СПОСОБ КОРРЕКЦИИ ЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ ТАДАЛАФИЛОМ ПРИ L-NAME ИНДУЦИРОВАННОМ ДЕФИЦИТЕ ОКСИДА АЗОТА Российский патент 2009 года по МПК A61K31/198 A61K31/4985 A61P9/00 

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии.

Наиболее близким к заявленному решению является способ коррекции эндотелиальной дисфункции с помощью силденафила, относящегося к селективным ингибиторам фосфодиэстеразы (ФДЭ5) недлительного действия, описанный G. Rossoni, В. Manfredi и соавт.в статье «Sildenafil reduces L-NAME-induced severe hypertension and worsening of myocardial ischaemia-reperfusion damage in the rat», British Journal of Pharmacology, 2007, V.150, P.567-576», который заключается в использовании силденафила для восстановлении вазорелаксирующей функции на фоне блокады эндотелиальной NO-синтазы.

Основным недостатком способа является то, что сиденафил является более короткодействующим препаратом, менее селективным и менее безопасным, чем препарат этой же группы тадалафил. Поэтому результаты коррекции эндотелиальной дисфункции при повреждении в системе L-аргининNO, которое связано в основном с недостаточностью эндотелиальной NO-синтазы, с помощью силденафила неудовлетворительны.

Техническим результатом изобретения является способ коррекции эндотелиальной дисфункции при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота, включающий использование тадалафила, относящегося к селективным ингибиторам ФДЭ5 с большей продолжительностью действия.

Технический результат достигается тем, что на фоне моделирования эндотелиальной дисфункции в эксперименте внутрибрюшинным введением лабораторному животному в течение 7 суток блокатора синтеза NO L-нитро-аргинин-метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг, проводится ее коррекция внутрижелудочным введением тадалафила в дозе 0,9 мг/кг однократно в сутки.

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ

Опыты проводят на белых крысах самцах линии Wistar массой 250-300 г. N-нитро-L-аргинин метиловый эфир (L-NAME) вводится внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг/сут, одновременно внутрижелудочно вводится тадалафил в дозе 0,9 мг/кг/сут. На 8 день от начала эксперимента под наркозом (этаминал-натрия 50 мг/кг) вводят катетер в левую сонную артерию для регистрации показателей артериального давления (АД), болюсное введение фармакологических агентов осуществляют в правую бедренную вену. Показатели гемодинамики: систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС) измеряют непрерывно посредством датчика и компьютерной программы "Bioshell". Функциональные пробы: эндотелийзависимая вазодилатация (ЭЗВ) - внутривенное введение ацетилхолина (АХ) в дозе 40 мкг/кг, эндотелийнезависимая вазодилатация (ЭНЗВ) - внутривенное введение нитропрусеида натрия (НП) в дозе 30 мкг/кг.

При статистической обработке данных рассчитывали среднее значение, величину стандартного отклонения. Различия считали достоверными при р<0,05.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ

Болюсное внутривенное введение АХ в течение 3-5 с приводило к резкому падению артериального давления достигающего пика у интактных животных для систолического давления (САД) 84,3±4,4, для диастолического давления (ДАД) - 38,7±2,8 и для среднего артериального давления (СрАД) 53,9±2,7 мм рт.ст., при этом в течение первых 2-3 с развивалась резкая брадикардия до 130-150 ударов в минуту. Восстановление АД происходило в среднем за 42,2±0,8 с после нормализации сердечного ритма. ЭНЗВ также характеризовалась снижением САД до 83,0±3,7, ДАД до 42,1±4,4 и СрАД до 55,7±3,5 мм рт.ст. с последующим полным восстановлением в среднем в течение 45,1±1,0 с. Блокада NO-синтазы с помощью длительного, ежедневного, в течение 7-суток внутрибрюшинного введения L-NAME (N-нитро-L-аргинин метиловый эфир в дозе 25 мг/кг) вызывало артериальную гипертензию (САД - 190,3±6,7, ДАД - 145,0±3,9, СрАД - 160,1±4,6 мм рт.ст.) и приводила к меньшему снижению показателей АД после введения АХ (САД до 110,6±5,2, ДАД до 82,8±6,6, СрАД до 92,1±6,1 мм рт.ст.) и НП (САД до 88,7±4,7, ДАД до 50,8±4,2 и СрАД до 63,4±4,1 мм рт.ст.) по сравнению с интактными животными.

Одновременное введение L-NAME и тадалафила (0,9 мг/кг внутрижелудочно) не приводило к снижению показателей исходных значений АД (САД - 208,7±10,2, ДАД - 155,0±9,6 мм рт.ст.) (таблица 1).

Таблица 1. Динамика показателей АД и ЧСС при моделировании дефицита оксида азота и коррекции эндотелиальной дисфункции тадалафилом. Группы животных Функциональные пробы САД, мм рт.ст. ДАД, мм рт.ст. ЧСС, уд. в мин. Интактные Исходные 137,7±3,7 101,9±4,3 420,0±9,0 ЭЗВ с АХ 84,3±4,5 38,7±2,8 416,0±14,0 ЭНЗВ с НП 83,0±3,7 42,1±4,4 415,0±10,0 Получавшие L-NAME (25 мг/кг) Исходные 190,3±6,7* 145,0±3,9* 428,0±11 ЭЗВ с АХ 110,6±5,2* 82,8±6,6* 426,0±14,0 ЭНЗВ с НП 88,7±4,7 50,8±4,2 426,0±13,0 L-NAME (25 мг/кг)+тадалафил (0,9 мг/кг) Исходные 208,7±10,2 155,±9,6 398,0±10,0** ЭЗВ с АХ 99,8±6,5** 61,9±5,5** 373,0±7,7** ЭНЗВ с НП 96,8±9,3 55,9±5,4 400,0±11,0 * - р<0,05 в сравнении с группой интактных, ** - р<0,05 в сравнении с группой L- NAME

Принципиальная разница в ЭЗВ и ЭНЗВ у интактных животных и животных с введением ингибитора NO-синтазы L-NAME закономерно привело нас к необходимости выведения специального показателя, характеризующего степень эндотелиальной дисфункции, являющегося отношением площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение НП к площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение АХ.

Мы рассчитывали это отношение у каждого животного интактной группы и крыс после моделирования блокады NO-синтазы и получили разницу данного показателя в 5 раз - соответственно 1,1 у интактных и 5,4 у животных, получавших L-NAME.

Таким образом, для дальнейшей оценки влияния АХ и НП при ЭЗВ и ЭНЗВ нами использовано это отношение как показатель коррекции эндотелиальной дисфункции. Так, в группе, где на фоне введения ингибитора N0-синтазы L-NAME вводился тадалафил, это отношение соответствовало значению 1,9±0,3 (таблица 2).

Таблица 2 Показатели, отражающие коррекцию эндотелиальной дисфункции на фоне введения L-NAME тадалафилом Группы животных Функциональные пробы Прирост падения
сосудистой реакции по СрАД (мм рт.ст.) Время сосудистой реакции (с) Площадь сосудистой реакции (усл. ед.) Отношение
площадей сосудистой реакции АХ кНП Интактные АХ 59,9±2,9 42,2±0,8 1268,0±74,8 1,1±0,1 НП 61,0±3,0 45,1±1,0 1375,3±93,7 L-NAME АХ 68,0±4,1* 20,0±1,4* 695,3±87,6* 5,4±0,6* НП 98,0±2,0* 67,4±1,4* 3322,7±116,7* L-NAME +тадалафил (0,9 мг/кг) АХ 97,7±6,8** 41,1±6,0** 1923,5±202,0** 1,9±0,3** НП 104,0±7,8 66,6±5,5 3457,7±382,1 * - р<0,05 в сравнении с группой интактных, ** - р<0,05 в сравнении с группой L- NAME

Таким образом, полученные результаты позволяют констатировать коррекцию эндотелиальной дисфункции тадалафилом, возникающую при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии, и может быть использовано для коррекции эндотелиальной дисфункции. Для этого в эксперименте моделируют эндотелиальную дисфункцию ежедневным внутрибрюшинным введением крысам-самцам линии Wistar, в течение 7 дней, N-нитро-L-аргинин метилового эфира в дозе 25 мг/кг. При этом степень развития дисфункции оценивают по соотношению эндотелийнезависимой и эндотелийзависимой вазодилатации. Коррекцию дисфункции осуществляют внутрижелудочным введением тадалафила в дозе 0,9 мг/кг 1 раз в сутки. Способ обеспечивает эффективную коррекцию эндотелиальной дисфункции в специфических условиях моделирования. 2 табл.

Способ коррекции эндотелиальной дисфункции, отличающийся тем, что в эксперименте белым крысам самцам линии Wistar с эндотелиальной дисфункцией, на фоне ее моделирования внутрибрюшинным введением ингибитора эндотелиальной синтазы N-нитро-L-аргинин метилового эфира в дозе 25 мг/кг ежедневно, в течение 7 сут, оценивая степень развития дисфункции по отношению показателей эндотелийнезависимой и эндотелийзависимой вазодилатации, внутрижелудочно вводят тадалафил 0,9 мг/кг ежедневно, в течение 7 сут.