СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РАЗВИТИЯ ОЧАГОВЫХ ФОРМ КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА В ОСТРОМ ПЕРИОДЕ Российский патент 2013 года по МПК G01N33/483 G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, неврологии, инфекционным болезням, а именно к ранней диагностике развития различных форм клещевого энцефалита (КЭ) - непаралитических (менингиальная, лихорадочная) и паралитических очаговых форм.

Широкое распространение КЭ, высокий уровень заболеваемости, часто приводящей к инвалидизации, вероятность летальных исходов обусловливают высокую медико-социальную и экономическую значимость КЭ и делают необходимым дальнейший поиск новых ранних методов прогнозирования течения инфекции. Первые 2-4 дня заболевания КЭ еще не определяют его клинической формы и тяжести (А.П.Иерусалимский, 2006). Ведущим в это время часто бывает общеинфекционный синдром, а неврологические проявления могут развиться позднее. Клиническая симптоматика не всегда отражает истинную тяжесть и степень поражения центральной нервной системы (ЦНС). Этим можно объяснить тот факт, что исход заболевания, в том числе и неблагоприятный, становится очевидным далеко не в первые дни от начала болезни.

Актуальным является поиск прогностических маркеров, отражающих выраженность патологических изменений в ЦНС, с целью раннего и адекватного лечения.

Известен способ прогнозирования развития очаговых форм КЭ [Субботин А.В., Чебаненко Н.В., Зинчук С.Ф. Способ прогнозирования развития очаговых форм клещевого энцефалита. Патент РФ №2003103892/14 от 2004 г.; Субботин А.В., Деконенко Е.П., Чебаненко Н.В., Зинчук С.Ф. О роли различных факторов в прогнозировании развития и формирования очаговой формы клещевого энцефалита // Неврологический журнал. - 2004. - №4. - С.19-25], основанный на оценке совокупности анамнестических, клинических и лабораторных признаков, в том числе анализе крови (определение лейкоцитарного индекса интоксикации, люциферазного индекса, концентрации гемоглобина, количества эритроцитов, концентрации молекул средней массы, концентрации мочевины и билирубина, активности аланинаминотрансферазы), определении каждому признаку прогностического коэффициента, прогноз проводят путем сравнения суммы коэффициентов пациента со средней известной вероятностью степени риска развития очаговой формы КЭ. Недостатки: способ трудоемок, требует сбора и анализа многочисленных показателей, математической обработки данных.

Техническим результатом изобретения является упрощение и ускорение способа раннего прогнозирования течения КЭ при высокой чувствительности и специфичности.

Поставленная задача решается тем, что у больного в тромбоцитах крови определяют уровень серотонина, пороговая цифра тромбоцитарного серотонина (ТС) составляет 150 нг/мл, выше которой прогнозируют благоприятное течение заболевания с развитием непаралитических форм, меньше 150 нг/мл - прогнозируют неблагоприятное течение с формированием паралитических очаговых форм.

Способ осуществляют следующим образом. У больного с КЭ утром натощак забирают 5 мл крови из вены в пластиковую пробирку, содержащую цитрат. Далее для получения плазмы крови, обогащенной тромбоцитами (ПОТ), образцы центрифугируют в течение 10 минут при комнатной температуре при 200×g. Переносят надосадочную жидкость в другую пробирку и проводят подсчет тромбоцитов. Осадок тромбоцитов получают путем добавления 800 мкл физиологического раствора к 200 мкл ПОТ и центрифугирования (4500×g, 10 минут). Надосадочную жидкость удаляют. К осадку тромбоцитов добавляют 200 мкл дистиллированной воды и тщательно перемешивают на вортексе. Полученную суспензию затем можно хранить замороженной при температуре минус 20°C в течение нескольких недель. Замороженный образец после размораживания центрифугируют при 10000×g в течение 2 минут при комнатной температуре. Для реакции ацилирования используют 25 мкл надосадочной жидкости. До проведения ИФА проводят количественное ацилирование серотонина.

Набор Serotonin ELISA ^{Fast Track} (LDN, Германия) основан на твердофазном конкурентном варианте иммуноферментного анализа. На поверхности лунок планшета (твердой фазе) иммобилизованы молекулы антигена. Молекулы ацилированного серотонина, содержащиеся в стандартах, контролях и исследуемых образцах, и молекулы, иммобилизованные на твердой фазе, конкурируют за ограниченное число центров связывания специфических антител. После того как реакция связывания достигнет равновесия, несвязавшиеся с твердой фазой антигены и комплексы «антиген-антитело» удаляют промывкой. Антитела, связавшиеся с иммобилизованным на твердой фазе антигеном, выявляют с помощью конъюгата - антител к IgG кролика, меченных пероксидазой. В качестве субстрата используют тетраметилбензидин (ТМБ). Интенсивность цветовой реакции измеряют при длине волны 450 нм. Количество серотонина в исследуемых образцах рассчитывают по калибровочной кривой, построенной по известным концентрациям в стандартах. Содержание серотонина в тромбоцитах выражается отношением к 10⁹ тромбоцитов.

Для прогнозирования течения КЭ в тромбоцитах крови определяют уровень серотонина. Если величина серотонина более 150 нг/мл, то прогнозируют благоприятное течение заболевания с развитием непаралитических форм КЭ (лихорадочной и менингиальной). В случае если величина серотонина будет менее 150 нг/мл, прогнозируют неблагоприятное течение с формированием паралитических очаговых форм.

При помощи заявляемого способа повышается точность прогнозирования течения и тяжести поражения ЦНС у больных с КЭ.

Чувствительность метода - 91%.

Специфичность метода - 98%.

ПРИМЕРЫ КОНКРЕТНОГО ПРИМЕНЕНИЯ

Пример 1. Б-я П., 35 лет, преподаватель, история болезни №4434. Поступила 17.06.2011 г. на второй день болезни с жалобами на высокую температуру, сильную головную боль, боли при движении глазных яблок, слабость. Эпиданамнез - 7 дней назад отдыхала на природе в лесу, присасывание клеща отрицает, от КЭ не вакцинирована. Заболела остро 16.06.2011 г. - температура 38,0°C, озноб, головная боль, миалгии, тошнота, рвота на высоте головной боли. При объективном обследовании в стационаре: состояние средней тяжести, температура до 38,0°C в течение 2 дней. Гиперемия лица, инъекция сосудов склер. В зеве разлитая легкая гиперемия. АД 110/70 мм рт.ст. Пульс - 88 в мин. Ригидность затылочных мышц +1,5 см (сомнительная), симптом Кернига отрицательный с обеих сторон, очаговых неврологических симптомов нет. В общем анализе крови от 18.06.2011 г. эр. - 4,0×10¹²/л, гемоглобин - 122 г/л, тромбоциты - 252×10⁹/л, лейкоциты - 4,1×10⁹/л, э - 1%, п - 2%, с - 53%, л - 37%, м - 6%, СОЭ - 2 мм/час. Общий анализ мочи и биохимический анализ крови без отклонений от нормы. В ИФА в сыворотке крови обнаружены антитела класса IgM к вирусу КЭ, КП 1,1. ИФА на боррелиоз, анаплазмоз, эрлихиоз - антитела не выявлены. Тромбоцитарный серотонин - 325,7 нг/мл. Диагноз: Клещевой энцефалит, лихорадочная форма, средней степени тяжести (непаралитическая форма).

Вывод. В первые дни заболевания у данной пациентки не исключалась форма с поражением ЦНС, от люмбальной пункции больная отказалась, была выбрана выжидательная тактика. Определение уровня ТС позволило с высокой вероятностью говорить о том, что поражения ЦНС у этой больной отсутствует и заболевание будет иметь благоприятный исход.

Пример 2. Б-я В., 52 лет, история болезни №4688. Поступила 26.06.2011 г. на второй день болезни с жалобами на температуру, сильную головную боль, слабость. Эпиданамнез - 11.06.2011 г. (за 14 дней до заболевания) посещала лес, было присасывание клеща в живот. Вирусофорность клеща ++++. Введен противоэнцефалитный иммуноглобулин 1:160 - 3,0 мл (через сутки). Заболела остро 25.06.2011 г. - температура 37,3-39°C, озноб, головная боль, слабость, миалгии. Против КЭ не вакцинирована. При объективном обследовании в стационаре: состояние средней тяжести, температура до 39,0°C в течение 7 дней. Гиперемия лица, инъекция сосудов склер. В зеве разлитая легкая гиперемия. АД 120/70 мм рт.ст. Пульс - 100 ударов в мин. Ригидность затылочных мышц +1,5 см, симптом Кернига сомнительный, очаговых неврологических симптомов нет. В анализе крови от 27.06.2011 г. - эр. - 4,3×10¹²/л, гемоглобин - 135 г/л, тромбоциты - 340×10⁹/л, лейкоциты - 8,8×10⁹/л, п - 4%, с - 76%, л - 16%, м - 4%, СОЭ - 11 мм/час. Проведена люмбальная пункция, ликвор прозрачный, реакция Панди положительная, плеоцитоз 52 клетки, смешанный, белок 470, сахар - 3,2. Общий анализ мочи и биохимический анализ крови без отклонений от нормы. В ИФА в сыворотке крови обнаружены антитела класса IgM к вирусу КЭ, КП 12,8. ИФА на боррелиоз, анаплазмоз, эрлихиоз - антитела не выявлены. Тромбоцитарный серотонин - 174,7 нг/мл. Диагноз: Клещевой энцефалит, менингеальная форма, средней степени тяжести (непаралитическая форма).

Вывод. Определение уровня ТС позволило уже в первые дни заболевания с высокой вероятностью говорить о том, что у данной пациентки поражение вещества головного мозга отсутствует, и с учетом клинических и лабораторных данных диагностировать менингиальную форму заболевания с благоприятным течением.

Пример 3. Б-й П., 44 лет, преподаватель, история болезни №5188. Поступил 14.07.2011 г. на 11 день болезни с жалобами на высокую температуру, сильную головную боль, слабость, рвоту. Эпиданамнез - 10 дней назад был на сплаве на реке, присасывание клеща отрицает, от КЭ не вакцинирован. Заболел остро 03.07.2011 г. - температура 39,0°C, озноб, головная боль, миалгии, принимал жаропонижающие, в последующие 7 дней температура нормальная; 10.07.2011 г. вновь повышение температуры до 39,0°C, тошнота, рвота на высоте головной боли, судороги, слабость. При объективном обследовании в стационаре: состояние тяжелое, температура 39,0°C, больной в сопоре. Гиперемия лица, инъекция сосудов склер. В зеве разлитая легкая гиперемия. АД 160/120 мм рт.ст. Пульс - 105 ударов в мин. Ригидность затылочных мышц +2,0, симптом Кернига положительный под углом 160° с обеих сторон, легкий расходящийся страбизм. В общем анализе крови эр. - 4,55×10¹²/л, гемоглобин - 135 г/л, тромбоциты - 230×10⁹/л, лейкоциты - 8,0×10⁹/л, э - 1%, п - 2%, с - 72%, л - 19%, м - 6%, СОЭ - 9 мм/час. Общий анализ мочи и биохимический анализ крови без отклонений от нормы. Проведена люмбальная пункция, ликвор прозрачный, реакция Панди отрицательная, плеоцитоз 21 клетка, смешанный, белок 1380 г/л, сахар - 2,9 ммоль/л. В ИФА в сыворотке крови обнаружены антитела класса IgM к вирусу КЭ, КП 7,4. ИФА на боррелиоз, анаплазмоз, эрлихиоз - антитела не выявлены. Тромбоцитарный серотонин - 147,7 нг/мл. Диагноз: Клещевой энцефалит, менингоэнцефалическая форма, тяжелое течение (паралитическая форма).

Вывод: Определение уровня ТС позволило уже в первые дни заболевания с высокой вероятностью говорить о том, что у пациента есть поражение ЦНС, и с учетом клинических и лабораторных данных была диагностирована паралитическая очаговая форма заболевания.

Пример 4. Б-я X., 61 года, пенсионерка, история болезни №5133. Поступила 11.07.2011 г. на 3 день болезни с жалобами на высокую температуру, сильную головную боль в затылочной области, слабость, боли в мышцах и суставах. Эпиданамнез - 25.06.2011 г. присасывание клеща в шею, пила сырое коровье молоко, клещ не исследован, от КЭ не вакцинирована. Заболела остро 09.07.2011 г. - температура 38,8°C, озноб, головная боль, артралгии, миалгии, рвота, 11.07.2011 г. вызвала скорую помощь, доставлена в краевую клиническую инфекционную больницу. При объективном обследовании в стационаре: состояние средней тяжести, температура 39,3°C, больная в сознании. Гиперемия лица, инъекция сосудов склер. В зеве разлитая легкая гиперемия. АД 160/100 мм рт.ст. Пульс - 96 в мин. Ригидность затылочных мышц +3,0, симптом Кернига положительный под углом 160° с обеих сторон. В общем анализе крови эр. - 3,5×10¹²/л, гемоглобин - 106 г/л, тромбоциты - 240×10⁹/л, лейкоциты - 8,0×10⁹/л, п - 3%, с - 86%, л - 7%, м - 4%, СОЭ - 32 мм/час. Общий анализ мочи: протеинурия, лейкоцитурия. Биохимический анализ крови: сахар - 7,5 ммоль/л. Проведена люмбальная пункция, ликвор прозрачный, реакция Панди резко положительная, плеоцитоз 725 клеток, смешанный, белок 1240 г/л, сахар - 1,72 ммоль/л. В ИФА в сыворотке крови обнаружены антитела класса IgM к вирусу КЭ, КП 1,2. ИФА на боррелиоз, анаплазмоз, эрлихиоз - антитела класса IgM не выявлены. Тромбоцитарный серотонин - 59,4 нг/мл. Диагноз: Клещевой энцефалит, менингоэнцефалополиемилитическая форма, тяжелое течение (паралитическая форма).

Особенность данного случая в том, что пациентка поступает с подозрением на КЭ, люмбальная пункция проводится только на следующий день, когда была заподозрена менингиальная форма, а к вечеру состояние больной ухудшилось, появилась очаговая симптоматика и больная переведена в отделение реанимации, где через 2 недели погибает.

Вывод: исследование уровня ТС в первый день поступления в стационар позволило с высокой степенью вероятности говорить о том, что у данной пациентки имеет место поражение ЦНС, формируется паралитическая очаговая форма, и прогнозировать неблагоприятный исход заболевания.

Таким образом, проведенные исследования позволили выявить критерий, на основании которого можно прогнозировать течение КЭ. Полученные знания позволят инфекционистам и неврологам уже в первые дни заболевания прогнозировать формирование паралитических очаговых форм, назначить адекватную терапию и снизить количество осложнений. Существенным преимуществом заявляемого способа является небольшое количество крови, необходимое для исследования, в сочетании с высокой чувствительностью и специфичностью. Кроме того, способ не травматичен и не имеет противопоказаний. Способ апробирован на клиническом материале и найдет применение в практике инфекционистов, неврологов.

Изобретение относится к медицине, в частности к ранней диагностике развития различных форм клещевого энцефалита. Изобретение предоставляет собой способ прогнозирования развития очаговых форм клещевого энцефалита в остром периоде. Прогнозирование осуществляется на основе анализа крови: в тромбоцитах крови больного определяют уровень серотонина и при его значении более 150 нг/мл прогнозируют благоприятное течение клещевого энцефалита с развитием непаралитических форм, менее 150 нг/мл - прогнозируют неблагоприятное течение с формированием паралитических очаговых форм. Способ обеспечивает повышение точности и специфичности проводимого прогнозирования. 4 пр.

Способ прогнозирования развития очаговых форм клещевого энцефалита в остром периоде с помощью анализа крови, отличающийся тем, что в тромбоцитах крови больного определяют уровень серотонина, при его значении более 150 нг/мл прогнозируют благоприятное течение заболевания с развитием непаралитических форм, менее 150 нг/мл прогнозируют неблагоприятное течение с формированием паралитических очаговых форм.