ПРЕПАРАТ, СОДЕРЖАЩИЙ БАТРОКСОБИН, ДЛЯ ИНГИБИРОВАНИЯ ЛОКАЛЬНОЙ ИНВАЗИИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ОПУХОЛЕЙ Российский патент 2009 года по МПК A61K38/48 A61P35/00 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение относится к препарату, содержащему батроксобин, для ингибирования локальной инвазии злокачественных опухолей и для инкапсулирования тканей злокачественных опухолей.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

При лечении злокачественных опухолей степень успеха в устранении первичных раковых заболеваний постоянно повышается вследствие постоянного прогресса в хирургии, облучении и химиотерапии. Однако даже на ранних стадиях опухоли клетки злокачественной опухоли часто рассеиваются и локально внедряются в смежные ткани и органы. В этом случае, даже если первичный очаг злокачественной опухоли удаляют хирургическим путем, возможен рецидив вследствие остаточных внедрившихся клеток злокачественной опухоли; в итоге, во многих случаях результатом является смерть. Конкретно, если клетки злокачественной опухоли внедрились в жизненно важный орган, они не могут быть удалены вместе с нормальными тканями. Поэтому частота рецидива и скорость гибели в этих случаях является высокой. Когда злокачественная опухоль возникает в жизненно важном органе, удаляют большое количество ткани, в том числе нормальные ткани, при попытке избежать локальной инвазии, и функция жизненно важного органа может быть утрачена. Кроме того, в случае злокачественных опухолей с высокой степенью злокачественности, таких как меланома, рак легких, рак печени и рак поджелудочной железы, ранняя диагностика является трудной. К тому времени, когда опухоль диагностируют, локальная инвазия злокачественной опухоли становится широко распространенной, что делает неприемлемым во многих случаях хирургическое лечение.

Облучение обычно не демонстрирует положительных результатов при лечении локальной инвазии таких злокачественных опухолей. Кроме того, химиотерапевтические лекарственные средства, имеющие в настоящее время клиническое применение, такие как адриамицин, который действует путем непосредственного разрушения клеток злокачественной опухоли, поражает также нормальные клетки и имеет сильные побочные действия, что является проблемой для клинического применения. Поэтому ожидают создания новых препаратов для ингибирования локальной инвазии злокачественных опухолей.

Обычно полагают, что локальная инвазия имеет отношение, как указано ниже, к стадиям злокачественных опухолей.

(1) На ранней стадии злокачественных опухолей клетки злокачественной опухоли разрастаются клеточным делением, что приводит в результате к росту ткани опухоли. Это известно как «дисплазия». В гистопатологических терминах разрастающиеся клетки злокачественной опухоли на этой стадии локализуются и могут четко отличаться от окружающих нормальных тканей. В большинстве случаев вокруг тканей злокачественной опухоли образуется капсулоподобная ткань.

Капсулоподобная ткань представляет собой соединительную ткань, образованную в результате взаимодействия между тканями злокачественной опухоли и нормальными тканями, отделяющими ткани злокачественной опухоли от нормальных тканей. Поэтому кажется, что ткани злокачественной опухоли окружены капсулой. Злокачественную опухоль, окруженную капсулоподобной тканью, чрезвычайно легко удалять путем операции, и клетки злокачественной опухоли не рассеиваются во время операции, после операции имеется очень небольшой риск рецидива злокачественной опухоли.

(2) Однако, поскольку злокачественная опухоль развивается, капсулоподобная ткань утрачивается и происходит локальная инвазия из тканей злокачественной опухоли в смежные, окружающие нормальные ткани и органы, что приводит в результате к широкой диффузии злокачественной опухоли. На этой стадии хирургическое лечение становится трудным.

Принимая во внимание вышеописанную связь между локальной инвазией и стадиями злокачественных опухолей, предположили, что терапия злокачественной опухоли, которая действовала путем ускорения образования капсулоподобной ткани, может быть клинически полезной. Однако исследования образования капсулоподобной ткани вокруг злокачественных опухолей не проводили, фокусируя их только на локальной инвазии злокачественных опухолей, и не разрабатывали лекарственные средства, которые ускоряют такое образование (см., например, Clin. Expl. Metastasis 7:277-282, 1989). Обычно считают, что в области техники это происходит из-за того, что локальная инвазия злокачественных опухолей является частью метастатического процесса злокачественной опухоли, и полагают, что лекарственные средства, которые замедляют образование метастаза, также должны быть способны замедлять локальную инвазию.

Однако недавно путь метастаза, который не принимает участия в процессе локальной инвазии, обнаружен во многих злокачественных опухолях (см., например, ВМС Medicine, 2(9):1-8, 2004). Например, имеются клинические описания о злокачественных опухолях, которые метастазируют без локальной инвазии (см., например, Virchows Arch. Pathol. Anat. 390:121-126, 1981 и Surgery Today 25:369-372, 1995). Кроме того, описано, что лекарственные средства являются эффективными для замедления локальной инвазии злокачественных опухолей, но являются неэффективными против метастаза и на самом деле ускоряют метастаз (см. например, Breast Cancer Res. Treat. 40:209-223, 1996). И наоборот, имеются публикации об экспериментах in vivo с лекарственными средствами, которые замедляют метастазирование злокачественной опухоли, но не замедляют локальную инвазию (см., например, Clinical & Experimental Metastasis, 19:95-105, 2002). В этих публикациях предполагают феномен, в котором локальная инвазия злокачественных опухолей не является частью метастатического процесса, а вместо этого локальная инвазия и метастаз протекают как различные процессы.

С другой стороны, многие базовые и клинические исследования указывали на близкую связь между злокачественными опухолями и коагуляцией и фибринолитической системой. Например, известно, что у пациентов со злокачественной опухолью имеют место нарушения микроциркуляции, вызванные увеличенной концентрацией фибриногена в плазме, увеличенной вязкостью крови, аномальной реологией крови и другими аномалиями коагуляции и фибринолитической системы. Описано также, что повышенная концентрация фибриногена в плазме или секретирование фибриногена клетками злокачественной опухоли само приводит к депонированию фибриногена или фибрина во внеклеточном матриксе ткани злокачественной опухоли и что затем это действует как часть внеклеточного матрикса для ускорения разрастания, инвазии и метастаза клеток злокачественной опухоли (см., например, Cancer Research 60:2033-2039, 2000; Ann NY Acad. Sci. 936:406-425, 2001 и Blood 96:3302-3309, 2000).

Фокусируя внимание на этой связи между злокачественными опухолями и коагуляцией и фибринолитической системой, описали, что батроксобин, тромбиноподобная серинпротеаза из яда Bothrops atrox moojeni замедляет разрастание и метастазы злокачественных опухолей таким же путем, как анкрод, другая тромбиноподобная серинпротеаза (см., например, Eur. J. Cancer 16:919-923, 1980). Однако, хотя в этой публикации используют массу опухоли как индикатор замедляющего воздействия на разрастание злокачественной опухоли и количество метастатических очагов в органах в качестве индикатора метастаза злокачественной опухоли, это не позволило оценить локальную инвазию злокачественных опухолей.

Кроме того, в связи с взаимосвязью между злокачественными опухолями и коагуляцией и фибринолитической системой описали, что в экспериментальной модели с использованием фибриногендефицитной мыши метастаз злокачественной опухоли зависит от фибриногена и фибрина, а разрастание и локальная инвазия злокачественной опухоли не зависят от фибриногена (см., например, Blood 96:3302-3309, 2000). Однако о взаимосвязи между батроксобином и локальной инвазией злокачественных опухолей не сообщается.

РАСКРЫТИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Следовательно, задачей настоящего изобретения является создание нового лекарственного средства, способного замедлять локальную инвазию злокачественных опухолей, а также нового лекарственного средства, вызывающего образование капсулоподобной ткани или ускоряющего образование капсулоподобной ткани вокруг тканей злокачественной опухоли.

Чтобы разрешить эти проблемы, авторы в этом случае обнаружили в результате исчерпывающего исследования локальной инвазии злокачественных опухолей in vivo, что батроксобин замедляет локальную инвазию злокачественных опухолей и вызывает или ускоряет образование капсулоподобной ткани вокруг тканей злокачественной опухоли. Настоящее изобретение создано на основе этих результатов.

То есть настоящее изобретение относится к:

(1) препарату, содержащему батроксобин, для замедления локальной инвазии злокачественных опухолей и

(2) препарату, содержащему батроксобин, для инкапсулирования тканей злокачественной опухоли.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Фиг.1 представляет собой микроскопическую фотографию солидных раковых тканей мыши, имеющей меланому В16-ВL6, в контрольной группе.

Фиг.2 представляет собой микроскопическую фотографию солидных раковых тканей мыши, имеющей меланому В16-ВL6, в группе батроксобина.

Фиг.3 представляет собой микроскопическую фотографию солидных раковых тканей мыши, имеющей рак легких LA795, в контрольной группе.

Фиг.4 представляет собой микроскопическую фотографию солидных раковых тканей мыши, имеющей рак легких LA795, в группе батроксобина.

НАИЛУЧШИЙ СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение ниже объясняется подробно.

В настоящем изобретении препарат для замедления локальной инвазии злокачественных опухолей и для инкапсулирования тканей злокачественной опухоли включает в себя в качестве активного компонента батроксобин.

Батроксобин представляет собой тромбиноподобную серинпротеазу, полученную из яда Bothrops atrox moojeni. Батроксобин высвобождает только фибринопептид А из фибриногена, продуцирующего фибрин Des A (также называемый фибрин I) (см., например, Thromb. Haemost. 36:9-13, 1976 и Thromb. Diath. Haemorrh. 45 Suppl:63-68, 1971). Кроме того, первичная структура батроксобина уже была установлена (см., например, J. Biol. Chem. 262(7):3132-3135, 1987).

Как и в случае с тромбином, батроксобин представляет собой тромбиноподобную серинпротеазу. Однако она отличается от тромбина тем, что в то время как батроксобин высвобождает только фибринопептид А из фибриногена, чтобы продуцировать фибрин Des A, тромбин высвобождает фибринопептид А и фибринопептид В из фибриногена, чтобы продуцировать фибрин. Другое отличие состоит в том, что батроксобин не действует на факторы свертывания крови, кроме фибриногена, в то время как тромбин действует на другие факторы свертывания крови.

Батроксобин, применяемый в настоящем изобретении, может быть в виде продуктов природного происхождения или может быть в виде препаратов генетической рекомбинации.

Сам батроксобин представляет собой известное вещество, которое можно получить согласно способам, описанным в публикации заявки на патент Японии № S57-10718 с проведенной экспертизой (патент Японии № 1118129). В альтернативном случае, его можно легко приобрести на рынке (от Tobishi Pharmaceutical Co., Ltd., Токио, Япония и ее дочерней компании Beijing Tobishi Pharmaceutical Co., Ltd., Beijing, Китай).

Мишенями настоящего изобретения являются злокачественные опухоли. В зависимости от первоначального происхождения ткани злокачественные опухоли можно широко классифицировать на эпителиальные злокачественные опухоли и неэпителиальные злокачественные опухоли. Неэпителиальные злокачественные опухоли можно дополнительно классифицировать на злокачественные опухоли, образованные из мезенхимальной ткани, злокачественные опухоли, образованные из невральной ткани, и злокачественные опухоли недифференцированных клеток. Конкретные примеры каждого вида злокачественных опухолей даны ниже.

Эпителиальные злокачественные опухоли

Аденокарциномы (карциномы, образованные из железистого эпителия, который встречается на всем протяжении тела, включая желудок, кишки, поджелудочную железу, трахею, легкие, молочные железы, яичники, тело матки, железы простаты и тому подобное, как предполагают, составляет 70-80% рака человека), карциномы сквамозных клеток (раковые опухоли, образованные из многослойного сквамозного эпителия и имеющие место в эпителиальных тканях эпидермиса, губ, языка, гортани, пищевода, ануса, вульвы, шейки матки и тому подобного, и легочный сквамозный эпителиальный рак, классифицируемый как немелкоклеточный рак легких), базально-клеточные карциномы (образованные из базальных клеток кожи и придатков), переходно-клеточные карциномы (образованные из переходного эпителия, например раковой опухоли мочевого пузыря), печеночно-клеточные карциномы (образованные из гепатоцитов), почечно-клеточные карциномы (образованные из почечного эпителия), холангиокарциномы (образованные из желчных протоков) и хориокарциномы (образованные из плацентарного эпителия).

Неэпителиальные злокачественные опухоли

Злокачественные опухоли, образованные из мезенхимальной ткани

Фибросаркомы (образованные из соединительной ткани и фиброзной ткани), липосаркомы (образованные из соединительной ткани и жировой ткани), хондросаркомы (образованные из соединительной ткани и хрящевой ткани), остеосаркомы (образованные из соединительной ткани и костной ткани), ангиосаркомы (образованные из кровеносных сосудов), лимфангиосаркомы (образованные из лимфатических протоков), миелогенная лейкемия (образованная из кроветворных клеток), моноцитарная лейкемия (образованная из кроветворных клеток), злокачественная лимфома (образованная из лимфоидной ткани), лимфоцитарная лейкемия (образованная из лимфоидной ткани), плазмоцитома (множественная миелома, образованная из лимфоидной ткани), клетки Ходжкина (образованные из лимфоидной ткани), лейомиосаркома (образованная из гладких мышц), рабдомиосаркома (образованная из поперечнополосатой мышцы).

Злокачественные опухоли, образованные из невральной ткани

Нейробластома (образованная из нейробластов), медуллобластома (образованная из медуллобластов), злокачественная астроцитома (образованная из астроцитов), ретинобластома (образованная из ретинобластов), глиобластома (образованная из глиобластов), злокачественная невринома (образованная из клеток Schwann), меланома (образованная из нейроэктодермы).

Злокачественные опухоли, образованные из недифференцированных клеток

Злокачественная тератома (образованная из тотипотентных клеток), нефробластома (образованная из нефробластов), гепатобластома (образованная из гепатобластов), смешанные опухоли (образованные из различных типов клеток).

Из этих злокачественных опухолей, названных выше, препарат по настоящему изобретению для замедления локальной инвазии злокачественных опухолей и для инкапсулирования тканей злокачественной опухоли является высокоэффективным против эпителиальных злокачественных опухолей и против неэпителиальных злокачественных опухолей, полученных из невральной ткани, конкретно меланомы и рака легких.

Локальную инвазию злокачественных опухолей определяют как инвазию, при которой опухолевые клетки прорываются через капсулу для внедрения в окружающие жировые ткани и другие соединительные ткани, она отличается от широкой инвазии (в которой клетки непрерывно внедряются в другие органы из первичной опухоли).

Инкапсулирование тканей злокачественной опухоли означает, что капсулоподобную ткань формируют вокруг тканей злокачественной опухоли. Капсулоподобная ткань представляет собой соединительную ткань, образованную взаимодействием между тканями злокачественной опухоли и нормальными тканями, которая отделяет ткани злокачественной опухоли от нормальных тканей так, чтобы злокачественные опухолевые ткани оказались окруженными капсулой.

Образование капсулоподобной ткани вокруг тканей злокачественой опухоли уменьшает степень экстирпации тканей во время хирургического лечения злокачественной опухоли, делая операцию более легкой. Поскольку инкапсулирование облегчает полную экстирпацию тканей злокачественной опухоли, рецидив опухоли вследствие оставшихся внедрившихся опухолевых клеток, также можно предотвратить. Даже когда злокачественная опухоль возникает в жизненно важном органе, утрату функции жизненно важного органа можно предотвратить с помощью настоящего изобретения, потому что капсулоподобная ткань, которая образуется вокруг тканей злокачественной опухоли, позволяет осуществлять экстирпацию тканей злокачественной опухоли только в минимальной области органа.

Что касается причинной взаимосвязи между батроксобином, активным компонентом настоящего изобретения, и воздействиями замедления локальной инвазии злокачественных опухолей и инкапсулирования тканей злокачественной опухоли, имеются случаи, в которых локальная инвазия замедляется без какого-либо инкапсулирования тканей злокачественной опухоли (см. примеры, приведенные ниже). Поэтому представляется, что инкапсулирование тканей злокачественной опухоли не является необходимым условием для замедления локальной инвазии злокачественных опухолей. Однако оказывается, что инкапсулирование тканей злокачественной опухоли по меньшей мере содействует замедлению локальной инвазии злокачественных опухолей.

Препарат для ингибирования локальной инвазии злокачественных опухолей и для инкапсулирования тканей злокачественной опухоли настоящего изобретения может включать в себя батроксобин либо отдельно, либо в комбинации с другими активными веществами.

Примеры других активных веществ включают в себя антиметаболиты, такие как фторурацил, противоопухолевые антибиотики, такие как адриамицин, алкилирующие агенты, такие как дакарбазин, противораковые лекарственные средства растительного происхождения, такие как паклитаксел, и тому подобное.

Для изготовления препарата для замедления локальной инвазии злокачественных опухолей и для инкапсулирования тканей злокачественной опухоли по данному изобретению можно применять любую технологию изготовления лекарственного средства в соответствии с общими правилами японской фармакопеи для препаратов. Примеры изготовления форм препарата для замедления локальной инвазии злокачественных опухолей и для инкапсулирования тканей злокачественной опухоли данного изобретения включают в себя инъекции для прямого введения внутрь организма (включающие в себя суспензии и эмульсии); мази (включающие в себя жировые мази, эмульсионные мази (кремы), водорастворимые мази и тому подобное), лекарственные формы для ингаляции, жидкости (включающие в себя глазные растворы, раствор для орошения полости носа и тому подобное), суппозитории, пластыри, припарки, лосьоны и другие препараты для наружного применения; препараты для внутреннего применения, включающие в себя таблетки (в том числе покрытые сахаром, пленкой и желатином), жидкости, капсулы, гранулы, порошки (в том числе в виде крупинок), шарики, сиропы, пастилки и тому подобное. Эти препараты можно изготавливать способами, описанными в общих правилах японской фармакопеи для препаратов.

Препарат по данному изобретению для замедления локальной инвазии злокачественных опухолей и для инкапсулирования тканей злокачественной опухоли может также включать в себя фармакологически пригодные твердые или жидкие носители, или основы для терапевтического вмешательства, в зависимости от технологии его изготовления. Примеры фармакологически пригодных твердых или жидких носителей включают в себя растворители, стабилизаторы, консерванты, солюбилизирующие агенты, эмульгаторы, суспендирующие агенты, буферные агенты, изотонические агенты, окрашивающие агенты, основы, загустители, эксципиенты, смазывающие вещества, связующие агенты, разрыхляющие агенты, покрывающие агенты, корригенты и тому подобное.

Конкретные примеры включают в себя воду, лактозу, сахарозу, фруктозу, глюкозу, маннит, сорбит и другие сахара, и сахарные спирты, кристаллическую целлюлозу, метилцеллюлозу, этилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, незначительно замещенную гидроксипропилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, фталат гидроксипропилметилцеллюлозы, ацетатсукцинат гидроксипропилметилцеллюлозы, кармеллозу, кальциевую соль кармеллозы, натриевую соль кармеллозы, натриевую соль кроскармелозы, карбоксиметилэтилцеллюлозу, ацетатфталат целлюлозы и другие целлюлозы, и аналогичные производные, кукурузный крахмал, пшеничный крахмал, рисовый крахмал, картофельный крахмал, декстрин, прежелатинизированный крахмал, частично прежелатинизированный крахмал, гидроксипропилкрахмал, натриевую соль карбоксиметилкрахмала, циклодекстрин, пуллулан и другие крахмалы, и аналогичные производные, агар, альгинат натрия, смолу акации, желатин, коллаген, шеллак, трагакант, ксантановую смолу и другие природные полимеры (морские водоросли, растительный клей, белки и тому подобное), поливинилпирролидон, сополимер аминоалкилметакрилат, сополимер метакриловой кислоты, карбоксивиниловый полимер, поливиниловый спирт, диметилполисилоксан и другие синтетические полимеры, оливковое масло, масло какао, карнаубский воск, говяжий жир, гидрированное масло, соевое масло, кунжутное масло, масло камелии, парафин, жидкий парафин, парафиновое масло, желтый пчелиный воск, вазелин, кокосовое масло, микрокристаллический воск и другие масла и жиры, стеариновую кислоту, стеарат алюминия, стеарат кальция, стеарат магния, триэтилцитрат, триацетин, триглицерид жирной кислоты со средней длиной цепи, твердый жир, изопропилмиристат и другие жирные кислоты и их производные, глицерин, стеариловый спирт, цетанол, пропиленгликоль, макрогол и другие спирты, и многоатомные спирты, оксид цинка, двухосновный фосфат кальция, осажденный карбонат кальция, синтетический силикат алюминия, безводный диоксид кремния, каолин, высушенный гель гидроксида алюминия, синтетический гидротальцит, оксид титана, тальк, бентонит, алюмометасиликат магния, сульфат калийалюминия, субгаллат висмута, субсалицилат висмута, лактат кальция, бикарбонат натрия и другие неорганические вещества и соли металлов, эфиры сахарозы с жирной кислотой, полиоксистеарат, гидрогенизированное касторовое масло, функционализированное полиоксиэтиленом, полиоксиэтиленполиоксипропиленгликоль, сесквиолеат сорбитана, триолеат сорбитана, моностеарат сорбитана, монопальмитат сорбитана, монолаурат сорбитана, полисорбат, глицерилмоностеарат, лаурилсульфат натрия, лауромакрогол и другие сурфактанты, красители, отдушки и тому подобное.

Примеры устройств для терапевтического вмешательства включают в себя стенты, искусственные кровеносные сосуды и тому подобное.

Вводимая доза препарата по настоящему изобретению для замедления локальной инвазии злокачественных опухолей и для инкапсулирования тканей злокачественной опухоли различается в зависимости от массы пациента, симптомов заболевания и состояния, но составляет, например, 1-20 батроксобиновых единиц (обозначенных как BU) батроксобина один раз в день для взрослых.

Батроксобиновая единица, описанная здесь, представляет собой единицу, демонстрирующую ферментативную активность батроксобина и такую активность, при которой имеет место коагуляция плазмы в течение 19,0±0,2 секунд, когда 0,1 мл раствора батроксобина добавляют к 0,3 мл стандартной плазмы человека, содержащей лимонную кислоту, при температуре 37°С, определяют как 2 BU.

Препарат по настоящему изобретению для замедления локальной инвазии злокачественных опухолей и для инкапсулирования тканей злокачественной опухоли предпочтительно вводят путем подходящего разбавления батроксобина и введения его капельным внутривенным вливанием или внутривенным, артериальным, внутримышечным или локальным введением.

Острая токсичность (LD₅₀ (BU/кг)) батроксобина у мышей, крыс, кроликов и собак показана ниже в таблице 1. Изучение острой токсичности проводили внутривенным введением батроксобина согласно способам, описанным в литературе (Pharmacometrics 25:339-346, 1983).

Таблица 1
Острая токсичность батроксобина (i.v.) Виды животных Величина LD₅₀ (BU/кг) Мышь (ddy) 192-210 Крыса (Wistar) 105-110 Кролик (NW) >300 Cобака (помесь) 190-208

Настоящее изобретение ниже объясняется подробно с использованием примеров, но настоящее изобретение не ограничивается этими примерами.

[Пример 1] Замедляющее воздействие батроксобина на локальную инвазию меланомы

Клетки злокачественной меланомы В16-ВL6 (клетки солидного рака, Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing, China), полученные из мышей с симптомами высокой степени локальной инвазии, которые субкультивировали в мышах C57BL/6j (Animal Institute of Academy of Medical Sciences, Beijing, China) и суспендировали в физиологическом солевом растворе для получения суспензии клеток меланомы с концентрацией 5 × 10⁶/мл. 0,2 мл полученной в результате суспензии клеток меланомы инокулировали подкожно в правую часть спины 7-недельных (массой 18-20 г) самцов мышей С57BL/6j для получения мышей, имеющих опухоль.

Мыши с установленной опухолью произвольно были приписаны к контрольной группе (5 мышей) и к группе батроксобина (10 мышей), которую подвергали лечению. Мыши в группе батроксобина получали внутрибрюшинно инъекции 40 BU/кг батроксобина ежедневно один раз в день от 4 до 20 дней после инокуляции клеток опухоли. Мыши в контрольной группе получали внутрибрюшинно инъекции физиологического раствора соли такого же объема (2 мл/кг) вместо батроксобина. В конце эксперимента (через 20 дней после инокуляции опухоли) брали образцы ткани, включающие в себя ткани солидной опухоли и окружающую кожу и мышцу, и фиксировали формалином, затем фиксированные образцы погружали в парафин и приготавливали как образцы, окрашенные красителем гематоксилин-эозин. Полученные в результате образцы исследовали под оптическим микроскопом и оценивали замедляющее воздействие батроксобина на локальную инвазию злокачественных опухолей.

(1) Микроскопическое исследование

На фиг.1 показана микроскопическая фотография (увеличение 200х) из контрольной группы. На фиг.2 показана микроскопическая фотография (увеличение, 100х) из группы батроксобина (верх: инкапсулирование вокруг тканей опухоли, низ: инкапсулирование вокруг тканей опухоли (от другой мыши)).

В контрольной группе клетки меланомы (Т) и окружающая кожа или мышца (М) были полностью соединены так, что было трудно отделить ткань меланомы от мышцы (фиг.1). Это указывает на то, что капсулоподобная ткань не образовалась.

С другой стороны, в группе батроксобина капсулоподобная ткань (соединительная ткань) оказалась между клетками меланомы (Т) и мышцей (М). Инвазия клеток меланомы (Т) была ограниченной вследствие присутствия этой капсулоподобной ткани и почти не было локальной инвазии в подкожную соединительную ткань или боковую мышцу (фиг.2, верх и низ). Более того, в группе батроксобина присутствие капсулоподобной ткани означает, что ткань меланомы не была близко связана с окружающей кожей и мышцей. Таким образом, это означает, что ткани опухоли можно было легко отделить от кожи и мышцы и удалить в целом.

(2) Количественная оценка локальной инвазии

Локальную инвазию клеток меланомы оценивали согласно присутствию или отсутствию локальной инвазии в слое боковой мышцы (положительная оценка: локальная инвазия присутствует). Также оценивали и присутствие или отсутствие капсулоподобной ткани, окружающей ткань меланомы (положительная оценка: капсулоподобная ткань присутствует). Результаты показаны в таблице 2.

Таблица 2
Замедляющее действие батроксобина на локальную инвазию подкожно трансплантированной меланомы В16-ВL6 Подвергаемая лечению группа Локальная инвазия в слое боковой мышцы (положительная/общая (%)) Капсулоподобная ткань (положительная/общая
(%)) Контрольная группа 3/5 (60%) 1/5 (20%) Батроксобин 0/10 (0%)* 9/10 (90%)* *P<0/05 по сравнению с контрольной группой

Как показано в таблице 2, имеется значительное различие между контрольной группой и группой батроксобина в замедлении локальной инвазии и образовании капсулоподобной ткани. Эти результаты показывают, что батроксобин может эффективно замедлять локальную инвазию меланомы и может вызывать или ускорять образование капсулоподобной ткани вокруг тканей меланомы.

[Пример 2] Замедляющее действие батроксобина на локальную инвазию рака легких

Клетки легочной аденомы LA795 (клетки солидного рака, Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing, China), полученные из мышей с симптомами высокой степени локальной инвазии, которые субкультивировали в самцах мышей Т739 (Animal Institute of Academy of Medical Sciences, Beijing, China) и суспендировали в физиологическом солевом растворе для получения суспензии клеток рака легких с концентрацией 5 × 10⁶/мл. 0,2 мл образовавшейся суспензии клеток рака легких были инокулированы подкожно в правую часть спины 7-недельных (массой 18-20 г) самцов мышей Т739 для получения мышей, имеющих опухоль рака легких.

Мыши с установленной опухолью рака легких произвольно распределяли в контрольную группу (18 мышей) и группу батроксобина (18 мышей), которую подвергали лечению. Мыши в группе батроксобина получали внутримышечные инъекции 40 BU/кг батроксобина ежедневно один раз в день от 2 до 18 дней после инокуляции клеток опухоли. Мыши в контрольной группе получали внутримышечные инъекции такого же объема физиологического раствора соли (2 мл/кг) вместо батроксобина. В конце эксперимента (19 дней после инокуляции опухоли) брали образцы ткани, включающие в себя ткань солидной опухоли и окружающую кожу и мышцу и фиксировали формалином, затем фиксированные образцы погружали в парафин и приготовляли как образцы, окрашенные красителем гематоксилин-эозин. Полученные в результате образцы исследовали под оптическим микроскопом и оценивали замедляющее действие батроксобина на локальную инвазию злокачественных опухолей.

(1) Микроскопическое исследование

На фиг.3 показана микроскопическая фотография (увеличение 200х) из контрольной группы. На фиг.4 показана микроскопическая фотография (увеличение 100х) из группы батроксобина (верх: инкапсулирование вокруг тканей опухоли, низ: инкапсулирование вокруг тканей опухоли (от другой мыши)).

В контрольной группе клетки (Т) рака легких и окружающая мышца (М) были полностью связаны вместе так, что было почти невозможно отделить ткань твердой опухоли рака легких от мышцы (фиг.3). Это показывает, что капсулоподобная ткань не образовывалась.

С другой стороны, в группе батроксобина появилась капсулоподобная ткань (соединительная ткань) между клетками (Т) рака легких и мышцей (М). Инвазия клеток (Т) рака легких ограничивается из-за присутствия этой капсулоподобной ткани и почти не имеется локальной инвазии в подкожной соединительной ткани или боковой мышце. Конкретно, клетки (Т) солидного рака легких появляются вверху справа на верхней фотографии на фиг.4, в то время как ткани мышцы (М) появляются в наклонном положении в середине фигуры с капсулоподобной тканью между ними. Верхнюю половину нижней фотографии на фиг.4 занимают клетки (Т) солидного рака легких, в то время как нижняя половина является тканями мышцы (М). Капсулоподобная ткань появляется между этими раковыми тканями и тканями мышцы. Кроме того, в группе батроксобина присутствие капсулоподобной ткани означает, что раковые ткани не являются полностью связанными с окружающей кожей и мышцей, так что раковые ткани можно легко отделять от кожи и мышцы и удалять в целом.

(2) Количественная оценка локальной инвазии

Локальную инвазию клеток рака легких оценивали согласно присутствию или отсутствию локальной инвазии в боковом слое мышцы (положительная оценка: локальная инвазия присутствует). Также оценивали присутствие или отсутствие капсулоподобной ткани вокруг тканей рака легких (положительная оценка: капсулоподобная ткань присутствует). Результаты показаны в таблице 3.

Таблица 3
Замедляющее действие батроксобина на локальную инвазию в подкожно трансплантированном раке легких LA795 Группа, подвергаемая лечению Локальная инвазия в слое боковой мышцы Капсулоподобная ткань (положительная/полная (%)) Контрольная группа 14/18 (77,8%) 4/18 (22,2%) Батроксобин 6/18 (33,3%)* 10/18 (55,6%)* *P<0,05 по сравнению с контрольной группой

Как показано в таблице 3, имеется значительное различие между контрольной группой и группой батроксобина в замедлении локальной инвазии и образовании капсулоподобной ткани. Эти результаты показывают, что батроксобин может эффективно замедлять локальную инвазию рака легких и может вызывать или ускорять образование капсулоподобной ткани вокруг тканей рака легких.

ПРОМЫШЛЕННАЯ ПРИМЕНИМОСТЬ

Как показано в примерах, настоящее изобретение может эффективно замедлять локальную инвазию злокачественных опухолей и вызывать или ускорять образование капсулоподобной ткани вокруг тканей злокачественной опухоли. Вследствие замедления локальной инвазии требуется удалять меньше ткани во время хирургического лечения злокачественных опухолей, что делает операцию более легкой. Кроме того, капсулоподобная ткань, которая образуется вокруг тканей злокачественной опухоли, облегчает полную экстирпацию (удаление) тканей злокачественной опухоли. Изобретение можно успешно применять для предотвращения рецидива опухоли из-за остаточных внедрившихся клеток злокачественной опухоли, которые вызывали неполную экстирпацию опухоли ранее, в предшествующем уровне техники. Радиационное облучение также можно уменьшить, когда применяют лучевую терапию, потому что требуется подвергать воздействию радиации меньшую область тканей опухоли.

Следовательно, настоящее изобретение можно применять как препарат для замедления локальной инвазии злокачественных опухолей и для инкапсулирования тканей злокачественной опухоли.

Изобретение относится к препарату для замедления локальной инвазии злокачественных опухолей, который содержит батроксобин и поэтому может замедлять локальную инвазию злокачественных опухолей. Изобретение также относится к препарату для инкапсулирования тканей злокачественной опухоли, который содержит батроксобин и поэтому может вызывать или ускорять инкапсулирование капсулоподобной ткани вокруг тканей злокачественной опухоли. Заявленное изобретение обеспечивает инкапсулирование и замедление локальной инвазии злокачественных опухолей из эпителиальной, неэпителиальной, невральной тканей, представляющих собой меланому или рак легких. 2 н. и 8 з.п. ф-лы, 3 табл., 4 ил.

1. Препарат, содержащий батроксобин, для ингибирования локальной инвазии злокачественных опухолей.

2. Препарат для ингибирования локальной инвазии злокачественных опухолей по п.1, где злокачественные опухоли представляют собой эпителиальные злокачественные опухоли.

3. Препарат для ингибирования локальной инвазии злокачественных опухолей по п.1, где злокачественные опухоли представляют собой неэпителиальные злокачественные опухоли.

4. Препарат для ингибирования локальной инвазии злокачественных опухолей по п.1, где злокачественные опухоли представляют собой злокачественные опухоли, полученные из невральной ткани.

5. Препарат для ингибирования локальной инвазии злокачественных опухолей по п.1, где злокачественная опухоль представляет собой меланому или рак легких.

6. Препарат, содержащий батроксобин, для инкапсулирования тканей злокачественной опухоли.

7. Препарат для инкапсулирования тканей злокачественной опухоли по п.6, где злокачественные опухоли представляют собой эпителиальные злокачественные опухоли.

8. Препарат для инкапсулирования тканей злокачественной опухоли по п.6, где злокачественные опухоли представляют собой неэпителиальные злокачественные опухоли.

9. Препарат для инкапсулирования тканей злокачественной опухоли по п.6, где злокачественные опухоли представляют собой злокачественные опухоли из невральной ткани.

10. Препарат для инкапсулирования тканей злокачественной опухоли по п.6, где злокачественная опухоль представляет собой меланому или рак легких.