и васкулита.

22. Полипептид по любому из пп.1-11, пригодный для лечения и/или предупреждения, и/или облегчения расстройства, чувствительного к модуляции веществом, модулирующим TNF-альфа, способным эффективно проходить через ткани под языком.

23. Полипептид по п.22, где указанные расстройства представляют собой любое расстройство из числа воспаления, ревматоидного артрита, болезни Крона, неспецифического язвенного колита, синдрома воспаленной толстой кишки, рассеянного склероза, болезни Аддисона, аутоиммунного гепатита, аутоиммунного паротита, диабета типа I, эпидидимита, гломерулонефрита, болезни Грейвса, синдрома Гийена-Барре, болезни Хасимото, гемолитической анемии, системной красной волчанки, мужского бесплодия, астенического бульбарного паралича, пузырчатки, псориаза, ревматической лихорадки, саркоидоза, склеродермы, синдрома Шегрена, спондилоаргропатий, тиреоидита и васкулита.

24. Полипептид по любому из пп.1-11, пригодный для лечения и/или предупреждения, и/или облегчения расстройства, чувствительного к модуляции веществом, модулирующим TNF-альфа, способным эффективно проходить через кожу.

25. Полипептид по п.24, где указанные расстройства представляют собой любое расстройство из числа воспаления, ревматоидного артрита, болезни Крона, неспецифического язвенного колита, синдрома воспаленной толстой кишки, рассеянного склероза, болезни Аддисона, аутоиммунного гепатита, аутоиммунного паротита, диабета типа I, эпидидимита, гломерулонефрита, болезни Грейвса, синдрома Гийена-Барре, болезни Хасимото, гемолитической анемии, системной красной волчанки, мужского бесплодия, астенического бульбарного паралича, пузырчатки, псориаза, ревматической лихорадки, саркоидоза, склеродермы, синдрома Шегрена, спондилоартропатий, тиреоидита и васкулита.

26. Композиция, содержащая эффективное количество полипептида по любому из пп.1-9 и, по меньшей мере, одно однодоменное антитело, выбранное из однодоменного антитела против IFN-гамма, однодоменного антитела против рецептора TNF-альфа и однодоменного антитела против рецептора IFN-гамма, и фармацевтически приемлемый носитель, пригодная для лечения, и/или предупреждения, и/или облегчения расстройства, чувствительного к модуляции веществом, модулирующим TNF-альфа.

27. Композиция по п.26, где, по меньшей мере, одно однодоменное антитело против IFN-гамма содержит последовательность, любую из SEQ ID NO: 44-72.

28. Композиция по п.26, где, по меньшей мере, одно однодоменное антитело представляет собой VHH Camelidae.

29. Композиция по п.26 или 27, пригодная для лечения и/или предупреждения, и/или облегчения расстройств, связанных с воспалительными процессами.

30. Композиция по п.26, пригодная для лечения и/или предупреждения, и/или облегчения расстройства, чувствительного к модуляции веществом, модулирующим TNF-альфа, способным проходить через среду желудка без инактивации вещества.

31. Композиция по п.26, пригодная для лечения и/или предупреждения, и/или облегчения расстройства, чувствительного к модуляции веществом, модулирующим TNF-альфа, доставляемым во влагалище или прямую кишку.

32. Композиция по п.26, пригодная для лечения и/или предупреждения, и/или облегчения расстройства, чувствительного к модуляции веществом, модулирующим TNF-альфа, доставляемым в нос, верхние дыхательные пути и/или легкие.

33. Композиция по п.26, пригодная для лечения и/или предупреждения, и/или облегчения расстройства, чувствительного к модуляции веществом, модулирующим TNF-альфа, доставляемым в слизистую оболочку кишечника, где указанное расстройство повышает проницаемость слизистой оболочки кишечника.

34. Композиция по п.26, пригодная для лечения и/или предупреждения, и/или облегчения расстройства, чувствительного к модуляции веществом, модулирующим TNF-альфа, способным эффективно проходить через ткани под языком.

35. Композиция по п.26, пригодная для лечения и/или предупреждения, и/или облегчения расстройства, чувствительного к модуляции веществом, модулирующим TNF-альфа, способным эффективно проходить через кожу.

36. Нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид по любому из пп.1-11.

37. Нуклеиновая кислота по п.36, пригодная для лечения и/или предупреждения, и/или облегчения расстройств, связанных с воспалительными процессами.

38. Набор для идентификации средства, которое снижает интенсивность расстройства, опосредуемого фактором некроза опухолей альфа, содержащий полипептид по любому из пп.1-11, фактор некроза опухолей альфа, и упаковочные материалы для них и инструкции по применению.

39. Набор по п.38, где указанные расстройства представляют собой любое расстройство из числа воспаления, ревматоидного артрита, болезни Крона, неспецифического язвенного колита, синдрома воспаленной толстой кишки, рассеянного склероза, болезни Аддисона, аутоиммунного гепатита, аутоиммунного паротита, диабета типа I, эпидидимита, гломерулонефрита, болезни Грейвса, синдрома Гийена-Барре, болезни Хасимото, гемолитической анемии, системной красной волчанки, мужского бесплодия, астенического бульбарного паралича, пузырчатки, псориаза, ревматической лихорадки, саркоидоза, склеродермы, синдрома Шегрена, спондилоартропатий, тиреоидита и васкулита.

40. Композиция, содержащая эффективное количество нуклеиновой кислоты по п.36, полипептид по любому из пп.1-11, и подходящий фармацевтический носитель, пригодная для лечения, и/или предупреждения, и/или облегчения расстройства, чувствительного к модуляции веществом, модулирующим TNF-альфа.

41. Способ диагностики in vitro расстройства, характеризуемого дисфункцией фактора некроза опухолей альфа, включающий:
(a) приведение в контакт образца с полипептидом по любому из пп.1-11,
(b) детекцию связывания указанного полипептида с указанным образцом, и
(c) сравнение связывания, обнаруженного на стадии (b), со стандартом, где различие в связывании относительно указанного образца является диагнозом расстройства, характеризуемого дисфункцией фактора некроза опухолей альфа.

42. Набор для скрининга на расстройство, где указанное расстройство является любым из числа воспаления, ревматоидного артрита, болезни Крона, неспецифического язвенного колита, синдрома воспаленной толстой кишки, рассеянного склероза, болезни Аддисона, аутоиммунного гепатита, аутоиммунного паротита, диабета типа I, эпидидимита, гломерулонефрита, болезни Грейвса, синдрома Гийена-Барре, болезни Хасимото, гемолитической анемии, системной красной волчанки, мужского бесплодия, астенического бульбарного паралича, пузырчатки, псориаза, ревматической лихорадки, саркоидоза, склеродермы, синдрома Шегрена, спондилоартропатий, тиреоидита и васкулита, включающий полипептид по любому из пп.1-11, упаковочные материалы для него и инструкцию по применению.

43. Способ получения полипептида по любому из пп.1-11, включающий стадии:
(a) получения ДНК, кодирующей VHH Camelidae, направленный против фактора некроза опухолей альфа,
(b) клонирования и экспрессии ДНК, полученной на стадии (а).

44. Способ получения полипептида по любому из пп.1-11, включающий:
(a) культивирование клеток-хозяев, содержащих нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид по любому из пп.1-11, в условиях, допускающих экспрессию полипептида, и
(b) извлечение полученного полипептида из культуры.

45. Способ по п.44, в котором указанные клетки-хозяева являются бактериальными или дрожжевыми.

46. Применение полипептида по любому из пп.1-11, нуклеиновой кислоты по п.36 или композиции по п.26 для получения лекарственного средства для лечения и/или предупреждения, и/или облегчения расстройств, связанных с воспалительными процессами.

47. Применение полипептида по любому из пп.1-11 или композиции по п.26 для получения лекарственного средства для лечения, предупреждения и/или облегчения симптомов расстройства, чувствительного к модуляции веществом, модулирующим TNF-альфа, способным проходить через среду желудка без инактивации вещества.

48. Применение полипептида по любому из пп.1-11 или композиции по п.26 для получения лекарственного средства для лечения, предупреждения и/или облегчения симптомов расстройства, чувствительного к модуляции веществом, модулирующим TNF-альфа, доставляемым во влагалище или прямую кишку.

49. Применение полипептида по любому из пп.1-11 или композиции по п.26 для получения лекарственного средства для лечения, предупреждения и/или облегчения симптомов расстройства, чувствительного к модуляции веществом, модулирующим TNF-альфа, доставляемым в нос, верхние дыхательные пути и/или легкие.

50. Применение полипептида по любому из пп.1-11 или композиции по п.26 для получения лекарственного средства для лечения, предупреждения и/или облегчения симптомов расстройства, чувствительного к модуляции веществом, модулирующим TNF-альфа, доставляемым в слизистую оболочку кишечника, где указанное расстройство повышает проницаемость слизистой оболочки кишечника.

51. Применение полипептида по любому из пп.1-11 или композиции по п.26 для получения лекарственного средства для лечения, предупреждения и/или облегчения симптомов расстройства, чувствительного к модуляции веществом, модулирующим TNF-альфа, способным эффективно проходить через ткани под языком.

52. Применение полипептида по любому из пп.1-11 или композиции по п.26 для получения лекарственного средства для лечения, предупреждения и/или облегчения симптомов расстройства, чувствительного к модуляции веществом, модулирующим TNF-альфа, способным эффективно проходить через кожу.