СПОСОБ ОЦЕНКИ ДЕЙСТВИЯ ГЕРПЕС-ВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ НА УСТОЙЧИВОСТЬ МЕМБРАН ЭРИТРОЦИТОВ НОВОРОЖДЕННЫХ ОТ МАТЕРЕЙ, ПЕРЕНЕСШИХ В ТРЕТЬЕМ ТРИМЕСТРЕ БЕРЕМЕННОСТИ ОБОСТРЕНИЕ ГЕРПЕС-ВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ Российский патент 2013 года по МПК G01N33/48 

Цель исследования заключается в оценке действия герпес-вирусной инфекции на устойчивость мембран эритроцитов периферической крови новорожденных от матерей, перенесших в третьем триместре гестации обострение герпес-вирусной инфекции, вызывающей повышение активности перекисного окисления липидов в мембранах эритроцитов, что подтверждается нарастанием продуктов перекисного окисления МДА и снижением в мембранах эритроцитов скелетного белка α-спектрина.

α-Спектрин является одним из главных протеинов мембранного цитоскелета эритроцитов. Он сконцентрирован на цитозольной поверхности эритроцитарной мембраны и находится в тесной связи с β-спектрином и белком полосы 4.1 (V.T.Marchesi, 1979, 1983). В результате способности спектрина к самосборке образуются его олигомеры, которые, соединяясь, образуют конечную форму цитоскелетного белка тетрамер-спектрин (J.Palek, 1985; А.И.Воробьев, 2007). α- и β-спектриновые нити, переплетаясь, образуют основу цитоскелета эритроцита (А.И.Воробьев, 2007; M.J.Telen, R.E.Kaufman, 2004). Изменение структуры молекулы спектрина или снижение его содержания нарушают, прежде всего, устойчивость мембраны эритроцитов. В качестве прототипа взяты работы: Иванова В.П., Лукашова А.А., Полоникова А.В. (2000), отмечающих, что при гипотонии нарушается содержание основных спектриновых белков мембран эритроцитов в периферической крови, а также работу Штехмана М.И (2004), в которой автор указывает, что при гипохромной анемии под влиянием нарушения электролитного баланса в эритроцитах происходит изменение структуры мембранного белка - спектрина. В работе М.Т.Луценко и И.А.Андриевской (2009, №4, С.71-74) описываются изменения стромальных белков в дискоцитах периферической крови матери при обострении герпес-вирусной инфекции.

Однако в работе Иванова В.П., Лукашова А.А. и Полоникова А.В. нет указаний, какие именно факторы становятся причиной нарушения содержания белков цитоскелета мембран эритроцитов при гипотонии, а в работе Штехмана М.И. основной причиной изменения цитоскелета эритроцитов считается нарушение баланса электролитного состава эритроцитов. В работе М.Т.Луценко и И.А.Андриевской изменения стромальных белков описываются в эритроцитах беременной, что должно отличаться от мегалоцитов, находящихся в крови новорожденного.

В своих исследованиях мы обращаем внимание на фактор, наиболее токсично действующий на мембрану эритроцитов - перекиси жирных кислот, которые активно вырабатываются под влиянием инфекционного начала - герпес-вирусной инфекции и на изменения, происходящие не у взрослых пациентов, а в эритроцитах (мегалоцитах) новорожденных, родившихся от матерей, перенесших в третьем триместре обострение герпес-вирусной инфекции.

Помимо этого мы отмечаем нарастание в крови новорожденного МДА - продукта перекисного окисления липидов. Под влиянием обостряющейся герпес-вирусной инфекции и при нарастании перекисного окисления авторами доказано методом гель-электрофореза снижение скелетного белка α-спектрина.

Заявленный способ имеет следующие приемы:

1. Исследовали кровь у 20 беременных в третьем триместре гестации и 20 новорожденных, родившихся от этих матерей. Титр антител к вирусу герпеса определяли иммуноферментным методом на спектрофотометре «Stat-Fax-2100» (USA).

2. Содержание перекисей в периферической крови определяли по содержанию малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты (МДА) по И.Д.Стальной и Т.Г.Гаришвили (1977) на спектрофотометре «Stat-Fax-2100» (USA).

3. В мембранах эритроцитов новорожденных методом диск-электрофореза в ступенчатом градиентном полиакриламидном геле (10%) с додецилсульфатом натрия выявляли α-спектрин с помощью денситометрии на аппарате «Biometra» (Германия).

4. Исследования проводились на базе стационара акушерского отделения, клиники Дальневосточного научного центра физиологии и патологии дыхания СО РАМН. Все исследования были проведены с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека» с поправками 2000 г. и «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утвержденными Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г. №266.

Исследования показали, что в случае обострения герпес-вирусной инфекции у беременной в третьем триместре гестации высокий титр антител в периферической крови отмечается как у матери, так и в периферической крови новорожденного (1:12800). При этом в периферической крови новорожденного обнаруживается накопление большого количества продуктов перекисного окисления липидов (МДА) до 1.56±0.07 мкмоль/мл (контроль - 0.4 мкмоль/мл). Изучение методом диск-электрофореза в полиакриламидном геле (10%) с додецилсульфатом натрия в мембранах эритроцитов новорожденных отмечено снижение содержания α-спектрина до 5.47±0.18% (контроль - 6.46±0.47%; p<0.001).

Проведенный дискриминантный анализ показал, что дискриминантная функция (Dф) определяется следующей:

Имя выборки Объем выборки Количество параметров Расстояния Махалан Критерий Фишера, различия выборок Вероятность различия выборок Граничное значение дискриминантной функции Вероятность ошибочности классиф, % 493 14 2 4.53 68.97 100.000 -15.03 1.734 00R 14 2 1.734 Dф=(-4.13×α-спектрин)+(+14.33×МДА)

Dф=(-4.131×5.47)+(+14.334×1.56);

Dф=(-22.596)+(+22.361)=-0.235;

Dф (-0.235)>граничного значения (-15.03).

Следовательно, при Dф (-0.235) > граничного значения (-15,03) отмечается снижение α-спектрина и создается угроза нарастания неустойчивости мембран эритроцитов новорожденного, что может привести к формированию внутриутробной анемии.

Литература

1. Воробьев А.И. Руководство по гематологии. - М: Изд. «Ньюдиамед», 2007. - 1275 с.

2. Иванов В.П, Лукашов А.А, Полоников А.В. Содержание основных белков мембран эритроцитов у больных первичной артериальной гипотонией и ее связь с наследственностью предрасположенной к сердечно-сосудистой патологии // Тер. Архив. 2000. - №9. - С.69-73.

3. Луценко М.Т., Андриевская И.А. Дифференциальная диагностика устойчивости мембран эритроцитов периферической крови у беременных с герпес-вирусной инфекцией // Бюллетень физиологии и патологии РАМН, 2009. - №4. - С.71-74.

4. Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитурровой кислоты // Современные методы в биохимии. - Москва, 1977. - 390 с.

5. Штехман М.И. Железодефицитная анемия и беременность // Гинекология. - 2004. - Т.6. - №4. - 11 с.

6. Marchesi V.T. Functional proteins of the human red cell membrane semin // Hematol. - 1979. - Vol.16. - P.3-20.

7. Marchesi V.T. The red cell membrane skeleton recent progress // Blood. - 1983. - P.1-11.

8. Palek J. Hereditary elliptocytosis and related disordes // Clin. Hematol. - 1985. - Vol.14. - №1. - P.45-87.

9. Telen M.J., Kaufman R.E. The mature erythrocyte. Wintrobs Clinical Hematology. Ed. J.P.Greer, J.Forster, J.N.Lukens. // Chapter 8.11^th edition. Lippincott William and Wilkins. - 2004. - P.217-247.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу оценки устойчивости мембран эритроцитов новорожденного на фоне обострения у беременной герпес-вирусной инфекции в третьем триместре беременности. Способ осуществляется следующим образом: в периферической крови новорожденного определяют содержания малонового диальдегида (МДА) и методом диск-электрофореза в ступенчатом градиентном полиакриламидном геле (10%) с додецилсульфатом натрия выявляют α-спектрин, затем вычисляют значение дискриминантной функции по формуле Dф=(-4.131×α-спектрин)+(+14.334×МДА); где Dф - дискриминантная функция; α-спектрин - белок стромы эритроцитов, содержащийся в мембранах эритроцитов; МДА - продукт перекисного окисления жирных кислот в периферической крови новорожденных. При Dф более (-0,235) прогнозируют угрозу нарастания неустойчивости мембран эритроцитов у новорожденного, что может привести к развитию внутриутробной анемии. 1 табл.

Способ оценки действия герпес-вирусной инфекции на устойчивость мембран эритроцитов новорожденных от матерей, перенесших в третьем триместре беременности обострение герпес-вирусной инфекции, характеризующийся тем, что в периферической крови новорожденного определяют содержание малонового диальдегида (МДА) и методом диск-электрофореза в ступенчатом градиентном полиакриламидном геле (10%) с додецилсульфатом натрия выявляют α-спектрин, вычисляют значение дискриминантной функции по формуле:
D_ф=(-4,131·α-спектрин)+(+14,334·МДА),
где D_ф - дискриминантная функция;
α-спектрин - белок стромы эритроцитов, содержащийся в мембранах эритроцитов;
МДА - продукт перекисного окисления жирных кислот в периферической крови новорожденных;
и при D_ф более (-0,235) прогнозируют угрозу нарастания неустойчивости мембран эритроцитов у новорожденных.