СПОСОБ ОЦЕНКИ СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ МЕМБРАН ЭРИТРОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ У БЕРЕМЕННЫХ ПРИ ОБОСТРЕНИИ ГЕРПЕС-ВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ Российский патент 2010 года по МПК G01N33/49 G01N33/68 

Цель изобретения заключается в прогнозировании нарушения микровязкости мембран эритроцитов при увеличении содержания в них гликофорина при обострении герпес-вирусной инфекции в третьем триместре.

Прототипом избран способ выявления нарушения микровязкости мембран лимфоцитов и эритроцитов в крови у онкологических больных (Ю.А.Владимиров, Г.Е.Добрецов, 1980; И.А.Горошинская, Л.Ю.Голотина, Е.И.Горло, Т.А.Рова, Ю.Н.Бордюшков, 1999; Ю.Н.Бордюшков, И.А.Горошинская, Е.М.Францияну, Г.Н.Ткачева, Е.И.Горло, И.В.Нескубина, 2000). В вышеуказанных работах предполагают, что микровязкость вероятно зависит от белков, включенных в мембрану эритроцитов.

Существующие данные имеют следующие недостатки:

1. Известные способы оценки микровязкости мембран эритроцитов не детализируют, от каких именно белков меняется микровязкость.

2. Отсутствуют данные, позволяющие прогнозировать, какой из белков мембраны эритроцитов взаимодействует с липидами активнее при насыщении крови вирусным антигеном (вирус простого герпеса).

3. Не имеется сведений, как влияние вируса герпеса отражается на текучести мембран эритроцитов.

В отличие от описанного прототипа проводится подробный анализ изменения содержания белка гликофорина при герпес-вирусной инфекции (титр антител к вирусу герпеса 1:12800) и изменение на этом фоне микровязкости мембран эритроцитов.

Цель достигается тем, что оценка изменения микровязкости мембран эритроцитов исследуется путем определения коэффициента эксимеризации пирена, который равен отношению интенсивности флюоресценции эксимеров к интенсивности флюоресценции мономеров при одновременном включении методом гель-электрофореза содержания белка гликофорина с последующей обработкой методом дискриминантного анализа.

Заявленный способ имеет следующие приемы:

а) Изменение микровязкости мембран эритроцитов проводили методом латеральной диффузии гидрофобного флюоресцентного зонда пирена. Определение микровязкости основано на образовании эксимеров (активных димеров) пирена в липидном окружении (Г.Е.Добрецов, 1989). Флюоресценцию пирена измеряли на спектрофлюориметре «Hitachi». Для определения микровязкости липидного бислоя находили интенсивность флюоресценции или свечение пирена при длине волны возбуждения 334 нм, длина волны мономеров 395 нм, длина волны эксимеров 470 нм. Для определения микровязкости зоны белок-липидных контактов длина волны возбуждения 286 нм, длина волны мономеров 395 нм, длина волны эксимеров 470 нм. Оценка микровязкости основывается на вычислении коэффициента эксимеризации пирена (К_экс.=F₄₇₀/F₃₉₅), который равен отношению интенсивности флюоресценции эксимеров к интенсивности флюоресценции мономеров. Коэффициент эксимеризации находится в обратной зависимости от микровязкости и обозначается как F_э/F_м.

б) Одновременно в этой же порции крови в мембранах эритроцитов методом диск-электрофореза в ступенчатом градиентном полиакриламидном геле (10%) с додецилсульфатом натрия были выявлены следующие фракции: α-спектрин, β-спектрин, протеин полосы-3, гликофорин и анкирин.

в) Титр антител к вирусу герпеса определяли иммуноферментным методом на спектрофотометре «Stat Fax-2100» (USA).

г) Микровязкость мембран эритроцитов в зависимости от содержания в них гликофорина у беременных, испытавших обострение герпес-вирусной инфекции (титр антител 1:12800), решали путем составления дискриминантного уравнения, при выполнении которого было установлено, что наиболее реальным в этой ситуации изменение содержания в составе мембран белка гликофорина, содержание которого увеличивалось до 8,60±0,30 усл. ед. (контроль 6,55) (р<0,001). Это повлекло за собой увеличение микровязкости мембран эритроцитов (зона белок-липидных контактов) - 0,790±0,004 (контроль - 1,000±0,004) F_э/F_м.

Остальные белки не оказывают при статистическом анализе достоверного влияния на микровязкость мембран эритроцитов при герпес-вирусной инфекции.

Создается угроза нарушения структурно-функционального состояния мембран эритроцитов и, прежде всего, увеличение их микровязкости.

D=-135,877·микровязкость мембран-(-0,353)·гликофорин.

D=-81,52-(-2,68)=-78,84.

Вычисленной путем статистического анализа дискриминантной функции (-78,84) соответствует граничное значение (-97,49). Поскольку дискриминантная функция (-78,84) больше граничного значения, прогнозируется увеличение микровязкости мембраны эритроцита в силу нарастания в ней содержания при герпес-вирусной инфекции белка гликофорина.

Полученные данные позволяют считать, что при дискриминантном показателе, меньшем (-78,84), увеличивается микровязкость клеточных мембран эритроцитов в силу повышения содержания в них белка гликофорина, что приводит к нарушению их морфофункционального состояния, которое, по-видимому, сопровождается изменением скелета мембран эритроцитов и их ферментативной активности.

Пример 1. Беременная Ф., 21 год, беременность 32 недели. Обострение герпес-вирусной инфекции на 30 неделе. Титр антител к вирусу герпеса 1:12800. До обострения герпес-вирусной инфекции в мембранах эритроцитов микровязкость (зона липид-белковых контактов) - 0,780±0,003 F_э/F_м. После обострения герпес-вирусной инфекции - 0,990±0,002 F_э/F_м.

Пример 2. Беременная Щ., 18 лет, беременность 33 недели. Обострение герпес-вирусной инфекции на 30 неделе. Титр антител к вирусу герпеса 1:12800. До обострения герпес-вирусной инфекции в мембранах эритроцитов микровязкость (зона липид-белковых контактов) - 0,840±0,004 F_э/F_м. После обострения герпес-вирусной инфекции - 1,08±0,003 F_э/F_м.

Литература

1. Бордюшков Ю.Н., Горошинская И.А., Франциянц Е.М., Ткачева Г.Н. Горло E.И., Нескубина И.В. Структурно-функциональные изменения мембран лимфоцитов и эритроцитов под воздействием переменного магнитного поля // Вопросы мед. химии, т.46, №1, с.72-80.

2. Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е. Флюоресцентные зонды в исследовании биологических мембран // М.: Наука.

3. Горошинская И.А., Голотина Л.Ю., Горло Е.И., Ровда Т.А., Бордюшков Ю.Н. Изменение микровязкости мембран лимфоцитов и эритроцитов крови онкологических больных // Вопросы мед. химии, 1999, т.45, №1, с.53-57.

4. Добрецов Г.Е. // Флюоресцентные зонды в исследовании клеток, мембран и липипротеидов // М.: Наука, 1989. - с.191-206.

Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностике, точнее к биохимическим методам исследования крови. Предложен способ определения структурно-функционального состояния мембран эритроцитов периферической крови у беременных при обострении герпес-вирусной инфекции, который заключается в том, что при установлении в образце титра антител 1:12800 определяется белок гликофорин методом диск-электрофореза в ступенчатом градиентом полиакриламидном 10% геле с додецилсульфатом натрия, и при увеличении содержания гликофорина до 8,6±0,3 усл.ед относительно 6,55 усл.ед в контроле определяют увеличение микровязкости мембран эритроцитов. Изобретение обеспечивает оценку микровязкости мембран эритроцитов периферической крови у беременных, перенесших обострение герпес-вирусной инфекции в третьем триместре.

Способ определения структурно-функционального состояния мембран эритроцитов периферической крови у беременных при обострении герпес-вирусной инфекции, характеризующийся тем, что при установлении в образце титра антител 1:12800 определяется белок гликофорин методом диск-электрофореза в ступенчатом градиентном полиакриламидном 10% геле с додецилсульфатом натрия, и при увеличении содержания гликофорина до (8,6±0,3) усл.ед. относительно 6,55 усл.ед. в контроле определяют увеличение микровязкости мембран эритроцитов.