СПОСОБ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ КОРРЕКЦИИ ИШЕМИИ СКЕЛЕТНОЙ МЫШЦЫ СИЛДЕНАФИЛОМ, В ТОМ ЧИСЛЕ ПРИ L-NAME-ИНДУЦИРОВАННОМ ДЕФИЦИТЕ ОКСИДА АЗОТА Российский патент 2013 года по МПК G09B23/28 A61K31/522 A61P9/10 

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и хирургии, и может быть использовано для коррекции ишемии.

Наиболее близким к заявленному решению «Способ коррекции ишемии», предложенный Покровским М.В. и др. RU 2438192 С1. Где коррекция ишемии скелетной мышцы осуществляется дистантным ишемическим прекондиционированием, за счет стимуляции неоангиогенеза.

Однако в данном решениях не проводится оценка влияния силденафила на состояние микроциркуляторного русла в ишемизированной скелетной мышце, в том числе при дефиците оксида азота.

Преимуществом заявленного способа является то, что отсутствует ишемический эпизод, являющийся опасным при различных сосудистых патологиях. Активация медиаторов прекондиционирования - оксида азота и протеинкиназ, и основного эффекторного звена - АТФ-зависимых калиевых каналов осуществляется фармакологическим препаратом.

Техническим результатом изобретения является разработка способа фармакологической коррекции ишемии скелетной мышцы, в том числе при L-NAME- индуцированном дефиците оксида азота, включающего применение силденафила.

Технический результат достигается тем, что коррекция ишемии скелетной мышцы, в том числе при моделировании дефицита оксида азота внутрибрюшинным введением лабораторному животному в течение 7 суток блокатора синтеза оксида азота N-нитро-L-аргинин метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг ежедневно, проводится путем внутрижелудочного введения силденафила в дозе 2,2 мг/кг на первые, третьи и пятые сутки эксперимента.

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ

Опыты проводят на белых крысах линии Wistar массой 220-250 г.

Дефицит оксида азота моделируется внутрибрюшинным введением лабораторному животному в течение 7 суток блокатора синтеза оксида азота N-нитро-L-аргинин метилового эфира в дозе 25 мг/кг ежедневно.

Острая ишемия моделируется на мышцах правой голени крысы оперативным удалением участка магистральных сосудов, включающего бедренную, подколенную, переднюю и заднюю большеберцовые артерии.

Уровень микроциркуляции в мышцах голени определяется при помощи оборудования производства компании Biopac systems: полиграфа МР100 с модулем лазерной допплеровской флоуметрии LDF100C и инвазив-ного игольчатого датчика TSD144. Регистрация и обработка результатов лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ) производится с помощью программы AcqKnowledge версии 3.8.1., значения микроциркуляции выражались в перфузионных единицах (ПЕ). Запись уровня микроциркуляции осуществляют в пяти точках (середина длины мышцы, точки на 3-5 мм выше и ниже, латеральное и медиальнее первой).

Регистрация уровня микроциркуляции проводится в группах ложно-оперированных животных, с моделированием ишемии мышц голени, с моделированием ишемии мышц голени при L-NAME- индуцированном дефиците оксида азота и в группах животных, которым проводилась коррекция ишемии мышц голени и ишемии мышц голени при L-NAME- индуцированном дефиците оксида азота силденафилом.

Силденафил («VIAGRA», Pfizer) вводится внутрижелудочно в дозе 2,2 мг/кг на первые, третьи и пятые сутки эксперимента.

При статистической обработке данных рассчитывается среднее значение, величина стандартного отклонения. Различия считаются достоверными при р<0,05.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ

Среднее значение уровня микроциркуляции в интактной мышце голени крыс составляет 526±34 НЕ. Экспериментальные животные были разделены

на следующие группы:

1) ложнооперированные животные (n=20);

2) моделирование ишемии мышц голени (n=20);

3) моделирование ишемии мышц голени+силденафил (n=20);

4) моделирование ишемии мышц голени при L-NAME- индуцированном дефиците оксида азота (n=20);

5) моделирование ишемии мышц голени при L-NAME- индуцированном дефиците оксида азота+силденафил (n=20).

Моделирование ишемии мышц правой голени осуществляли под наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг веса внутрибрюшинно), оперативным удалением участка магистральных сосудов, включающего бедренную, подколенную, переднюю и заднюю большеберцовые артерии. Моделирование дефицита оксида азота осуществляли животным 4-й и 5-й групп внутрибрюшинным введением в течение первых 7 суток блокатора синтеза оксида азота N-нитро-L-аргинин метилового эфира в дозе 25 мг/кг ежедневно. Коррекцию ишемии мышц проводили у животных 3-й и 5-й групп внутрижелудочным введением силденафила в дозе 2,2 мг/кг на первые, третьи и пятые сутки эксперимента.

Уровень микроциркуляции в мышцах голени определяли при помощи оборудования производства компании Biopac systems: полиграфа МР100 с модулем лазерной допплеровской флоуметрии LDF100C и инвазивного игольчатого датчика TSD144 на 21 и 28 сутки. Регистрацию и обработку результатов лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ) производили с помощью программы AcqKnowledge версии 3.8.1., значения микроциркуляции выражали в перфузионных единицах (НЕ). Запись кривой уровня микроциркуляции осуществли в пяти точках (середина длины мышцы, точки на 3-5 мм выше и ниже, латеральное и медиальнее первой) в течение 30 секунд в каждой точке. Из полученных пяти значений выводили среднее, которое вносили в протокол и принимали за уровень микроциркуляции в мышцах голени у данного животного. Из 10 полученных значений рассчитывали среднее, которое принимали за уровень микроциркуляции в данной группе животных на данном сроке исследования.

Результаты оценки уровня микроциркуляции у животных опытных групп представлены в таблице (табл.1).

Таблица 1 Результаты оценки уровня микроциркуляции в мышцах голени животных опытных групп (М±m) в перфузионных единицах   21 сутки (n=10) 28 сутки (n+10) Ложнооперированные животные 527±10 532±33 Ишемия мышц голени 322±7 361±8 Ишемия мышц голени+силденафил 435±12* 806±42* Ишемия мышц голени+L-NAME 351±24 427±13 Ишемия мышц голени+L-NAME+силденафил 359,93±18,078 503±24** Примечание. * - р<0,05 в сравнении с группой животных с ишемией мышц голени; ** - р<0,05 в сравнении с группой животных с ишемией мышц голени, получавших L-NAME; силденафил в дозе 2,2 мг/кг на первые, третьи и пятые сутки эксперимента; L-NAME - N-нитро-L-аргинина метиловый эфир ежедневно внутрижелудочно, в дозе 25 мг/кг/сут.

В группе ложнооперированных животных среднее значение уровня микроциркуляции в мышцах правой голени на всех сроках не имеет достоверных отличий от показателей в группе интактных животных (526±34 ПЕ) (р=0,19; р=0,43 соответственно). В группе моделирования ишемии мышц голени уровень микроциркуляции на всех сроках достоверно ниже значения в интактной мышце (р<0,05).

Коррекция силденафилом способствовала достоверному повышению уровня регионарного кровотока в ишемизированной мышце голени крыс по сравнению с показателями во второй группе на соответствующем сроке (21-е сутки - р<0,05, 28-е сутки - р<0,05). Уровень микроциркуляции в данной группе на 21-е сутки приближается к показателю в группе интактных животных, а на 28-е сутки значительно превосходит его. При моделировании ишемии мышц голени на фоне L-NAME- индуцированного дефицита оксида азота уровень микроциркуляции на 21 сутки в пролеченной группе достоверно не отличается от группы животных, не получавших лечение (р=0,8229). Статистически значимая разница отмечена в данных группах на 28 сутки (р<0,0002).

Таким образом, полученные результаты позволяют констатировать фармакологическую коррекцию ишемии скелетной мышцы силденафилом, в том числе при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота за счет стимуляции неоангиогенеза.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для коррекции ишемии скелетной мышцы. Для этого моделируют ишемию мышц голени, в том числе при одновременном дополнительном моделировании дефицита оксида азота внутрибрюшинным введением в течение 7 суток блокатора синтеза оксида азота N-нитро-L-аргинин метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг ежедневно. Для коррекции ишемии и в том и другом случае внутрижелудочно вводят силденафил в дозе 2,2 мг/кг на первые, третьи и пятые сутки эксперимента. Способ обеспечивает значительное улучшение показателей микроциркуляции в ишемизированной мышце голени крыс, в т.ч. вследствие активации процесса прекондиционирования и стимуляции неоангиогенеза в специфических условиях проводимого эксперимента. 1 табл., 1 пр.

Способ фармакологической коррекции ишемии скелетной мышцы силденафилом, в том числе при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота, отличающийся тем, что коррекцию ишемии скелетной мышцы, в том числе при моделировании дефицита оксида азота внутрибрюшинным введением лабораторному животному в течение 7 суток блокатора синтеза оксида азота N-нитpo-L-аргинин метилового эфира в дозе 25 мг/кг ежедневно, осуществляют путем внутрижелудочного введения силденафила в дозе 2,2 мг/кг на первые, третьи и пятые сутки эксперимента.