НОВЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ ОКСИМА ХОЛЕСТ-4-ЕН-3-ОНА, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ, ИХ СОДЕРЖАЩИЕ, И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ Российский патент 2013 года по МПК C07J41/00 C07J43/00 A61K31/58 A61K31/575 A61P25/28 

Настоящее изобретение относится к новым химическим соединениям, в частности, к производным оксима холест-4-ен-3-она, их применению в качестве лекарственных средств, в частности, в качестве цитопротекторных лекарственных средств, более конкретно в качестве нейропротекторных, кардиопротекторных и/или гепатопротекторных лекарственных средств.

Указанные лекарственные средства особенно адаптированы к патологиям и травмам, связанным с дегенерацией или гибелью клеток, в частности, мотонейронов и/или кардиомиоцитов и/или гепатоцитов.

Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим эти соединения, и способу их получения.

Процессы клеточной дегенерации характеризуются дисфункцией клеток, вызывающей в частных случаях нежелательную клеточную активность и гибель клеток.

Клетки выработали механизмы адаптации в ответ на стресс, которые продлевают продолжительность их жизни или замедляют или препятствуют клеточной гибели (цитопротекторные механизмы).

Тем не менее, эти цитопротекторные механизмы являются в некоторых случаях недостаточными, неадекватными или индуцированными слишком поздно для того, чтобы быть эффективными, и клетки гибнут. Таким образом, возникает потребность в новых лекарственных средствах, цитопротекторах, которые способствуют цитопротекции.

Среди основных механизмов клеточной гибели различают главным образом некроз, апоптоз и некроптоз.

Некроз - это гибель клеток, называемая «случайной», которая наступает при повреждении тканей. Наиболее поврежденной является плазматическая мембрана клетки, что вызывает изменение гомеостаза клетки. Клетки заполняются водой настолько, что это вызывает разрушение их плазматической мембраны. Некроз является причиной воспалительного процесса.

Некроз может затрагивать совокупность клеток или ткань, тогда как другие соседние части остаются живыми. Происходящая в результате трансформация - это умерщвление клеток или тканей.

Иными словами, некроз определяется морфологическими изменениями, происходящими, когда клетка подходят к концу жизни вследствие таких событий, как существенное повреждение, такое как остановка или уменьшение кровообращения на уровне органа, гипертермия (значительное повышение температуры), интоксикация химическим продуктом, физический удар и т.д.

Один из самых известных некрозов - это некроз миокарда во время инфаркта (остановка поступления крови в сердечную мышцу), связанный с облитерацией (обструкцией) коронарной артерии.

Апоптоз является неотъемлемой частью нормальной физиологии организма. Это запрограммированная физиологическая форма клеточной гибели и она является необходимой для выживания многоклеточных организмов. Апоптоз - это процесс, который играет первостепенную роль в эмбриогенезе.

Клетки в апоптозе, или апоптические клетки, изолируются от других клеток. Обычно апоптоз распространяется на отдельные клетки в ткани и не вызывает воспаления. Одним из морфологических проявлений, характерных для апоптоза, является существенная конденсация одновременно ядра и цитоплазмы, что вызывает существенное уменьшение клеточного объема. Ядро впоследствии распадается на фрагменты, каждый фрагмент окружается двойной оболочкой. Апоптические тела (цитоплазмические и ядерные элементы) затем высвобождаются и поглощаются фагоцитами соседних клеток.

Апоптоз может индуцироваться по разному. Например, радиация, присутствие химического соединения или гормона являются стимулами, способными вызывать апоптический каскад в клетке. Межклеточные сигналы, как например, неполный митоз или повреждение ДНК могут также вызывать апоптоз.

Апоптоз происходит также вследствие генотоксического воздействия и во время болезни. Некоторые патологии характеризуются анормальным апоптозом, вызывающим потерю некоторых клеточных популяций, как например гепатотоксичность, ретинопатия, кардиотоксичность.

Таким образом, различают физиологический апоптоз и патологический апоптоз. Изобретение относится главным образом к патологическому апоптозу.

Существуют другие механизмы клеточной гибели, например, некроптоз, имеющий характеристики некроза и апоптоза. Гибнущая вследствие некроптоза клетка имеет характеристики, подобные характеристикам клетки, гибнущей вследствие некроза, но биохимические стадии этого механизма больше ассимилируются со стадиями апоптоза. Этот механизм клеточной гибели имеет место, например, при ишемии.

Следовательно, одна из целей настоящего изобретения заключается в создании новых лекарственных средств, которые могли бы предупреждать и/или лечить некроз и/или патологический апоптоз и/или некроптоз (антинекротические и/или антиапоптические и/или антинекроптотические лекарственные средства).

Клеточные дегенеративные процессы могут являться кроме прочего, следствием, патологических ситуаций, которые объединяют термином дегенеративные заболевания или повреждения, травмы или воздействие различных факторов.

Эти травмы или факторы могут включать, например, радиационное облучение (УФ, гамма), гипоксию или недостаток кислорода, лишение пищи, лишение факторов роста, яды, клеточные токсины, отходы, токсины из окружающей среды, свободные радикалы, реактивные формы кислорода. Можно также назвать химические или биологические агенты, используемые в качестве лекарственных агентов в контексте медицинского лечения, например, цитостатические агенты или противовоспалительные агенты.

К патологиям, которые характеризуются самыми серьезными дегенеративными процессами, относятся:

- болезни костей, суставов, соединительной ткани и хрящей, такие как остеопороз, остеомиелит, артриты, к которым например, относятся остеоартрит, ревматоидный артрит и псориатический артрит, аваскулярный некроз, оссифицирующий прогрессирующий миозит, рахит, синдром Кушинга;

- болезни мышц, такие как мышечная дистрофия, как например, мышечная дистрофия формы Дюшена, миотоническая дистрофия, миопатия и миастения;

- кожные болезни, такие как дерматиты, экзема, псориаз, старение или ухудшение рубцевания;

- сердечно-сосудистые заболевания, такие как ишемическая болезнь сердца и/или сосудов, инфаркт миокарда, ишемическая кардиопатия, хроническая или острая сердечная недостаточность, сердечная дисритмия, фибрилляция предсердий, фибрилляция желудочков сердца, пароксизмальная тахикардия, сердечная недостаточность, аноксия, гипоксия, побочные эффекты, связанные с лечением противораковыми агентами;

- циркуляторные заболевания, такие как атеросклероз, артериальные склерозы, заболевания периферической сосудистой системы, нарушения мозгового кровообращения, аневризмы;

- гематологические и сосудистые заболевания, такие как: анемия, амилоидоз сосудов, кровотечения, дрепаноцитоз, синдром фрагментации эритроцитов, нейтропения, лейкопения, аплазия костного мозга, панцитопения, тромбоцитопения, гемофилия;

- болезни легких, включая пневмонию, астму; хронические обструктивные заболевания легких, как например, хронические бронхиты и эмфизема;

- заболевания желудочно-кишечного тракта, такие как язвы;

- заболевания печени, включая вирусные гепатиты и циррозы, заболевания печени, связанные с токсинами или лекарственными препаратами, заболевания, вследствие которых может развиваться цирроз, такие как неалкогольный стеатогепатит (Non Alcoholic Steato-Hapatitis NASH), болезнь Вильсона, первичный склерозирующий холангит или первичный желчный цирроз;

- заболевания поджелудочной железы, как например, острые или хронические панкреатиты;

- метаболические заболевания, такие как сахарный и несахарный диабет, тироидиты;

- заболевания почек, такие, например, как острые почечные нарушения или гломерулонефрит;

- вирусные и бактериальные инфекции, такие как септицемия;

- тяжелые интоксикации химическими агентами, токсинами или лекарственными средствами;

- дегенеративные заболевания, ассоциированные с синдромом приобретенного иммунодефицита (СПИД);

- нарушения, связанные со старением, такие как синдром ускоренного старения;

- воспалительные заболевания, такие как болезнь Крона, ревматоидный полиартрит;

- аутоиммунные заболевания, такие как красная волчанка;

- стоматологические заболевания, такие как заболевания, приводящие к разрушению тканей, например, периодонтиты;

- офтальматологические болезни или нарушения, включая диабетическую ретинопатию, глаукому, макулярная дегенерацию, ретинальную дегенерацию, пигментный ретинит, разрыв сетчатки, отслоение сетчатки, ишемию сетчатки, острую ретинопатию, связанную с травмой, воспалительную дегенерацию, послеоперационные осложнения, медикаментозную ретинопатию, катаракту;

- нарушения слуховых путей, такие как отосклероз и глухота, вызванная антибиотиками;

- заболевания, связанные с митохондриями (митохондриальные патологии), такие как спинальная атаксия Фридрейха, врожденная мышечная дистрофия со структурной митохондриальной аномалией, некоторые миопатии (синдром MELAS, синдром MERFF, синдром Pearson), синдром MIDD (митохондриальный диабет и глухота), синдром Вольфрама, дистония.

К тому же нейродегенеративные процессы характеризуются дисфункцией и гибелью нейронов, вызывающими снижение неврологических функций, опосредованных головным мозгом (центральная нервная система, ЦНФ), спинным мозгом и периферической нервной системой (ПНФ). Они, кроме того, могут быть следствием патологических состояний, объединяемых термином нейродегенеративные заболевания или повреждения, травмы или действие токсинов.

Наиболее важными патологиями, которые характеризуются нейродегенеративным процессом, являются:

- нейродегенеративные хронические болезни, в частности, демилизирующие хронические заболевания, наследственные или спорадические, в частности, болезнь Альцгеймера, болезнь Гентингтона, болезнь Паркинсона, боковой амиотрофический склероз, спинальная амиотрофия, в частности, детская, болезнь Крейтцфельдта-Жакоба, рассеянный склероз, адренолейкодистония, эпилепсия, деменция, шизофрения и неврологические синдромы, ассоциированные со СПИДом;

- повреждения нейронов, связанные со старением;

- наследственные или вызванные повреждением периферические невропатии, такие как болезни Фабри, Шарко-Мари-Туса, Краббе, лейкодистрофии, диабетические невропатии и невропатии, индуцированные противораковым лечением;

- травмы головного мозга, периферических нервов или спинного мозга;

- ишемии головного мозга или спинного мозга, возникающие вследствие инсульта или индуцированные недостаточностью кровообращения;

- врожденная, вызванная повреждением или связанная со старением дегенерация сенсорных нейронов зрительной системы, такая как макулярная дегенерация, пигментные ретиниты или дегенерация оптического нерва, индуцированная глаукомой;

- врожденная, травматическая или связанная со старением дегенерация сенсорных слуховых нейронов, вызывающая снижение или потерю слуха.

Часть сигнальных путей, поврежденных при этих патологиях, является общей для большого числа нейродегенеративных заболеваний. Наиболее часто встречающейся формой деменции является болезнь Альцгеймера. Она проявляется в атрофии головного мозга, преобладающей потере нейронов в гиппокампе и затрагивает также холинэргические нейроны. Другие патологии, такие как лобарные атрофии (болезнь Пика, болезнь Крейтцфельдта-Якоба), деменция, связанная с телом Леви, васкулярные деменции, болезнь Паркинсона связаны со значительной гибелью нейронов, обуславливающей возникновение симптомов этих деменций.

Терапевтический подход в целях защиты нейронов от гибели заключается во введении нейротрофических белков.

Эти белки, такие как BDNF (нейротрофический фактор головного мозга), CNTF (цилиарный нейротрофический фактор), NGF (фактор роста нервов), GDNF (глиальный нейротрофический фактор) синтезируются в процессе эмбрионального развития или в организме взрослого человека после получения поражения. Эти факторы роста благоприятствуют сохранению, созреванию и дифференцировке нервных клеток. Кроме того, они ингибируют апоптические механизмы, активируют множество путей выживаемости и защищают большое число нейронных популяций. Их использование предлагается в большинстве случаев нейронной дегенерации.

Соединения, которые могут активировать экспрессию нейротрофических факторов или воспроизводить действие этих факторов, обладают лечебным потенциалом для лечения нейродегенеративных синдромов.

В частности, введение нейротрофических молекул для лечения нейронной дегенерации имеет три цели:

- компенсация потенциального недостатка нейротрофических факторов, связанного с отсутствием поступления к периферическим или центральным мишеням нейронов, и/или деградационное расстройство транспорта этих факторов;

- неспецифическое вмешательство в биохимические пути, включенные в дегенеративный каскад;

- благоприятствование естественным компенсаторным явлениям дендритного роста и ветвлению нервных окончаний.

Эти соединения могли бы иметь, таким образом, благоприятный эффект для большего числа патологий, в частности, при патологиях, затрагивающих периферическую и центральную нервную систему.

К тому же в приведенном выше контексте мотонейроны являются нейронами, имеющимися в частности в спинном мозге и в мозговом стволе. Их дегенерация или гибель может привести к прогрессирующей слабости мышц в конечностях, затем к атрофии и возможно спастичности (т.е. постоянной контракции) мышц.

Наиболее важными патологиями, которые обусловлены дегенерацией и гибелью спинальных и/или бульбарных мотонейронов, являются боковой амиотрофический склероз, известный также под названием болезни Шарко или болезни Лу Герига, и спинальная амиотрофия, в частности, детского возраста, также известная как болезнь Верднига-Гоффмана или болезнь Кугельберга-Веландера.

Кроме того, дегенерация мотонейронов наблюдается в случае травм с раздавливанием и/или рассечением спинного мозга или периферических двигательных нервов.

В более общем случае речь идет о спинальных амиотрофиях как о болезнях, при которых наблюдается дегенерация или гибель мотонейронов спинного мозга.

Боковой амиотрофический склероз (SLA или ALS для Amyotrophic Lateral Sclerosis) представляет собой нейродегенеративное заболевание, ассоциированное с различными типами включений, такими как тела Леви, и характеризующееся дегенерацией спинальных или кортикальных мотонейронов, при котором фатальный исход иногда ассоциирован с фронтальной деменцией. Во время развития ALS дегенеративные явления происходят не только в головном мозге, но и в спинном мозге и, следовательно, в мышцах как результат недостаточной иннервации.

В плане химических структур в литературе приводится несколько примеров производных 3-оксииминохолест-4-ена. Эти примеры, в частности, содержатся в заявках на патент WO2004/082581 и WO2007/118967, в которых описаны нейропротекторные и цитопротекторные свойства 3-оксиминохолест-4-ен и его производных соответственно.

В документе Leibigs Annalen der Chemie [(1991), (1), стр. 89-91] описаны соединения 3-оксиимино-4-хлорохолест-4-ен и 3-оксиимино-4-бромохолест-4-ен, а также их хироптические свойства. Но в этом документе не содержится описание цитопротекторной, нейропротекторной и/или кардиопротекторной активности этих двух соединений.

В документе Chemical & Pharmaceutical Bulletin [(1972), 20(7), стр. 1567-9] описан анти-изомер 3-оксиимино-4-метилхолест-4-ена, но не описана или не упомянута возможная цитопротекторная, нейропротекторная и/или кардиопротекторная активность этого соединения.

Не дискредитируя известные в настоящее время методы лечения, следует, тем не менее, отметить, что на сегодняшний день не существует эффективного лечения, препятствующего клеточной дегенерации, в частности, нейронной дегенерации.

Таким образом, все еще существует реальная потребность в новых продуктах, позволяющих эффективно защищать клетки от явлений дегенерации.

Соединения по настоящему изобретению, кроме того, что они являются новыми, обладают фармакологическим свойствами, представляющими очень большой интерес.

Они являются преимущественно цитопротекторами, в частности нейропротекторами и/или кардиопротекторами и/или гепатопротекторами.

Кроме того, некоторые из этих новых соединений за счет своей биологической активности могут также обладать преимущественными свойствами в том, что касается их фармакологической активности, такой, как их фармакокинетика, их биодоступность, их растворимость, их стабильность, их токсичность, их абсорбция и/или их метаболизм. Это делает их очень пригодными для получения лекарственного средства, в частности, для получения цитопротекторного, более конкретно нейропротекторного и/или кардиопротекторного и/или гепатопротекторного лекарственного средства.

Более конкретно объектом настоящего изобретения являются новые соединения формулы (I)

в которой

R₁ может обозначать атом водорода или С₁-С₆-алкил, С₃-С₆-циклоалкил, С₂-С₆-алкенил, С₂-С₆-алкинил, арил, гетероцикл или атом галогена или группу -CN, CF₃, -NO₂, -OR^a, -SR^a, -SO₂R^a, -NR^aR^b, -OC(O)R^a, -OC(O)NR^aR^b, -C(O)OR^a, CONR^aR^b, в которой

(i) R^a и R^b одновременно или независимо друг от друга могут выбираться из атома водорода или С₁-С₆-алкила, С₃-С₆-циклоалкила, арила, гетероарила или

(ii) R^a и R^b совместно могут образовывать углеводородную цепочку, линейную или разветвленную, содержащую от 2 до 6 атомов углерода, возможно содержащую одну или несколько двойных связей и/или возможно прерываемую одним или несколькими атомами кислорода, серы или азота,

R₂ может обозначать атом водорода или С₁-С₆-алкил, С₃-С₆-циклоалкил, арил или атом галогена;

R₃ может обозначать атом водорода или С₁-С₆-алкил, или атом галогена или группу -CN, -OR^a, -SR^a, -SeR^a, -COOR^a, -NR^aR^b, OCONR^aR^b, причем R^a и R^b такие, как определены выше;

R₃ и R₂ вместе с углеродом, с которым они связаны, могут образовывать С₃-С₆-циклоалкил;

R₄ может обозначать атом водорода или С₁-С₆-алкил или

R₄ и R₂ совместно могут образовывать дополнительную углеродно-углеродную связь (связь С-С) между атомами углерода, с которыми R₂ и R₄ связаны, или С₃-С₆-циклоалкил;

R₅ может обозначать атом водорода или группу -OR^a, -SR^a, -CN, NR^aR^b, причем R^a и R^b такие, как определены выше; и

R₆ может обозначать атом водорода или группу -СН₃, -СН₂-CN, -СН₂-SR^a, -СН₂-SeR^a или группу следующей формулы (А) или (В):

-CH₂-Q-R^c (A) или -C(O)-Q-R^c (В)

в которой

+ Q может обозначать атом кислорода или группу NR^a, в которой R^a такой, как определен выше, или ответвление (bras espaceur), состоящее из углеводородной линейной или разветвленной цепи, возможно замещенной, содержащей от 2 до 20 атомов углерода и содержащей дополнительно по меньшей мере один гетероатом,

+ R^c может обозначать атом водорода или С₁-С₆-алкил, арил, гетероарил, гетероцикл, С₁-С₆-С(О)алкил, арил-С(О)-, гетероарил-С(О), гетероцикл-С(О), в частности, группу, соответствующую одной из формул (С) или (D)

R₇ может обозначать атом водорода или атом галогена или гидроксигруппу, предпочтительно атом водорода;

R₈ может обозначать атом водорода или группу -OR^a, в которой R^a, такой, как определен выше, предпочтительно атом водорода;

R₉ может обозначать атом водорода или С₁-С₆-алкил, С₃-С₆-циклоалкил, С₂-С₆-алкенил, С₂-С₆-алкинил, арил или атом галогена, предпочтительно атом водорода;

R₁₀ может обозначать атом водорода или С₁-С₆-алкил, атом галогена или группу -CN, CF₃, -NO₂, -OR^a, -SR^a, -SO₂R^a, -NR^aR^b, -OC(O)R^a, -OC(O)NR^aR^b, -C(O)OR^a, C(O)NR^aR^b, при этом R^a и R^b, такие как определены выше, предпочтительно атом водорода;

R₁₀ может обозначать вместе с R₉ оксогруппу, =СН-С₁-С₆-алкил, =СН-арил, =СН-С₃-С₆-циклоалкил,

R₁₁ может обозначать атом водорода или С₁-С₆-алкил, С₃-С₆-циклоалкил или арил, предпочтительно атом водорода или

R₁₁ и R₉ совместно могут образовывать дополнительную связь С-С между атомами углерода, с которыми они связаны, или могут образовывать вместе С₃-С₆-циклоалкил;

R₁₂ может обозначать атом водорода или С₁-С₆-алкил, или группу -OR^a, -SR^a, при этом R^a, такой как определен выше, предпочтительно атом водорода;

R₁₃ может обозначать

(i) С₄-С₁₂-алкил или С₄-С₁₂-алкенил, в частности, группу, выбранную из

или

(ii) группу следующей формулы Е:

R¹⁴-X-R¹⁵ (E)

в которой:

R¹⁴ может обозначать С₄-С₁₂-алкил или С₄-С₁₂-алкенил, в частности, С₅-С₁₀-алкил, предпочтительно следующую группу G₇

и

Х может обозначать атом кислорода или группу -NR^a, где R^a, такой как описан выше, и

R¹⁵ может обозначать С₁-С₆-алкил, С₃-С₆-циклоалкил, арил, гетероарил, гетероцикл, С₁-С₆-С(О)алкил, С₃-С₆-С(О)циклоалкил, -С(О)-арил, -С(О)гетероарил, -С(О) гетероцикл, в частности, группу, соответствующую одной из формул (С) или (D), таких как описаны выше:

а также:

- его изомеры SYN, ANTI, если они существуют;

- его оптические изомеры (энантиомеры, диастереоизомеры), если они существуют,

- его соли присоединения с фармацевтически приемлемой кислотой или основанием,

- его гидраты и его сольваты,

- его пролекарства,

за исключением следующих соединений:

3-оксииминохолест-4-ен;

3-оксиимино-2,2-диметилхолест-4-ен;

3-оксиимино-7,7-диметилхолест-4-ен;

3-оксиимино-2-(3-оксииминобутил)холест-4-ен;

3-оксииминохолест-1,4-диен;

3-оксииминохолест-4,6-диен;

3-оксииминохолест-4,22-диен;

3-оксииминохолест-4,24-диен;

3-оксииминохолест-4-ен-6-он;

3-оксиимино-24-метилхолест-4,22-диен;

3-оксиимино-24-метилхолест-4,22-диен-6-он;

3-оксиимино-24-этилхолест-4-ен;

3-оксиимино-24-этилхолест-4-ен-6-он;

3-оксиимино-24-этилхолест-4,22-диен;

3-оксиимино-24-этилхолест-4,22-диен-6-он;

3-оксииминохолест-4,22-диен-6-он;

3-оксииминохолест-4,24-диен-6-он;

3,6-диоксииминохолест-4-ен;

3,6-диоксииминохолест-4,22-диен;

3,6-диоксииминохолест-4,24-диен;

3,6-диоксиимино-24-метилхолест-4,22-диен;

3,6-диоксиимино-24-этилхолест-4-ен;

3,6-диоксиимино-24-этилхолест-4,22-диен;

3-оксиимино-4-хлорхолест-4-ен;

3-оксиимино-4-бромхолест-4-ен;

3-оксиимино-4-метилхолест-4-ен;

3-оксиимино-6-этоксихолест-4,6-диен;

3-оксииминохолест-1,4,6-триен.

При условии, что в настоящем тексте

термин «С₁-С₆-алкил» относится к углеводородному линейному или разветвленному радикалу, содержащему от 1 до 6 атомов углерода, такому как метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, третбутил, пентил, неопентил, н-гексил. С₁-С₄-алкильные группы являются предпочтительными. Алкильные группы могут быть замещены арильной группой, такой как определена ниже, в этом случае речь идет об арилалкильной группе. Примерами арилалкильных групп являются бензил и фенетил. По выбору алкильные группы могут быть замещены один или несколько раз одним из заместителей, независимо выбранных из атома галогена или группы -CN, CF₃, -COOR^a, -CONR^aR^b, -О-CONR^aR^b, -NR^aR^b, -OR^a, -SR^a, при этом группы R^a и R^b, такие как описаны выше. Углеводородный радикал может содержать от 4 до 12 атомов углерода, за исключением случаев, когда имеется уточнение. Термин «С₂-С₆-алкенил» относится к углеводородному линейному или разветвленному или циклическому радикалу, имеющему одну или несколько двойных связей, содержащему от 2 до 6 атомов углерода. Например, можно назвать радикал этенил, 1-пропенил, 2-пропенил, 1-бутенил, 2-бутенил, 1-пентенил, 2-пентенил, 3-метил-3-бутенил, 1-гексенил. По выбору алкенильные группы могут быть замещены один или несколько раз одним из заместителей, независимо выбранных из атома галогена или группы -CN, CF₃, -COOR^a, -C(O)NR^aR^b, -О-C(O)NR^aR^b, -NR^aR^b, -OR^a, -SR^b, при этом группы R^a и R^b, такие как описаны выше;

- термин «С₃-С₆-циклоалкил» относится к углеводородному циклическому насыщенному или частично насыщенному радикалу, содержащему от 3 до 6 атомов углерода. Циклоалкильные группы включают в частности заместители циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогексенил. По выбору циклоалкильные группы могут быть замещены один или несколько раз одним из заместителей, независимо выбранных из атома галогена или группы -CN, CF₃, -COOR^a, -C(O)NR^aR^b, -О-C(O)NR^aR^b, -NR^aR^b, -OR^a, -SR^a, при этом группы R^a, R^b, такие как описаны выше;

- термин «С₂-С₆-алкинил» относится к углеводородному линейному, разветвленному радикалу, имеющему по меньшей мере одну тройную связь, содержащему от 2 до 6 атомов углерода. Алкинильные группы в частности включают заместители этинил, 1-пропинил, 2-пропинил, 1-бутинил, 2-бутинил, 1-пентинил или 2-пентинил. По выбору алкинильные группы могут быть замещены один или несколько раз одним из заместителей, независимо выбранных из атома галогена или группы -CN, CF₃, -COOR^a, -C(O)NR^aR^b, -О-C(O)NR^aR^b, -NR^aR^b, -OR^a, -SR^a, при этом группы R^a, R^b, такие как описаны выше;

- термин «С₆-С₁₀-арил» относится к углеводородному ароматическому радикалу, содержащему от 6 до 10 атомов углерода, более конкретно 6 атомов углерода. Арильные группы включают в частности радикалы фенил, нафтил и бифенил. По выбору арильные группы могут быть замещены один или несколько раз одним из заместителей, независимо выбранных из атома галогена или группы алкильной, -CN, CF₃, -N₃, -NO₂, -COOR^a, -C(O)NR^aR^b, -О-C(O)NR^aR^b, -NR^aR^b, -OR^a, -SR^a, при этом группы R^a, R^b, такие как описаны выше;

- термин «С₃-С₉-гетероцил» относится к моно- или полициклическому, насыщенному, ненасыщенному или ароматическому радикалу, возможно замещенному, содержащему от 3 до 9 атомов углерода и содержащему один или несколько гетероатомов. Предпочтительно гетероатомы выбирают из кислорода, серы и азота. Примерами гетероцикла являются радикалы фурил, тиенил, пиррол, имидазол, изотиазол, тиазол, изоксазол, оксазол, пиридин, пиразин, пиримидин, пиридазин, индол, изоиндол, индазол, хинолеин, изохинолеин, фталазин, хиназолин, пирролидин, имидазолидин, пирразолидин, пиперидин, пиперазин, морфолин, тиазолидин или фталимид, бензимидазол. По выбору гетероциклические группы могут быть замещены один или несколько раз одним из заместителей, независимо выбранных из атома галогена или группы алкильной, -CN, CF₃, -N₃, -NO₂, -COOR^a, -C(O)NR^aR^b, -О-C(O)NR^aR^b, -NR^aR^b, -OR^a, -SR^a, при этом группы R^a, R^b, такие как описаны выше;

- термин «галоген» относится к атому хлора, брома, фтора или йода. Предпочтительно атому фтора;

- выражение «ответвление» (bras espaceur) относится к углеводородной цепочке, содержащей от 2 до 20 атомов углерода, насыщенной или ненасыщенной, возможно замещенной и содержащей по меньшей мере один гетереоатом. В частности, указанное ответвление выбирают из следующих групп К1, К2, К3 или К4, в которых R^a такой, как описан выше:

- термин «лечение» означает профилактическое, куративное, паллиативное лечение, а также ведение больных (облегчение страданий, увеличение продолжительности жизни, замедление развития заболевания), и т.д. Кроме того, лечение можно проводить в сочетании с другими средствами или способами лечения, такими, в частности, как другие активные соединения для лечения патологий или травм, указанных в настоящей заявке;

- термин «цитопротектор» означает способность агентов, например, химических натуральных или ненатуральных соединений поддерживать взаимодействия клеток между собой или с другими тканями, защищать клетки от явлений дегенерации, приводящих к потере клеточной функции или к нежелательной клеточной активности с гибелью клеток или без таковой и/или от клеточных дисфункций и/или от дегенеративных болезней или повреждений, приводящих к клеточным дисфункциям, причем указанные дисфункции или указанные заболевания или повреждения приводят или не приводят к гибели клеток;

- термины «нейропротектор» или «кардиопротектор» или «гепатопротектор» обозначают те же свойства указанных агентов, но специфически в отношении нервных клеток («нейропротектор») или специфически в отношении клеток сердечной системы («кардиопротектор»), или специфически в отношении клеток печени («гепатопротектор»). Таким образом, ясно, что соединение цитопротекторное, или нейропротекторное, или кардиопротекторное или гепатопротекторное является соединением, которое обладает описанными выше свойствами.

Наиболее предпочтительными соединениями формулы (I) являются те, в которых:

- заместитель R₁ можно выбирать из атома водорода, атома фтора, С₁-С₆-алкильной группы, по выбору С₁-С₄-алкильной группы и фенильной группы, возможно замещенной;

- заместитель R₆ можно выбирать из группы -СН₃ и группы -СН₂-ОН, более предпочтительно заместитель R₆ может представлять собой группу -СН₃.

В соответствии с другим аспектом изобретения предпочтительный заместитель R₆ может представлять собой группу следующей формулы (А):

-CH₂-Q-R^c (A)

в которой Q может обозначать атом кислорода и R^c может обозначать группу следующей формулы (С)

Другие предпочтительные соединения по изобретению являются соединениями, в которых заместитель R₆ может представлять собой группу следующей формулы (А):

-СН₂-Q-R^c (A)

в которой Q может обозначать группу NR^a, причем R^a такой, как описан выше, и R^c может обозначать группу, выбранную из арила, гетероарила, гетероцикла, в частности, группу следующей формулы (D):

Соединения, в которых R₄ совместно с R₂ образует дополнительную связь С-С между атомами углерода, с которыми R₂ и R₄ связаны, также являются предпочтительными.

Также соединения формулы (I), в которой R₁₁ и R₉ совместно образуют дополнительную связь С-С между атомами углерода, с которыми они связаны, также являются предпочтительными соединениями.

Заместитель R₁₃, наиболее предпочтительный по изобретению, выбирают из следующих групп G1 и G2:

Другие предпочтительные соединения по изобретению являются соединениями, в которых R₁₃ может обозначать группу следующей формулы (Е):

R₁₄-Х-R₁₅ (Е)

в которой

R₁₄ может обозначать следующую группу G₇

X может обозначать -NH или -NCH₃ и

(i) R₁₅ может обозначать группу, выбранную из арила, гетероарила, гетероцикла, в частности, группу следующей формулы (D)

или

(ii) R₁₅ может обозначать группу, выбранную из С₁-С₆-С(О)алкила, С₃-С₆-С(О)циклоалкила, -С(О)арила, -С(О)гетероарила, -С(О)гетероцикла, в частности, группу следующей формулы (С)

Наиболее предпочтительными соединения по настоящему изобретению являются:

3-оксиимино-4-фторхолест-4-ен;

3-оксиимино-6β-фторхолест-4-ен;

3-оксиимино-2,2-дифторхолест-4-ен;

3-оксиимино-2,6-дифторхолест-4-ен;

3-оксиимино-2α-фторхолест-4-ен;

3-оксиимино-25-[метил(7-нитро-2,1,3-бензоксадиазол-4-ил)амино]-27-норхолест-4-ен;

3-оксиимино-25-((N-(+)биотиноил-N-метил)амино)-27-норхолест-4-ен;

3-оксиимино-19-гидроксихолест-4-ен;

3-оксиимино-19-биотинилоксихолест-4-ен;

3-оксиимино-2-метилхолест-4-ен;

3-оксиимино-4-метоксихолест-4-ен;

а также:

их изомеры SYN, ANTI, если они существуют;

их оптические изомеры (энантиомеры, диастереоизомеры), если они существуют,

их соли присоединения с фармацевтически приемлемой кислотой или основанием,

их гидраты и их сольваты,

их пролекарства.

Соли присоединения с фармацевтически приемлемыми кислотами могут, например, являться солями, образованными с соляной, бромистоводородной, азотной, серной, фосфорной, уксусной, муравьиной, пропионовой, бензойной, малеиновой, фумаровой, янтарной, винной, лимонной, щавелевой, глиоксиловой, аспаргиновой кислотой, алкансульфоновыми кислотами, такими как метансульфоновая или этансульфоновая кислоты, арилсульфоновыми, такими как бензолсульфоновая или паратолуолсульфоновая кислоты, или карбоновыми кислотами.

Некоторые предпочтительные соединения по настоящему изобретению содержат один или несколько атомов фтора. В качестве примера 3-оксиимино-4-фторхолест-4-ен (формула I-1), содержащий атом фтора в положении 4, является наиболее предпочтительным.

Формула I-1

Введение такого атома фтора в это соединение неожиданно позволило изменить его фармакологические свойства. Это фтористое соединение (Формула I-1), полученное в форме одного изомера ANTI, оказывает более эффективное воздействие при введении пероральным путем.

Согласно настоящему изобретению 3-оксиимино-6-фторхолест-4-ен (Формула I-2) и 3-оксиимино-2,2-дифторхолест-4-ен (Формула I-3) относятся к предпочтительным соединениям.

Следует отметить, что в настоящем тексте атом, который может называться общим термином «галоген», может также быть изотопом, природным или синтетическим, радиоактивным как, например, фтор, фтор-18 (¹⁸F). Соединения формул (I), меченные радиоактивным изотопом, в частности, меченные изотопом ¹⁸F, являются очень пригодными для медицинской визуализации, в частности, для Positron Emission Tomography (PET), которая является технологией визуализации in vivo, разработанной для диагностики заболеваний, например, в области онкологии, неврологии и кардиологии. Аналогично в отношении брома или йода можно сказать, что они являются меченными радиоактивными изотопами бром-75 (⁷⁵Br) и йод-124 (¹²⁴I) соответственно.

Общий термин «галоген» может также охватывать в настоящем тексте изотопы, природные или синтетические, нерадиоактивные, как например, нерадиоактивный изотоп фтор-19 (¹⁹F), пригодный для биомедицинских исследований и в частности в когнитивной неврологии и особенно в технологии ядерно-магнитно-резонансного исследования (IRM).

Соединения, являющиеся объектами настоящего изобретения, обладают очень интересными фармакологическими свойствами. Они в частности обладают замечательными цитопротекторными свойствами, в частности нейропротекторными, более конкретно в отношении мотонейронов, и кардиопротекторными и гепатопротекторными.

Эти свойства иллюстрируются ниже в экспериментальной части. Они оправдывают использование описанных выше соединений, а также использование их сложных эфиров или солей присоединения с фармацевтически приемлемыми кислотами в качестве цитопротекторных лекарственных средств, в частности, нейропротекторных и/или кардиопротекторных и/или гепатопротекторных лекарственных средств.

Более конкретно соединения по изобретению обладают замечательной активностью в отношении мотонейронов, нейронов центральной нервной системы, двигательных и периферических нервов.

Таким образом, объектом изобретения является применение в качестве лекарственного средства соединения формулы (I), включая 3-оксиимино-4-хлорохолест-4-ен, 3-оксиимино-4-бромхолест-4-ен, 3-оксиимино-6-этоксихолест-4,6-диен и 3-оксиимино-4-метилхолест-4-ен, или их сложные эфиры и/или их соли присоединения с фармацевтически приемлемыми кислотами.

Таким образом, объектом изобретения является также применение соединения формулы (I), включая 3-оксиимино-4-хлорохолест-4-ен, 3-оксиимино-4-бромхолест-4-ен, 3-оксиимино-6-этоксихолест-4,6-диен и 3-оксиимино-4-метилхолест-4-ен, а также один из его сложных эфиров и/или его солей присоединения с фармацевтически приемлемыми кислотами для получения цитопротекторного лекарственного средства.

Соединения по настоящему изобретению за счет их цитопротекторных свойств могут использоваться для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения или предупреждения некроза и/или патологического апоптоза и/или некроптоза (антинекротические и/или антиапоптические и/или антинекроптические лекарственные средства) или для лечения или профилактики таких заболеваний как:

- болезни костей, суставов, соединительной ткани и хрящей, такие как остеопороз, остеомиелит, артриты, к которым например, относятся остеоартрит, ревматоидный артрит и псориатический артрит, аваскулярный некроз, оссифицирующий прогрессирующий миозит, рахит, синдром Кушинга;

- болезни мышц, такие как мышечная дистрофия, как например, мышечная дистрофия формы Дюшена, миотоническая дистрофия, миопатия и миастения;

- кожные болезни, такие как дерматиты, экзема, псориаз, старение или ухудшение рубцевания;

- сердечно-сосудистые заболевания, такие как ишемическая болезнь сердца и/или сосудов, инфаркт миокарда, ишемическая кардиопатия, хроническая или острая сердечная недостаточность, сердечная дисритмия, фибрилляция предсердий, фибрилляция желудочков сердца, пароксизмальная тахикардия, сердечная недостаточность, аноксия, гипоксия, побочные эффекты, связанные с лечением противораковыми агентами;

- циркуляторные заболевания, такие как атеросклероз, артериальные склерозы, заболевания периферической сосудистой системы, нарушения мозгового кровообращения, аневризмы;

- гематологические и сосудистые заболевания, такие как: анемия, амилоидоз сосудов, кровотечения, дрепаноцитоз, синдром фрагментации эритроцитов, нейтропения, лейкопения, аплазия костного мозга, панцитопения, тромбоцитопения, гемофилия;

- болезни легких, включая пневмонию, астму; хронические обструктивные заболевания легких, как например, хронические бронхиты и эмфизема;

- заболевания желудочно-кишечного тракта, такие как язвы;

- заболевания печени, включая вирусные гепатиты и циррозы, заболевания печени, связанные с токсинами или лекарственными препаратами, заболевания, вследствие которых может развиваться цирроз, такие как неалкогольный стеатогепатит (Non Alcoholic Steato-Hapatitis NASH), болезнь Вильсона, первичный склерозирующий холангит или первичный желчный цирроз;

- заболевания поджелудочной железы, как например, острые или хронические панкреатиты;

- метаболические заболевания, такие как сахарный и несахарный диабет, тироидиты;

- заболевания почек, такие, например, как острые почечные нарушения или гломерулонефрит;

- вирусные и бактериальные инфекции, такие как септицемия;

- тяжелые интоксикации химическими агентами, токсинами или лекарственными средствами;

- дегенеративные заболевания, ассоциированные с синдромом приобретенного иммунодефицита (СПИД);

- нарушения, связанные со старением, такие как синдром ускоренного старения;

- воспалительные заболевания, такие как болезнь Крона, ревматоидный полиартрит;

- аутоиммунные заболевания, такие как красная волчанка;

- стоматологические заболевания, такие как заболевания, приводящие к разрушению тканей, например, периодонтиты;

- офтальматологические болезни или нарушения, включая диабетическую ретинопатию, глаукому, макулярная дегенерацию, ретинальную дегенерацию, пигментный ретинит, разрыв сетчатки, отслоение сетчатки, ишемию сетчатки, острую ретинопатию, связанную с травмой, воспалительную дегенерацию, послеоперационные осложнения, медикаментозную ретинопатию, катаракту;

- нарушения слуховых путей, такие как отосклероз и глухота, вызванная антибиотиками;

- заболевания, связанные с митохондриями (митохондриальные патологии), такие как спинальная атаксия Фридрейха, врожденная мышечная дистрофия со структурной митохондриальной аномалией, некоторые миопатии (синдром MELAS, синдром MERFF, синдром Pearson), синдром MIDD (митохондриальный диабет и глухота), синдром Вольфрама, дистония.

Более конкретно лекарственные средства по настоящему изобретению находят применение благодаря своим нейропротекторным свойствам в лечении или предупреждении нейродегенеративных заболеваний, например, болезни Гентингтона, хронических нейродегенеративных болезней, преимущественно хронических нейродегенеративных демиелизирующих болезней, наследственных или спорадических, нейронных поражений, связанных со старением, периферических невропатий, наследственных или вызванных повреждением, невропатий диабетических или вызванных противораковым лечением, травм головного мозга, периферической нервной системы или спинного мозга, ишемии головного мозга или спинного мозга, эпилепсии, дегенерации наследственной, вызванной повреждением или старением сенсорных зрительных нейронов или дегенерации глазного нерва, наследственной, травматической или связанной со старением дегенерации слуховых сенсорных нейронов, лобарной атрофии и сосудистой деменции, и в частности спинальной амиотрофии, бокового амиотрофического склероза и патологий, связанных с травмами спинного мозга или двигательных периферических нервов.

Более конкретно они находят применение благодаря их нейропротекторным свойствам в отношении мотонейронов в лечении спинальных амиотрофий, в частности, бокового амиотрофического склероза или детских спинальных амиотрофий и в лечении травм спинного мозга или двигательных периферических нервов, как указано выше.

Главным образом суточная доза соединения является минимальной дозой, обеспечивающей получение терапевтического эффекта. Эта доза зависит от различных факторов, указанных ранее. Дозы соединений, описанных выше, включая 3-оксиимино-4-хлорохолест-4-ен, 3-оксиимино-4-бромхолест-4-ен, 3-оксиимино-6-этоксихолест-4,6-диен и 3-оксиимино-4-метилхолест-4-ен, могут главным образом составлять от 0,001 до 100 мг на кг в день на человека.

В случае необходимости суточная доза может вводиться в два, три, четыре, пять, шесть или более приемов в день или в виде многократных субдоз, вводимых с соответствующими интервалами в течение дня.

Выбранное количество зависит от многих факторов, в частности от пути введения, продолжительности введения, времени ведения, скорости выведения соединения, одного или нескольких продуктов, используемых в комбинации с соединением, возраста, массы тела и физического состояния пациента, а также его истории болезни и любой другой информации медицинского характера.

Назначение лечащим врачом доз может начинаться с меньших доз, чем используемые в общем случае, затем эти дозы могут быть прогрессивно увеличены для того, чтобы лучше отслеживать появление вероятных побочных эффектов.

Объектом изобретения также являются фармацевтические композиции, которые содержат по меньшей мере одно соединение формулы (I), включая 3-оксиимино-4-хлорохолест-4-ен, 3-оксиимино-4-бромхолест-4-ен, 3-оксиимино-6-этоксихолест-4,6-диен и 3-оксиимино-4-метилхолест-4-ен или один из его сложных эфиров и/или его солей присоединения с фармацевтически приемлемыми кислотами в качестве активного вещества.

В этих композициях активное вещество присутствует главным образом в физиологически эффективных дозах; указанные выше композиции могут содержать в частности эффективную нейропротекторную дозу по меньшей мере одного указанного выше активного вещества.

В качестве лекарственных средств соединения формулы (I), включая 3-оксиимино-4-хлорохолест-4-ен, 3-оксиимино-4-бромхолест-4-ен, 3-оксиимино-6-этоксихолест-4,6-диен и 3-оксиимино-4-метилхолест-4-ен, а также их сложные эфиры и/или их соли присоединения с фармацевтически приемлемыми кислотами могут быть включены в композиции, предназначенные для введения через пищеварительный тракт или парентерально.

Фармацевтические композиции по изобретению могут дополнительно содержать по меньшей мере еще один терапевтически активный ингредиент для одновременного, раздельного или распределенного во времени применения, в частности при лечении больных, пораженных патологиями или травмами, связанными с дегенерацией или гибелью клеток, в частности, сердечных клеток и/или мотонейронов, таких как определены выше.

Фармацевтические композиции или лекарственные средства по изобретению преимущественно содержат один или несколько эксципиентов или инертных носителей, т.е. фармацевтически неактивных и нетоксичных. Например, можно назвать солевые, физиологические, изотонические, буферные и т.д. растворы, приемлемые для фармацевтического применения и известные специалисту. Композиции могут содержать один или несколько агентов или носителей, выбранных из диспергентов, растворителей, стабилизаторов, консервантов и т.д. Агентами или носителями, пригодными для использования в лекарственных формах (жидких и/или годных для инъекций и/или твердых) являются, в частности, метилцеллюлоза, гироксиметилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза, циклодекстрины, полисорбат 80, маннит, желатин, лактоза, растительные или животные масла, масло препаратов и т.д. Композиции могут иметь форму суспензий для инъекций, гелей, масел, таблеток, суппозиториев, порошков, желатиновых капсул, капсул и т.д., возможно в виде галеновых форм или устройств, обеспечивающих пролонгированное и/или замедленное высвобождение активного вещества. Для лекарственных форм этого типа преимущественно используют такой агент, как целлюлоза, карбонаты или крахмалы.

Введение можно осуществлять любым способом, известным специалисту, предпочтительно, перорально или путем инъекции, обычно интраперитонеально, интрацеребрально, интратекально, внутривенно, внутриартериально или внутримышечно. Предпочтительным является пероральное введение. При долговременном лечении предпочтительным путем введения является сублингвальное, пероральное или чрескожное введение.

Используемые для инъекций соединения в общем случае используют в виде жидких суспензий, которые можно вводить, например, при помощи шприцов или путем перфузии. Разумеется, что скорость ввода и/или инъецируемая доза или главным образом доза, предназначенная для введения, могут подбираться специалистом в зависимости от особенностей пациента, вида патологии, способа введения и т.д. Разумеется, многократные введения можно осуществлять в сочетании с другими активными ингредиентами или любым фармацевтически приемлемым носителем (буферные, солевые, изотонические растворы, в присутствии стабилизаторов и т.д.).

Изобретение можно использовать в отношении млекопитающих, в частности человека.

Объектом изобретения также является способ получения описанной выше композиции, отличающийся тем, что смешивают известными способами одно или несколько активных веществ с приемлемыми, в частности фармацевтически приемлемыми эксципиентами.

Более конкретно объектом изобретения является применение соединения формулы (I), приведенной выше, включая 3-оксиимино-4-хлорохолест-4-ен, 3-оксиимино-4-бромхолест-4-ен, 3-оксиимино-6-этоксихолест-4,6-диен и 3-оксиимино-4-метилхолест-4-ен, для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения или предупреждения патологий или травм, связанных с дегенерацией или гибелью клеток, в частности, клеток сердца и/или нейронов, независимо от того, являются ли они естественными или случайными.

Еще более конкретно объектом изобретения является применение соединения формулы (I), приведенной выше, включая 3-оксиимино-4-хлорохолест-4-ен, 3-оксиимино-4-бромхолест-4-ен, 3-оксиимино-6-этоксихолест-4,6-диен и 3-оксиимино-4-метилхолест-4-ен, для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения или предупреждения некроза и/или патологического апоптоза и/или некроптоза (антинекротические и/или антиапоптические и/или антинекроптические лекарственные средства) или для лечения или профилактики таких заболеваний как:

- болезни костей, суставов, соединительной ткани и хрящей, такие как остеопороз, остеомиелит, артриты, к которым например, относятся остеоартрит, ревматоидный артрит и псориатический артрит, аваскулярный некроз, оссифицирующий прогрессирующий миозит, рахит, синдром Кушинга;

- болезни мышц, такие как мышечная дистрофия, как например, мышечная дистрофия формы Дюшена, миотоническая дистрофия, миопатия и миастения;

- кожные болезни, такие как дерматиты, экзема, псориаз, старение или ухудшение рубцевания;

- сердечно-сосудистые заболевания, такие как ишемическая болезнь сердца и/или сосудов, инфаркт миокарда, ишемическая кардиопатия, хроническая или острая сердечная недостаточность, сердечная дисритмия, фибрилляция предсердий, фибрилляция желудочков сердца, пароксизмальная тахикардия, сердечная недостаточность, аноксия, гипоксия, побочные эффекты, связанные с лечением противораковыми агентами;

- циркуляторные заболевания, такие как атеросклероз, артериальные склерозы, заболевания периферической сосудистой системы, нарушения мозгового кровообращения, аневризмы;

- гематологические и сосудистые заболевания, такие как: анемия, амилоидоз сосудов, кровотечения, дрепаноцитоз, синдром фрагментации эритроцитов, нейтропения, лейкопения, аплазия костного мозга, панцитопения, тромбоцитопения, гемофилия;

- болезни легких, включая пневмонию, астму; хронические обструктивные заболевания легких, как например, хронические бронхиты и эмфизема;

- заболевания желудочно-кишечного тракта, такие как язвы;

- заболевания печени, включая вирусные гепатиты и циррозы, заболевания печени, связанные с токсинами или лекарственными препаратами, заболевания, вследствие которых может развиваться цирроз, такие как неалкогольный стеатогепатит (Non Alcoholic Steato-Hapatitis NASH), болезнь Вильсона, первичный склерозирующий холангит или первичный желчный цирроз;

- заболевания поджелудочной железы, как например, острые или хронические панкреатиты;

- метаболические заболевания, такие как сахарный и несахарный диабет, тироидиты;

- заболевания почек, такие, например, как острые почечные нарушения или гломерулонефрит;

- вирусные и бактериальные инфекции, такие как септицемия;

- тяжелые интоксикации химическими агентами, токсинами или лекарственными средствами;

- дегенеративные заболевания, ассоциированные с синдромом приобретенного иммунодефицита (СПИД);

- нарушения, связанные со старением, такие как синдром ускоренного старения;

- воспалительные заболевания, такие как болезнь Крона, ревматоидный полиартрит;

- аутоиммунные заболевания, такие как красная волчанка;

- стоматологические заболевания, такие как заболевания, приводящие к разрушению тканей, например, периодонтиты;

- офтальматологические болезни или нарушения, включая диабетическую ретинопатию, глаукому, макулярная дегенерацию, ретинальную дегенерацию, пигментный ретинит, разрыв сетчатки, отслоение сетчатки, ишемию сетчатки, острую ретинопатию, связанную с травмой, воспалительную дегенерацию, послеоперационные осложнения, медикаментозную ретинопатию, катаракту;

- нарушения слуховых путей, такие как отосклероз и глухота, вызванная антибиотиками;

- заболевания, связанные с митохондриями (митохондриальные патологии), такие как спинальная атаксия Фридрейха, врожденная мышечная дистрофия со структурной митохондриальной аномалией, некоторые миопатии (синдром MELAS, синдром MERFF, синдром Pearson), синдром MIDD (митохондриальный диабет и глухота), синдром Вольфрама, дистония и более конкретно

- нейродегенеративные заболевания, например, болезнь Гентингтона, хронические нейродегенеративные болезни, преимущественно хронические демиелизирующие и нейродегенеративные болезни, наследственные или спорадические в частности рассеянный склероз и лейкодистрофии, нейронные поражения, связанные со старением, периферические невропатии, наследственные или вызванные повреждением, болезнь Шарко-Мари-Туса, невропатии диабетические или вызванные противораковым лечением, эпилепсия, травмы головного мозга, периферической нервной системы или спинного мозга, ишемия головного мозга или спинного мозга, дегенерация наследственная, вызванная поражением или старением сенсорных зрительных нейронов или дегенерация глазного нерва, наследственная, травматическая или связанная со старением дегенерация слуховых сенсорных нейронов, лобарная атрофия и сосудистая деменция, заболевания и травмы, связанные с дегенерацией мотонейронов, и в частности спинальная амиотрофия, более конкретно детского возраста, боковой амиотрофический склероз, рассеянный склероз и травмы спинного мозга или периферических двигательных нервов.

В частности объектом изобретения является применение соединения формулы (I), включая 3-оксиимино-4-хлорохолест-4-ен, 3-оксиимино-4-бромхолест-4-ен, 3-оксиимино-6-этоксихолест-4,6-диен и 3-оксиимино-4-метилхолест-4-ен, для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения спинальной амиотрофии, более конкретно детского возраста, и бокового амиотрофического склероза.

Применение этих лекарственных средств обычно состоит во введении в организм пациента, в частности, млекопитающего, более конкретно человека, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I), включая 3-оксиимино-4-хлорохолест-4-ен, 3-оксиимино-4-бромхолест-4-ен, 3-оксиимино-6-этоксихолест-4,6-диен и 3-оксиимино-4-метилхолест-4-ен, в частности для увеличения выживаемости клеток, более конкретно сердечных клеток и/или нейронов, или для благоприятствования росту аксонов.

Объектом изобретения также является способ лечения указанных выше заболеваний, в частности, нейродегенеративных и более конкретно способ лечения патологий или травм, связанных с дегенерацией или гибелью нейронов, у млекопитающих (главным образом у больных), пораженных такими патологиями или травмами, состоящий во введении в организм этих млекопитающих терапевтически эффективного количества соединения формулы (I), включая 3-оксиимино-4-хлорохолест-4-ен, 3-оксиимино-4-бромхолест-4-ен, 3-оксиимино-6-этоксихолест-4,6-диен и 3-оксиимино-4-метилхолест-4-ен, в частности для увеличения выживаемости нейронов или для благоприятствования росту аксонов.

Кроме того объектом изобретения является способ лечения одного из заболеваний, описанных выше, и, в частности, патологий или травм, связанных с дегенерацией или гибелью мотонейронов у млекопитающих (главным образом, пациентов), страдающих такими патологиями или травмами, состоящий во введении в организм этих млекопитающих терапевтически эффективного количества соединения формулы I, включая 3-оксиимино-4-хлорохолест-4-ен, 3-оксиимино-4-бромхолест-4-ен, 3-оксиимино-6-этоксихолест-4,6-диен и 3-оксиимино-4-метилхолест-4-ен, в частности для увеличения выживаемости нейронов. Более конкретно патологиями, связанными с дегенерацией или гибелью мотонейронов являются боковой амиотрофический склероз или детская спинальная амиотрофия. В соответствии с другим вариантом изобретение также относится к соединениям, содержащим группу мечения, обнаруживаемую и/или визуализируемую непосредственно или опосредовано при помощи технологий обнаружения и/или визуализации, известных специалисту, таких как флуоресцентная микроскопия или технология с использованием очень высокого сродства авидинов (стрептавидина или нейтравидина) с биотином (Ка~10⁷М).

В общем значении термина под «мечением» понимают частицу, такую как радиоактивный изотоп или неизотопную частицу, такую как флуорофор, краситель, нафтен, биотин и т.д.

Термин флуорофор относится главным образом к такой особенности вещества, как флуоресценция, т.е. способность поглощать световую энергию (возбуждаемое свечение), если она возбуждается энергетическим источником, и быстро отдавать ее обратно в форме флуоресцентного свечения (испускаемое свечение). Эта флуорофорная особенность позволяет использовать такое вещество, как флуоресцентная метка в биологических системах (мембранах, клетках, нейронах, митохондриях и т.д.), например, для визуализации исследуемых клеток.

Биотин представляет собой коэнзим, называемый также витамин Н, синтезируемый растениями, бактериями и некоторыми грибами. Биотин обнаруживается при помощи авидинов (стрептавидина или нейтравидина), которые обладают очень высоким сродством с биотином (Ка~10⁷М). Биотин имеет следующую структуру:

Из уровня техники известно, что введение биотиновой группы в биологически активное вещество позволяет выделять и/или идентифицировать протеиновые мишени или другие небелковые соединения, способные взаимодействовать с указанным активным веществом, используя один из подходов, основанных на очень высоком сродстве авидинов с биотином. Белковые мишени или другие небелковые соединения, выделенные таким образом, характеризуются, например, масс-спектрометрией. Из применений, известных специалисту, можно назвать, например: диагностические тесты с использованием биотинилированных соединений; тест ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), в котором используют биотинилированные антибиотики; аффинную хроматографию, основанную на использовании неподвижной колонки с авидином, в которую помещают биотинилированные соединения; технологии протеомического анализа (электрофорез 2D и масс-спектрометрия) и т.д.

Группу мечения по настоящему изобретению можно выбирать из биотина или флуорофорной группы, такой как 7-нитробенз-2-окса-1,3-диазол-4-ил (формула D); флуорофор BODIPY®; антрацен и флуоресцен. Предпочтительно группу мечения по настоящему изобретению выбирают из биотина и флуорофора 7-нитробенз-2-окса-1,3-диазол-4-ил (формула D).

Соединения по настоящему изобретению, меченные биотином или флуорофорной группой, являются зондами, пригодными для:

- визуализации и/или обнаружения клеток, которые находятся в контакте с мечеными соединениями,

- исследования их распределения в живом организме, человека или животного, и их локализации в клеточных компартментах (мембраны, клетки, нейроны, митохондрии, ядро, эндоплазменный ретикулум, аппарат Гольжи, лизосомы, эндосомы и другие органеллы и т.д.),

- осуществления способа обнаружения белков или других небелковых соединений, способных взаимодействовать с указанными мечеными соединениями,

- идентификации их молекулярных мишеней,

- исследования взаимодействия молекулы-белок с молекулярной точки зрения,

- обнаружения специфических моноклональных антител оксима холест-4-ен-3-она и его производных,

- разработки и осуществления опытных испытаний связывания, позволяющих кроме прочего оптимизировать лиганды, обладающие наибольшим сродством с вышеупомянутой мишенью,

- разработки способов дозировки,

- разработки новых инструментов скрининга лигандов.

Внедрение такой группы мечения не вызывает потери биологической активности меченых соединений по настоящему изобретению и позволяет использовать эти меченые соединения в качестве зондов, в частности, в качестве маркеров или агентов мечения.

Следовательно, другим объектом изобретения являются соединения формулы (I), содержащие группу мечения, выбранную из группы NBD и биотина.

Кроме того, объектом изобретения является использование в качестве зондов, в частности, маркеров или агентов мечения, соединений формулы (I), в которых:

- R₆ может обозначать группу следующей формулы (А):

-CH₂-Q-R^c (A)

в которой

- Q обозначает атом кислорода или группу NR^a, R^a такой, как описан выше, и

- R^c может обозначать группу формулы (С) или (D)

или

- R₁₃ может обозначать группу следующей формулы (Е):

R₁₄-X-R₁₅ (Е)

в которой:

- R₁₄ может обозначать следующую группу G₇:

- Х может обозначать атом кислорода или NR^a, R^a такой, как описано выше, в частности, NH или NCH₃ и

R₁₅ может обозначать группу следующей формулы (С) или (D)

Наиболее предпочтительные соединения, такие как маркеры или агенты мечения по изобретению имеют следующие формулы (III), (IV), (V):

формулы (III), (IV) или (V), в которых заместитель R₁ может быть таким, как описан выше. Предпочтительно заместитель R₁ является атомом водорода.

Соединения формулы (I) по изобретению можно получать разными способами синтеза, с использованием, в частности, реакции оксимирования кетонов, которая хорошо известна специалисту. Приведенная ниже схема иллюстрирует способ, использованный для получения соединений формулы (I)

В качестве примера способ, наиболее пригодный для получения соединений формулы (I), заключается в том, что вводят во взаимодействие:

(i) соединение формулы (II), в котором группы R₁-R₁₃, такие как определены выше,

(ii) галогенид гидроксиламина, такой как гидроксиламинхлоргидрат.

Этот способ преимущественно осуществляют в пригодном растворителе, таком как пиридин.

Соединения формулы (I) можно выделить в реакционной среде разными способами, хорошо известными специалисту. По выбору соединения формулы (I) можно превращать в одну из их фармацевтически приемлемых солей. Соединения формулы (II), используемые в качестве исходных продуктов для получения соединений формулы (I), являются коммерчески доступными или их получают способами, известными специалисту.

Следующие примеры иллюстрируют настоящее изобретение, не ограничивая его. Структуры соединений, описанных в примерах и в подготовительных работах, определялись при помощи обычных технологий (ядерный магнитный резонанс, масс-спектроскопия и т.д.).

Аббревиатуры:

EP: петролейный эфир

АЕ: этилацетат

s: синглет

d: дублет

t: триплет

sept: септуплет

Пример 1: Получение соединений формулы (II)

Пример 1а: - Синтез 4-фторхолест-4-ен-3-она

4-фторхолест-4-ен-3-он получали способом, описанным в следующих статьях: Toyota A. & al., Chemical & Pharmaceutical Bulletin (1994), 42(3) 459-61; Nakanishi S. & al., Chemistry & Industry (London, United Kingdom)(1960), 1136-7.

Пример 1b - Синтез 6β-фторхолест-4-ен-3-она

6β-фторхолест-4-ен-3-он получали способом, описанным в одной из следующих статей: Thomas M.G. et al., Journal of the Chemical Society, Perkin Transactions 1: Organic and Bio-Organic Chemistry (1999),(21), 3191-3198; Poss, A.J. et al., Tetrahedron letters (1995), 36(27), 4721-4; Edmunds, J.J. et al. Journal of the Chemical Society, Chemical Communications (1989),(13), 881-3, Salmond W.G et al. Ger. Offen. (1983), DE 3225747; Nakanishi, S. et al, Journal of the american Chemical Society, (1959), 81 5259-60.

Пример 1с - Синтез 2,2-дифторхолест-4-ен-3-она и 2,6-дифторхолест-4-ен-3-она

В колбе перемешивают 10 г (26 ммолей) холест-4-ен-3-она, суспендированного в 260 мл метанола, затем 17,4 г (27,2 ммоля) 1-фтор-4-гидрокси-1,4-диазониабицикло[2,2,2]октанбис(тетрафторборат) 50 масс. % на кремнеземе. Среду перемешивают с обратным холодильником в течение 16 часов и вводят 7,7 г реагента фторирования; перемешивание продолжают в течение 5 часов с обратным холодильником и 4 дня при комнатной температуре. Затем реакционную среду концентрируют в вакууме и остаток обрабатывают в дихлорметане. После фильтрования полученный раствор концентрируют в вакууме и остаток обрабатывают в 500 мл 10%-ной соляной кислоты в ацетонитриле. Суспензию перемешивают в течение 2 часов при комнатной температуре и фильтруют. Осадок промывают этилацетатом и фильтрат экстрагируют этилацетатом и органическую фазу концентрируют в вакууме.

Очистка осадка флэш-хроматографией на силикагеле (элюент ЕР/АЕ, градиент 100% ЕР 80/20 ЕР/АЕ), затем полупрепаративной ВЭЖХ, что позволяет выделить 17,5 мг 2,6-дифторхолест-4-ен-3-она и 23,1 мг 2,2-дифтор-4-холестен-3-она.

Остаток, полученный из фильтрата, очищают флэш-хроматографией на силикагеле (элюент ЕР/АЕ, градиент 100% ЕР 80/20 ЕР/АЕ), затем полупрепаративной ВЭЖХ, что позволяет выделить дополнительно 82 мг 2,2-дифторхолест-4-ен-3-она.

2,6-дифторхолест-4-ен-3-он

ЯМР-¹H (CDCl₃): δ (м.д.) 6,11 (д, 1H, 4-CH), 5,21 (дддд, 1H, 2-CH), 4,86 (ддд, 1H, 6-CH), 0,71 (с, 3H, 18-CH₃).

LC/UV/MS (254 нм): T_R=5,82 мин, m/z=421[M+H]⁺

2,2-дифторхолест-4-ен-3-он

ЯМР-¹H (CDCl₃): δ (м.д.) 6,26 (д, 1H, 4-CH), 0,73 (с, 3H, 18-CH₃)

ЯМР-¹⁹F (CDCl₃): δ (м.д., не калиброванный) -86,33 (ддд, 2-CF_a), -101,04 (д, 2-CF_b)

LC/UV/MS (254 нм): T_R=6,48 мин, m/z=421[M+H]⁺

Пример 1d - Синтез 2α-фторхолест-4-ен-3-она

В колбу вводят 5 г (13 ммолей) холест-4-ен-3-она, суспендированного в 130 мл метанола, затем 8,7 г (13,6 ммоля) 1-фтор-4-гидрокси-1,4-диазониабицикло[2,2,2]октанбис(тетрафторборат) 50 масс. % на кремнеземе. Среду перемешивают с обратным холодильником в течение 3 часов и вводят 4,3 г реагента фторирования; перемешивание продолжают в течение 3 часов с обратным холодильником и 1 ночи при комнатной температуре. Затем реакционную среду концентрируют в вакууме и остаток обрабатывают в дихлорметане. После фильтрования полученный раствор концентрируют в вакууме и остаток обрабатывают в 250 мл 10%-ной соляной кислоты в ацетонитриле. Суспензию перемешивают в течение 1 часа при комнатной температуре и фильтруют. Осадок промывают этилацетатом и фильтрат экстрагируют этилацетатом и органическую фазу концентрируют в вакууме.

Полученный остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле (элюент ЕР/АЕ, градиент 100% ЕР 95/5 ЕР/АЕ), затем полупрепаративной ВЭЖХ, что позволяет выделить 30 мг 2α-фторхолест-4-ен-3-она.

LC/UV/MS (254 нм): T_R=6,27 мин (син/анти), m/z=403[M+H]⁺

Пример 1е - Синтез 25-фторхолест-4-ен-3-она

В колбу при 0°С вводят 100 мг (247 ммолей) 25-фтор-5-холестен-3β-ола и 15 мл ацетона, затем добавляют 160 мл реагента Джонса. Среду перешивают в течение 9 минут при 0°С, затем реакцию останавливают путем добавления этанола. После концентрирования в вакууме при температуре ниже 30°С остаток обрабатывают в 10 мл этанола и вводят 100 мкл раствора 1н соляной кислоты. Среду перемешивают в течение 15 минут при 50-60°С, затем концентрируют в вакууме. Полученный остаток обрабатывают водой и экстрагируют этилацетатом; органическую фазу отделяют, промывают водой, сушат над безводным сульфатом магния и концентрируют в вакууме. После очистки флэш-хроматографией на силикагеле (петролейный эфир, затем петролейный эфир/этилацетат 95/5), получают 69 мг энона с выходом 69%.

LC/UV/MS (254 нм): T_R=5,41 мин, m/z=403[M+H]⁺

Пример 1f - Синтез 25-[метил(7-нитро-2,1,3-бензоксадиазол-4-ил)амино]-27-норхолест-5-ен-3-она и 25((N-(+)биотиноил-N-метил)амино)-27-норхолест-4-ен-3-она

Стадия 1: синтез третбутилдиметилсилил-25-(N-метиламино)-27-норхолестерола

В колбу вводят 2,83 г (5,65 ммоля) третбутилдиметилсилил-25-кето-27-норхолестерола⁽¹⁾, 3,62 г (53,67 ммоля) N-метиламинхлоргидрата и 355 мг (5,65 ммоля) цианоборогидрида натрия в 40 мл метанола. Раствор перемешивают в течение ночи при комнатной температуре, затем среду концентрируют в вакууме. Остаток обрабатывают в растворе 2М карбоната натрия в воде и экстрагируют 3 раза дихлорметаном. Органические фазы объединяют, промывают насыщенным раствором натрия хлорида, сушат над безводным сульфатом магния, фильтруют и концентрируют в вакууме. Полученный продукт используют как таковой без очистки.

LC/UV/MS: T_R=10,42 мин, m/z=516[M+H]⁺

ЯМР-¹H (CDCl₃): δ (м.д.) 5,29-5,33 (массив, 1H, 6-CH), 3,47 (м, 1H, 3-CH), 2,10-2,55 (массив, 4H, 25-CH и NCH₃), 0,67 (с, 3H, 18-CH₃), 0,05 (с, 6H, Si(CH₃)₂)

(1) Ferraboschi, P. et al., Tetrahedron Asymmetry (1999), 10(13), 2497-2500, Ferraboschi, P. et al., Tetrahedron Asymmetry (1998), 9(13), 2193-2196. Okamoto, M. et al. Jpn. Kokai Tokkyo Koho (1997), 15 pp. CODEN, JKXXAF JP 09249691 A 19970922; Satsangi R.K. et al., Analyst (Cambridge, United Kigndom) (1992), 117(6), 953-7.

Стадия 2: Синтез 25-(N-метиламино)-27-норхолестерола

В колбу вводят 2 г (3,87 ммоля) третбутилдиметилсилил-25-(N-метиламино)-27-норхолестерола, полученного на стадии 1, в 12 мл дихлорметана. 4 мл раствора 4н хлористого водорода в диоксане вводят по каплям. Реакционную смесь перемешивают в течение 1 часа при комнатной температуре, затем фильтруют через фритту. Фильтрат подщелачивают добавлением раствора гидроксида натрия и экстрагируют 3 раза дихлорметаном. Органические фазы объединяют, сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют в вакууме. Полученный продукт используют как таковой без очистки.

LC/UV/MS: T_R=1,85 и 2,08 мин, m/z=402[M+H]⁺

ЯМР-¹H (CDCl₃): δ (м.д.) 5,29-5,40 (массив, 1H, 6-CH), 3,50 (м, 1H, 3-CH), 2,10-2,65 (массив, 4H, 25-CH и NCH₃), 0,67 (с, 3H, 18-CH₃).

Стадия 3: Синтез 25-(N-метиламино)-27-норхолест-4-ен-3-она

В колбу при 0°С вводят 870 мг (2,16 ммолей) 25-(N-метиламино)-27-норхолестерола, полученного на стадии 1, 15 мл ацетона и 6 мл дихлорметана, затем добавляют 1,1 мл реагента Джонса. Среду перешивают в течение 20 минут при 0°С, затем реакцию останавливают путем добавления 2 мл этанола. После концентрирования в вакууме при температуре ниже 30°С остаток обрабатывают в 15 мл этанола и вводят 725 мкл раствора 1н соляной кислоты. Среду перемешивают в течение 20 минут при 50°С, затем концентрируют в вакууме. Полученный остаток обрабатывают водой и экстрагируют 3 раза дихлорметаном; органические фазы объединяют, промывают насыщенным раствором хлорида натрия, сушат над безводным сульфатом магния и концентрируют в вакууме. После очистки флэш-хроматографией на силикагеле (дихлорметан/метанол, градиент от 95/5 до 8/2), получают 106 мг энона с выходом 12%.

LC/UV/MS (254 нм): T_R=7,35 мин, m/z=400[M+H]⁺

ЯМР-¹H (CDCl₃): δ (м.д.) 5,72 (с, 1H, 4-CH), 2,86 (м, 1H, 25-CH), 2,10-2,60 (массив, 3H, NCH₃), 0,70 (с, 3H, 18-CH₃).

Стадия 4: Синтез 25-[метил(7-нитро-2,1,3-бензоксадиазол-4-ил)амино]-27-норхолест-5-ен-3-она

В колбу вводят 106 мг (0,265 ммоля) 25-(N-метиламино)-27-норхолест-4-ен-3-она, полученного на стадии 3, 58,3 мг (0,292 ммоля) 4-хлор-7-нитробензофуразана и 74 мкл триэтиламина в 8 мл дихлорметана. Раствор перемешивают в течение одной ночи при комнатной температуре в темноте, затем реакционную среду разводят дихлорметаном. Полученный раствор промывают раствором 1н соляной кислоты (3 раза), сушат над безводным сульфатом магния и концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле (элюент дихлорметан/этилацетат, градиент от 95/5) затем флэш-хроматографией в обратной фазе (элюент ацетонитрил). 27 мг целевого продукта получают в виде твердого вещества коричневого цвета (выход 18%).

LC/UV/MS (254 нм): T_R=4,75 мин, m/z=563[M+H]⁺

ЯМР-¹H (CDCl₃): δ (м.д.) 8,44 (д, 1H, NBD-CH), 6,16 (д, 1H, NBD-CH), 5,71 (с, 1H, 4-CH), 2,93-3,25 (массив, 4H, 25-CH и NCH₃), 0,66 (д, 3H, 18-CH₃).

Стадия 4': 25((N-(+)биотиноил-N-метил)амино)-27-норхолест-4-ен-3-она

В колбу вводят 82 мг (0,205 ммоля) 25-(N-метиламино)-27-норхолест-4-ен-3-она, полученного на стадии 3, 43 мг (0,226 ммоля) 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбоиимида, 33 мг (0,267 ммоля) N,N-диметиламинопиридина и 55 мг (0,226 ммоля) D(+)-биотина в 2 мл N,N-диметилформамида и 1 мл дихлорметана. Реакционную среду перемешивают в течение одной ночи при комнатной температуре, затем полностью погружают в воду и экстрагируют 3 раза дихлорметаном. Органические фазы объединяют, промывают насыщенным раствором хлорида натрия, сушат над безводным сульфатом магния и концентрируют в вакууме. После очистки флэш-хроматографией на силикагеле (градиент от 100% дихлорметана до 95/5 дихорметан/метанол) получают 90 мг амида с выходом 70%.

LC/UV/MS (254 нм): T_R=9,14 мин, m/z=626[M+H]⁺

Пример 1g: - синтез 19-биотинилоксихолест-4-ен-3-она

В колбу вводят 112 мг (0,582 ммоля) 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбоиимида, 84 мг (0,688 ммоля) N,N-диметиламинопиридина и 142 мг (0,582 ммоля) D(+)-биотина в 3,5 мл N,N-диметилформамида и 2 мл дихлорметана. Среду перемешивают в течение 45 минут при комнатной температуре, затем вводят по каплям 212 мг (0,529 ммоля) 19-гидроксихолест-4-ен-3-она в растворе в 2 мл N,N-диметилформамида. Среду перемешивают в течение 48 часов при комнатной температуре, затем концентрируют в вакууме. Остаток обрабатывают водой и экстрагируют 3 раза этилацетатом. Органические фазы объединяют, промывают насыщенным раствором хлорида натрия, сушат над безводным сульфатом магния и концентрируют в вакууме. После очистки флэш-хроматографией на силикагеле (градиент от 100% дихлорметана до 95/5 дихорметан/метанол) получают 180 мг сложного эфира 19-биотинилоксихолест-4-ен-3-она с выходом 54%.

ЯМР-¹H (CDCl₃): δ (м.д.) 5,91 (с, 1H), 4,72 (д, 1H), 4,52 (м, 1H), 4,32 (м, 1H), 4,12 (д, 1H), 3,13 (м, 1H), 2,93 (дд, 1H), 0,70 (с, 3H)

LC/UV/MS (254 нм): T_R=4,85 мин, m/z=627[M+H]⁺

*соединение 19-гидроксихолест-4-ен-3-он является коммерчески доступным.

Пример 1h - Синтез 2-метилхолест-4-ен-3-она

2-метилхолест-4-ен-3-он получают способом, описанным в следующей статье: Julia, S. & al., Journal of Chemical society (1964), Aug, 2633-9.

Пример 1i - Синтез 4-метоксихолест-4-ен-3-она

4-метоксихолест-4-ен-3-он получают способом, описанным в следующей статье: Patel, K.M. & al., Journal of Organic Chemistry (1975), 40(10), 1504-5 et Engelfried O & al, Patent DE 1117112(1961).

Пример 2 - Синтез соединений формулы (I)

Пример 2а - Общий способ А:

В колбу вводят один эквивалент кетона и шесть эквивалентов гидроксиламина хлоргидрата в пиридине (примерно от 10 до 20 мл/ммоль). Раствор перемешивают в течение одной ночи при комнатной температуре, затем реакционную среду концентрируют в вакууме. Полученный остаток обрабатывают водой и экстрагируют дихлорметаном или этилацетатом; органическую фазу отделяют, промывают водой, сушат над безводным сульфатом магния и концентрируют в вакууме. При необходимости продукт очищают флэш-хроматографией на силикагеле.

Пример 2b - Синтез 3-оксиимино-4-фторхолест-4-ена

3-оксиимино-4-фторхолест-4-ен получают из 4-фторхолест-4-ен-3-она, полученного в примере 1а с количественным выходом по способу А.

ЯМР-¹H (CDCl₃): δ (м.д.) 3,02 (дд, 2H, 2-CH₂), 2,23 (тд, 1H, 6-CH_a) 0,69 (3H, 18-CH₃).

ЯМР-¹⁹F (CDCl₃): δ (м.д., не калиброванный) -137,35 (с, 4-CF)

LC/UV/MS (254 нм): T_R=6,42 мин, m/z=418[M+H]⁺

Пример 2с - Синтез 3-оксиимино-6β-фторхолест-4-ена

3-оксиимино-6β-фторхолест-4-ен получают в виде смеси син/анти из 6β-фторхолест-4-ен-3-она, полученного в примере 1b c выходом 93% по способу А.

ЯМР-¹H (CDCl₃): δ (м.д.) 6,75 (д, 0,3H, 4-CH [син]), 6,07 (д, 0,7H, 4-CH [анти]), 5,01 (дт, 0,3H, 6-CH [син]), 4,97 (дт, 0,7H, 6-CH [анти]), 3,07 (д, 0,7H, 2-CH_a [анти]), 0,72 (с, 3H, 18-CH₃).

ЯМР-¹⁹F (CDCl₃): δ (м.д., не калиброванный) -159,23 (тд, 6-CF [анти]), -162,05 (тд, 6-CF [син])

LC/UV/MS (254 нм): T_R=5,88 мин и 5,96 мин (син/анти), m/z=418[M+H]⁺

Пример 2d - Синтез 3-оксиимино-2,2-дифторхолест-4-ена

3-оксиимино-2,2-дифторхолест-4-ен получают в виде смеси син/анти из 2,2-дифтор-4-холестен-3-она, полученного в примере 1с с выходом 89% по способу А.

ЯМР-¹H (CDCl₃): δ (м.д.) 7,18 (д, 0,3H, 4-CH [син]), 6,49 (д, 0,7H, 4-CH [анти]), 3,09 (д шир., 0,7H), 0,71 (с, 3H, 18-CH₃).

LC/UV/MS (254 нм): T_R=6,06 мин, m/z=436[M+H]⁺

Пример 2е - Синтез 3-оксиимино-2,6-дифторхолест-4-ена

3-оксиимино-2,6-дифторхолест-4-ен получают в виде смеси син/анти из 2,6-дифторхолест-4-ен-3-она, полученного в примере 1с с выходом 97% способом А.

ЯМР-¹H (CDCl₃): δ (м.д.) 6,84 (с, 0,35H, 4-CH [син]), 6,25 (с, 0,65H, 4-CH [анти]), 5,94 (д шир., 1H, 2-CH), 5,13 (д шир., 1H, 6-CH), 0,70 (с, 3H, 18-CH₃).

ЯМР-¹⁹F (CDCl₃): δ (м.д., не калиброванный) -171,52 (тд, 2-CF [син]), -180,75 (тд, 2-CF [анти]), -183,56 (д, 6-CF [син]), -184,02 (д, 6-CF [анти]).

LC/UV/MS (254 нм): T_R=5,68 мин, m/z=436[M+H]⁺

Пример 2f- Синтез 3-оксиимино-2α-фторхолест-4-ена

3-оксиимино-2α-фторхолест-4-ен получают в виде смеси син/анти из 2α-фторхолест-4-ен-3-она, полученного в примере 1d с выходом 97% способом А.

ЯМР-¹H (CDCl₃): δ (м.д.) 6,87 (с, 0,3H, 4-CH [син]), 6,21 (с, 0,7H, 4-CH [анти]), 5,08 (ддд, 1 H, 2-CH), 3,08 (д шир., 0,7H), 0,69 (с, 3H, 18-CH₃).

ЯМР-¹⁹F (CDCl₃): δ (м.д., не калиброванный) -183,12 (ддд, 2-CF [син]), -183,66 (ддд, 2-CF [анти]).

LC/UV/MS (254 нм): T_R=5,78 и 5,99 мин (син/анти), m/z=418[M+H]⁺

Пример 2g- Синтез 3-оксиимино-25-фторхолест-4-ена

3-оксиимино-25-фторхолест-4-ен получают в виде смеси син/анти из 25-фторхолест-4-ен-3-она, полученного в примере 1е, с выходом 83% способом А.

ЯМР-¹H (CDCl₃): δ (м.д.) 6,46 (с, 0,4H, 4-CH [син]), 5,77 (с, 0,6H, 4-CH [анти]), 3,04 (д, 0,6H, 2-CH_a [анти]), 0,70 (с, 3H, 18-CH₃).

ЯМР-¹⁹F (CDCl₃): δ (м.д., не калиброванный) -137,01 (септ., 25-CF).

LC/UV/MS (254 нм): T_R=4,44 и 4,84 мин (син/анти), m/z=418[M+H]⁺

Пример 2h - Синтез 3-оксиимино-25-[метил(7-нитро-2,1,3-бензоксадиазол-4-ил)амино]-27-норхолест-4-ена

В колбу вводят 25 мг (0,044 ммоля) 25-[метил(7-нитро-2,1,3-бензоксадиазол-4-ил)амино]-27-норхолест-4-ен-3-она, полученного в примере 1f, стадия 4, и 25 мг (0,36 ммоля) гидроксиламинхлоргидрата в 2 мл пиридина. Раствор перемешивают в течение одной ночи при комнатной температуре, затем реакционную смесь разводят в дихлорметане. Полученный раствор промывают водой, сушат над безводным сульфатом магния и концентрируют в вакууме. Получают таким образом 26 мг 3-оксиимино-25-[метил(7-нитро-2,1,3-бензоксадиазол-4-ил)амино]-27-норхолест-4-ена в виде твердого вещества оранжевого цвета (выход 86%).

LC/UV/MS (254 нм): T_R=3,34, 3,64 и 3,95 мин, m/z=578[M+H]⁺

ЯМР-¹H (CDCl₃): δ (м.д.) 8,45 (д, 1H, NBD-CH), 6,45 (с, 0,34H, 4-CH [син]), 6,16 (д, 1H, NBD-CH), 5,80 (с, 0,66H, 4-CH [анти]), 2,94-3,30 (массив, 4H, 25-CH и NCH₃), 0,64 (д, 3H, 18-CH₃).

Пример 2i - Синтез 3-оксиимоино-25-((N-(+)биотинил-N-метил)амино)-27-норхолест-4-ена

В колбу вводят 65 мг (0,104 ммоля) 25-((N-(+)биотиноил-N-метил)амино)-27-норхолест-4-ен-3-она, полученного в примере 1f, стадия 4', и 65 мг (0,935 ммоля) гидроксиламинхлоргидрата в 2 мл пиридина. Раствор перемешивают в течение одной ночи при комнатной температуре, затем пиридин концентрируют в вакууме. Остаток обрабатывают в воде и экстрагируют 4 раза этилацетатом. Органические фазы объединяют, промывают насыщенным раствором натрия хлорида, сушат над безводным сульфатом магния и концентрируют в вакууме. Получают таким образом 66 мг 3-оксиимоино-25-((N-(+)биотинил-N-метил)амино)-27-норхолест-4-ена в виде твердого вещества бежевого цвета (выход 98%).

LC/UV/MS (254 нм): T_R=8,56 и 8,81 мин, m/z=641[M+H]⁺

ЯМР-¹H (CDCl₃): δ (м.д.) 6,46 (с, 0,3H, 4-CH [син]), 5,77 (с, 0,7H, 4-CH [анти]), 2,68-2,81 (массив, 4H), 2,85-3,23 (массив, 3H), 3,82 (м, 0,5H), 4,33 (м, 1 H), 4,51 (м, 1 H), 4,73 (м, 0,5H), 4,90-5,01 (массив, 1H), 5,35-5,49 (массив, 1H), 0,68 (с шир., 3H, 18-CH₃).

Пример 2j - 3-оксиимино-7α-гидроксихолест-4-ен

3-оксиимино-7α-гидроксихолест-4-ен получают в виде смеси син/анти из 7α-гидроксихолест-4-ен-3-она* с количественным выходом по способу А.

ЯМР-¹H (CDCl₃): δ (м.д.) 6,56 (с, 0,3H), 5,87 (с, 0,7H), 3,85-3,94 (массив, 1H), 3,92-4,08 (массив, 1H), 3,05 (дт, 0,7H), 2,56 (д шир., 1 H), 1,07 (с, 3H), 0,90 (д, 3H), 0,86 (дд, 6H), 0,69 (с, 3H)

LC/UV/MS (254 нм): T_R=3,19 и 3,56 мин (син/анти), m/z=416[M+H]⁺

*7α-гидрокси-4-холестен-3-он является коммерчески доступным.

Пример 2k - 3-оксиимино-19-гидроксихолест-4-ен

3-оксиимино-19-гидроксихолест-4-ен получают в виде смеси син/анти из 19-гидроксихолест-4-ен-3-она* с выходом 96% способом А.

ЯМР-¹H (CDCl₃): δ (м.д.) 6,75 (с, 0,25H), 6,07 (с, 0,75H), 3,69-3,81 (массив, 1H), 3,92-4,08 (массив, 1H), 2,96 (д шир., 1H), 0,68 (с, 3H)

LC/UV/MS (254 нм): T_R=3,81 и 4,27 мин (син/анти), m/z=416[M+H]⁺

*19-гидрокси-4-холестен-3-он является коммерчески доступным.

Пример 2l - 3-оксиимино-19-биотинилоксихолест-4-ен

3-оксиимино-19-биотинилоксихолест-4-ен получают в виде смеси син/анти из сложного эфира 19-биотинилоксихолест-4-ен-3-она, полученного в примере 1g, с выходом 92% по способу А.

ЯМР-¹H (CDCl₃): δ (м.д.) 6,76 (с, 0,3H), 6,62 (с шир., 1H), 5,93 (с, 0,7H), 4,89 (д, 0,7H), 4,73 (д, 0,3H), 4,50 (м, 1H), 4,34 (м, 1 H), 4,03 (д, 0,3H), 3,85 (д, 0,7H), 2,15-3,20 (массив, 8H), 0,69 (с, 3H)

LC/UV/MS (254 нм): T_R=4,41 и 4,55 мин (син/анти), m/z=642[M+H]⁺

Пример 2m - Синтез 3-оксиимино-2-метилхолест-4-ена

3-оксиимино-2-метилхолест-4-ен получают из 2-метилхолест-4-ен-3-она*, полученного в примере 1h с количественным выходом по способу А.

ЯМР-¹H (CDCl₃): δ (м.д.) 6,44 (с, 0,7H), 5,78 (с, 0,20H), 0,70 (с, 3H)

LC/UV/MS (254 нм): T_R=6,42 и 6,74 мин (син/анти), m/z=414[M+H]⁺

Пример 2n - Синтез 3-оксиимино-4-метоксихолест-4-ена

3-оксиимино-4-метоксихолест-4-ен, получают из 4-метоксихолест-4-ен-3-она, полученного в примере 1i с количественным выходом по способу А.

ЯМР-¹H (CDCl₃): δ (м.д.) 3,57 (с, 3H), 3,03 (дд, 2H), 0,69 (с, 3H)

LC/UV/MS (254 нм): T_R=6,36 мин, m/z=430[M+H]⁺

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

Соединения тестировали в соответствии со следующими протоколами:

Действие соединений формул (I) в отношении выживаемости мотонейронов

Для выявления нейропротекторного действия соединений формулы (I) авторами изучена их активность на модели in vitro трофического ограничения мотонейронов крыс. Здесь может оказаться полезной ссылка на заявку авторов WO 0142784 по культивированию мотонейронов спинного мозга.

Спинной мозг эмбрионов крысы линии E14 иссекали и вентральную часть диссоциировали растиранием после обработки трипсином.

Мотонейроны отделяли от других спинальных клеток известным способом (Camu et al., 1993, Purification of spinal motoneurons from chicken and rat embryons by immunopanning. In “Immunoselection Strategies for Neural cell culture”, Neuroprotocols: A companion to Methods in Neurosciences 2, 191-199; Henderson et col., 1993, Neutrophins promote motor neuron survival and are present in embryonic limb bud. Nature 363 (6426): 266-70).

Клетки центрифугировали с градиентом плотности. Мотонейроны обогащали во фракции крупных клеток (менее плотных). Клетки этой фракции инкубировали с антителом anti-p75, поверхностным антигеном, присутствующим на мотонейронах.

Добавляли вторичные антитела, нанесенные на магнитные шарики, и смесь клеток пропускали через колонку с магнитом (Arce et al, 1999 Cardiotrophin-1 requires LIFRbeta to promote survival of mouse motoneurons purified by a novel technique. J.Neurosci Res 55(1): 119-26). Задерживались только мотонейроны: их чистота составляла порядка 90%.

Мотонейроны высевали с низкой плотностью в культуральные лунки на субстрат полиорнитин-ламинин в нейробазальной среде (GIBCO)с добавлением по Raoul et col, 1999, Programmed cell death of embryonic motoneurons triggered through the Fas death receptor. J Cell Biol 147(5): 1049-62.

В каждую серию включали отрицательные контрольные опыты (отсутствие трофических факторов) и положительные контрольные опыты (присутствие BDNF (нейротрофический фактор головного мозга) с концентрацией 1 нг/мл, GDNF (глиальный нейротрофический фактор) с концентрацией 1 нг/мл и CNTF (цилиарный нейротрофический фактор) с концентрацией 10 нг/мл, выпускаемые американской фирмой PEPROTECH, Inc. и фирмой Sigma-Aldrich).

Тестируемые соединения добавляли через 60 минут после посева и культуры выдерживали при 37°С в атмосфере с содержанием 5% CO₂ в течение 3 дней.

В отсутствие нейротрофических факторов мотонейроны имели спонтанную тенденцию к гибели (Pettmann et Henderson, 1998, Neuronal cell death. Neuron 20(4): 633-47). Через 3 дня выживаемость оценивали измерением флуоресценции после инкубации клеток в присутствии кальцеина, который проявляет флуоресцентность в живых клетках.

После 3 дней культивирования при 37°С в атмосфере с содержанием 5% CO₂ и влажностью, соответствующей насыщению, до 50% первоначально засеянных мотонейронов выживает в среде с добавлением нейротрофических факторов, тогда как менее 15% мотонейронов выживает в культурной среде без добавления нейротрофических факторов.

Нейропротекторную активность тестируемых соединений оценивали по их способности препятствовать гибели мотонейронов, внесенных в нейробазальную среду (GIBCO), по сравнению с выживаемостью мотонейронов в среде с добавлением нейротрофических факторов.

Соединения формулы I по настоящему изобретению продемонстрировали нейропротекторную активность в концентрации, обеспечивающей показатель выживаемости мотонейронов лучший, чем в нейробазальной среде.

Этот показатель выживаемости выражали числом живых клеток после обработки тестируемым соединением по отношению к выживаемости, индуцированной нейротрофическими факторами. Это отношение может выражать, таким образом, процент выживаемости, обеспечиваемый тестируемым соединением, по отношению к выживаемости, индуцированной нейротрофическими факторами. Если значение отношения больше 0, то действие соединений на выживаемость мотонейронов оценивали положительно.

Были получены следующие результаты:

Соединение из примера Концентрация в мкм Показатель отношения 2b 3 0,73 2c 3 0,50 2d 3 0,50 2e 3 0,37 2f 3 0,27 2h 1 0,66 2i 3 0,42 2k 3 0,49 2l 1 0,32 2m 1 0,42 2n 1 0,34

Таким образом, по своему трофическому действию на спинальные мотонейроны соединения формулы I по настоящему изобретению проявляют себя потенциально полезными в качестве лекарственного средства, в частности, при лечении амиотрофии, в особенности при лечении бокового амиотрофического склероза или спинальной амиотрофии детского возраста, и при лечении травм спинного мозга.

Изобретение относится к производным оксима холест-4-ен-3-она формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям и оптическим изомерам, их применению в качестве цитопротекторных лекарственных средств, а также к фармацевтической композиции на их основе. Значения радикалов в общей формуле

указаны в формуле изобретения. Соединения могут быть использованы в качестве цитопротекторных лекарственных средств, в том числе нейропротекторных, кардиопротекторных и/или гепатопротекторных лекарственных средств, лекарственного средства для защиты клеток почек, мышечных клеток, для лечения или предупреждения некроза и/или патологического апоптоза и/или некроптоза, а также в качестве маркера или агента мечения. 13 н. и 21 з.п. ф-лы, 2 пр.

1. Соединение формулы (I)

в которой R₁ может обозначать атом водорода, или С₁-С₆-алкил, или атом галогена, или группу -OR^a, в которой
(i) R^a может быть выбран из атома водорода или С₁-С₆-алкила,
R₂ может обозначать атом водорода, или С₁-С₆-алкил, или атом галогена;
R₃ может обозначать атом водорода, или C₁-С₆-алкил, или атом галогена;
R₄ может обозначать атом водорода, или С₁-С₆-алкил;
R₄ и R₂ совместно могут образовывать дополнительную углеродно-углеродную связь между атомами углерода, с которыми R₂ и R₄ связаны;
R₅ может обозначать атом водорода;
R₆ может обозначать атом водорода, или группу -СН₃, или группу следующей формулы (А):

в которой +Q может обозначать атом кислорода,
+R^c может обозначать атом водорода или группу, соответствующую одной из формул (С) или (D)

R₇ может обозначать атом водорода;
R₈ может обозначать атом водорода;
R₉ может обозначать атом водорода, или C₁-С₆-алкил, или атом галогена;
R₁₀ может обозначать атом водорода, или С₁-С₆-алкил, или группу -OR^a, в которой R^a может быть выбран из атома водорода или С₁-С₆-алкила;
R_l1 может обозначать атом водорода или С₁-С₆-алкил,
R₁₁ и R₉ совместно могут образовывать дополнительную связь С-С между атомами углерода, с которыми они связаны;
R₁₂ может обозначать атом водорода, или С₁-С₆-алкил, или группу -OR^a, в которой R^a может быть выбран из атома водорода или С₁-С₆-алкила;
R₁₃ может обозначать
(i) группу, выбранную из
или
(ii) группу следующей формулы Е:

в которой R¹⁴ может обозначать следующую группу G₇

X может обозначать группу -NR^a, где R^a является таким, как описано выше, и
R¹⁵ может обозначать группу, соответствующую одной из формул (С) или (D):

а также:
его изомеры SYN, ANTI, если они существуют;
его оптические изомеры (энантиомеры, диастереоизомеры), если они существуют,
его соли присоединения с фармацевтически приемлемой кислотой или основанием,
за исключением следующих соединений:
3-оксииминохолест-4-ен;
3-оксиимино-2,2-диметилхолест-4-ен;
3-оксиимино-7,7-диметилхолест-4-ен;
3-оксииминохолест-1,4-диен;
3-оксииминохолест-4,6-диен;
3-оксииминохолест-4,22-диен;
3-оксииминохолест-4,24-диен;
3-оксиимино-24-метилхолест-4,22-диен;
3-оксиимино-24-этилхолест-4-ен;
3-оксиимино-24-этилхолест-4,22-диен;
3-оксиимино-4-хлорхолест-4-ен;
3-оксиимино-4-бромхолест-4-ен;
3-оксиимино-4-метилхолест-4-ен;
3-оксииминохолест-1,4,6-триен.

2. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R₁ может обозначать атом водорода.

3. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R₁ может обозначать С₁-С₄-алкил.

4. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R₁ может обозначать атом фтора.

5. Соединение по п.1 отличающееся тем, что R₆ обозначает группу СН₃.

6. Соединение по п.1 отличающееся тем, что R₆ может обозначать группу, соответствующую следующей формуле (А):

в которой Q может обозначать атом кислорода и R^c может обозначать группу формулы (С) или (D)

7. Соединение по п.1, отличающееся тем, что оно соответствует формуле (I), в которой R₄ совместно с R₂ образует дополнительную связь С-С между атомами углерода, с которыми R₂ и R₄ связаны.

8. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R₉ может обозначать атом водорода.

9. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R₁₀ может обозначать атом водорода.

10. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R₁₁ может обозначать атом водорода.

11. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R₁₂ может обозначать атом водорода.

12. Соединение по п.1, отличающееся тем, что оно соответствует формуле (I), в которой R₁₁ и R₉ совместно образуют дополнительную связь С-С между атомами углерода, с которыми R₁₁ и R₉ связаны.

13. Соединение по п.12, отличающееся тем, что R₉, R₁₀, R₁₁ и R₁₂ являются атомами водорода.

14. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R₆ является метилом.

15. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R₁₃ может обозначать группу, выбираемую из

16. Соединение по п.15, отличающееся тем, что R₁₃=G₁

17. Соединение по п.15, отличающееся тем, что R₁₃=G₂

18. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R₁₃ может обозначать группу следующей формулы (Е):

в которой R₁₄ может обозначать следующую группу G₇

X может обозначать -NH и
R₁₅ может обозначать группу следующей формулы (С) или (D)

19. Соединение по любому из пп.1-18, отличающееся тем, что оно представляет собой:
3-оксиимино-4-фторхолест-4-ен;
3-оксиимино-6β-фторхолест-4-ен;
3-оксиимино-2,2-дифторхолест-4-ен;
3-оксиимино-2α-фторхолест-4-ен;
3-оксиимино-25-[метил(7-нитро-2,1,3-бензоксадиазол-4-ил)амино]-27-норхолест-4-ен;
3-оксиимино-25-((N-(+)биотиноил-N-метил)амино)-27-норхолест-4-ен;
3-оксиимино-19-гидроксихолест-4-ен;
3-оксиимино-19-биотинилоксихолест-4-ен;
3-оксиимино-2-метилхолест-4-ен;
3-оксиимино-4-метоксихолест-4-ен.

20. Применение соединения, такого как описано по любому из пп.1-19, включая 3-оксиимино-4-хлорохолест-4-ен, 3-оксиимино-4-бромхолест-4-ен и 3-оксиимино-4-метилхолест-4-ен, для получения цитопротекторного лекарственного средства.

21. Применение соединения, такого как описано по любому из пп.1-19, включая 3-оксиимино-4-хлорохолест-4-ен, 3-оксиимино-4-бромхолест-4-ен и 3-оксиимино-4-метилхолест-4-ен, для получения нейропротекторного лекарственного средства.

22. Применение соединения, такого как описано по любому из пп.1-19, включая 3-оксиимино-4-хлорохолест-4-ен, 3-оксиимино-4-бромхолест-4-ен и 3-оксиимино-4-метилхолест-4-ен, для получения кардиопротекторного лекарственного средства.

23. Применение соединения, такого как описано по любому из пп.1-19, включая 3-оксиимино-4-хлорохолест-4-ен, 3-оксиимино-4-бромхолест-4-ен и 3-оксиимино-4-метилхолест-4-ен, для получения гепатопротекторного лекарственного средства.

24. Применение соединения, такого как описано по любому из пп.1-19, включая 3-оксиимино-4-хлорохолест-4-ен, 3-оксиимино-4-бромхолест-4-ен и 3-оксиимино-4-метилхолест-4-ен, для получения лекарственного средства для защиты клеток почек.

25. Применение соединения, такого как описано по любому из пп.1-19, включая 3-оксиимино-4-хлорохолест-4-ен, 3-оксиимино-4-бромхолест-4-ен и 3-оксиимино-4-метилхолест-4-ен, для получения лекарственного средства для защиты мышечных клеток.

26. Применение соединения по любому из пп.1-19, включая 3-оксиимино-4-хлорохолест-4-ен, 3-оксиимино-4-бромхолест-4-ен и 3-оксиимино-4-метилхолест-4-ен, для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения или предупреждения некроза и/или патологического апоптоза и/или некроптоза.

27. Применение соединения по любому из пп.1-19, включая 3-оксиимино-4-хлорохолест-4-ен, 3-оксиимино-4-бромхолест-4-ен и 3-оксиимино-4-метилхолест-4-ен, для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения патологий или травм, связанных с дегенерацией или гибелью клеток, независимо от того, являются ли они естественными или случайными.

28. Применение соединения по любому из пп.1-19, включая 3-оксиимино-4-хлорохолест-4-ен, 3-оксиимино-4-бромхолест-4-ен и 3-оксиимино-4-метилхолест-4-ен, для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения патологий или травм, связанных с дегенерацией или гибелью нейронов, клеток сердца, мышечных клеток или клеток печени, независимо от того, являются ли они естественными или случайными.

29. Применение соединения по любому из пп.1-19, включая 3-оксиимино-4-хлорохолест-4-ен, 3-оксиимино-4-бромхолест-4-ен и 3-оксиимино-4-метилхолест-4-ен, или одной из его солей присоединения с фармацевтически приемлемыми кислотами для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения таких состояний, как болезни мышц, таких как мышечная дистрофия, сердечно-сосудистые заболевания, заболевания печени, заболевания почек, заболевания, связанные с митохондриями (патологии митохондрий), неврологические и нейродегенеративные заболевания.

30. Применение соединения по любому из пп.1-19, включая 3-оксиимино-4-хлорохолест-4-ен, 3-оксиимино-4-бромхолест-4-ен и 3-оксиимино-4-метилхолест-4-ен или одной из его солей присоединения с фармацевтически приемлемыми кислотами для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения нейродегенеративных заболеваний.

31. Применение по п.21, отличающееся тем, что нейропротекторное лекарственное средство предназначено для лечения нейродегенеративного заболевания, выбранного из болезни Гентингтона, хронических нейродегенеративных болезней, наследственных или спорадических, нейронных поражений, связанных со старением, периферических невропатий, наследственных или вызванных повреждением, болезни Шарко-Мари-Туса, невропатий диабетических или вызванных противораковым лечением, эпилепсии, хронических демиелизирующих и нейродегенеративных болезней, в частности рассеянного склероза и лейкодистрофий, травм головного мозга, периферической нервной системы или спинного мозга, ишемии головного мозга или спинного мозга, дегенерации наследственной, вызванной поражением или старением сенсорных зрительных нейронов или дегенерации глазного нерва, наследственной, травматической или связанной со старением дегенерации слуховых сенсорных нейронов, лобарной атрофии и сосудистой деменции, заболеваний и травм, связанных с дегенерацией мотонейронов, спинальной амиотрофии, спинальной амиотрофии детского возраста, рассеянного склероза, бокового амиотрофического склероза и травм спинного мозга или периферических двигательных нервов.

32. Применение по п.21, отличающееся тем, что нейропротекторное лекарственное средство предназначено для лечения рассеянного склероза, спинальной амиотрофии, спинальной амиотрофии детского возраста или бокового амиотрофического склероза.

33. Применение соединения по п.6 или 18 в качестве маркера или агента мечения.

34. Цитопротекторная фармацевтическая композиция, отличающаяся тем, что она содержит в качестве активного вещества по меньшей мере одно соединение, такое как описано в любом из пп.1-19, включая 3-оксиимино-4-хлорохолест-4-ен, 3-оксиимино-4-бромхолест-4-ен и 3-оксиимино-4-метилхолест-4-ен, а также фармацевтически приемлемый эксципиент.