ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Изобретение относится к терапевтическому средству для лечения заболевания нижних мочевых путей, где средство включает тромбиноподобный фермент и средство для улучшения симптома нижних мочевых путей, связанного с заболеванием нижних мочевых путей, где средство включает тромбиноподобный фермент.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Нижние мочевые пути состоят из мочевого пузыря и уретры. Нижние мочевые пути выполняют функцию сбора мочи в мочевом пузыре и функцию выделения собранной мочи. В 2002 г. Международное общество по проблемам регуляции функции мочевого пузыря предложило обозначить нарушение нижних мочевых путей как дисфункция нижних мочевых путей и обозначить различные симптомы, вызванные дисфункцией нижних мочевых путей как симптомы нижних мочевых путей.
Симптомы нижних мочевых путей разделяют в общих чертах на 3 категории: симптомы накопления, симптомы опорожнения и постмиктурические симптомы (Abrams P et al.: The Standardisation of Terminology of Lower Urinary Tract Function. Neurourology and Urodynamics 21:167-178, 2002). Симптомы накопления представляют собой симптомы, при которых моча не накапливается в мочевом пузыре, или, что известно, как частое мочеиспускание (поллакиурия) или недержание мочи.
Следующие примеры симптомов накопления включены в описание ниже.
1) Учащенное мочеиспускание в дневное время: выделение мочи в дневное время происходит слишком часто.
2) Никтурия: субъект может просыпаться один или более раз в течение ночи, чтобы опорожнить мочевой пузырь.
3) Ургентность: внезапный непреодолимый позыв на мочеиспускание, который сложно отложить.
4) Недержание мочи: непроизвольное подтекание мочи.
5) Императивное недержание мочи: непроизвольное подтекание мочи, сопровождаемое ургентностью или с предшествующей ургентностью.
6) Стрессовое недержание мочи: непроизвольное подтекание мочи, которое происходит при повышении внутрибрюшного давления или при кашле и чихании.
7) Смешанное недержание мочи: имеет место комбинация императивного недержания мочи и стрессового недержания мочи.
Симптомы опорожнения имеют место во время фазы опорожнения, и указываются как симптомы, при которых затруднено опорожнение. В частности, включены следующие симптомы.
l) Медленная струя: уменьшенный поток мочи.
2) Разбрызгивание: струя мочи расщепляется.
3) Прерывистая струя: струя мочи останавливается и начинается более чем один раз во время мочеиспускания.
4) Затрудненное начало мочеиспускания: задержка начала опорожнения после того, как субъект готов помочиться.
5) Напряжение: необходимо увеличение внутрибрюшного давления, чтобы инициировать, поддерживать или исправить струю мочи.
6) Заключительное капание: окончание мочеиспускания продлевается, и струя мочи замедляется до капания.
Симптомы после мочеиспускания представляют собой симптомы, наблюдаемые непосредственно после мочеиспускания. Конкретные примеры включают следующее.
l) Чувство неполного опорожнения: чувство, что мочевой пузырь не полностью опорожнен после мочеиспускания.
2) Капание после мочеиспускания: непроизвольное выделение мочи непосредственно после опорожнения; у мужчин данный симптом проявляется непосредственно после выхода из туалета, тогда как у женщин данный симптом проявляется после вставания с унитаза.
Кроме того, боль в урогенитальной области и боль в области нижних мочевых путей упоминаются в категории симптомов нижних мочевых путей, в качестве симптомов наряду с упомянутыми выше симптомами накопления, симптомами опорожнения и симптомами после мочеиспускания в приведенной выше статье (Abrams P et al.: The Standardisation of Terminology of Lower Urinary Tract Function. Neurourology and Urodynamics 21:167-178, 2002).
Исходя из упомянутой выше статьи, примеры боли в области нижних мочевых путей включают следующие симптомы:
1) Боль в области мочевого пузыря: боль ощущается в надлобковой области и залобковой области. Боль в области мочевого пузыря обычно увеличивается с наполнением мочевого пузыря и может сохраняться после мочеиспускания.
2) Уретральная боль: боль ощущается в уретральной области.
Заболевание нижних мочевых путей обычно означает все заболевания, которые вызывают симптом нижних мочевых путей, и включает различные функциональные нарушения и заболевания мочевого пузыря, предстательной железы и уретры. В частности, заболевания у женщин возникают в таких областях как мочевой пузырь и уретра, тогда как заболевания у мужчин возникают в таких областях как мочевой пузырь, уретра и также в предстательной железе.
Заболевания мочевого пузыря включают, например, неосложненный цистит, геморрагический цистит, интерстициальный цистит, склероз шейки мочевого пузыря, нейрогенный мочевой пузырь, сморщенный мочевой пузырь, гиперактивный мочевой пузырь, недостаточно активный мочевой пузырь и другие заболевания мочевого пузыря.
Заболевания предстательной железы включают, например, острый или хронический бактериальный простатит, хронический небактериальный простатит, доброкачественная гиперплазия предстательной железы, другие заболевания предстательной железы и т.п.
Заболевания уретры включают, например, уретрит и уретростеноз и другие заболевания уретры.
Цистит относится к инфекционному или неинфекционному воспалению, которое возникает, главным образом, в мембране слизистой оболочки мочевого пузыря и подслизистой ткани. Клинически наблюдают симптомы накопления, симптомы опорожнения, симптомы после мочеиспускания и боль в области нижних мочевых путей. Обычно на основе клинического течения цистит разделяют на острую и хроническую форму. В зависимости от наличия или отсутствия обструктивного заболевания нижних мочевых путей цистит классифицируют на неосложненный цистит и осложненный цистит. Обычно неосложненный цистит протекает остро и хорошо отвечает на лечение противомикробными препаратами. Осложненный цистит протекает хронически и часто не вполне отвечает на лечение противомикробными препаратами и, соответственно, в ряде случаев обозначается как трудноизлечимый цистит. Трудноизлечимый цистит включает геморрагический цистит, интерстициальный цистит, бактериальный трудноизлечимый цистит и эозинофильный цистит (Schaeffer AJ et al.: Chapter 8 Infections of the Urinary Tract, Bladder Infectios Uncomplicated Cystitis, in Campbell-Walsh Urology, 9th ed.: Elsevier, Philadelphia 254-259, 2007).
Геморрагический цистит, который имеет симптомы цистита, характеризуется, прежде всего, наличием тяжелой гематурии. Геморрагический цистит может быть вызван несколькими различными путями. Главными причинами являются:
1) вирусы, такие как аденовирус и вирус гриппа;
2) микроорганизмы, включающие бактерии, такие как Escherichia coli, Proteus и Pseudomonas aeruginosa;
3) химическое раздражение противораковыми препаратами, такими как циклофосфамид;
4) физическое раздражение при воздействии радиации и т.п.
Интерстициальный цистит представляет собой заболевание мочевого пузыря, при котором главные жалобы включают неотложный позыв к мочеиспусканию, поллакиурия, боль внизу живота, и другие жалобы включают неполное опорожнение мочевого пузыря, чувство дискомфорта и беспокойства. Считают, что причины заболевания связаны с нарушениями лимфатической системы, хроническими инфекционными заболеваниями, нарушениями нервной системы, психическими расстройствами, аутоиммунными заболеваниями, поражением защитного механизма мочевого пузыря, с тучными клетками и т.д. Однако точная этиология неизвестна (Hanno PM et al.; Chapter 10 Painful Bladder Syndrome/Interstitial cystitis and Related Disorders, in Campbell-Walsh Urology, 9th ed. Elsevier, Philadelphia 330-349, 2007).
Типичной формой бактериального трудноизлечимого цистита является туберкулез мочевого пузыря. Туберкулез мочевого пузыря характеризуется отчетливыми симптомами цистита и пиурии; и общепринятые антибактериальные препараты являются неэффективными при его лечении. Для диагностики туберкулеза мочевых путей используют краску для прокрашивания кислотоустойчивых бактерий и культуры туберкулезных бактерий. Цистоскопическое исследование выявляет отчетливые желтые уплотненные узелки и по данному признаку диагностируют туберкулез мочевого пузыря. Эффективным является лечение путем введения туберкулостатического средства.
Эозинофильный цистит характеризуется симптомами, сходными с симптомами острого бактериального цистита и пиурии. Однако культура мочи является отрицательной и антибактериальные препараты не эффективны. Данное патологическое состояние вызывается аллергической реакцией на препараты с противоаллергическими свойствами. Типичные примеры таких препаратов включают траниласт. Но другие противоаллергические препараты также могут вызывать цистит. Пиурия включает, главным образом, эозинофилы. Но если эозинофилы отсутствуют, могут быть представлены полинуклеарные лейкоциты и лимфоциты. Эозинофильный цистит может быть облегчен путем отмены препаратов, которые вызывают симптомы. Однако если симптомы сложно облегчить, то проводят введение стероидов.
Острый простатит вызывается, преимущественно, бактериальным воспалением. Типичные примеры бактерий, вызывающих воспаление, включают грамотрицательные палочковидные бактерии, в частности Escherichia coli. Если пациент, имевший в анамнезе инфекции мочевых путей, заболевает острым простатитом, то вызывающие воспаление бактерии заболевания представляют собой грамотрицательные палочковидные бактерии, такие как Pseudomonas aeruginosa и Serratia, аналогичным образом как и, так называемые, осложненные инфекции мочевых путей. Кроме того, бактерии, вызывающие воспаление, могут быть представлены Enterococcus и Staphylococcus aureus, хотя их встречаемость невысока. Обычно симптомы включают боль в области нижних мочевых путей и высокую температуру, сопровождающуюся ознобом и лихорадкой. Данное заболевание представляет собой патологическое состояние, которое может быть легко диагностировано по увеличению предстательной железы, болезненности и по результатам исследования мочи (Nickel JC et al.: Chapter 23 prostatitis, Orchitis, and Epididymitis prostatitis, in diseases of the Kidney and Urinary Tract, 8th ed. Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, 634-649, 2007).
Хронический простатит разделяют на хронический бактериальный простатит и хронический небактериальный простатит. В клинической практике представлены симптомы опорожнения, симптомы после мочеиспускания и боль в области нижних мочевых путей. В тяжелых случаях поражается способность к удерживанию мочи и наблюдаются симптомы накопления. Считают, что путь инфекции при хроническом бактериальном простатите повторяет аналогичный путь инфекции при остром простатите: во-первых, когда острый простатит становится хроническим и, во-вторых, когда исходно развивается хронический бактериальный простатит. Симптомы представляют собой симптомы раздражения, которые появляются во время мочеиспускания, такие как поллакиурия, чувство неполного опорожнения и боль в области нижних мочевых путей. Степень выраженности указанных симптомов ниже, чем в острой стадии. Случаи хронического небактериального простатита встречаются очень часто, тем не менее, причины заболевания не вполне понятны. Хронический небактериальный простатит нельзя отличить от бактериального простатита, исходя из симптомов и пальпации предстательной железы. В тех случаях, когда не наблюдают предшествующую инфекцию мочевых путей, и анализ мочи и жидкости, полученной после массажа предстательной железы не подтверждает наличия бактерий, хронический небактериальный простатит диагностируют по наличию лейкоцитов (Nickel JC et al.: Chapter 23 Hrostatitis, Orchitis, and Epididymitis: Prostatis, in Diseases of the Kidney and Urinary Tract, 8th ed. Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, 634-649, 2007).
Доброкачественная гиперплазия предстательной железы обозначает патологическое состояние, при котором возрастная гипофункция предстательной железы вызывает образование фиброзно-мышечных или железистых узлов на железах, окружающих уретру. Указанные узлы постепенно увеличиваются, вызывая общее увеличение предстательной железы. Доброкачественная гиперплазия предстательной железы представляет собой заболевание с доброкачественным течением. Но если заболевание прогрессирует, что обуславливает увеличение предстательной железы, то заболевание вызывает непроходимость мочевых путей, что приводит к дисфункциям нижних мочевых путей и к почечным дисфункциям. Клинически симптомы доброкачественной гиперплазии предстательной железы преимущественно включают симптомы опорожнения, симптомы после мочеиспускания и боль в области нижних мочевых путей. В тяжелых случаях поражается накопительная способность мочевого пузыря, и наблюдаются симптомы накопления мочи.
В последние годы в результате старения общества симптомы нижних мочевых путей и боль в области нижних мочевых путей создает значительные проблемы в уходе за больными и в лечебной работе. Считают, что симптомы нижних мочевых путей и боль в области нижних мочевых путей могут быть вызваны сложными причинами, такими как цереброваскулярные заболевания и нейродегенеративные заболевания, а также заболеваниями нижних мочевых путей.
До настоящего времени уже применялись некоторые терапевтические средства для лечения заболеваний нижних мочевых путей. Например, имеются альфа-1 блокаторы, которыми лечат гипофункцию мочеиспускания и доброкачественную гиперплазию предстательной железы, такие как тамсулозин и нафтопидил; антихолинергетики, которыми лечат поллакиурию и недержание мочи, такие как гидрохлорид оксибутина и гидрохлорид пропиверина; и релаксанты гладкой мускулатуры, которыми лечат поллакиурию и неотложный позыв к мочеиспусканию, такие как гидрохлорид флавоксата и т.п. (Zermann DH et al.; Chapter 22, Disorders of Urination: Treatment of Lower Urinary Tract Dysfunction, in diseases of the Kidney and Urinary Tract, 8th ed., Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, 621-625, 2007).
В последние годы описано соединение, которое обладает аффинностью в отношении рецептора 5-HT1A и является эффективным в лечении/предотвращении заболевания нижних мочевых путей (патент США № 5990114). Сообщалось также, что производное тетрагидроксоизохинолина, которое представляет собой средство, которое угнетает капсаицин-чувствительный сенсорный нерв, эффективно при интерстициальном цистите, гиперчувствительности нижних мочевых путей и небактериальном простатите (Патент США 7335668).
Однако с точки зрения эффективности и безопасности создание нового терапевтического средства для лечения заболевания нижних мочевых путей и нового средства для улучшения симптома нижних мочевых путей остается по-прежнему необходимым.
РАСКРЫТИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Целью настоящего изобретения является предоставление нового терапевтического средства для лечения заболевания нижних мочевых путей и средства для улучшения симптома нижних мочевых путей, которые являются превосходными по эффективности и безопасности. Хотя авторы настоящего изобретения проверили эффективность различных лекарств для лечения заболеваний нижних мочевых путей, авторы изобретения обнаружили, что тромбиноподобный фермент оказывает заметные терапевтические эффекты на заболевание нижних мочевых путей и положительные эффекты по улучшению симптома нижних мочевых путей, связанного с заболеваниями нижних мочевых путей. Настоящее изобретение выполнено на основе упомянутых выше заключений.
То есть настоящее изобретение предоставляет собой терапевтическое средство для лечения заболевания нижних мочевых путей, где средство включает тромбиноподобный фермент, и средство для улучшения симптома нижних мочевых путей, связанного с заболеванием нижних мочевых путей, где средство включает тромбиноподобный фермент.
Как показано в Примерах ниже, терапевтическое средство настоящего изобретения для лечения заболевания нижних мочевых путей, включающий тромбиноподобный фермент, может лечить различные заболевания нижних мочевых путей, такие как цистит, простатит и доброкачественная гиперплазия предстательной железы и может улучшать симптом нижних мочевых путей, связанный с указанными заболеваниями. Соответственно, проблемы, связанные с симптомами нижних мочевых путей, которые возникают при уходе и клиническом наблюдении, могут быть преодолены при использовании настоящего изобретения.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Фиг. 1 представляет собой микрофотографию (x40) группы, в которой имитировали операцию, в эксперименте с хроническим небактериальным простатитом.
Фиг. 2(A) представляет собой микрофотографию (x40) группы смоделированного заболевания в эксперименте с хроническим небактериальным простатитом. Стрелка, направленная вправо, указывает на инфильтрацию нейтрофилами полости железы.
Фиг. 2(B) представляет собой микрофотографию (x40), полученную в группе смоделированного заболевания в эксперименте с хроническим небактериальным простатитом. Стрелка, направленная вправо, указывает на инфильтрацию стромы плазмоцитами и лимфоцитами.
Фиг. 3 представляет собой микрофотографию (x40), полученную в группе DF-521 30 BU/кг, в эксперименте с хроническим небактериальным простатитом. Стрелка, направленная вправо, указывает на уменьшение инфильтрации нейтрофилами полости железы. Стрелка, направленная влево, указывает на уменьшение инфильтрации стромы лимфоцитами и плазмоцитами.
Фиг. 4 представляет собой микрофотографию (x40), полученную в группе с имитацией операции в эксперименте с доброкачественной гиперплазией предстательной железы.
Фиг. 5(A) представляет собой микрофотографию (x40), полученную в группе с моделью заболевания, в эксперименте с доброкачественной гиперплазией предстательной железы. Стрелка, направленная вправо, показывает сосочкоподобное утолщение в эпителиальных железах.
Фиг. 5(B) представляет собой микрофотографию (x40), полученную в группе смоделированного заболевания в эксперименте с доброкачественной гиперплазией предстательной железы. Стрелка, направленная влево, показывает пролиферацию и фиброз в строме.
Фиг. 6 представляет собой микрофотографию (x40) группы DF-521 30 BU/кг в эксперименте с доброкачественной гиперплазией предстательной железы. Стрелка, направленная вправо, показывает уменьшение сосочкоподобного утолщения в железистом эпителии. Стрелка, направленная влево, показывает уменьшенную пролиферацию и фиброз в строме.
НАИЛУЧШИЙ СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В дальнейшем настоящее изобретение будет объяснено в деталях.
Следует понимать, что в описании используют термины, которые имеют значения, обычно применяемые в данной области техники, если не указано иное. Поэтому, если не указано иначе, все технические термины и научные термины, которые используют в описании, имеют такие же значения, как значения, обычно понимаемые специалистом в области техники, к которой относится настоящее изобретение. Если значение термина, определяемое в описании, отличается от обычно используемого в данной области техники значения, предпочтительно следует использовать значение, определяемое в описании, а не значение, обычно используемое в данной области техники.
Определения терминов, применяемых в настоящем описании, приведены ниже.
Термин "тромбиноподобный фермент", применяемый в описании, относится к протеазе другой, чем тромбин, которая обладает свойством коагулирования фибриногена. Конкретные примеры тромбиноподобного фермента включают батроксобин, анкрод, кроталазу, флавоксобин, асперазу, акутин, ботропазу, клотазу, габоназу, вензим и т.п. Тромбиноподобные ферменты классифицируют на 3 категории, исходя из места расщепления в субстрате, фибриногене: (i) протеаза (такая как батроксобин, анкрод и кроталаза), которая высвобождает только фибринопептид A из фибриногена с образованием фибрина I; (ii) протеаза (такая как габоназа) которая высвобождает фибринопептид A и фибринопептид B из фибриногена с образованием фибрина II, который также называют фибрином; и (iii) протеаза (такая как вензим), которая преимущественно высвобождает фибринопептид B из фибриногена.
В описании термин "фибрин I" относится к мономеру, образующемуся, если из фибриногена высвобождается только фибринопептид A. Указанный фибрин I также называют дез-A фибрин. Кроме того, термин "фибринопептид A" представляет собой пептид, соответствующий 16 аминокислотам на NH2-конце цепи Aa фибриногена.
Кроме того, в описании батроксобин, анкрод, кроталаза, флавоксобин, аспераза, акутин и т.п. упоминаются в качестве примера протеазы, которая образует фибрин I из фибриногена.
Предпочтительный тромбиноподобный фермент настоящего изобретения содержит батроксобин, анкрод и кроталазу (Stocker KF: Snake venom proteins affecting hemostasis and fibrinolysis, in Medical Use of Snake Venom Proteins, Stocker KF, ed., CRC Press, Boston, p.130-131; 1990).
Батроксобин представляет собой тромбиноподобный фермент, полученный из яда Bothrops atrox moojeni, и гликопротеин с молекулярным весом приблизительно 36000 Da. Батроксобин высвобождает фибринопептид A из фибриногена с образованием фибрина I (Aronson DL: Comparison of the actions of thrombin and the thrombiirlike venom enzymes Ankord and Batroksobin. Thrombos Haemostas (stuttg) 36:9-13, 1976). Кроме того, первичная структура батроксобина уже определена, батроксобин представляет собой одноцепочечный гликопротеин, состоящий из 231 аминокислот (I toll N et al: Molecular cloning and sequence analysis of cDNA for Batroksobin, a thrombin-like snake venom enzyme. J Biol Cliem 262: 3132-3135, 1987).
Тромбин и батроксобин представляют собой ферменты, сходные по своей гликопротеиновой структуре. Однако тромбин отличается от батроксобина по участкам расщепления в фибриногене. Батроксобин высвобождает только фибринопептид A из фибриногена с образованием фибрина I. Однако тромбин высвобождает из фибриногена не только фибринопептид A, но также и фибринопептид B с образованием фибрина (известный как фибрин II). Кроме того, батроксобин не действует на другие факторы коагуляции за исключением фибриногена, тогда как тромбин оказывает воздействие на другие факторы коагуляции помимо фибриногена.
Батроксобин является известным веществом, и может быть получен по способу, описанному в патенте США № 4137127. Батроксобин может быть получен от Tobishi Pharmaceuticals Co., Ltd (Tokyo, Japan) или от дочерних компаний, Beijing Tobishi Pharmaceuticals Co., Ltd. (Beijing, China).
Анкрод представляет собой тромбиноподобный фермент, полученный из яда Agkistrodon rhodostoma, и гликопротеин с молекулярным весом приблизительно 35400 Da. Анкрод похож на батроксобин в том отношении, что они оба являются тромбиноподобными ферментами, которые высвобождают только фибринопептид A из фибриногена с образованием фибрина I (Stocker KF: Snake venom proteins affecting hemostasis and fibrinolysis, in Medical Use of Snake Venom Proteins, Stacker KF, ed., CRC Press, Boston, p.134-135; 1990).
Кроталаза представляет собой тромбиноподобный фермент, полученный из яда Crotalus adamanteus, и гликопротеин с молекулярным весом приблизительно 32700 Da. Кроталаза сходна с батроксобином в том отношении, что они оба являются тромбиноподобными ферментами, которые высвобождают только фибринопептид A из фибриногена с образованием фибрина I (Stocker KF: Snake venom proteins affecting hemostasis and fibrinolysis, in Medical Use of Snake Venom Proteins, Stocker KF, ed., CRC Press, Boston, p.l40-14l; 1990).
Среди упомянутых выше тромбиноподобных ферментов особенно предпочтительным является батроксобин. Тромбиноподобные ферменты, упомянутые выше, такие как батроксобин, анкрод и кроталаза, в настоящем изобретении могут представлять собой естественный продукт или генетический рекомбинантный продукт.
"Заболевание нижних мочевых путей", которое является мишенью настоящего изобретения, относится ко всем заболеваниям, которые вызывают симптомы нижних мочевых путей. Примеры включают заболевание или функциональное нарушение и т.д. мочевого пузыря, предстательной железы и уретры.
Примерами заболевания мочевого пузыря являются цистит, склероз шейки мочевого пузыря, нейрогенный мочевой пузырь, атрофический мочевой пузырь, гиперактивный мочевой пузырь, недостаточно активный мочевой пузырь и т.п. Конкретные примеры цистита представляют собой неосложненный цистит, геморрагический цистит, интерстициальный цистит и т.п. Заболевания предстательной железы представляют собой простатит, доброкачественную гиперплазию предстательной железы и т.п. Конкретные примеры простатита представляют собой острый или хронический бактериальный простатит, хронический небактериальный простатит и т.п.
Примеры заболеваний уретры представляют собой уретрит и уретростеноз.
Из указанных заболеваний с помощью настоящего изобретения предпочтительно лечат цистит, простатит и доброкачественную гиперплазию предстательной железы. Кроме того, с помощью настоящего изобретения наиболее предпочтительно лечат геморрагический цистит, интерстициальный цистит, хронический небактериальный простатит и доброкачественную гиперплазию предстательной железы.
Настоящее изобретение может быть использовано для лечения заболевания нижних мочевых путей. Термин "терапевтический" включает не только лечение заболевания, но также прекращение прогрессирования заболевания и предотвращение его проявления.
"Симптом нижних мочевых путей, который ассоциирован с заболеваниями нижних мочевых путей", который является мишенью настоящего изобретения, относится ко всем симптомам, которые вызваны заболеванием нижних мочевых путей. Конкретные примеры представляют собой симптомы накопления, симптомы опорожнения, симптомы после мочеиспускания, боль в области нижних мочевых путей и т.п.
Симптомы накопления представляют собой увеличенную частоту мочеиспускания в дневное время, никтурию, ургентность (императивные позывы на мочеиспускание), недержание мочи, ургентное недержание мочи, стрессовое недержание мочи, смешанное недержание мочи и т.п.
Симптомы опорожнения представляют собой медленное течение, расщепление струи, прерывающуюся струю, затрудненное начало мочеиспускания, напряжение, подтекание мочи каплями после завершения мочеиспускания и т.п.
Симптомы после мочеиспускания представляют собой чувство неполного опорожнения, капание мочи после мочеиспускания и т.п.
Кроме того, примеры боли в области нижних мочевых путей представляют собой боль в области мочевого пузыря, уретральную боль и т.п.
Настоящее изобретение может улучшить симптомы нижних мочевых путей, которые ассоциированы с заболеванием нижних мочевых путей. Термин "улучшение" включает не только полное снятие симптомов, но и облегчение симптомов, ослабление ухудшения симптомов, предотвращение появления, улучшение качества жизни (QOL) и т.п.
Любая композиция Японской фармакопеи общих правил лекарственных препаратов может быть применена для композиции настоящего средства. Примеры представляют собой инъекции для непосредственного введения внутрь организма (включая суспензии и эмульсии); мази (включая жирные мази, эмульсионные мази (кремы), водорастворимые мази и т.п.), средства для ингаляций, жидкости (включая офтальмические растворы, растворы для орошения полости носа, и т.п.), суппозитории, пластыри, припарки, примочки и другие композиции для наружного применения, и композиции для внутреннего применения, включающие таблетки (включая покрытые сахаром, пленкой и желатином), жидкости, капсулы, гранулы, порошки (включая граны), пилюли, сиропы, пастилки и т.п. Указанные композиции могут быть приготовлены способами, описанными в Японской фармакопее общих правил приготовления лекарственных препаратов и т.п.
Кроме того, настоящее средство может содержать фармацевтически приемлемый твердый или жидкий носитель или основу для интервенционной терапии в соответствии с ее фармацевтической дозированной формой. Примерами фармацевтически приемлемого твердого или жидкого носителя являются растворитель, стабилизатор, консервант, солюбилизирующий компонент, эмульсификатор, суспендирующее средство, буферное вещество, изотонирующее средство, окрашивающая добавка, загуститель, наполнитель, умягчитель, связующее средство, дезинтегрирующее средство, покрывающее средство, корригирующее вещество и т.п. Конкретные примеры носителя включают воду, лактозу, сахарозу, фруктозу, глюкозу, маннитол, сорбитол и другие сахара и сахарные спирты, кристаллическую целлюлозу, метилцеллюлозу, этилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу с низкой степенью замещения, гидроксипропилметилцеллюлозу, фталат гидроксипропилметилцеллюлозы, сукцинат ацетата гидроксипропилметилцеллюлозы, кармеллозу, кармеллозу кальция, кармеллозу натрия, кроскармеллозу натрия, карбоксиметилэтилцеллюлозу, ацетатфталат целлюлозы и другие целлюлозы и родственные соединения, кукурузный крахмал, пшеничный крахмал, рисовый крахмал, картофельный крахмал, декстрин, пептизированный крахмал, частично пептизированный крахмал, гидроксипропилкрахмал, карбоксиметилкрахмал натрия, циклодекстрин, пуллулан и другие крахмалы и родственные соединения, агар, альгинат натрия, камедь, желатин, коллаген, шеллак, трагакант, ксантановую смолу (натуральную) и другие натуральные полимеры (водоросли, растительная камедь, белки и т.п.), поливинилпирролидон, сополимер аминоалкил/метакрилата, сополимер метакриловой кислоты, карбоксивиниловый полимер, поливиниловый спирт, диметилполисилоксан и другие синтетические полимеры, оливковое масло, масло какао, карнаубский воск, говяжий жир, гидрогенезированное масло, соевое масло, кунжутное масло, масло камелии, парафин, вазелиновое масло, желтый пчелиный воск, медицинский вазелин, кокосовое масло, микрокристаллический парафин и другие масла и жиры, стеариновую кислоту, стеарат алюминия, стеарат кальция, стеарат магния, триэтилцитрат, триацетин, триглицериды со средней длиной цепи, твердый жир, изопропилмиристат и другие жирные кислоты и их производные, глицерин, стеариловый спирт, цетанол, пропиленгликоль, макрогол и другие спирты и поливалентные спирты, оксид цинка, двухосновный фосфат кальция, осажденный карбонат кальция, синтетический силикат алюминия, кремниевый ангидрид, каолин, сухой гель гидроокиси алюминия, синтетический гидроталькит, оксид титана, тальк, бентонит, алюмометасиликат магния, калиево-алюминиевые квасцы, основный галловокислый висмут, висмут субсалицилат, лактат кальция, бикарбонат натрия и другие неорганические вещества и соединения солей металлов, эфир сахарозы и жирной кислоты, полиоксилстеарат, полиоксиэтилен-гидрогенизованное касторовое масло, полиоксиэтилен-полиоксипропиленгликоль, сорбитансесквиолеат, сорбитантриолеат, сорбитанмоностеарат, сорбитанмонопальмитат, сорбитанмонолаурат, полисорбат, глицерилмоностеарат, лаурилсульфат натрия, лауромакрогол и другие сурфактанты, красители, отдушки и т.п.
Примеры носителей для интервенционной терапии включают стенты, искусственные кровеносные сосуды, катетер, баллон и т.п.
Вводимая доза и количество настоящего средства обычно изменяется в зависимости от типа тромбиноподобного фермента, веса пациента, свойств и состояний заболевания, и составляет, например, 0,1-50 единиц активности батроксобина (здесь и далее обозначенных как BU), в качестве тромбиноподобного фермента может быть введено один раз в день в случае взрослого человека. Предпочтительная доза для взрослого человека представляет собой дозу, принимаемую один раз в два дня (одна доза составляет 1-20 BU). В случае препаратов для наружного применения доза составляет 0,01-500 мг на грамм.
Единица активности батроксобина представляет собой единицу, показывающую ферментативную активность батроксобина; причем 2 BU соответствуют активности, необходимой для достижения коагуляции в течение 19,0±0,2 секунд, если 0,1 мл раствора батроксобина добавляют к 0,3 мл стандартной плазмы человека, содержащей лимонную кислоту, при 37°C.
Кроме того, если тромбиноподобный фермент, анкрод, вводят взрослому человеку один раз в день, обычная доза составляет 0,01-10 МЕ/кг. Предпочтительно, доза должна составлять 0,5 МЕ/кг.
Настоящее средство может быть введено субъекту с помощью внутривенного вливания, внутривенной инъекции, внутриартериальной инъекции, внутримышечной инъекции, подкожной инъекции, внутрикожной инъекции, внутрисердечной инъекции, внутрибрюшной инъекции, интратекальной инъекции, интраректального введения, сублингвального введения, назального введения, подкожного введения, ингаляции или местного введения в органы и/или ткани, пораженные заболеваниями нижних мочевых путей, композиции, приготовленной путем разведения тромбиноподобного фермента соответствующим образом.
Обычно предпочтительно разводить тромбиноподобный фермент 100 мл или более физиологического раствора и вводить приготовленную композицию субъекту путем капельной инфузии в течение 1 часа или более.
Определение острой токсичности (LD50 (BU/кг)) батроксобина у мышей, крыс, кроликов и собак выглядит следующим образом, как показано в таблице 1. Тест на острую токсичность оценивали при внутривенном введении батроксобина.
Острая токсичность батроксобина (в.в.)
Хотя далее предоставляется подробное объяснение настоящего изобретения с указанием Примера композиции и Примеров воплощения изобретения, настоящее изобретение не ограничено указанным Примером композиции и Примерами.
ПРИМЕР КОМПОЗИЦИИ 1
Препарат батроксобина был выпущен в виде инъекции, имеющей следующий состав:
батроксобин (активный инградиент) 10 BU
хлорбутанол (консервант) 3 мг
гидролизат желатина (стабилизатор) 0,1 мг
хлорид натрия (изотоническое средство) 9 мг
соляная кислота (регулятор pH) q.s.
дистиллированная вода для инъекций до 1 мл
общий объем 1 мл
ПРИМЕР 1
Эффект батроксобина на геморрагический цистит
Циклофосфамид (CYP) представляет собой противораковый препарат, и геморрагический цистит известен в качестве его главного побочного эффекта. В организме CYP метаболизируется с образованием 4-гидроксисубстанции, обладающей противораковой активностью. Затем 4-гидроксисубстанция метаболизируется с образованием метаболита акролеина в моче. Сообщалось, что акролеин является прямым воспалительным средством, и стимуляция акролеином внутренней стенки мочевого пузыря вызывает геморрагический цистит.
1. Экспериментальный метод
Использовали батроксобин (в дальнейшем обозначаемый как DF-521), который произведен Tobishi Pharmaceutical Co., Ltd, Japan. Использовали Циклофосфамид моногидрат (CYP) и формамид производства Sigma Co., Ltd, USA. Использовали Эванс голубой (EB), который произведен Tokyo Chemical Industry Co., Ltd. Использовали самцов мышей породы ddY (JIa: ddY, Japan Laboratory Animals, Inc) с весом тела приблизительно 25-30 г.
(1) Распределение животных по группам, создание модели геморрагического цистита и метод дозирования
Мышей распределяли по 4 группам: нормальная группа (6 мышей), группа с моделью заболевания (12 мышей), группа внутривенного введения DF-521 10 BU/кг (i.v.) (11 мышей) и группа внутрибрюшного введения DF-521 40 BU/кг (i.p.) (11 мышей). Мышам группы DF-521 10 BU/кг вводили i.v. (внутривенно) в хвостовую вену 10 BU/кг DF-521. Мышам группы DF-521 40BU/кг вводили i.p. внутрибрюшинно 40 BU/кг DF-521. Через 30 минут после введения DF-521 мыши получали дозу 200 мг/кг CYP внутрибрюшинно для создания модели геморрагического цистита. Через 2,5 часа после введения CYP вводили 30 мг/кг EB в хвостовую вену. Через 30 минут животных умерщвляли путем дислокации шейного отдела позвоночника и определяли относительный вес мочевого пузыря и вытекание белка плазмы в мочевом пузыре с применением нижеследующего метода. Кроме того, мышам группы смоделированного заболевания вводили физиологический раствор в таком же количестве, как и DF-521 (10 мл/кг). Спустя 30 минут вводили 200 мг/кг CYP внутрибрюшинно. Затем проводили аналогичную обработку в соответствии с планом проведения эксперимента для каждого объекта измерения.
Нормальную группу составляли нормальные мыши, не получавшие лечения.
(2) Измерение относительного веса мочевого пузыря и потери белка плазмы в мочевом пузыре
Метод окраски голубым Эванса Evans (EB) осуществляли с учетом методов Ishikawa et al. (Drug interaction effects on antitumour drugs (XV): Disulfiram as protective agent cyclophosphamide induced urotoxicity without compromising antitumour activity in mice. Pharmacology and Toxicology 74: 255-261, 1994) and Rouleau A et al. (Anti-inflammatory and Antinociceptive properties of BP 2-94, a histamine H3-receptor agonist prodrug. J Pharmacol Exp Ther. 295(1): 219-225, 2000). То есть, после того как мышам вводили внутрибрюшинно 200 мг/кг CYP, 30 мг/кг раствора EB вводили внутривенно в хвостовую вену. Через 30 минут после введения раствора EB животных умерщвляли методом дислокации шейных позвонков и вскрывали срединным разрезом. Осторожно вынимали ткань мочевого пузыря и производили продольный разрез уретры. Инородные материалы (кристаллоподобные отложения) и мочу удаляли, чтобы измерить вес мочевого пузыря во влажном состоянии. Относительный вес мочевого пузыря представляли как вес мочевого пузыря, мг/100 г веса тела. Мочевой пузырь сразу же помещали в пробирку, содержащую 0,5 мл раствора формамида. Пробирку, содержащую мочевой пузырь, инкубировали в течение 18 часов при 45°C. Краситель, который просачивался в ткань мочевого пузыря, экстрагировали с помощью раствора формамида. Абсорбцию экстракта измеряли при длине волны 620 нм (ImmunoReader). После того, как заранее определяли абсорбцию стандартного концентрированного раствора EB (0,1-100 мкг/мл) при длине волны 620 нм, строили стандартную кривую. Концентрацию EB в каждом образце жидкости рассчитывали из стандартной кривой. Содержание EB в мочевом пузыре представляли в виде "мкг EB/мочевой пузырь". Данный показатель являлся индикатором потери белка плазмы в мочевом пузыре.
(3) Статистический анализ
Результаты выражали в виде среднее значение ± стандартное отклонение. После анализа результатов теста с участием группы, получавшей препарат, и группы смоделированного заболевания с применением критерия Бартлетта применяли непараметрический критерий Дуннетта для коррекции неравных дисперсий. Кроме того, проводили тест для двух групп: группы смоделированного заболевания и нормальной группы, с применением F-теста, и после того как дисперсионный анализ был неравным, проводили тест Велша для коррекции неравных дисперсий. Различие между группами считали статистически значимым, если процент риска составлял менее 5% (p<0,05).
2. Результаты
Результаты действия батроксобина (DP-521) на геморрагический цистит при инъекции i.v (10 BU/кг) и при введении i.p. (40 BU/кг) показаны в таблице 2.
Как показано в таблице 2, относительный вес мочевого пузыря в группе смоделированного заболевания значительно возрастал (приблизительно в 2,1 раза) по сравнению с аналогичным показателем в нормальной группе. В то же время группа DF-521 10 BU/кг i.v. показала существенное ингибирование (48,7%) увеличения относительного веса мочевого пузыря (p<0,01). Группа DF-521 40 BU/кг i.p. показала существенное ингибирование (53,5%) увеличения относительного веса мочевого пузыря (p<0,01). Содержание красителя голубого Эванса в мочевом пузыре группы смоделированного заболевания показало существенное увеличение (приблизительно в 43 раза) по сравнению с нормальной группой (p <0,01). В то же время группа DF-521 10 BU/кг i.v показала значимый показатель ингибирования 38,1% (p 0,01). Кроме того, группа DF-521 40 BU/кг i.p. показала значимый (p<0,0l) показатель ингибирования 44,4%. То есть группа DF-521 10 BU/кг i.p. и группа DF-521 40 BU/кг i.p. обладали сравнительно сходными эффектами против увеличения относительного веса мочевого пузыря и увеличения протекания белка плазмы крови в мочевом пузыре при геморрагическом цистите. Кроме того, исходя из визуальных наблюдений степень гипертрофии, вызванной отеком стенки мочевого пузыря, была выраженной в группе смоделированного заболевания, и кровоизлияния в слизистой оболочке мочевого пузыря наблюдали у всех животных в группе смоделированного заболевания. Кроме того, у большинства животных площадь кровоизлияния занимала 25% или более общей площади слизистой оболочки мочевого пузыря. В то же время в группе DF - 521 40 BU/кг i.p. гипертрофия, вызванная отеком стенки мочевого пузыря, была меньше, чем в группе смоделированного заболевания, и степень гипертрофии была несколько ниже, чем в группе смоделированного заболевания.
Из приведенных результатов становится понятно, что батроксобин при введении внутрибрюшинно или внутривенно ингибирует увеличение относительного веса мочевого пузыря и увеличение протекания белка плазмы крови в мочевом пузыре при геморрагическом цистите. Увеличение относительного веса мочевого пузыря и протекание белка плазмы крови являются показателями геморрагического цистита. Таким образом, из результатов примеров понятно, что батроксобин эффективен в лечении цистита. На основании результатов примера считают, что батроксобин эффективен в улучшении симптомов нижних мочевых путей, ассоциированных с циститом (т.e., симптомы накопления, симптомы опорожнения и симптомы после мочеиспускания) и облегчении боли в области нижних мочевых путей.
ПРИМЕР 2
Эффект батроксобина на хронический небактериальный простатит
1. Экспериментальный метод
Использовали батроксобин (DF-521), который является продуктом Beijing Tobishi Pharmaceutical Co., Ltd., China. Использовали кунжутное масло и 17β-эстрадиол (E2) производства Sigma Co., Ltd., USA. E2 использовали для создания модели хронического небактериального простатита.
(1) Экспериментальные животные и распределение по группам
Самцов крыс породы Wistar в возрасте 13 недель, весом 330-420 г приобретали в Beijing Vital River Laboratory Animal Co., Ltd., China. Крыс содержали в камерах класса SPF при температуре 20-25°C, относительной влажности 40-70%, с циклической сменой дня и ночи (12 ч/12 ч). Твердый корм, стерилизованный с помощью 60Co, и стерильную воду предоставляли ad libitum (класс SPF, Beijing Science Au Corporate Feed Co., Ltd., China). После карантина и привыкания в течение одной недели крысы были подготовлены для участия в экспериментах. Самцов крыс породы Wistar в возрасте 13 недель распределяли по 3 группам (группа имитации операции, группа смоделированного заболевания, группа, получавшая DF-521 30 BU/кг), включавшим по 11 крыс в каждой группе.
(2) Создание модели хронического небактериального простатита и метод дозирования
В группе имитации операции только вскрывали мошонки крыс под действием эфирного наркоза (первый день эксперимента) и со следующего дня вводили по 1 мл/кг кунжутного масла подкожно в область спины один раз в день в течение последующего 31 дня. Крыс двух других групп кастрировали под действием эфирного наркоза (первый день эксперимента) и на следующий день 0,25 мг/мл/кг E2 растворяли в кунжутном масле и вводили подкожно в область спины крысам один раз в день в течение последующего 31 дня. Таким образом создавали модель хронического небактериального простатита.
С 17-го дня группе имитации операции и группе смоделированного заболевания вводили внутрибрюшинно 5 мл/кг физиологического раствора один раз в два дня. Животные группы DF-521 30 BU/кг получали дозу DF-521 (30 BU/5мл/кг) внутрибрюшинно, один раз в два дня, в течение 15 дней. В течение указанных 15 дней DF-521 вводили 8 раз.
(3) Измерение веса предстательной железы, определение концентрации пролактина и гистопатологическое исследование
На 32-й день эксперимента собирали кровь из брюшной аорты под эфирной анестезией с использованием антикоагулянта ЭДТА. После отделения плазмы измеряли пролактин в плазме с помощью коммерческого набора ИФА. Извлекали предстательную железу, измеряли вес простаты и "простатический индекс" определяли как предстательная железа, мг/100 г веса тела. Иссекали латеральную долю из предстательной железы, фиксированные в формалине, залитые в парафин срезы получали согласно общепринятому методу, и проводили окрашивание гематоксилин-эозином (HE). Гистопатологические срезы исследовали под микроскопом.
2. Результаты
(l) Вес предстательной железы крысы и простатический индекс
Результаты измерения веса простаты и простатического индекса крыс в каждой группе показаны в таблице 3.
Как показано в таблице 3, вес простаты (мг) и простатический индекс (простата, мг/100 г веса тела) в группе имитации операции составлял 938,4 и 194,7 соответственно, тогда как значения в группе смоделированного заболевания составляли 195,2 и 55,5. Очевидно, что значения в группе смоделированного заболевания ниже, чем в группе имитации операции. С другой стороны, небольшое улучшение наблюдали в группе DF-521 30 BU/кг, по сравнению с группой смоделированного заболевания. Вес простаты и простатический индекс являются индикаторами хронического небактериального простатита. Таким образом, из результатов примеров понятно, что батроксобин эффективен в лечении хронического небактериального простатита.
(2) Эффект батроксобина на содержание пролактина в плазме крови крыс
Концентрация пролактина в плазме крови крыс каждой группы показана в таблице 4.
Как показано в таблице 4, содержание пролактина в плазме крови крыс группы смоделированного заболевания отчетливо снижено, по сравнению с содержанием пролактина в группе имитации операции. С другой стороны, содержание пролактина в группе DF-521 30 BU/кг составляло приблизительно половину содержания пролактина в группе смоделированного заболевания. Пролактин является гормоном, секретируемым аденогипофизом, который вызывает лактацию. В последние годы сообщалось, что пролактин секретируется другими органами и тканями помимо гипофиза и обладает различными физиологическими активностями. Считают, что в развитии простатита играет роль пролактин (Yu-Lee Ly: Prolactin modulation of immune and inflammatory responses. Recent Prog Horm Res. 57: 435-455, 2002). Таким образом, в соответствии с настоящими примерами можно предположить, что действие батроксобина по снижению концентрации пролактина в плазме крови является, по всей вероятности, одним из механизмов ингибирования простатита.
(3) Гистологические показатели предстательной железы крысы
На фиг. 1 показана микрофотография группы имитации операции. В группе имитации операции неповрежденная предстательная железа была крупной. Отдельные железы имели округлую форму. В полости железы при HE-окраске наблюдали окрашивание богатых секретом жидкостей. На фиг. 2 показана микрофотография группы смоделированного заболевания. В группе смоделированного заболевания простатическая железа имела неправильную форму. Наблюдали сильную нейтрофильную инфильтрацию в полости железы (стрелка, фиг. 2(A)). Наблюдали распространенную, центральную или рассеянную инфильтрацию лимфоцитами и плазмацитами в строме (стрелка, фиг. 2(B)). Часть железистого эпителия некротизирована и утеряна. На фиг. 3 представлена микрофотография группы DF-521 30 BU/кг. Нейтрофильная инфильтрация полости железы (стрелка, направленная вправо) и лимфоцитарная и плазматическая инфильтрация (стрелка, направленная влево) уменьшены по сравнению с группой смоделированного заболевания. Железистое и стромальное воспаление заметно уменьшалось. Из полученных результатов можно понять, что батроксобин эффективен в лечении хронического небактериального простатита.
(4) Полуколичественная оценка на основе гистологических показателей
Степень нейтрофильной инфильтрации гранулярной полости и лимфоцитарную/плазмоцитарную инфильтрацию стромы в каждом образце простаты крысы оценивали в баллах на основе нижеследующих критериев оценки и затем оценивали эффект батроксобина на простатит.
Результаты представлены в таблице 5. В таблице 5 значение (%) для группы означает процент числа крыс, имевших оценку, относительно общего числа крыс в группе.
1) Критерии оценки нейтрофильной инфильтрации полости железы
0: Нет инфильтрации нейтрофилами полости железы.
1: 24,9% или менее желез, в которых 1/3 или больше площади полости железы была инфильтрована нейтрофилами.
2: 25-49,9% желез, в которых 1/3 или больше площади полости железы была инфильтрована нейтрофилами.
3: 50-74,9% желез, в которых 1/3 или больше площади полости железы была инфильтрована нейтрофилами.
4: 75% или больше желез, в которых 1/3 или больше площади полости железы была инфильтрована нейтрофилами.
2) Критерии оценки инфильтрации стромы лимфоцитами и плазмацитами.
0: нет инфильтрации стромы лимфоцитами и плазмацитами.
1: рассеянная инфильтрация стромы лимфоцитами и плазмацитами.
2: очаговая инфильтрация стромы лимфоцитами и плазмоцитами
3: распространенная инфильтрация стромы лимфоцитами и плазмоцитами.
В отношении нейтрофильной инфильтрации, процент крыс с оценкой в баллах 2-4 в группе смоделированного заболевания и в группе DF-521 30 BU/кг составил 100,0% и 36,4% соответственно. Нейтрофильная инфильтрация полости железы является показателем небактериального простатита. Из указанных результатов можно сделать заключение, что батроксобин эффективен в лечении хронического небактериального простатита.
Относительно лимфоцитарной и плазмацитарной инфильтрации, процентная доля крыс, имевших оценку 2 или 3 (более очаговая инфильтрация) в группе смоделированного заболевания и в группе DF-521 30 BU/кг, составляла 45,5% и 18,2% соответственно. Лимфоцитарная и плазматическая инфильтрация стромы является показателем хронического небактериального простатита. Исходя из результатов, есть основания полагать, что батроксобин эффективен в лечении хронического небактериального простатита.
Приведенные выше результаты подтверждают, что с помощью батроксобина можно лечить хронический небактериальный простатит. Кроме того, исходя из результатов указанного примера, есть основания полагать, что батроксобин эффективен в улучшении симптомов опорожнения и симптомов после мочеиспускания, которые ассоциированы с клиническим хроническим небактериальным простатитом, и в облегчении боли в области нижних мочевых путей.
ПРИМЕР 3
Эффект батроксобина на доброкачественную гиперплазию предстательной железы
1. Экспериментальный метод
Использовали батроксобин (DF-521), который является продуктом Beijing Tobishi Pharmaceutical Co., Ltd., China. Использовали кунжутное масло и 17β-эстрадиол (E2) производства Sigma Co., Ltd., USA. Использовали тестостерон (T) производства Zhejiang Xianju Pharmaceutical Co., Ltd., China. Использовали E2 и T для создания группы с моделью доброкачественной гиперплазии предстательной железы.
(1) Экспериментальные животные и распределение по группам
Самцов крыс породы Wistar в возрасте 13 недель, весом 340-420 г, приобретали в Beijing Vital River Laboratory Animal Co., Ltd., China. Крыс содержали в камерах класса SPF при температуре 20-25°C, относительной влажности 40-70%, с циклической сменой дня и ночи (12 ч/12 ч). Твердый корм, стерилизованный с помощью 60Co, и стерильную воду предоставляли ad libitum (класс SPF, Beijing Science Au Corporate Feed Co., Ltd., China). После карантина и привыкания в течение одной недели крысы были подготовлены для участия в экспериментах. Самцов крыс породы Wistar в возрасте 13 недель распределяли по 3 группам: группа имитации операции, группа смоделированного заболевания и группа, получавшая DF-521 30 BU/кг, с 10-11 крысами в каждой группе.
(2) Создание модели доброкачественной гиперплазии предстательной железы
В группе имитации операции только вскрывали мошонки крыс под действием эфирного наркоза (первый день эксперимента). Со следующего дня вводили по 1 мл/кг кунжутного масла подкожно в область спины один раз в день в течение последующих 32 дней.
После того как крысам других 2 групп давали эфирный наркоз и кастрировали (первый день эксперимента), на следующий день 50 мкг/5000 мкг/мл/кг E2/T растворяли в кунжутном масле и вводили подкожно в область спины крысам один раз в день в течение последующих 32 дней для создания модели доброкачественной гиперплазии предстательной железы.
(3) Метод дозирования
С 14-го дня эксперимента начинали введение крысам физиологического раствора или препаратов. Группе имитации операции и группе смоделированного заболевания вводили внутрибрюшинно дозу физиологического раствора (5 мл/кг) один раз в два дня. Группа DF-521 30 BU/кг получала внутрибрюшинно дозу DF-521 30 BU/5мл/кг один раз в два дня. Введение в течение 19-дневного периода времени включало 10 введений DF-521. Эксперимент завершали на 33-й день.
(4) Гистопатологическое исследование
На 33-й день крысам давали эфирный наркоз. Для сбора крови из брюшной аорты использовали антикоагулянт ЭДТА. Извлекали предстательную железу и срезы латеральной и вентральной долей предстательной железы фиксировали в формалине, заливали в парафин согласно общепринятому методу и проводили окрашивание гематоксилин-эозином (HE). Гистопатологические срезы исследовали под микроскопом.
2. Результат
(l) Гистологические показатели предстательной железы крысы
На фиг. 4 представлена микрофотография группы имитации операции. Предстательная железа имела четко очерченную структуру. Железы расположены аккуратно. Не наблюдали пролиферации или отека стромальной или эпителиальной железы. На фиг. 5(A) и 5(B) показана микрофотография группы смоделированного заболевания. В группе смоделированного заболевания была ясно видна стромальная пролиферация. Стрелка на фиг. 5(A) указывает на увеличение полости железы и сосочкоподобное утолщение в эпителиальных железах, и стрелка на фиг. 5(B) показывает центральный фиброз и незначительный отек стромы. На фиг. 6 показана микрофотография группы DF-521 30 BU/кг. Пролиферация эпителиальной железы (стрелка, направленная вправо) и стромы, а также фиброз (стрелка, направленная влево) уменьшены по сравнению с группой смоделированного заболевания. Из приведенных результатов понятно, что батроксобин эффективен в лечении доброкачественной гиперплазии предстательной железы.
(2) Полуколичественная оценка на основе гистологических показателей
Степень стромальной пролиферации и железистой пролиферации в образце простатической ткани каждой крысы определяли в соответствии с нижеследующими критериями оценки. Эффект батроксобина на доброкачественную гиперплазию предстательной железы оценивали на основании данной оценки. Результаты представлены в таблице 6. В таблице 6 значение (%) для группы означает процент числа крыс, имеющих оценку, по отношению к общему числу крыс в группе.
1) Критерии оценки стромальной пролиферации
0: нет стромальной пролиферации. Стромальную пролиферацию не наблюдали в сравнении с группой имитации операции.
1: низкий уровень стромальной пролиферации. 10% или меньше общего числа желез окружены одним или двумя слоями гладкомышечных волокон, находящихся в строме.
2: средний уровень стромальной пролиферации. 10% или меньше общего числа желез окружены несколькими слоями расположенных концентрически гладкомышечных волокон, находящихся в строме.
3: высокий уровень стромальной пролиферации. 10-20% общего числа желез окружены несколькими слоями расположенных концентрически гладкомышечных волокон, находящихся в строме.
2) Критерии оценки железистой пролиферации (увеличение железы или пролиферация железистого эпителия)
0: нет железистой пролиферации.
1 - железистую пролиферацию наблюдали в 24,9% или менее общего числа желез.
2 - железистую пролиферацию наблюдали в 25-49,9% общего числа желез.
3 - железистую пролиферацию наблюдали в 50-74,9% общего числа желез.
4 - железистую пролиферацию наблюдали в 75% или более общего числа желез.
Из полученных результатов наблюдали, что 50% крыс, тестированных в группе смоделированного заболевания, имели средний или высокий уровень стромальной пролиферации, тогда как средний уровень стромальной пролиферации наблюдали только у 33% крыс группы DF-521 30 BU/кг. Таким образом, показано, что батроксобин может ингибировать стромальную пролиферацию при доброкачественной гиперплазии предстательной железы.
Относительно железистой пролиферации, количество в процентах крыс с оценкой 3 или 4 (железистую пролиферацию наблюдали в 50% или более общего числа желез) составляло 20,0% и 0% для группы смоделированного заболевания и для группы DF-521 30 BU/кг соответственно. Таким образом, показано, что батроксобин может ингибировать железистую пролиферацию при доброкачественной гиперплазии предстательной железы.
Из приведенных выше результатов можно понять, что батроксобин эффективен в лечении доброкачественной гиперплазии предстательной железы. Кроме того, исходя из примеров, считают, что батроксобин также эффективен в улучшении симптомов опорожнения, симптомов после мочеиспускания и боли в области нижних мочевых путей, которые сопровождают доброкачественную гиперплазию предстательной железы.
ПРИМЕР 4
Клинические эффекты батроксобина на интерстициальный цистит
1. Экспериментальный метод
Использовали батроксобин (DF-521), который является продуктом Beijing Tobishi Pharmaceutical Co., Ltd., China, с торговым названием Dong Ling Di Fu. Исходно собирали данные 10 пациентов с интерстициальным циститом. Однако одна пациентка (No.01) выбыла из исследования в середине лечения. В конечном итоге были собраны данные только 9 пациентов.
(1) Метод дозирования
Первая введенная доза составляла 10 BU DF-521, разведенного 100 мл физиологического раствора и введенного с помощью внутривенного вливания в течение более чем одного часа. Затем 5 BU DF-521 разводили 100 мл физиологического раствора и вводили с помощью внутривенного вливания в течение более чем одного часа, один раз в два дня. Всего DF-521 вводили четырнадцать раз.
(2) Критерии отбора
Диагностические критерии интерстициального цистита не установлены. NIDDK (Национальный институт диабета, болезней пищеварительной системы и почек) сообщил критерии для исследовательских целей. Однако указанные критерии являются слишком жесткими для применения в клинике. Причина состоит в том, что более 60% пациентов с интерстициальным циститом исключены из указанных критериев.
В данной ситуации, в примере использовали клинические диагностические критерии на основе результатов цистоскопического исследования, которые рассматривали как наиболее соответствующие и объективные наблюдаемые результаты в представлении интерстициального цистита. В настоящем примере, если у тестируемого наблюдали следующие три симптома 1)-3), то у тестируемого диагностировали интерстициальный цистит.
1) Симптомы, такие как поллакиурия, учащенное мочеиспускание, ургентность, дискомфорт и боль в области мочевого пузыря.
2) Наблюдают язву Ханнера или кровоизлияние после гидравлического растяжения мочевого пузыря.
3) Упомянутые выше симптомы или наблюдения не могут быть объяснены другими заболеваниями и состояниями.
(3) Критерии исключения
Пациентов с одним из следующих состояний 1)-7) исключали из тестирования.
1) Пациент с сердечными, печеночными или почечными осложнениями.
2) Пациент, который перенес лечение гепарином, низкомолекулярным гепарином, и дикумарин-подобными препаратами в период двух недель до начала лечения интерстициального цистита.
3) Пациент, перенесший массивный ишемический инсульт, имеющий тенденцию к серьезному кровоизлиянию или к внутричерепному кровоизлиянию.
4) Пациент с язвами или геморроем в стадии обострения.
5) Пациент с артериальным давлением выше 180/100 мм рт.ст.
6) Женщина в период беременности или лактации.
7) Субъект, имеющий аллергию на батроксобин.
(4) Показатель клинической оценки
1) Симптомы увеличенной частоты мочеиспускания в дневное время и никтурии: измерение осуществляли 3 последующих дня до лечения и 3 последующих дня после последнего введения (таблица 7).
2) Индекс симптомов интерстициального цистита (шкала O'Leary-Sant): Указанную оценку в баллах подсчитывали до и после лечения соответственно (таблица 8).
Оценка по шкале O'Leary-Sant представляла собой итоговую сумму оценок в баллах 4 вопросов по проблемам и 4 вопросов по симптомам интерстициального цистита (Table IV, O'Leary MP, Sant GR, Fowler FJ Jr, Whitmore KE, Spolarich-Kroll J., The interstitial cystitis symptom index and problem index, Urology 49(Suppl5A): 58-63,1997).
3) Оценка по шкале QOL: баллы подсчитывали до и после лечения (таблица 8). Оценивали в баллах ответ на вопрос: "Как бы вы отнеслись к тому, если бы пришлось мириться с имеющимися урологическими проблемами до конца жизни?"
(5) Клинический лабораторный тест
Значения фибриногена плазмы (FBG), протромбинового времени (PT) и частично активированного протромбинового времени (APTT) до и после лечения батроксобином (через 48 часов после последнего введения) проверяли однократно.
(6) Статистический анализ
Используя программное обеспечение SPSS13.0, сравнивали и анализировали средний объем мочеиспускания и частоту мочеиспускания за 24 часа, оценки по шкале O'Leary-Sant и оценки по шкале QOL до и после лечения. Если данные соответствовали нормальному распределению, использовали t-тест. Если данные не соответствовали нормальному распределению, использовали критерий суммы рангов.
2. Результаты
Всего в исследование было включено 10 зарегистрированных пациентов. Участвовали 1 мужчина и 9 женщин. Все пациенты, которые были отобраны, соответствовали критериям отбора для интерстициального цистита. Одна пациентка (пациент No. 01) добровольно прекратила участие в эксперименте после 7 инъекций лечения, и ее данные не оценивали.
Другие 9 пациентов (пациенты No 02-10) получали по 14 инъекций, и данные указанных 9 пациентов применяли для статистической обработки.
(l) Средний объем мочеиспускания и частота мочеиспускания за 24 часа (число мочеиспусканий, имевших место в течение 24 часов) у пациента до и после лечения батроксобином
У 9 пациентов, получавших 14 инъекций батроксобина, оценивали средний объем мочеиспускания и частоту мочеиспускания за 24 часа до и после лечения батроксобином. Результаты показаны в таблице 7.
Как показано в таблице 7, средний объем мочеиспускания "после лечения" (145,85+72,00 мл) возрастал по сравнению с аналогичным показателем "до лечения" (135,70+73,27 мл). Указанное увеличение 12,70% являлось статистически значимым (p<0,05). Считают, что увеличение среднего объема мочеиспускания может происходить благодаря улучшению с помощью батроксобина функции накопления мочевого пузыря у пациентов с интерстициальным циститом.
Показатель частоты мочеиспускания в течение 24-часового периода "после лечения" (17,33±8,97) был меньше чем показатель "до лечения" (18,22±8,94). Небольшое уменьшение частоты мочеиспускания (3,82%) наблюдали "после лечения" (p=0,33).
Считают, что снижение частоты мочеиспускания (улучшение увеличенной частоты мочеиспускания в дневное время и никтурии) происходит в результате упомянутого выше увеличения среднего объема мочеиспускания, вызванного улучшением с помощью батроксобина функции накопления мочевого пузыря. Из указанных результатов можно понять, что батроксобин эффективен в улучшении симптомов нижних мочевых путей (симптомы накопления), которые сопутствуют интерстициальному циститу.
(2) Оценки по шкале O'LearySant и по шкале QOL пациента до и после лечения батроксобином
У 9 пациентов, которые получили 14 инъекций батроксобина, оценивали по шкалам O'Leary-Sant и QOL до и после лечения батроксобином и сравнивали степень улучшения по шкалам.
Оценка по шкале O'Leary-Sant:
0-15 = низкий уровень
16-23 = средний уровень
24-35 = тяжелый уровень
Оценка по шкале QOL:
0 = отлично
1 = хорошо
2 = в некоторой степени хорошо
3 = удовлетворительно
4 = нехорошо
5 = плохо
6 = очень плохо
Как показано в таблице 8, оценка по шкале O'Leary-Sant "после лечения" (19,11+4,96) снижалась по сравнению с оценкой "до лечения" (23,00+4,12). Указанное снижение на 17,17% являлось статистически значимым (p<0,05). Полученный результат показывает, что батроксобин существенно улучшает оценку по шкале O'Leary, с помощью которой оценивают клинические симптомы, ассоциированные с интерстициальным циститом, такие как поллакиурия, учащенное мочеиспускание, ургентность и боль в области мочевого пузыря.
Оценка по шкале QOL "после лечения" (4,00+0,87) снижалась по сравнению с оценкой "до лечения" (5,33+0,71). Указанное снижение 24,44% являлось статистически значимым (p<0,05).
Как можно понять из приведенных выше результатов, батроксобин эффективно улучшает у пациентов показания по шкале QOL, а также улучшает симптомы нижних мочевых путей, которые ассоциированы с интерстициальным циститом.
(3) Значения клинических лабораторных тестов пациента до и после лечения
У 9 пациентов, получивших 14 введений батроксобина, оценивали фибриноген плазмы крови (FBG), протромбиновое время (PT) и частично активированное тромбопластиновое время (APTT) до и после лечения батроксобином (48 часов после последнего введения). Указанные результаты показывают, что значение FBG "до лечения" составляло 3,24±1,04 г/л и FBG "после лечения" составляло 2,33±0,76 г/л и снижения являлось статистически значимым (p<0,05). В то же время значение PT "до лечения" составляло 12,18±1,01 секунд и значение PT "после лечения" составляло 12,57±1,04 секунд. Значение APTT "до лечения" составляло 31,48±5,41 секунд и значение APTT "после лечения" составляло 34,21±4,74. В отношении PT и APTT, не обнаружено достоверного различия между значениями "до лечения" и "после лечения". Для PT р-значение составляло 0,397. Для APTT р-значение составляло 0,085.
На основании приведенных выше результатов подтвердили отсутствие возможности возникновения кровотечения в качестве побочного эффекта, возникающего за счет дефибринирующего действия батроксобина у пациентов с интерстициальным циститом.
ПРИМЕНИМОСТЬ В ПРОМЫШЛЕННОСТИ
Настоящее изобретение может быть использовано для лечения различных заболеваний нижних мочевых путей, таких как цистит, простатит и доброкачественная гиперплазия предстательной железы; и улучшение симптомов нижних мочевых путей, связанных с заболеванием нижних мочевых путей.
Группа изобретений относится к медицине и касается: терапевтического средства для лечения заболевания нижних мочевых путей, где средство включает тромбиноподобный фермент в качестве единственного основного активного компонента; средства для облегчения боли в области нижних мочевых путей, связанной с заболеванием нижних мочевых путей; способа лечения заболевания нижних мочевых путей, включающего стадию введения эффективного количества тромбиноподобного фермента. Группа изобретений обеспечивает заметные терапевтические эффекты по заболеванию нижних мочевых путей. 9 н. и 14 з.п. ф-лы, 6 ил., 8 табл., 4 пр.
1. Терапевтическое средство для лечения заболевания нижних мочевых путей, где средство включает тромбиноподобный фермент в качестве единственного основного активного компонента.
2. Терапевтическое средство для лечения заболевания нижних мочевых путей по п.1, где тромбиноподобный фермент выбран из группы, состоящей из батроксобина, анкрода и кроталазы.
3. Терапевтическое средство для лечения заболевания нижних мочевых путей по п.1, где тромбиноподобный фермент представляет собой батроксобин.
4. Терапевтическое средство для лечения заболевания нижних мочевых путей по любому из пп.1-3, где заболевание нижних мочевых путей выбрано из группы, состоящей из цистита, простатита и доброкачественной гиперплазии предстательной железы.
5. Терапевтическое средство для лечения заболевания нижних мочевых путей по любому из пп.1-3, где заболевание нижних мочевых путей выбрано из группы, состоящей из геморрагического цистита, интерстициального цистита, хронического небактериального простатита и доброкачественной гиперплазии предстательной железы.
6. Средство для улучшения симптома нижних мочевых путей, связанного с заболеванием нижних мочевых путей, где средство включает тромбиноподобный фермент в качестве единственного основного активного компонента.
7. Средство для улучшения симптома нижних мочевых путей, связанного с заболеванием нижних мочевых путей по п.6, где тромбиноподобный фермент выбран из группы, состоящей из батроксобина, анкрода и кроталазы.
8. Средство для улучшения симптома нижних мочевых путей, связанного с заболеванием нижних мочевых путей по п.6, где тромбиноподобный фермент представляет собой батроксобин.
9. Средство для улучшения симптома нижних мочевых путей, связанного с заболеванием нижних мочевых путей по любому из пп.6-8, где заболевание нижних мочевых путей выбрано из группы, состоящей из цистита, простатита и доброкачественной гиперплазии предстательной железы.
10. Средство для улучшения симптома нижних мочевых путей, связанного с заболеванием нижних мочевых путей по любому из пп.6-8, где заболевание нижних мочевых путей выбрано из группы, состоящей из геморрагического цистита, интерстициального цистита, хронического небактериального простатита и доброкачественной гиперплазии предстательной железы.
11. Средство для улучшения симптома нижних мочевых путей, связанного с заболеванием нижних мочевых путей по любому из пп.6-8, где симптом нижних мочевых путей выбран из группы, состоящей из симптомов накопления, симптомов опорожнения и симптомов после мочеиспускания.
12. Средство для облегчения боли в области нижних мочевых путей, связанной с заболеванием нижних мочевых путей, где средство включает тромбиноподобный фермент в качестве единственного основного активного компонента.
13. Средство для облегчения боли в области нижних мочевых путей, связанной с заболеванием нижних мочевых путей, по п.12, где тромбиноподобный фермент выбран из группы, состоящей из батроксобина, анкрода и кроталазы.
14. Средство для облегчения боли в области нижних мочевых путей, связанной с заболеванием нижних мочевых путей, по п.12, где тромбиноподобный фермент представляет собой батроксобин.
15. Средство для облегчения боли в области нижних мочевых путей, связанной с заболеванием нижних мочевых путей, по любому из пп.12-14, где заболевание нижних мочевых путей выбрано из группы, состоящей из цистита, простатита и доброкачественной гиперплазии предстательной железы.
16. Средство для облегчения боли в области нижних мочевых путей, связанной с заболеванием нижних мочевых путей по любому из пп.12-14, где заболевание нижних мочевых путей выбрано из группы, состоящей из геморрагического цистита, интерстициального цистита, хронического небактериального простатита и доброкачественной гиперплазии предстательной железы.
17. Средство для облегчения боли в области нижних мочевых путей, связанной с заболеванием нижних мочевых путей, по любому из пп.12-14, где боль в области нижних мочевых путей выбрана из группы, состоящей из боли в области мочевого пузыря и уретральной боли.
18. Способ лечения заболевания нижних мочевых путей, включающий стадию введения эффективного количества тромбиноподобного фермента в качестве единственного основного активного компонента пациенту с заболеванием нижних мочевых путей.
19. Применение тромбиноподобного фермента для изготовления терапевтического средства для лечения заболевания нижних мочевых путей, где средство включает тромбиноподобный фермент в качестве единственного основного активного компонента.
20. Способ облегчения симптома нижних мочевых путей, связанного с заболеванием нижних мочевых путей, включающий стадию введения эффективного количества тромбиноподобного фермента в качестве единственного основного активного компонента пациенту с симптомом нижних мочевых путей.
21. Применение тромбиноподобного фермента для изготовления средства для облегчения симптома нижних мочевых путей, связанного с заболеванием нижних мочевых путей, где средство включает тромбиноподобный фермент в качестве единственного основного активного компонента.
22. Способ облегчения боли в области нижних мочевых путей, включающий стадию введения эффективного количества тромбиноподобного фермента в качестве единственного основного активного компонента пациенту, имеющему боль в области нижних мочевых путей.
23. Применение тромбиноподобного фермента для изготовления средства для облегчения боли в области нижних мочевых путей, где средство включает тромбиноподобный фермент в качестве единственного основного активного компонента.
| Пресс для выдавливания из деревянных дисков заготовок для ниточных катушек | 1923 |
|
SU2007A1 |
| Аппарат для очищения воды при помощи химических реактивов | 1917 |
|
SU2A1 |
| Pirkle H., Thrombin-like enzymes from snake venoms: an updated inventory | |||
| Scientific and Standardization Committee's Registry of Exogenous Hemostatic Factors | |||
| Thromb Haemost | |||
| Способ и аппарат для получения гидразобензола или его гомологов | 1922 |
|
SU1998A1 |
| КОЛОСНИКИ ТИПА КОЛОСНИКОВ НОБЕЛЯ | 1927 |
|
SU8921A1 |
