СПОСОБ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ КОРРЕКЦИИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ КРИТИЧЕСКОЙ ИШЕМИИ СКЕЛЕТНОЙ МЫШЦЫ КОМБИНАЦИЕЙ СИМВАСТАТИНА, УДЕНАФИЛА И МОНОНУКЛЕАРНОЙ ФРАКЦИЕЙ АУТОЛОГИЧНОГО КОСТНОГО МОЗГА Российский патент 2020 года по МПК G09B23/28 A61K31/351 A61K31/519 A61K35/28 

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и хирургии, может быть использовано для коррекции ишемии скелетной мышцы.

Наиболее близким к заявленному решению является «Способ фармакологической коррекции ишемии скелетной мышцы силденафилом, в том числе при L-name-индуцированном дефиците оксида азота», патент на изобретение № 2681511.

Основным недостатком данного способа является использование силденафила, который является менее селективным и менее безопасным, чем препарат этой же группы уденафил. Влияние на ФДЭ-6, содержащуюся в сетчатке глаза и ответственную за расстройство зрения, у уденафила выражено в 70 раз слабее, чем у силденафила. Это объясняет наименьшую среди всех ингибиторов ФДЭ частоту расстройства зрения на фоне лечения уденафилом. Уденафил в отличие от силденафила не оказывает влияние на ФДЭ-11, содержащуюся в яичках, следовательно, не угнетает сперматогенез. Эффективность уденафила не зависит от приема и характера пищи.

Ограниченная патогенетическая направленность, связанная лишь с эндотелий-зависимым вазодилатирующим эффектом при монотерапии силденафилом. Механизм действия силденафила и уденафила основан на блокаде гидролиза циклического гуанозинмонофосфата (цГМФ), в результате чего концентрация цГМФ растет и происходит активация цГМФ-зависимой протеинкиназы с последующим фосфорилированием ионных каналов. Как следствие, снижается концентрация кальция в гладкомышечных сосудистых клетках, что приводит к их релаксации. Ингибиторы ФДЭ-5 способствуют развитию вазодилатации под действием эндогенного оксида азота (NO), который выделяется из нервных окончаний и эндотелиальных клеток, стимулируя синтез цГМФ с помощью фермента гуанилатциклазы. Расслабление гладкомышечных клеток приводит к расширению артерий, что обеспечивает необходимый приток артериальной крови к тканям. По исследованиям последних лет препараты данной группы путем влияния на метаболический путь оксида азота оказывают выраженный эндотелиопротективный эффект, способны активировать протеинкиназу G и АТФ-зависимые калиевые каналы.

Статины действую сразу на несколько звеньев патогенеза, при любом исходном уровне холестерина статины приводят к его снижению, важно отметить и тот факт, что для них характерны не только гиполипидемические, но и нелипидные (плейотропные) эффекты. Так, они улучшают функцию эндотелия, обладают антитромботическим действием, снижают активность воспалительных процессов, угнетают процессы фиброза, усиливают перфузию и ангиогенез. Таким образом, вполне обоснованным является применение при критической ишемии конечности симвастатина.

С целью регенерационной клеточной терапии в настоящее время используются стволовые клетки костного мозга в силу их плюрипотентности. Стволовые клетки (гемопоэтические и мезенхимальные) содержатся в мононуклеарной фракции клеток костного мозга. Обладая мультипотентными свойствами, эти клетки могут способствовать замещению дефектов тканей и неоангиогенезу. Кроме того, лимфоидные клетки фракции в силу своих морфогенетических способностей могут принимать участие в процессах восстановительной регенерации поврежденных органов и тканей

Монотерапия препаратом силденафил в дозе 2,2 мг/кг является менее безопасной с точки зрения возникновения побочных эффектов, а также фармакоэкономически не целесообразна. Тогда как предложенная нами доза уденафила составляет 0,86 мг/кг (опираясь на литературные данные, эффект влияния на неоангиогенез малыми дозами, то есть уменьшение их в 10 раз, позволяет достичь практически такого же уровня микроциркуляции). Комбинированная терапия симвастатином, уденафилом и мононуклеарной фракцией аутологичного костного мозга также позволяет уменьшить дозу симвастатина до 0,86 мг/кг. Помимо этого совместное применение вышеперечисленных компонентов позволяет уменьшить курсовую дозу каждого из них.

Таким образом, вполне обоснованным является комбинированное применение при ишемии конечности симвастатина, уденафила и мононуклеарной фракцией аутологичного костного мозга, которые действуют на разные звенья патогенеза. Такое неконкурентное взаимодействие позволяет достичь максимального физиологического ответа, обеспечить хороший реологический эффект в очаге ишемии и уменьшить дозу каждого из препаратов в предложенной нами комбинации, что в свою очередь увеличивает безопасность данной комбинации с точки зрения возникновения побочных эффектов, а также является фармакоэкономически более выгодным.

Техническим результатом изобретения является разработка способа коррекции ишемии скелетной мышцы симвастатином, уденафилом и мононуклеарной фракцией аутологичного костного мозга в условиях комбинированной терапии.

Технический результат достигается тем, что на фоне моделирования ишемии скелетной мышцы проводится ее коррекция путем внутрижелудочного введения симвастатина в дозе 0,86 мг/кг, уденафила в дозе 0,86 мг/кг 1 раз в сутки ежедневно в течение 7 дней и однократным параэнтеральным введением мононуклеарной фракцией аутологичного костного мозга на 7-е сутки после моделирования критической ишемии по 50 мкл в 4 точки (паравазально над паховой связкой в место отхождения от внутренней подвздошной артерии латеральной артерии, огибающие бедренную кость; под паховой связкой в область поверхностной артерии, огибающей подвздошную кость; в область отхождения мышечной ветви бедренной артерии r. muscularis, место прикрепления гребенчатой и длинной приводящей мышц бедра; в верхнюю треть икроножной мышцы).

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ

Опыты проводят на белых крысах линии Wistar массой 220-250 г.

Экспериментальные животные были разделены на следующие группы:

1) интактные (n=30);

2) ложнооперированные животные (разрез кожи вдоль бедра по внутренней поверхности с выделением сосудисто-нервного пучка бедра и ушивание раны непрерывным швом) (n=30);

3) моделирование критической ишемии мышц голени (удаление бедренной, подколенной, передней и задней большеберцовой артерии и вены, а также седалищный нерв) (n=30);

4) моделирование критической ишемии мышц голени и ее коррекция симвастатином, уденафилом и мононуклеарной фракцией аутологичного костного мозга (n=30).

Моделирование критической ишемии мышц левой голени осуществляли под наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг веса внутрибрюшинно), оперативным удалением участка магистральных сосудов, включающего бедренную, подколенную, переднюю и заднюю большеберцовые артерии и вены, а также седалищный нерв.

Коррекция критической ишемии мышц конечностей проводилась симвастатином в дозе 0,86 мг/кг, уденафилом дозе 0,86 мг/кг, внутрижелудочно 1 раз в сутки ежедневно в течение 7 дней и однократным параэнтеральным введением мононуклеарной фракцией аутологичного костного мозга (из большеберцовой кости посредством пункции костномозговой полости и выделением по методу Boyum) на 7-е сутки после моделирования критической ишемии по 50 мкл в 4 точки (паравазально над паховой связкой в место отхождения от внутренней подвздошной артерии латеральной артерии, огибающие бедренную кость; под паховой связкой в область поверхностной артерии, огибающей подвздошную кость; в область отхождения мышечной ветви бедренной артерии r. muscularis, место прикрепления гребенчатой и длинной приводящей мышц бедра; в верхнюю треть икроножной мышцы).

Уровень микроциркуляции в мышцах голени определяли при помощи оборудования производства компании Biopac systems: полиграфа МР100 с модулем лазерной допплеровской флоуметрии LDF100C и инвазивного игольчатого датчика TSD144 на 10, 21 и 28 сутки. Регистрацию и обработку результатов лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ) производили с помощью программы AcqKnowledge версии 3.8.1., значения микроциркуляции выражали в перфузионных единицах (ПЕ). Запись кривой уровня микроциркуляции осуществляли в пяти точках (середина длины мышцы, точки на 3-5 мм выше и ниже, латеральнее и медиальнее первой) в течение 30 секунд в каждой точке. Из полученных пяти значений выводили среднее, которое вносили в протокол и принимали за уровень микроциркуляции в мышцах голени у данного животного. Из 10 полученных значений рассчитывали среднее, которое принимали за уровень микроциркуляции в данной группе животных на данном сроке исследования. Регистрация уровня микроциркуляции проводится в всех экспериментальных группах.

При статистической обработке данных рассчитывается среднее значение, величина стандартного отклонения. Различия считаются достоверными при р<0,05.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ

Результаты оценки уровня микроциркуляции у животных опытных групп представлены в таблице 1.

Таблица 1

Результаты оценки уровня микроциркуляции в мышцах голени животных опытных групп (M ± m) в перфузионных единицах 10 сутки (n=10) 21 сутки (n=10) 28 сутки (n=10) Интактные 528,6±11,04 531,6±12,08 533,4±11 Ложнооперированные животные 521,4±11,46 523±13,79 524,1±15,1 Моделирование критической ишемии мышц голени 160,5±3,28* 249,1±7,31* 302,9±6,46* Моделирование критической ишемии мышц голени и ее коррекция симвастатином, уденафилом и мононуклеарной фракцией аутологичного костного мозга 321,3±8,49 493,4±17,54 574,7±9,86 Примечание: * - р<0,05 в сравнении с интактной группой животных; ** - р<0,05 в сравнении с группой животных с критической ишемией мышц голени

Среднее значение уровня микроциркуляции в интактной мышце голени крыс составило 531±12 ПЕ (перфузионных единиц).

В группе ложнооперированных животных среднее значение уровня микроциркуляции в мышцах левой голени на всех сроках не имеет достоверных отличий от показателей в группе интактных животных (523 ± 13 ПЕ). В группе моделирования критической ишемии мышц голени уровень микроциркуляции на всех сроках приводило к достоверному снижению уровня регионарного кровотока в ишемизированной мышце голени крыс (10-е сутки р<0,05, 21-е сутки р<0,05; 28-е сутки р<0,05).

Коррекция симвастатином, уденафилом и мононуклеарной фракцией аутологичного костного мозга способствовала достоверному повышению уровня регионарного кровотока в ишемизированной мышце голени крыс по сравнению с показателями группы животных с критической ишемией мышц голени на соответствующем сроке (10-е сутки р<0,05, 21-е сутки р<0,05; 28-е сутки р<0,05). Уровень микроциркуляции в данной группе на 28-е сутки приближается к показателю в группе интактных животных.

Таким образом, полученные результаты позволяют констатировать коррекцию ишемии скелетной мышцы комбинацией симвастатина, уденафила и мононуклеарной фракцией аутологичного костного мозга за счет стимуляции неоангиогенеза.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и хирургии, и может быть использовано для моделирования критической ишемии скелетной мышцы. Способ фармакологической коррекции экспериментальной критической ишемии скелетной мышцы комбинацией симвастатина, уденафила и мононуклеарной фракции аутологичного костного мозга включает экспериментальное моделирование критической ишемии мышц голени, где симвастатин вводят внутрижелудочно в дозе 0,86 мг/кг, уденафил вводят внутрижелудочно в дозе 0,86 мг/кг 1 раз в сутки ежедневно в течение 7 дней и мононуклеарную фракцию аутологичного костного мозга вводят однократно парентерально на 7-е сутки после моделирования критической ишемии по 50 мкл в 4 точки. Изобретение обеспечивает разработку способа фармакологической коррекции критической ишемии мышц голени у экспериментальных животных симвастатином. 1 пр., 1 табл.

Способ фармакологической коррекции экспериментальной критической ишемии скелетной мышцы комбинацией симвастатина, уденафила и мононуклеарной фракции аутологичного костного мозга, включающий экспериментальное моделирование критической ишемии мышц голени, где симвастатин вводят внутрижелудочно в дозе 0,86 мг/кг, уденафил вводят внутрижелудочно в дозе 0,86 мг/кг 1 раз в сутки ежедневно в течение 7 дней и мононуклеарную фракцию аутологичного костного мозга вводят однократно парентерально на 7-е сутки после моделирования критической ишемии по 50 мкл в 4 точки: паравазально над паховой связкой в место отхождения от внутренней подвздошной артерии латеральной артерии, огибающей бедренную кость; под паховой связкой в область поверхностной артерии, огибающей подвздошную кость; в область отхождения мышечной ветви бедренной артерии r. muscularis, место прикрепления гребенчатой и длинной приводящей мышц бедра; в верхнюю треть икроножной мышцы.