СПОСОБ ОЦЕНКИ ДЕЙСТВИЯ ГЕРПЕС-ВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ НА УСТОЙЧИВОСТЬ МЕМБРАН ЭРИТРОЦИТОВ НОВОРОЖДЕННЫХ ОТ МАТЕРЕЙ, ПЕРЕНЕСШИХ В ТРЕТЬЕМ ТРИМЕСТРЕ БЕРЕМЕННОСТИ ОБОСТРЕНИЕ ГЕРПЕС-ВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ Российский патент 2013 года по МПК G01N33/48 

Цель исследования показать, что если при обострении у беременной в третьем триместре герпес-вирусной инфекции вирус герпеса преодолевает фетоплацентарный барьер ворсинок синцитиотрофобласта и в периферической крови новорожденного, стимулирует нарастание в мембранах эритроцитов новорожденного продуктов перекисного окисления липидов - малонового диальдегида (МДА), то в них происходят структурные изменения - снижается содержание β-спектрина. Мембраны эритроцитов плода и новорожденного, как общеизвестно, имеют отличающуюся друг от друга структуру: у новорожденного и плода они шаровидной формы, диаметр их от 8 до 10 мкм в отличие от материнских, имеющих дисковидную форму и диаметр от 7 до 7.5 мкм.

Уязвимость белковой стромы эритроцитов новорожденных при попадании в его кровь вируса герпеса и нарастании малонового диальдегида становится очень опасным явлением для новорожденного.

Спектрин является главным протеином мембран эритроцитов, выполняющим функцию цитоскелета мембраны (V.T.Marchesi, 1983) [7]. α- и β-спектриновые нити переплетаясь, образуют основу цитоскелета эритроцита (J.Palek. 1985 [8]; А.И.Воробьев, 2007 [1]; M.J.Telen, R.E.Kaufinan, 2004 [9]). Изменение структуры молекулы спектрина или снижение его содержания нарушают устойчивость мембраны эритроцитов. Не исключено, что фактором, отрицательно влияющим на содержание спектрина, являются перекиси липидов, выработка которых, стимулируется обострением герпес-вирусной инфекции. В качестве прототипа взяты работы: Иванова В.П., Лукашова А.Д., Полоникова А.В. (2000) [2], отмечающих, что при гипотонии нарушается содержание основных мембранных белков эритроцитов, а также работу Штехмана М.И (2004) [5], в которой автор указывает, что при гипохромной анемии под влиянием нарушения электролитного баланса в эритроцитах происходит изменение структуры мембранного белка-спектрина.

Однако, в работе Иванова В.П., Лукашова А.А. и Полоникова А.В. [2] нет указаний, какие именно факторы становятся причиной нарушения содержания белков цитоскелета мембран эритроцитов при гипотонии, а в работе Штехмана М.И. [5] основной причиной изменения цитоскелета эритроцитов считается нарушение баланса электролитного состава эритроцитов.

В работах М.Т. Луценко и И.А. Андриевской (2009) описываются изменения в мембранах эритроцитов беременной, но не новорожденного [3].

В отличие от вышеуказанных работ в представленной заявке имеются следующие элементы отличия.

1. Авторы указывают, что вирус герпеса, заражая беременную, проникает через барьер в кровь новорожденного.

2. У новорожденного увеличивается в мембранах эритроцитов содержание малонового диальдегида.

3. Под влиянием герпес-вирусной инфекции с прямым участием малонового диальдегида в мембранах эритроцитов новорожденного нарушается структура скелетных белков - снижается содержание β-спектрина.

В своих исследованиях мы обращаем внимание на фактор, наиболее токсично действующий на мембрану эритроцитов, - малоновый диальдегид, который активно вырабатывается в клеточных мембранах под влиянием инфекционного начала - герпес-вирусной инфекции, а изменения происходят не у взрослых пациентов, а в эритроцитах новорожденных, родившихся от матерей, перенесших в третьем триместре обострение герпес-вирусной инфекции.

Заявленный способ имеет следующие приемы.

1. Исследовали кровь у 20 беременных в третьем триместре гестации и 20 новорожденных, родившихся от этих матерей. Титр антител к вирусу герпеса определяли иммуноферментным методом на спектрофотометре «Stat-Fax-2100» (USA).

2. В мембранах эритроцитов новорожденных методом диск-электрофореза в ступенчатом градиентном полиакриламидном геле (10%) с додецилсульфатом натрия, выявляли β-спектрин с помощью денситометрии на аппарате «Biometra» (Германия).

3. Малоновый диальдегид определяли в периферической крови новорожденных спектрофотометрическим методом на аппарате «Stat-Fax-1900» (USA) по методу, предложенному И.Д.Стальной и Т.Г.Гаришвили (1977).

4. Исследования проводились на базе стационара акушерского отделения, клиники Дальневосточного научного центра физиологии и патологии дыхания СО РАМН. Все исследования были проведены с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека» с поправками 2000 г. и «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утвержденными Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г. №266.

Исследования показали, что в случае обострения герпес-вирусной инфекции у беременной в третьем триместре гестации высокий титр антител в периферической крови отмечается как у матери, так и у новорожденного (1:12800).

При этом в периферической крови новорожденного обнаруживается накопление до 1,65±0,09 мкмоль/мл МДА (контроль - 0,4 мкмоль/мл; р<0,001). Изучение методом диск-электрофореза в полиакриламидном геле (10%) с додецилсульфатом натрия в мембранах эритроцитов новорожденного отмечается снижение содержания β-спектрина до 6,01±0,22% (контроль - 7,11±0,40%; р<0,001).

Проведенный дискриминантный анализ показал, что дискриминантная функция (D_ф) по формуле.

Имя выборки Объем выборки Количество параметров Расстояния Махалан Критерий Фишера, различия выборок Вероятность различия выборок Граничное значение дискриминант
ной функции Вероятность ошибочности классиф., % 493 14 2 5.49 101.38 100.000 -55.45 .513 00R 14 2 .513 D_ф=(-9.236×β - спектрин)+(+19.029×МДА) где D_ф - дискриминантная функция; β-спектрин - белок стромы эритроцитов, содержащийся в мембранах эритроцитов; - 9,236 - коэффициент, автоматически выставляемый компьютером в дискриминантном уравнении при значении β-спектрина, равном 6,01%;
МДА - малоновый диальдегид; + 19,029 - коэффициент, автоматически выставляемый компьютером в дискриминантном уравнении при значении МДА -1,65 мкмоль/мл.

Таким образом, при обострении герпес-вирусной инфекции в периферической крови новорожденного увеличивается содержание малонового диальдегида (МДА), что приводит к снижению в мембранах эритроцитов β-спектрина до 6,01±0,22% (контроль - 7,11±0,40%), выявляемого методом диск-электрофореза в полиакриламидном геле (10%) с додецилфосфатом натрия. По вычисленному значению D_ф в формуле дискриминантной функции D_ф=(-9.236×β-спектрин)+(+19.029×МДА) более (-24,03) оценивают неустойчивость мембран эритроцитов, формирующую угрозу разрушения эритроцитов и развитие внутриутробной анемии.

Литература

1. Воробьев А.И. Руководство по гематологии. - М.: Изд. «Ньюдиамед», 2007 - 1275 с.

2. Иванов В.П, Лукашов А.А, Полоников А.В. Содержание основных белков мембран эритроцитов у больных первичной артериальной гипотонией и ее связь с наследственностью, предрасположенной к сердечно-сосудистой патологии // Тер. Архив. 2000. - №9. - С.69-73.

3. Луценко М.Т., Андриевская И.А. Дифференциальная диагностика устойчивости мембран эритроцитов периферической крови у беременных с герпес-вирусной инфекцией // Бюллетень физиологии и патологии РАМН, 2009. - №4. - С.71-74.

4. Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты // Современные методы в биохимии. Москва. - 1977. - 390 с.

5. Штехман М.И. Железодефицитная анемия и беременность // Гинекология. 2004. - Т.6, №4. - 11 с.

6. Marchesi V.T. Functional proteins of the human red cell membrane semin // Hematol. 1979. - Vol.16. - P.3-20.

7. Marchesi V.T. The red cell membrane skeleton recent progress // Blood. 1983. - P.1-11.

8. Palek J. Hereditary elliptocytosis and related disordes // Clin. Hematol. 1985. - Vol.14, №1. Р.45-87.

9. Telen M.J., Kaufman R.E. The mature erythrocyte. Wintrobs Clinical Hematology. Ed.J.P.Greer, J.Forster, J.N.Lukens. Chapter 8.11th edition. Lippincott William and Wilkins. 2004. P.217-247.

Изобретение относится к области медицины и может найти применение для оценки действия герпес-вирусной инфекции на устойчивость мембран эритроцитов новорожденных от матерей, перенесших в третьем триместре беременности обострение герпес-вирусной инфекции. Сущность способа: в периферической крови новорожденного определяют накопление малонового диальдегида (МДА) и в мембранах эритроцитов новорожденного методом диск-электрофореза в полиакриламидном геле (10%) с додецилсульфатом натрия определяют β-спектрин, вычисляют значение дискриминантной функции по формуле: Dф=(-9,236×β-спектрин)+(+19,029×МДА). При Dф более -24,03 оценивают неустойчивость мембран эритроцитов, формирующую угрозу разрушения эритроцитов и развитие внутриутробной анемии. 1 табл.

Способ оценки действия герпес-вирусной инфекции на устойчивость мембран эритроцитов новорожденных от матерей, перенесших в третьем триместре беременности обострение герпес-вирусной инфекции, характеризующийся тем, что в периферической крови новорожденного определяют накопление малонового диальдегида (МДА) и в мембранах эритроцитов новорожденного методом диск-электрофореза в полиакриламидном геле (10%) с додецилсульфатом натрия определяют β-спектрин, вычисляют значение дискриминантной функции по формуле:
Dф=(-9,236×β-спектрин)+(+19,029×МДА);
и при Dф более -24,03 оценивают неустойчивость мембран эритроцитов, формирующую угрозу разрушения эритроцитов и развитие внутриутробной анемии.