СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ИНФИЦИРОВАННОГО ПАНКРЕОНЕКРОЗА Российский патент 2012 года по МПК G09B23/28 

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной хирургии, и может быть использовано для изучения патогенеза и разработки способов направленной терапии и диагностики данного заболевания в условиях экспериментального моделирования.

На данный момент известно множество способов моделирования острого панкреатита в эксперименте с использованием селективной перевязки внепеченочных желчных протоков, однако лишь небольшая часть из них отвечает современным представлениям о его патогенезе [1, 5]. Наиболее важными моментами которых являются наличие препятствия для оттока панкреатического сока в результате отека поджелудочной железы, спазма большого дуоденального соска, обтурации его конкрементами, а также с высокой секреторной активностью органа [2, 4]. Недостатками этих способов являются необходимость выполнения дополнительных оперативных вмешательств с внутрипротоковым введением аутожелчи без применения инфекционного агента.

Наиболее близким к предлагаемому является способ моделирования острого деструктивного панкреатита, включающий целенаправленную травматизацию поджелудочной железы, с последующим введением в паренхиму органа микробной взвеси [3]. Однако недостатком данного способа является отсутствие дозированного и патогенетически обоснованного инфекционного возбудителя.

Задача изобретения - повышение воспроизводимости и технической простоты способа моделирования инфицированного панкреонекроза.

Поставленную задачу решают за счет того, что в дистальной части правой доли в поперечном направлении на протяжении 3 см выполняют травматизацию поджелудочной железы зажимом Бильрота 3 раза в разных местах, после чего шприцем в паренхиму железы вводят по 0,2 мл аутожелчи и клинического штамма Acinetobacter baumannii в количестве 10⁵ КОЕ/мл, через 3 дня животное выводят из эксперимента и проводят забор крови, ткани поджелудочной железы с последующей их заморозкой при температуре 77К, затем с помощью метода электронного парамагнитного резонанса в крови определяют уровень трансферрина, церулоплазмина и метгемоглобина, в ткани поджелудочной железы - величину свободного железа, трансферрина: при увеличении показателей метгемоглобина и церулоплазмина до 0,16±0,05 усл. ед. и 3,68±1,02 усл. ед. соответственно, снижении концентрации трансферрина крови до 0,83±0,24 усл. ед., а также увеличение уровня свободного железа на 153% и трансферрина на 206% по сравнению с нормой в ткани поджелудочной железы свидетельствуют о развитии панкреонекроза.

Техническим результатом заявленного изобретения является моделирование инфицированного панкреонекроза путем введения аутожелчи после травматизации в дистальной части правой доли в поперечном направлении на протяжении 3 см поджелудочной железы зажимом Бильрота 3 раза в разных местах, а также дозированного и патогенетически обоснованного инфекционного возбудителя.

Способ осуществляют следующим образом: кроликам породы "Шиншила" мужского пола выполняют лапаротомию, ревизию брюшной полости с мобилизацией поджелудочной железы. В дистальной части правой доли в поперечном направлении на протяжении 3 см выполняют травматизацию паренхимы железы зажимом Бильрота 3 раза в разных местах. После чего шприцем вводят 0,2 мл взвеси клинического штамма Acinetobacter baumannii в количестве 10⁵ ОЕ/мл и 0,2 мл аутожелчи. Рану ушивают послойно наглухо. Через 3 дня животных выводят из эксперимента, после чего проводят забор крови и ткани поджелудочной железы в специальные контейнеры с последующей их заморозкой при температуре 77К.

С помощью метода электронного парамагнитного резонанса (ЭПР) в крови определяли уровень трансферрина, церулоплазмина и метгемоглобина, в ткани поджелудочной железы - величину свободного железа, трансферрина.

При увеличении показателей метгемоглобина и церулоплазмина до 0,16±0,05 усл. ед. и 3,68±1,02 усл. ед. соответственно, снижении концентрации трансферрина крови до 0,83±0,24 усл. ед., а также увеличение уровня свободного железа на 153% и трансферрина на 206% по сравнению с нормой в ткани поджелудочной железы свидетельствуют о развитии панкреонекроза (табл.1, 2).

На базе вивария КГМУ им. проф. В.Ф.Войно-Ясенецкого проводился эксперимент на 60 кроликах породы "Шиншила" мужского пола.

Все животные были разделены на две группы: 1-я - контрольная (30 животных) - здоровые кролики; 2-я группа (30 животных) - экспериментальная. Обезболивание животных проводили внутрибрюшинной и внутримышечной анестезией 1% раствором тиопентала натрия в дозе 0,25 г на 1 мл 0,9% раствор хлорида натрия, 1 мл 2% раствором рометара. В контрольной и экспериментальной группах после бритья и введения животного в наркоз производили верхнесрединную лапаротомию и торакотомию, после чего проводился забор крови и ткани поджелудочной железы в специальные контейнеры с последующей их заморозкой для дальнейшего исследования методом ЭПР. Образцы крови брали шприцем из левого желудочка сердца кролика. В экспериментальной группе для воспроизведения инфицированного панкреонекроза после анестезии животному выполняли лапаротомию. Затем в дистальной части правой доли в поперечном направлении на протяжении 3 см выполняли травматизацию поджелудочной железы зажимом Бильрота 3 раза в разных местах, после чего шприцем в паренхиму железы вводили по 0,2 мл аутожелчи и клинического штамма Acinetobacter baumannii в количестве 10⁵ ОЕ/мл. Рану ушивали послойно наглухо. Все кролики содержались на стандартном рационе вивария. Вторым этапом через 3 дня животных выводили из эксперимента, сразу после забора крови и ткани поджелудочной железы в специальные контейнеры с последующей их заморозкой для дальнейшего исследования методом ЭПР.

Объектом ЭПР явились цельная кровь и ткань поджелудочной железы - у здоровых и оперированных кроликов в эксперименте. Спектры ЭПР регистрировали в условиях низкотемпературной стабилизации 77К на радиоспектрометре "Elexsys E-580" фирмы Bruker (Германия). Оценивали следующие параметры: 1) ЭПР-сигнал крови: уровень метгемоглобина, трансферрина и церулоплазмина. 2) ЭПР-сигнал ткани поджелудочной железы: уровень свободного железа и трансферрина.

Уровень метгемоглобина у 2-х групп кроликов имеет достоверные различия между собой. Так показатель парамагнитного гемоглобина в экспериментальной группе повышен в 1,5 раза по сравнению с уровнем данного показателя контрольной группы. Уровень трансферрина в экспериментальной группе значительно снижен по сравнению с величиной в контрольной группе - в 3,9 раза. Показатели церулоплазмина у экспериментальной группы превышают аналогичный показатель контрольной группы в 2,3 раза (табл.1).

Таблица 1 Сравнение параметров про- и антиоксидантного статуса крови у животных экспериментальной и контрольной групп Показатель Средние значения Контрольная группа Экспериментальная группа Метгемоглобин, усл. ед. 0,1±0,03 0,16±0,05 Трансферрин, 3,20±0,74 0,83±0,24 усл. ед.     Церулоплазмин, усл. ед. 1,57±0,46 3,68±1,02 Примечание: условные единицы (усл. ед.) - отношение разности амплитуды показателя в спектре на разность амплитуды фона в спектре

Показатели свободного железа в ткани поджелудочной железы во всех группах имеют достоверные различия между собой. В экспериментальной группе по сравнению с контрольной группой содержание свободного железа увеличивается в 2,5 раза. Уровень трансферрина в ткани поджелудочной железы в экспериментальной группе увеличивается в 3,1 раза, по сравнению с контрольной группой (табл.2).

Таблица 2 Сравнение параметров про- и антиоксидантного статуса ткани поджелудочной железы у животных экспериментальной и контрольной групп Показатель Средние значения Контрольная группа Экспериментальная группа Свободное железо (Fe³⁺), отн. ед. 125196±1911 317649±3903 Трансферрин, отн. ед. 178478±1445 547212±6654 Примечание: относительные единицы (отн. ед.) - разность амплитуды показателя в спектре

Предлагаемый способ имеет следующие преимущества:

1) сокращение времени проведения эксперимента за счет того, что не требуется дополнительных оперативных вмешательств в виде селективной перевязки внепеченочных желчных протоков;

2) позволяет оценить степень антиоксидантной и проаксидантной систем, являющихся пусковыми звеньями в патогенезе инфицированного панкреонекроза;

3) позволяет исследовать цельную кровь с сохранением ее реологических свойств;

4) применяемое количество взвеси клинического штамма Acinetobacter baumannii в 10⁵ КОЕ/мл является оптимальным и патогенетически обоснованным для моделирования инфицированного панкреонекроза.

Изобретение относится к области медицины, а именно к экспериментальной хирургии. Для моделирования инфицированного панкреонекроза выполняют ревизию брюшной полости с мобилизацией поджелудочной железы. В дистальной части правой доли в поперечном направлении на протяжении 3 см выполняют травматизацию поджелудочной железы зажимом Бильрота три раза в разных местах. В паренхиму железы вводят по 0,2 мл аутожелчи и клинического штамма Acinetobacter baumannii в количестве 10⁵ КОЕ/мл. Через три дня животное выводят из эксперимента, проводят забор крови и ткани поджелудочной железы с последующей их заморозкой при температуре 77К. С помощью метода электронного парамагнитного резонанса в крови определяют уровень трансферрина, церулоплазмина и метгемоглобина, в ткани поджелудочной железы - величину свободного железа, трансферрина. При увеличении показателей метгемоглобина и церулоплазмина до 0,16±0,05 усл. ед. и 3,68±1,02 усл. ед. соответственно, снижении концентрации трансферрина крови до 0,83±0,24 усл. ед., а также увеличении уровня свободного железа на 153% и трансферрина на 206% по сравнению с нормой в ткани поджелудочной железы судят о развитии панкреонекроза. Способ позволяет моделировать инфицированный панкреонекроз путем введения аутожелчи и патогенетически обоснованного и дозированного возбудителя в паренхиму поджелудочной железы после ее травматизации. 2 табл.

Способ моделирования инфицированного панкреонекроза, включающий ревизию брюшной полости с мобилизацией поджелудочной железы, введение аутожелчи в ее паренхиму, отличающийся тем, что в дистальной части правой доли в поперечном направлении на протяжении 3 см выполняют травматизацию поджелудочной железы зажимом Бильрота 3 раза в разных местах, после чего шприцем в паренхиму железы вводят по 0,2 мл аутожелчи и клинического штамма Acinetobacter baumannii в количестве 10⁵ КОЕ/мл, через 3 дня животное выводят из эксперимента и проводят забор крови, ткани поджелудочной железы с последующей их заморозкой при температуре 77К, затем с помощью метода электронного парамагнитного резонанса в крови определяют уровень трансферрина, церулоплазмина и метгемоглобина, в ткани поджелудочной железы - величину свободного железа, трансферрина: при увеличении показателей метгемоглобина и церулоплазмина до (0,16±0,05) усл. ед. и (3,68±1,02) усл. ед. соответственно, снижении концентрации трансферрина крови до (0,83±0,24) усл. ед., а также увеличение уровня свободного железа на 153% и трансферрина на 206% по сравнению с нормой в ткани поджелудочной железы свидетельствуют о развитии панкреонекроза.