СРЕДСТВО ДЛЯ СНИЖЕНИЯ ПОБОЧНОГО ЭФФЕКТА ПРОТИВОРАКОВОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА Российский патент 2012 года по МПК A61K38/48 A61K35/00 

Область техники

Настоящее изобретение относится к средству для снижения побочного эффекта противоракового лекарственного средства, которое содержит фермент, подобный тромбину.

Предшествующий уровень техники

В последние годы, при ранней диагностике и выявлении рака, которые стали возможны в результате периодического медицинского обследования, постоянно повышалась частота успешных хирургических операций по удалению первичного рака. Однако множественная медикаментозная химиотерапия или комбинированное лечение с использованием химиотерапии и лучевой терапии еще применяется для лечения рака на поздних стадиях или рака, сопровождающегося образованием метастатического очага.

В частности, поскольку ранняя диагностика злокачественных опухолей с высокой степенью злокачественности, таких как меланома, рак легких, рак печени и рак поджелудочной железы, трудна, ко времени, когда диагностируется злокачественная опухоль, первичная опухоль и метастатическая опухоль могут уже существовать одновременно, и во многих случаях хирургические операции невозможны. В этих случаях при лечении таких злокачественных опухолей широко используется комбинированная химиотерапия множеством противораковых лекарственных средств.

В настоящее время, такие цитотоксические противораковые лекарственные средства такие, как алкилирующие средства, антиметаболиты, противораковые антибиотики, растительные алкалоиды, лекарственные средства на основе платины, известны как противораковые лекарственные средства, широко применяемые в клинике. Однако цитотоксические противораковые лекарственные средства вызывают повреждение не только раковых клеток, но также нормальных клеток, имеющих активный цитокинез. Ввиду побочных эффектов, вызванных цитотоксическими противораковыми лекарственными средствами, таких как подавление костного мозга, кардиотоксичность, гематопоэтические расстройства, пищеварительные расстройства, облысение и тому подобные, эффективное количество лекарственного средства, необходимое для терапии рака, невозможно ввести, что является фатальным недостатком цитотоксических противораковых лекарственных средств.

Циклофосфамид, алкилирующее лекарственное средство, широко используется в клинике ввиду его эффективности при остром лейкозе, злокачественной лимфоме, множественной миеломе и тому подобных заболеваниях. Циклофосфамид представляет собой лекарственное средство, которое блокирует клеточную пролиферацию алкилированием ДНК, таким образом, подавляя функцию ДНК. Поскольку это лекарственное средство блокирует не только пролиферацию раковых клеток, но также пролиферацию нормальных клеток, могут возникнуть побочные эффекты. Известно, что побочным эффектом являются рвота, диарея, облысение, подавление костного мозга и тому подобные явления.

Адриамицин (доксорубицин), противораковый антибиотик, широко применяется в клинике и эффективен при различных видах рака, которые включают раковые заболевания крови, такие как острый лейкоз и злокачественная лимфома, и солидные опухоли, такие как рак легких, рак молочной железы и остеосаркома. Однако известно, что адриамицин вызывает побочные эффекты, такие как подавление костного мозга, кардиотоксичность, стоматит, пищеварительные расстройства и облысение. В частности, кардиотоксичность, вызванная адриамицином, представляет собой серьезный побочный эффект, который представляет клиническую проблему и вызывает необходимость ограничения доз (William Lown J et al.: Strand scission of DNA by bound adriamycin and daunorubicin in the presence of reducing agents. Biochem. Biophys. Res. Commun., 76(3):705-710, 1977).

Цисплатин, лекарственное средство на основе платины, представляет собой противораковое лекарственное средство широкого спектра. Однако клинические дозы должны ограничиваться ввиду побочных эффектов, таких как пищеварительные расстройства (главным образом, включающие тошноту или рвоту), общее недомогание, почечную недостаточность и гематопоэтические расстройства. Кроме того, для снижения этих побочных эффектов, было синтезировано производное цисплатина, известное как карбоплатин. Даже хотя побочные эффекты, вызванные карбоплатином, меньше чем побочные эффекты, вызванные цисплатином, проблемой, связанной с карбоплатином, является слабая противораковая активность.

В таких условиях, для клинического применения имеется большая потребность в разработке лекарственного средства, которое снижает побочные эффекты противораковых лекарственных средств. До настоящего времени, было сообщение об одном средстве для снижения побочных эффектов противоракового лекарственного средства. Такое средство характеризуется содержанием производного нитротриазола для снижения побочных эффектов цитотоксического противоракового средства (патент Японии № 3482418). В этой ссылке представлены данные о том, что производное нитротриазола подавляет потерю массы тела, которая является побочным эффектом многих противораковых лекарственных средств.

Кроме того, сообщается о производном птерина или производном неоптерина в качестве активного ингредиента ингибитора метастазирования рака и средства для лечения побочного эффекта противораковых лекарственных средств (патент Японии № 3156112). В этой ссылке объясняется, что производные птерина и неоптерина могут подавить метастазирование рака, что ведет к благоприятным воздействиям на выживание, и снижает побочные эффекты антрахиноновых противораковых средств, такие как кардиотоксичность.

Сообщалось, что подобный тромбину фермент батроксобин, который получен из яда Bothrops atrox moojeni, эффективен при подавлении метастазирования и пролиферации злокачественных опухолей (Chmielewska J et al.: Effect of defibrination with batroxobin on growth and metastasis of JW sarcoma in mice. Europ. J. Cancer, 16:919-923,1980). Технологии, раскрытые в этой ссылке, основаны на предположении, что фибриноген функционирует в качестве барьера для защиты клеток злокачественных опухолей от атак иммунной системы. В этих технологиях подобный тромбину фермент снижает уровни фибриногена, таким образом, облегчая атаку иммунной системы на клетки злокачественных опухолей, что в результате обеспечивает блокирование пролиферации и метастазирования опухолевых клеток батроксобином. Но нет сообщений о примерах относительно связи батроксобина и снижения побочных эффектов противораковых лекарственных средств.

Описание изобретения

Производное нитротриазола, производное птерина и производное неоптерина, описанные в приведенных выше патентных документах, в настоящее время не применяются в качестве лекарственных средств в клинике. Поэтому имеется настоятельная необходимость в разработке лекарственного средства, которое может эффективно снизить побочные эффекты противораковых лекарственных средств, в частности, такие тяжелые побочные эффекты, как подавление костного мозга и кардиотоксичность.

Заявители в результате исчерпывающих научных исследований проблемы устранения таких побочных эффектов, как подавление костного мозга и кардиотоксичность, которые вызваны такими противораковыми лекарственными средствами как циклофосфамид, адриамицин и цисплатин, обнаружили, что подобный тромбину фермент батроксобин может снизить эти побочные эффекты. Настоящее изобретение основано на этих данных.

А именно, настоящее изобретение относится к средству для снижения побочного эффекта противоракового лекарственного средства, которое содержит подобный тромбину фермент. В частности, настоящее изобретение заключается в следующем.

(1) Средство для снижения побочного эффекта противоракового лекарственного средства, где средство содержит подобный тромбину фермент.

(2) Средство для снижения побочного эффекта согласно абзацу (1), где подобный тромбину фермент представляет собой протеазу, которая генерирует фибрин I из фибриногена.

(3) Средство для снижения побочного эффекта согласно абзацу (1), где подобный тромбину фермент выбран из группы, состоящей из батроксобина, анкрода и кроталазы.

(4) Средство для снижения побочного эффекта согласно абзацу (1), где подобный тромбину фермент представляет собой батроксобин.

(5) Средство для снижения побочного эффекта согласно абзацу (1), где противораковое лекарственное средство представляет собой цитотоксическое лекарственное средство.

(6) Средство для снижения побочного эффекта согласно абзацу (5), где цитотоксическое противораковое лекарственное средство выбрано из группы, состоящей из алкилирующего лекарственного средства, противоракового антибиотика и лекарственного средства на основе платины.

(7) Средство для снижения побочного эффекта согласно абзацу (5), где цитотоксическое противораковое лекарственное средство выбрано из группы, состоящей из циклофосфамида, адриамицина и цисплатина.

(8) Средство для снижения побочного эффекта согласно абзацу (1), где побочный эффект представляет собой подавление костного мозга или кардиотоксичность, вызванные противораковым лекарственным средством.

(9) Средство для снижения побочного эффекта согласно абзацу (1), где побочный эффект представляет собой подавление костного мозга, вызванное цитотоксическим противораковым лекарственным средством.

(10) Средство для снижения побочного эффекта согласно абзацу (9), где цитотоксическое противораковое лекарственное средство выбрано из группы, состоящей из алкилирующего лекарственного средства, противоракового антибиотика и лекарственного средства на основе платины.

(11) Средство для снижения побочного эффекта согласно абзацу (9), где цитотоксическое противораковое лекарственное средство выбрано из группы, состоящей из циклофосфамида, адриамицина и цисплатина.

(12) Средство для снижения побочного эффекта согласно абзацу (1), где побочный эффект представляет собой кардиотоксичность, вызванную противораковым антибиотиком.

(13) Средство для снижения побочного эффекта согласно абзацу (12), где противораковый антибиотик представляет собой адриамицин.

(14) Способ снижения побочного эффекта противоракового лекарственного средства у индивидуума, включающий введение индивидууму эффективного количества подобного тромбину фермента.

(15) Применение подобного тромбину фермента для получения средства для снижения побочного эффекта противоракового лекарственного средства.

Средство для снижения побочного эффекта противоракового лекарственного средства по настоящему изобретению может эффективно снизить побочный эффект противоракового лекарственного средства, в частности, такой тяжелый побочный эффект, как подавление костного мозга и кардиотоксичность, как показано в примерах ниже, а именно путем введения настоящего средства один или два раза в сутки с одновременным введением противоракового лекарственного средства или после введения противоракового лекарственного средства, настоящее средство может заметно снизить побочный эффект противоракового лекарственного средства. Поэтому настоящее изобретение может внести большой вклад в противораковую медикаментозную терапию.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1 представляет полученную через оптический микроскоп фотографию (окрашивание гематоксилином и эозином, увеличение ×400) ткани миокарда левого желудочка в наблюдении из контрольной группы.

Фиг. 2 представляет полученную через оптический микроскоп фотографию (окрашивание гематоксилином и эозином, увеличение ×400) ткани миокарда левого желудочка в наблюдении из группы батроксобина.

Фиг. 3 представляет полученную через оптический микроскоп фотографию (окрашивание гематоксилином и эозином, увеличение в 200 раз) ткани миокарда левого желудочка в наблюдении из группы адриамицина.

Фиг. 4 представляет полученную через оптический микроскоп фотографию (окрашивание гематоксилином и эозином, увеличение в 200 раз) ткани миокарда левого желудочка в наблюдении из группы батроксобина + адриамицина.

Наилучший способ осуществления изобретения

Ниже представлено детальное объяснение настоящего изобретения.

Следует понимать, что, пока нет иных указаний, термины, применяемые в описании, используются в их обычном значении, используемом в данной области. Поэтому, пока нет других определений, все технические термины и научные термины, используемые в описании, имеют такие же значения, которые в целом понятны специалисту в данной области, для которого предназначено настоящее изобретение. Если значение термина, определенного в описании, отличается от обычно используемого в данной области значения, то значение, определенное в описании, должно использоваться в предпочтение значению, обычно используемому в данной области.

Ниже представлены определения терминов, используемых в настоящем описании.

Термин «фермент, подобный тромбину», используемый в описании, относится к протеазе, отличной от тромбина, которая имеет свойство коагулировать фибриноген. Определенные примеры подобного тромбину фермента включают батроксобин, анкрод, кроталазу, флавоксобин, асперазу, акутин, ботропазу, клотазу, габоназу, вензим и тому подобные.

Подобные тромбину ферменты классифицируются на 3 категории на основании участка в субстрате, фибриногене, который атакует фермент: (i) протеаза (такая как батроксобин, анкрод и кроталаза), которая отделяет только фибринопептид А от фибриногена для генерирования фибрина I; (ii) протеаза (такая как габоназа), которая отделяет фибринопептид А и фибринопептид В от фибриногена для генерирования фибрина II, который также называется фибрином; и (iii) протеаза (такая как вензим), которая главным образом отделяет фибринопептид В от фибриногена.

В описании термин «фибрин I» относится к мономеру, генерированному, только когда фибринопептид А отделяется от фибриногена. Фибрин I также называется фибрином Des A. Кроме того, термин «фибринопептид А» обозначает пептид, соответствующий 16 аминокислотам на NH₂-концевой части цепи Аα фибриногена.

Кроме того, в описании, батроксобин, анкрод, кроталаза, флавоксобин, аспераза, акутин и тому подобные указаны в качестве примера протеазы, которая генерирует фибрин I из фибриногена.

Предпочтительный подобный тромбину фермент по настоящему изобретению содержит батроксобин, анкрод, кроталазу (Stocker KF: Snake venom proteins affecting hemostasis and fibrinolysis, in Medical Use of Snake Venom Proteins, Stocker KF, ed., CRC Press, Boston, p.130-131; 1990). Из указанных выше подобных тромбину ферментов, особенно предпочтителен батроксобин.

Батроксобин представляет собой подобный тромбину фермент, полученный из яда Bothrops atrox moojeni, и гликопротеин, имеющий молекулярную массу 36000 Да.

Тромбин представляет собой фермент, который имеет гликопротеиновую структуру, где активируется протромбин, существующий в живом организме. В основе гликопротеиновой структуры тромбин и батроксобин являются аналогичными ферментами. Однако тромбин отличается от батроксобина в том, что тромбин отделяет не только фибринопептид А, но и фибринопептид В от фибриногена и генерирует фибрин. Кроме того, хотя батроксобин не действует на какие-либо факторы свертывания крови, отличные от фибриногена, тромбин отличается от батроксобина в том, что тромбин действует на факторы свертывания крови, отличные от фибриногена.

Батроксобин является известным веществом и может быть получен в соответствии со способом, описанным в публикации прошедшей экспертизу заявки на патент Японии № S57-10718 (патент Японии № 1118129). Альтернативно, его можно легко приобрести у компании Tobishi Pharmaceuticals Co., Ltd. (Tokyo, Japan) и в ее филиале, Beijing Tobishi Pharmaceuticals, Co., Ltd. (Beijing, China).

Анкрод представляет собой подобный тромбину фермент, полученный из яда Agkistrodon rhodostoma, и гликопротеин, имеющий молекулярную массу примерно 35400 Да. Анкрод аналогичен батроксобину в том, что они оба представляют собой подобные тромбину ферменты, которые отделяют только фибринопептид А от фибриногена для генерирования фибрина I (Stocker KF: Snake venom proteins affecting hemostasis and fibrinolysis, in Medical Use of Snake Venom Proteins. Stocker KF, ed., CRC Press, Boston, p.134-135; 1990).

Кроталаза представляет собой подобный тромбину фермент, полученный из яда Crotalus adamanteus, и гликопротеин, имеющий молекулярную массу примерно 32700 Да. Кроталаза аналогична батроксобину в том, что они оба представляют собой подобные тромбину ферменты, которые отделяют только фибринопептид А от фибриногена для генерирования фибрина I (Stocker KF: Snake venom proteins affecting hemostasis and fibrinolysis, in Medical Use of Snake Venom Proteins. Stocker KF, ed., CRC Press, Boston, p.140-141; 1990).

Указанные выше ферменты, подобные тромбину, такие как батроксобин, анкрод и кроталаза, в настоящем изобретении могут представлять собой натуральный продукт или генетический рекомбинантный продукт.

Термин «противораковое лекарственное средство» в настоящем изобретении относится к лекарственному средству, применяемому при лечении рака. Конкретные примеры противоракового лекарственного средства включают цитотоксическое противораковое лекарственное средство, лекарственное средство на основе молекулярной мишени, гормон и тому подобные.

Термин «цитотоксическое противораковое лекарственное средство» относится к противораковому лекарственному средству, которое демонстрирует любое влияние на ДНК ядра или клеточный цикл для оказания противоракового эффекта. Конкретные примеры цитотоксического противоракового лекарственного средства включают алкилирующий агент, антиметаболит, противораковый антибиотик, лекарственное средство на основе платины и растительный алкалоид и тому подобные.

Алкилирующий агент включает N-оксид гидрохлорид азотистого иприта, мелфалан, циклофосфамид, ифосфамид и другой азотистый иприт; карбоквон, тиотепа и другие этиленимины; нимустин гидрохлорид, ранимустин и другие нитрозомочевины и тому подобные.

Антиметаболит включает метотрексат и другие антагонисты фолиевой кислоты; фторурацил, тегафур, кармофур и другие антагонисты пиримидина; цитарабин, циклоцитидин, эноцитабин и другие цитозинарабинозиды; меркаптопурин, тиоинозин и другие антагонисты пурина и тому подобные.

Противораковые антибиотики включают адриамицин, доксорубицин, даунорубицин, акларубицин, пирарубицин и другие антрациклины; блеомицин, пеплеомицин и другие блеомицины; митомицин С и другие митомицины, актиномицин D и другие актиномицины; неокарзиностатин и другие полипептиды и тому подобные.

Лекарственные средства на основе платины включают цисплатин, карбоплатин, недаплатин, оксалиплатин и тому подобные.

Растительные алколоиды включают винбластин, винкристин, виндезин, паклитаксел, доцетаксел, этопозид, камптотецин, иринотекан и тому подобные.

Средство по настоящему изобретению может, в частности, демонстрировать эффективность в снижении побочных эффектов циклофосфамида, адриамицина и цисплатина.

Кроме того, средство по настоящему изобретению может проявлять действие снижения не только побочного эффекта, который возникает при введении одного противоракового лекарственного средства, но также снижения побочного эффекта, который возникает при одновременном введении множества противораковых лекарственных средств.

Термин «побочный эффект противоракового лекарственного средства» относится к терапевтически не требуемому эффекту, наблюдаемому во время введения противоракового лекарственного средства, или эффекту, который может вызвать клиническое нарушение.

Примеры побочных эффектов противоракового лекарственного средства включают подавление костного мозга, кардиотоксичность, потерю волос, пищеварительные расстройства (включая тошноту, рвоту, диарею), почечную дисфункцию, общее недомогание, стоматит и тому подобные. Из этих указанных побочных эффектов, с помощью настоящего изобретения можно в значительной степени снизить такие побочные эффекты, как подавление костного мозга и кардиотоксичность.

Термин «подавление костного мозга» означает уменьшение количества эритроцитов (RBC), лейкоцитов (WBC) и тромбоцитов (Plt), которое вызвано повреждением нормальных гематопоэтических клеток противораковым лекарственным средством. Симптомы подавления костного мозга включают анемию вследствие нарушения гематопоэза, инфекции вследствие лейкопении, кровоизлияния вследствие тромбоцитопении и тому подобные. Подавление костного мозга представляет собой побочный эффект, который легко возникает, когда применяется цитотоксическое противораковое лекарственное средство (в частности, алкилирующее лекарственное средство, противораковый антибиотик и лекарственное средство на основе платины). Когда степень тяжести подавления костного мозга максимально усугубляется, гематопоэтические стволовые клетки, которые продуцируют RBC, WBC и Plt, разрушаются. Иногда такое разрушение вызывает серьезную анемию, смертельные инфекционные заболевания, кровоизлияния (внутричерепные, желудочно-кишечные, легочные), и, наконец, это может привести к смерти. Соответственно, подавление костного мозга представляет собой очень тяжелый побочный эффект.

Термин «кардиотоксичность» означает патологические изменения в тканях миокарда или клетках миокарда, вызванные противораковым лекарственным средством. Указывается, что такие симптомы, как застойная сердечная недостаточность и аритмия и тому подобные, возникают в результате кардиотоксичности. Кардиотоксичность представляет собой побочный эффект, который легко возникает при применении противораковых антибиотиков (в частности, антрациклина, включая адриамицин). При патогистологических исследованиях отчетливые полосы сокращения в ткани миокарда являются критерием оценки кардиотоксичности. Степень кардиотоксичности зависит от дозировки противоракового лекарственного средства. Когда степень тяжести кардиотоксического действия высока, то это вызывает застойную сердечную недостаточность, в конечном счете, приводя к смерти. Соответственно, кардиотоксичность представляет собой очень тяжелый побочный эффект.

Настоящее изобретение может быть очень эффективно в снижении побочных эффектов, вызванных циклофосфамидом, цисплатином и адриамицином. Типичные побочные эффекты, вызванные циклофосфамидом, цисплатином и адриамицином, следующие:

Циклофосфамид

Подавление костного мозга, рвота, диарея, облысение и тому подобные;

Адриамицин

Кардиотоксичность, подавление костного мозга, стоматит, пищеварительные расстройства, облысение и тому подобные;

Цисплатин

Пищеварительные расстройства, общее недомогание, подавление костного мозга, гематопоэтические расстройства, нефропатия и тому подобные.

Термин «снижение» означает, что побочный эффект, который вызван противораковым лекарственным средством в отсутствие средства по настоящему изобретению, облегчается введением настоящего средства. Термин «снижение» означает, что настоящее средство не только облегчает побочный эффект, но также, что сам побочный эффект не возникает под действием настоящего агента.

Любая препаративная форма, представленная в Общих Правилах Получения Японской Фармакопеи, может применяться с препаративной формой средства по настоящему изобретению. Примеры включают инъекционные формы для непосредственного введения внутрь организма (включая суспензии и эмульсии); мази (включая жирные мази, эмульсионные мази (кремы), растворимые в воде мази и тому подобные), ингаляционные формы, жидкости (включая глазные растворы, растворы для орошения полости носа и тому подобные), суппозитории, накладки, припарки, лосьоны и другие препаративные формы для наружного применения; и препаративные формы для внутреннего применения, включающие таблетки (включая таблетки, покрытые сахаром, пленкой и желатином), жидкости, капсулы, гранулы, порошки (включая зерна), пилюли, сиропы, пастилки и тому подобные. Эти препаративные формы могут быть получены способами, описанными в Общих Правилах Получения в Японской Фармакопее.

Кроме того, средство по настоящему изобретению может также содержать фармакологически приемлемый твердый или жидкий носитель или основу для инвазивного лечения, в соответствии с его лекарственной формой. Примеры фармакологически приемлемого твердого или жидкого носителя включают растворитель, стабилизатор, консервант, стабилизирующий агент, эмульгатор, суспендирующий агент, буферный агент, изотонизирующий агент, красящий агент, загуститель, эксципиент, смазывающее вещество, связывающий агент, разрыхлитель, агент для покрытия, корригент и тому подобные.

Конкретные примеры носителя включают воду, лактозу, сахарозу, фруктозу, глюкозу, маннит, сорбит и другие сахара и сахарные спирты, кристаллическую целлюлозу, метилцеллюлозу, этилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, низко замещенную гидроксипропилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, фталат гидроксипропилметилцеллюлозы, ацетатсукцинат гидроксипропилметилцеллюлозы, кармеллозу, кармеллозу кальция, кармеллозу натрия, кроскармеллозу натрия, карбоксиметилцеллюлозу, ацетатфталат целлюлозы и другие целлюлозы и родственные производные, кукурузный крахмал, пшеничный крахмал, рисовый крахмал, картофельный крахмал, декстрин, предварительно желатинизированный крахмал, частично предварительно желатинизированный крахмал, гидроксипропилкрахмал, карбоксиметилкрахмал натрия, циклодекстрин, пуллулан и другие крахмалы и родственные производные, агар, альгинат натрия, акацию, желатин, коллаген, шеллак, трагакант, ксантановую смолу (натуральную) и другие натуральные полимеры (морские водоросли, растительную слизь, белки и тому подобные), поливинилпирролидон, сополимер аминоалкилметакрилата, сополимер метакриловой кислоты, карбоксивиниловый полимер, поливиниловый спирт, диметилполисилоксан и другие синтетические полимеры, оливковое масло, масло какао, воск карнаубы, говяжье сало, гидрированное масло, масло соевых бобов, кунжутное масло, масло камелии, парафин, жидкий парафин, желтый пчелиный воск, белый вазелин, кокосовое масло, микрокристаллический воск и другие масла и жиры, стеариновую кислоту, стеарат алюминия, стеарат кальция, стеарат магния, триэтилцитрат, триацетин, триглицерид среднецепочечных жирных кислот, твердый жир, изопропилмиристат и другие жирные кислоты и их производные, глицерин, стеариловый спирт, цетанол, пропиленгликоль, макрогол и другие спирты и поливалентные спирты, оксид цинка, двухосновный фосфат кальция, осажденный карбонат кальция, синтетический силикат алюминия, ангидрид диоксида кремния, каолин, высушенный гель гидроксида алюминия, синтетический гидротальцит, оксид титана, тальк, бентонит, алюминометасиликат магния, сульфат алюминия калия, субгаллат висмута, субсалицилат висмута, лактат кальция, бикарбонат натрия и другие неорганические вещества и соединения солей металлов, сложные эфиры жирных кислот сахарозы, полиоксилстеарат, гидрированное касторовое масло полиоксиэтилена, полиоксиэтиленполиоксипропиленгликоль, сесквиолеат сорбитана, триолеат сорбитана, моностеарат сорбитана, монопальмитат сорбитана, монолаурат сорбитана, полисорбат, глицерилмоностеарат, лаурилсульфат натрия, лауромакрогол и другие поверхностно-активные вещества, красители, ароматизаторы и тому подобные вещества.

Примеры основ для инвазивного лечения включают стенты, искусственные сосуды, катетеры, баллоны и тому подобные устройства.

Средство по настоящему изобретению может вводиться индивидууму, которому вводится противораковое лекарственное средство. Примеры индивидуума включают млекопитающих, таких как человек, собака и кошка. Средство по настоящему изобретению может подходить для применения у людей.

Время введения средства по настоящему изобретению может быть определено в соответствии с типом, дозировкой противоракового лекарственного средства. Средство по настоящему изобретению предпочтительно вводить одновременно с противораковым лекарственным средством или после введения противоракового лекарственного средства.

Вводимая доза средства по настоящему изобретению варьируется в зависимости от массы тела пациента, особенностей заболевания и состояния, но составляет, например, от 0,1 до 50 единиц батроксобина (далее именуемых BU), в случае лечения взрослого человека, батроксобин в качестве подобного тромбину фермента может вводиться один раз в день. Причем предпочтительная доза для взрослого человека составляет по 1-20 BU через день. При использовании препаратов для наружного применения доза составляет от 0,01 до 500 мг на грамм основы.

Единица батроксобина представляет собой единицу, указывающую ферментативную активность батроксобина, причем 2BU представляют активность для достижения свертывания через 19,0±0,2 секунд, когда 0,1 мл раствора батроксобина добавляется к 0,3 мл стандартной человеческой плазмы, содержащей лимонную кислоту, при 37°C.

Например, средство по настоящему изобретению может вводиться индивидууму внутривенным капельным вливанием, путем внутривенной инъекции, внутриартериальной инъекции, внутримышечной инъекции, подкожной инъекции, внутрикожной инъекции, внутрисердечной инъекции, внутрибрюшинной инъекции, внутриоболочечной инъекции, внутриректального введения, сублингвального введения, интраназального введения, чрескожного введения, ингаляции или локального введения в поврежденные органы и/или ткани состава, полученного разбавлением подобного тромбину фермента физиологическим солевым раствором. В целом, предпочтительно разбавление подобного тромбину фермента 100 мл или более физиологического солевого раствора и введение полученного состава индивидууму внутривенным капельным вливанием в течение 1 часа или более.

Подобный тромбину фермент, батроксобин, используется в средстве по настоящему изобретению. Данные по острой токсичности (LD₅₀ (BU/кг)) батроксобина, полученные на мышах, крысах, кроликах и собаках, представлены ниже в таблице 1. Оценку острой токсичности проводили в тесте при внутривенном введении батроксобина.

Таблица 1
Острая токсичность батроксобина (при внутривенном введении) Вид животных Величина LD₅₀ (BU/кг) Мыши (ddy) 192~210 Крысы (Wistar) 105~110 Кролики (NW) >300 Собаки (беспородные) 190~208

Хотя ниже представлено детальное объяснение настоящего изобретения путем указания составов и их примеров, настоящее изобретение не ограничивается этими составами и примерами.

Состав 1

Используя батроксобин в качестве подобного тромбину фермента, было получено средство для снижения побочных эффектов противоракового лекарственного средства, которое имеет следующую композицию.

Батроксобин (активный ингредиент) 10BU

Хлорбутанол (консервант) 3 мг

Гидролизат желатина (стабилизатор) 0,1 мг

Хлорид натрия (изотонический агент) 9 мг

Хлористоводородная кислота (регулятор pH) сколько требуется

Дистиллированная вода для инъекций до 1 мл

Общий объем 1 мл

Пример 1

Эффект снижения батроксобином летальной токсичности, вызванной адриамицином

Использовали подобный тромбину фермент, батроксобин (далее именуемый DF-521), выпускаемый Beijing Tobishi Pharmaceutical Co., Ltd. (Beijing, China) под торговым названием Dong Ling Di Fu.

Использовали противораковое лекарственное средство, адриамицин (далее именуемый ADM), выпускаемый компанией Hualian Pharmaceutical Factory of Shanghai Pharmaceutical (Group) Co., Ltd.

Лабораторные животные, самцы мышей C57BL/6 (масса тела: 19-22 г) были разделены на 3 группы: контрольная группа, группа адриамицина (группа ADM) и группа адриамицина+батроксобина (группа ADM + DF-521), по 10 мышей в каждой группе. Контрольной группе вводили физиологический раствор.

Группе адриамицина внутрибрюшинно через день вводили дозу адриамицина (3 мг/кг). Группе адриамицина+батроксобина одновременно внутрибрюшинно вводили адриамицин в дозировке 3 мг/кг и батроксобин в дозе 30BU/кг через день. Введение лекарственного средства производили всего 18 раз. Эксперимент заканчивали на 41-й день после введения первой дозы. Определяли общее количество случаев смерти, и выживаемость рассчитывали по данным смертности. Результаты представлены в таблице 2.

Таблица 2 Группа Кол-во выживших/общее кол-во (выживаемость в %) Контроль 10/10 (100%) ADM 4/10* (40%) ADM+DF+521 10/10^# (100%) *p<0,05, по сравнению с контрольной группой
#p<0,05, по сравнению с группой ADM

Как показано в таблице 2, умерли 6 мышей из группы адриамицина. Считается, что смерть мышей вызвана общими побочными эффектами, обусловленными адриамицином, такими как подавление костного мозга, кардиотоксичность и тому подобные. С другой стороны, все мыши в группе адриамицина + батроксобина выжили. Полученный результат означает, что выживаемость в группе адриамицина + батроксобина значительно выше (p<0,05), чем выживаемость в группе адриамицина. Это показывает, что батроксобин может снизить побочные эффекты, вызванные адриамицином.

Пример 2

Эффект снижения батроксобином подавления костного мозга, вызванного циклофосфамидом

Использовали подобный тромбину фермент, батроксобин (далее именуемый DF-521), выпускаемый Beijing Tobishi Pharmaceutical Co., Ltd. (Beijing, China) под торговым названием Dong Ling Di Fu.

Использовали противораковое лекарственное средство циклофосфамид (далее именуемый CPA), который выпускается компанией Shanxi Powerdone Pharmaceutical Co., Ltd.

Лабораторные животные, самцы мыши C57BL/6 (масса тела: 20-24 г) были разделены на три группы: контрольную группу, группу циклофосфамида (группу CPA) и группу циклофосфамида + батроксобина (группу CPA+DF-521), по 5 мышей в каждой группе. Контрольной группе однократно через день вводили физиологический раствор. Группе циклофосфамида внутрибрюшинно однократно через день вводили дозу циклофосфамида (100 мг/кг). Группе циклофосфамида+батроксобина одновременно однократно внутрибрюшинно вводили через день 100 мг/кг циклофосфамида и 30BU/кг батроксобина. После четвертого введения (через 7 дней после первого введения) кровь брали из бедренной артерии под общей анестезией, используя EDTA (этилендиаминтетрауксусную кислоту) в качестве антикоагулянта, и измеряли количество лейкоцитов (WBC), эритроцитов (RBC), уровень гемоглобина (Hb) и количество тромбоцитов (Plt).

Количество ядерных клеток костного мозга (BMNC) на бедренную кость мыши измеряли следующей процедурой. Образцы костного мозга брали из 2 бедренных костей мыши, костный мозг промывали 2 мл физиологического раствора и готовили суспензию клеток костного мозга. 20 мкл суспензии клеток костного мозга помещали в 380 мкл 3% раствора уксусной кислоты. После разрушения эритроцитов, для подсчета BMNC использовали гемоцитометр под микроскопом. Затем подсчитывали количество BMNC на бедренную кость.

Указанные выше количества BMNC, WBC, RBC, Plt и уровень Hb использовали в качестве показателя оценки подавления костного мозга, вызванного циклофосфамидом. Результаты показаны в таблице 3.

Таблица 3 Группа BMNC
(×10⁶/ кость) WBC
(×10⁹/л) RBC
(×10¹²/л) Hb
(г/л) Plt
(×10⁹/л) Контроль 13,5±2,3 5,6±1,8 8,0±1,1 118,2±22,0 1022,0±147,7 CPA 2,4±0,4** 0,8±0,3** 6,2±0,5* 98,8±9,2 1081,6±47,4 CPA+DF-521 3,3±0,4**^## 1,3±0,1**^## 6,2±0,5* 98,4±5,4 973,0±177,1 *p<0,05, по сравнению с контрольной группой
** p<0,01, по сравнению с контрольной группой
^##p<0,01, по сравнению с группой CPA

Количество BMNC, WBC, RBC группы циклофосфамида было значительно снижено, по сравнению с контрольной группой (p<0,05 или p<0,01). С другой стороны, количества BMNC и WBC в группе циклофосфамида+батроксобина были значительно выше, чем количества BMNC и WBC в группе циклофосфамида (p<0,01). Также, когда количества RBC и Plt и уровень Hb в группе циклофосфамида+батроксобина сравнивали с этими показателями в группе циклофосфамида, изменение не наблюдалось.

В настоящем примере было подтверждено, что батроксобин может снизить уменьшение количества BMNC и количества WBC, вызванное циклофосфамидом. Поэтому, понятно, что батроксобин может снизить подавление костного мозга, вызванное циклофосфамидом.

Пример 3

Эффект снижения батроксобином подавления костного мозга, вызванного адриамицином

Использовали подобный тромбину фермент, батроксобин (далее именуемый DF-521), выпускаемый компанией Beijing Tobishi Pharmaceutical Co., Ltd. (Beijing, China) под торговым названием Dong Ling Di Fu.

Использовали противораковое лекарственное средство адриамицин (далее именуемый ADM), который выпускается компанией Hualian Pharmaceutical Factory of Shanghai Pharmaceutical Group Co., Ltd.

Лабораторные животные, мыши C57BL/6 (масса тела: 19-22 г) были разделены на три группы: контрольную группу, группу адриамицина (группу ADM) и группу адриамицина+батроксобина (группу ADM+DF-521), по 5-10 мышей (n=5 или 10) в каждой группе. Контрольной группе однократно через день вводили физиологический раствор. Группе адриамицина внутрибрюшинно однократно через день вводили адриамицин в дозе 3 мг/кг. Группе адриамицина+батроксобина одновременно внутрибрюшинно вводили через день дозы 3 мг/кг адриамицина и 30BU/кг батроксобина. После 9-го введения эксперименты заканчивались, и кровь брали из бедренной артерии под эфирной анестезией, используя в качестве антикоагулянта EDTA. Затем измеряли количество WBC, RBC и уровень Hb.

Кроме того, измеряли количество ядерных клеток костного мозга (BMNC) на бедренную кость мыши следующей процедурой. Образцы костного мозга брали из 2 бедренных костей мыши, костный мозг промывали 2 мл физиологического раствора и готовили суспензию клеток костного мозга. 20 мкл суспензии клеток костного мозга помещали в 380 мкл 3% раствора уксусной кислоты. После разрушения эритроцитов, для подсчета BMNC использовали гемоцитометр под микроскопом. Затем подсчитывали количество BMNC на бедренную кость.

Указанные выше количества BMNC, RBC, WBC и уровень Hb использовали в качестве показателя оценки подавления костного мозга, вызванного адриамицином. Результаты показаны в таблице 4.

Таблица 4 Группа n BMNC
(×10⁶/кость) WBC
(×10⁹/л) RBC
(×10¹²/л) Hb
(г/л) Контроль 5 11,4±1,4 5,4±0,7 9,6±0,2 148,6±2,2 ADM 10 6,9±1,6** 3,4±0,7** 6,6±1,5** 94,9±30,5** ADM+DF-521 10 8,6±1,9**^# 3,5±0,6** 7,5±0,5** 116,5±7,9**^# ** p<0,01, по сравнению с контрольной группой
^#p<0,05, по сравнению с группой ADM

В группе адриамицина все величины BMNC, WBC, RBC и уровень Hb были значительно снижены, по сравнению с контрольной группой (p<0,01). С другой стороны, количество BMNC и уровень Hb в группе адриамицина+батроксобина были значительно выше, по сравнению с группой адриамицина (p<0,05). Кроме того, не было изменения количества WBC в группе адриамицин+батроксобин при сравнении с группой адриамицина. Однако хотя количество RBC в группе адриамицина+батроксобина проявляло тенденцию к повышению, по сравнению с группой адриамицина, между этими двумя группами не было статистически значимого различия.

В настоящем примере было подтверждено, что батроксобин может снизить уменьшение количества BMNC и уровня Hb, вызванное адриамицином. Поэтому, понятно, что батроксобин может снизить подавление костного мозга, вызванное адриамицином.

Пример 4

Эффект снижения батроксобином подавления костного мозга, вызванного цисплатином

Использовали подобный тромбину фермент, батроксобин (далее именуемый DF-521), выпускаемый компанией Beijing Tobishi Pharmaceutical Co., Ltd. (Beijing, China) под торговым названием Dong Ling Di Fu.

Использовали противораковое лекарственное средство цисплатин (далее именуемый DDP), который выпускается компанией Yunnan Gejiu Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd.

Лабораторные животные, самцы мышей C57BL/6 (масса тела: 20-22 г) были разделены на три группы: контрольную группу, группу цисплатина (группу DDP) и группу цисплатина+батроксобина (группу DDP+DF-521), по 10 мышей в каждой группе. Контрольной группе однократно через день вводили физиологический раствор. Группе цисплатина внутрибрюшинно однократно через день вводили цисплатин в дозе 0,8 мг/кг. Группе цисплатина+батроксобина одновременно внутрибрюшинно вводили однократно через день дозы 0,8 мг/кг цисплатина и 30BU/кг батроксобина. После 17-го введения (33 день после первого введения) эксперименты заканчивались, кровь брали из бедренной артерии под эфирной анестезией, используя в качестве антикоагулянта EDTA и измеряли количество WBC, RBC, Plt и уровень Hb.

Кроме того, измеряли количество ядерных клеток костного мозга (BMNC) на бедренную кость мыши следующей процедурой. Образцы костного мозга брали из 2 бедренных костей мыши, костный мозг промывали 2 мл физиологического раствора и готовили суспензию клеток костного мозга. 20 мкл суспензии клеток костного мозга помещали в 380 мкл 3% раствора уксусной кислоты. После разрушения эритроцитов, для подсчета BMNC использовали гемоцитометр под микроскопом. Затем подсчитывали количество BMNC на бедренную кость.

Указанные выше количества BMNC, RBC, WBC, Plt и уровень Hb использовали в качестве показателя оценки подавления костного мозга, вызванного цисплатином. Результаты показаны в таблице 5.

Таблица 5 Группа BMNC
(×10⁶/
кость) WBC
(×10⁹/л) RBC
(×10¹²/л) Hb
(г/л) Plt
(×10⁹/л) Контроль 16,8±3,4 6,4±1,7 7,6±0,6 114,3±10,6 1474,0±193,0 DDP 11,3±2,6** 6,1±2,2 7,4±0,8 121,6±10,7 1059,2±241,5** DDP+DF-521 14,7±3,6^# 5,8±1,3 8,2±0,3*^## 134,0±5,2**^## 1280,6±167,4*^# *p<0,05, по сравнению с контрольной группой
** p<0,01, по сравнению с контрольной группой
^#p<0,05, по сравнению с группой DDP
^##p<0,01, по сравнению с группой DDP

В группе цисплатина величины BMNC и Plt были значительно снижены, по сравнению с контрольной группой (p<0,01). Но количество WBC, RBC и уровень Hb в группе цисплатина не изменялись по сравнению с контрольной группой. С другой стороны, величины BMNC и Plt группы цисплатин+батроксобин были значительно выше, чем величины BMNC и Plt группы цисплатина (р<0,05). Однако хотя количество RBC и уровень Hb в группе цисплатина+батроксобина были значительно выше, чем в группе цисплатина (р<0,05 и р<0,01), не было различий в величинах WBC между группой цисплатин+батроксобин и группой цисплатина.

В настоящем примере было подтверждено, что батроксобин может снизить уменьшение количества BMNC и Plt, вызванное цисплатином. Поэтому, понятно, что батроксобин может снизить подавление костного мозга, вызванное цисплатином.

Пример 5

Эффект снижения батроксобином кардиотоксичности, вызванной адриамицином

Использовали подобный тромбину фермент, батроксобин (далее именуемый DF-521), выпускаемый компанией Beijing Tobishi Pharmaceutical Co., Ltd. (Beijing, China) под торговым названием Dong Ling Di Fu.

Использовали противораковое лекарственное средство адриамицин (далее именуемый ADM), который выпускается компанией Shenzhen Main Luck Phamaceuticals Ltd.

Лабораторные животные, самцы мышей C57BL/6 (масса тела: 16-18 г) были разделены на четыре группы: 10 мышей в контрольной группе, 7 мышей в группе батроксобина, 7 мышей в группе адриамицина и 7 мышей в группе адриамицин+батроксобин. Мышам из каждой группы инокулировали подкожной инъекцией в дорсальную правую латеральную область 3×10⁶ клеток мышиной злокачественной меланомы B16-BL6 в 0,3 мл суспензии опухолевых клеток. После одного дня инокуляции опухолевых клеток, контрольной группе делали внутрибрюшинную инъекцию физиологического солевого раствора 1 раз в день; группе батроксобина 1 раз в день делали внутрибрюшинную инъекцию батроксобина (20BU/кг); группе адриамицина один раз в день с интервалом 2 дня делали внутрибрюшинную инъекцию адриамицина (3 мг/кг); группе адриамицина + батроксобина один раз в день с интервалом 2 дня делали внутрибрюшинную инъекцию адриамицина (3 мг/кг) и внутрибрюшинную инъекцию батроксобина 20BU/кг 1 раз в день после введения адриамицина. После 20 последовательных дней введения, сердца в каждой группе иссекали под эфирной анестезией. После фиксации сердечных тканей формалином, делали залитые в парафин срезы и проводили окрашивание гематоксилином-эозином (H&E). Проводили патоморфологические исследования окрашенных срезов ткани под световым микроскопом.

В ткани миокарда левого желудочка группы батроксобина (фиг. 2) патология при сравнении с тканью миокарда левого желудочка контрольной группы не наблюдалась.

С другой стороны, в ткани миокарда левого желудочка группы адриамицина (фиг. 3) при сравнении с контрольной группой наблюдались патологические изменения. В частности, имелось нарушение расположения клеток миокарда, и наблюдалась патологическая ткань, называемая полосами сокращения (стрелка А). В полосе сокращения некоторые клетки миокарда были сильно сокращены, приводя к агглютинации, с приобретением подобного волне расположения, исчезла обычная структура полосатости, а вместо этого, образовался ацидофильный толстый пояс со структурой патологического интервала миокардиальных клеток. Кроме того, во многих миокардиальных клетках произошел лизис или потеря миоплазмы, и окрашивание цитоплазмы стало бледным. Кроме того, в клетках миокарда развился клеточный отек или произошла ацидофильная дегенерация и некроз (стрелка В), межклеточное пространство расширилось, и возник отек (стрелка С) в строму клеток миокарда. Такие аномалии вызывают миокардиопатии, которые ведут к застойной сердечной недостаточности и, таким образом, служат в качестве показателя кардиотоксичности.

Напротив, в ткани миокарда левого желудочка (фиг. 4) группы адриамицина + батроксибина не было интерстициального отека или образования полосы сокращения, наблюдавшейся в группе адриамицина. Кроме того, хотя в небольшом числе клеток миокарда было получено растворение цитоплазмы (стрелка), ацидофильная дегенерация наблюдалась редко.

В настоящем примере было подтверждено, что степень аномалии в тканях миокарда в группе адриамицина + батроксобина была меньшей, чем в группе адриамицина. Поэтому, понятно, что батроксобин может снизить кардиотоксичность, вызванную адриамицином.

Промышленная применимость

Средство по настоящему изобретению может значительно снизить побочный эффект противоракового лекарственного средства. Поэтому, средство по настоящему изобретению может применяться при лечении рака с использованием противоракового лекарственного средства.

Группа изобретений относится к медицине и касается средства для снижения побочного эффекта противоракового лекарственного средства, где средство содержит подобный тромбину фермент, а также к способу снижения побочного эффекта и к применению. Тромбиноподобный фермент представляет собой протеазу, которая генерирует фибрин I из фибриногена, в частности батроксобин. Группа изобретений обеспечивает эффективное снижение побочных эффектов, таких как подавление костного мозга или кардиотоксичность. 3 н. и 12 з.п. ф-лы, 5 пр., 4 ил., 5 табл.

1. Средство для снижения побочного эффекта противоракового лекарственного средства, где средство содержит подобный тромбину фермент.

2. Средство для снижения побочного эффекта по п.1, где подобный тромбину фермент представляет собой протеазу, которая генерирует фибрин I из фибриногена.

3. Средство для снижения побочного эффекта по п.1, где подобный тромбину фермент выбран из группы, состоящей из батроксобина, анкрода и кроталазы.

4. Средство для снижения побочного эффекта по п.1, где подобный тромбину фермент представляет собой батроксобин.

5. Средство для снижения побочного эффекта по п.1, где противораковое лекарственное средство представляет собой цитотоксическое противораковое средство.

6. Средство для снижения побочного эффекта по п.5, где цитотоксическое противораковое средство выбрано из группы, состоящей из алкилирующего лекарственного средства, противоракового антибиотика и лекарственного средства на основе платины.

7. Средство для снижения побочного эффекта по п.5, где цитотоксическое противораковое средство выбрано из группы, состоящей из циклофосфамида, адриамицина и цисплатина.

8. Средство для снижения побочного эффекта по п.1, где побочный эффект представляет собой подавление костного мозга или кардиотоксичность, вызванную противораковым лекарственным средством.

9. Средство для снижения побочного эффекта по п.1, где побочный эффект представляет собой подавление костного мозга, вызванное цитотоксическим противораковым лекарственным средством.

10. Средство для снижения побочного эффекта по п.9, где цитотоксическое противораковое лекарственное средство выбрано из группы, состоящей из алкилирующего лекарственного средства, противоракового антибиотика и лекарственного средства на основе платины.

11. Средство для снижения побочного эффекта по п.9, где цитотоксическое противораковое лекарственное средство выбрано из группы, состоящей из циклофосфамида, адриамицина и цисплатина.

12. Средство для снижения побочного эффекта по п.1, где побочный эффект представляет собой кардиотоксичность, вызванную противораковым антибиотиком.

13. Средство для снижения побочного эффекта по п.12, где противораковый антибиотик представляет собой адриамицин.

14. Способ снижения побочного эффекта противоракового лекарственного средства у индивидуума, включающий введение индивидууму эффективного количества подобного тромбину фермента.

15. Применение подобного тромбину фермента для получения средства для снижения побочного эффекта противоракового лекарственного средства.