ПРОТИВОИШЕМИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО Российский патент 2013 года по МПК A61K31/05 A61K31/15 A61P9/10 

Изобретение относится к медицине, конкретно к фармакологии, и касается средства, обладающего противоишемическими свойствами.

Известны средства, проявляющие противоишемические свойства: триметазидин [1,2], милдронат [2, 3], эмоксипин [4], мексидол [5], n-тирозол [6, 7, 8, 9, 10] и другие средства [4, 11, 12, 13, 14, 15].

Задачей изобретения является расширение номенклатуры противоишемических средств.

Поставленная задача достигается использованием 4-метил-2,6-диизоборнилфенола в качестве противоишемического средства.

Известно, что 4-метил-2,6-диизоборнилфенол обладает антиоксидантной [16], гемореологической, антитромбоцитарной, антитромбогенной [17, 18, 19, 20, 21, 22], эндотелийпротекторной [23], нейропротекторной [24, 25, 26], ретинопротекторной [27] активностью и способен увеличивать мозговой кровоток [28]. При этом показана низкая токсичность соединения [29].

Использование 4-метил-2,6-диизоборнилфенола, как противоишемического средства при инфаркте миокарда, стенокардии, «синдроме реперфузии», хронической сердечной недостаточности, в литературе не описано.

Принципиально новым в предлагаемом изобретении является то, что в качестве противоишемического средства используется 4-метил-2,6-диизоборнилфенола. 4-метил-2,6-диизоборнилфенол может применяться для первичной и вторичной профилактиктики ишемических повреждений миокарда. Данное свойство явным образом не вытекает для специалиста из уровня техники.

Таким образом, данное техническое решение соответствует критериям изобретения «Новизна», «Изобретательский уровень» и «Промышленная применимость».

Объектом исследования являлись аутбредные крысы-самцы сток Вистар.

Эксперименты по изучению противоишемической активности 4-метил-2,6-диизоборнилфенола были выполнены на 49 аутбредной крысе-самце сток Вистар массой 220-240 г.

Животные были разделены на 2 группы: крысы контрольной группы (n=33) получали 1 мл 2% крахмальной слизи в течение 3 суток до и 5 суток после создания модели острой ишемии миокарда с реперфузией, крысы опытной группы (n=16) получали 1 мл взвеси 4-метил-2,6-диизоборнилфенол в 2% крахмальной слизи в дозе 100 мг/кг в течение 3 суток до и 5 суток после создания модели острой ишемии миокарда с реперфузией. Крахмальную слизь и исследуемое вещество в виде суспензии в крахмальной слизи вводили внутрижелудочно один раз в сутки.

4-Метил-2,6-диизоборнилфенола исследовали с помощью электрокардиографического (ЭКГ) и морфологического методов. ЭКГ регистрировали на 1, 3 и 5 сутки эксперимента с помощью компьютерного электрокардиографа Поли-Спектр-8/Л (Россия).

Для моделирования ишемии миокарда с реперфузией крыс наркотизировали тиопентал-натрием (60 мг/кг), интубировали и подключали к аппарату искусственной вентиляции легких (ИВЛ) Rodent Ventilator 7025 (Италия). После проведения торако- и перикардотомии проводили окклюзию левой коронарной артерии на уровне нижнего края auricula sinistra без нарушения топографии сердца в грудной клетке по методу А.Х. Когана [30]. Длительность окклюзии левой коронарной артерии составляла 40 мин, после чего лигатуру развязывали и проводили реперфузию. Для верификации окклюзии коронарной артерии проводили мониторирование ЭКГ во II стандартном отведении, используя компьютерный электрокардиограф Поли-Спектр-8/Л (Россия). У ложнооперированных животных проводили аналогичное оперативное вмешательство без наложения лигатур на левую коронарную артерию.

На 5-е сутки после реперфузии крыс вновь наркотизировали (тиопентал-натрий 60 мг/кг внутрибрюшинно), подключали ИВЛ и затягивали лигатуру. Для выявления зоны гипоперфузии в бедренную вену болюсно вводили 0,2 мл 5% раствора красителя patent blue violet («Sigma») и через 10-20 с извлекали сердце. Участки миокарда с сохраненной перфузией окрашивались в зеленый цвет, неперфузируемые оставались неокрашенными.

Поперечные срезы сердца толщиной 300 мкм приготавливали на замораживающем микротоме МЗ-2 (Россия). Полученные срезы (39-42 в зависимости от размеров сердца) распределяли по 4 предметным стеклам, размещая на каждое по одному из четырех смежных срезов. Срезы на 2 стеклах оставляли в нативном виде (для оценки зоны гипоперфузии), срезы на двух других стеклах окрашивали нитросиним тетразолием (НСТ) («Sigma») по Зелигману и Рутенбергу [31] для выявления в ткани дегидрогеназной активности. Срезы заключали в глицериново-желатиновый гель и сканировали. Оценку размера зон гипоперфузии и изменения дегидрогеназной активности проводили с использованием программы Adobe Photoshop CS2.

За зону инфаркта принимали зоны с резким снижением дегидрогеназной активности. Для этого на срезах миокарда выделяли участки, суммарная интенсивность окраски которых была снижена в 2,5 раза и более относительно интактных областей миокарда, что отражает топографию снижения в той же степени дегидрогеназной активности [30].

ЭКГ-мониторинг проводили на 1-е, 3-й и 5-е сутки реперфузии.

Статистическую обработку результатов проводили стандартными методами с применением t-критерия Стъюдента и критерия χ² с помощью пакета программ «Statistica for Windows 6.0».

Результаты исследований представлены в примерах 1 и 2.

Пример 1.

В контрольной группе в течение первых 2-3 часов после восстановления кровоснабжения миокарда левого желудочка погибло 16 животных из 33 (48%) (табл.1).

Таблица 1. Влияние курсового внутрижелудочного введения 4-метил-2,6-диизоборнилфенола (100 мг/кг) на выживаемость животных в течение первых суток после ишемии/реперфузии миокарда Группа Общее количество Выжившие (%) Контроль 33 17(52%) 4-Метил-2,6-диизоборнил фенол 16 13 (81%)⁺ Примечание: ⁺ - р<0,05 по сравнению со значениями в контрольной группе

В контрольной группе у крыс к 1-м суткам и в течение последующих 5 суток после возобновления перфузии миокарда левого желудочка на ЭКГ наблюдалось появление патологического зубца Q, свидетельствующего о наличии некротических изменений в миокарде [32], и снижение амплитуды зубца Т относительно исходных значений. В течение 1-5 суток после восстановления кровоснабжения миокарда в контрольной группе сохранялось существенное снижение амплитуды зубца R относительно исходных значений, характеризующее нарушение процесса деполяризации желудочков вследствие выключения части миокарда из процессов возбуждения [32] (табл.2).

Зона гипоперфузии в контрольной группе занимала 32,8±0,5%. Зона резко сниженой дегидрогеназной активности составила в среднем 19,0±0,8% от общей площади срезов миокарда и занимала 57,9±2,4% от площади зоны гипоперфузии (табл.3).

Таблица 2. Влияние курсового внутрижелудочного введения 4-метил-2,6-диизоборнилфенола (100 мг/кг) на параметры ЭКГ крыс на 1-е, 3-й и 5-е сутки после ишемии/реперфузии миокарда Показатель Исходные значения 1-е сут 3-й сут 5-е сут Контроль(n=17) ЧСС, мин^-1 439±±15 441±15 431±12 420±12 PQ, мс 42,1±06 44,0±1,0 44,2±1,5 41,8±1,5 QT, мс 82,5±1,8 80,6±2,0 78,6±2,3 81,6±2,1 Q, мкВ 0±0 28,6±2,9^# 20,9±2,3^# 7,6±1,4^# R, мкВ 310,2±14,7 174,1±14,2^# 186,3±8,9^# 228,3±12,3^# Т, мкВ 243,8±19,1 17,7±1,3^# 19,7±3,0^# 75,4±7,8^# 4-Метил-2,6-диизоборнилфенол (n=13) ЧСС, мин^-1 439±11 441±13 419±12 439±11 PQ, мс 37,8±2,4 44,2±1,0 42,5±2,3 39,6±1,9 QT, мс 81,5±1,4 78,9±4,1 77,5±2,1 79,2±1,7 Q, мкВ 0±0 25,7±2,4^# 15,6±1,8^# 4,5±1,6^#+ R, мкВ 316,2±21,5 192,3±20^# 240±24,7^#+ 274,6±27,6 Т, мкВ 293,9±17,4 51,3±11,3^#+ 76,7±5,5^#+ 147,4±12,8^#+ Примечание: ^# - р<0,05 по сравнению с исходными значениями; ⁺ - р<0,05 по сравнению со значениям в контрольной группе

Таблица 3. Влияние курсового внутрижелудочного введения 4-метил-2,6-диизоборнилфенола (100 мг/кг) на размеры зоны гипоперфузии и зоны резко сниженной дегидрогеназной активности на 5-е сутки после ишемии/реперфузии миокарда   Зона Зона резко сниженной Группа гипоперфузии, % дегидрогеназной активности   от площади % от площади % от площади   миокарда миокарда гипоперфузии Контроль (n=12) 33±1 19±1 58±2 4-Метил-2,6- 32±2 10±1⁺ 31±3⁺ диизоборнилфенол (n=12)       Примечание: ⁺ - р<0,05 по сравнению со значениями в контрольной группе значениями в контрольной группе

Пример 2. В опытной группе в период реперфузии из 16 животных погибло 3. Таким образом, смертность составила 19%, что достоверно отличалось от показателя в контрольной группе (табл.1).

В группе животных с введением 4-метил-2,6-диизоборнилфенола через 1 сутки после реперфузии миокарда амплитуда зубца Q на ЭКГ после эпизода ишемии/реперфузии в опытной группе была аналогична контрольным показателям. К 3-м суткам наблюдения отмечена отчетливая тенденция к снижению амплитуды зубца Q, а к 5-м суткам данный показатель достоверно отличался от контроля. Снижение амплитуды зубца Т было менее выраженным и достоверно отличалось от контроля на всем протяжении наблюдения. В опытной группе крыс к 3-м суткам выявлялось отчетливое повышение амплитуды зубца R относительно контрольной группы, снижение этого показателя относительно исходных значений сохранялось в течение первых трех суток (табл.2).

Зона гипоперфузии в группе животных, получавших 4-метил-2,6-диизоборнилфенол, занимала 32,1±1,9% от общей площади поперечных срезов миокард, что соответствовало показателю контрольной группы. Зона резко сниженной дегидрогеназной активности составила 10,0%±1,2% от общей площади миокарда и 31,2±3,1% от площади зона гипоперфузии (табл.3). Следовательно, лечебно-профилактическое введение 4-метил-2,6-диизоборнилфенола в дозе 100 мг/кг значимо уменьшало зону инфаркта как от общей площади миокарда (на 47%), так и от площади гипоперфузии (на 46%) по сравнению с аналогичными показателями контрольной группы.

Таким образом, 4-метил-2,6-диизоборнилфенол при лечебно-профилактическом введение в дозе 100 мг/кг снижает смертность животных в постреперфузионный период и уменьшает размеры зоны инфаркта как относительно общей площади миокарда, так и относительно зоны гипоперфузии.

Источники информации

1. Чекман И.С., Горчакова Н.А., Французова С.Б., Минцер В.О. Кардиопротекторы - клинико-фармакологические аспекты // Укр. медичиний часопис. - 2003. - Т. 38, №6. - С.18-25.

2. Регистр лекарственных средств России. Энциклопедия лекарств. - М: «РЛС-2007», 2006. - Вып. 15. - С.573, 891.

3. Пархоменко А.И. Метаболические подходы к лечению острых и хронических форм ишемической болезни сердца и сердечной недостаточности // Журн. практ.врача. - 1999. - №1. - С.22-25.

4. Большая Российская энциклопедия лекарственных средств. - М.: Ремедиум, 2001. - С.770.

5. Голиков А.П., Михин В.П., Полумисков В.Ю., Бойцов С.А., Богословская Е.Н. Опыт применения кардиопротектора мексикора у больных с острым коронарным синдромом // Диагностика и лечение нарушений регуляции сердечно-сосудистой систмы: Сбор. трудов VI научно-практической конф. - М, 2004. - С.485-492.

6. Патент РФ №2384327 «Противоишемическое средство».

7. Чернышева Г.А., Плотников М.Б., Смольякова В.И., Черкашина И.В., Толстикова Т.Г., Крысин А.П., Сорокина И.В. Влияние n-тирозола на течение постишемической дисфункции миокарда у крыс // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2005, Приложение 1. - С.69-72.

8. Плотников М.Б., Алиев О.И., Чернышева Г.А., Смольякова В.И., Голубева И.В., Краснов Е.А. Разработка нового гемореологического и кардиопроекторного средства на основе n-тирозола // Создание новых лекарственных препаратов: Матер. конф. - Томск, 2007. - С.33-34.

9. Чернышева Г.А., Плотников М.Б., Смольякова В.И., Голубева И.В., Алиев О.И., Толстикова Т.Г., Крысин А.П., Сорокина И.В. Антиаритмическая активность n-тирозола в условиях острой ишемии и реперфузии миокарда // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2007. - Т. 143, №6 - С.631-633.

10. Чернышева Г.А., Плотников М.Б., Смольякова В.И., Краснов Е.А. Влияние активности n-тирозола при лечебном применении на электрическую нестабильность миокарда после каранарооклюзии // Эксперим. и клин. фармакология. - 2007. - Т. 70, №4 - С.23-25.

11. Патент РФ №2136667 «Производные 2-меркаптобензимидазола, обладающие противоишемической, антиаритмической и противофибрилляторной активностью».

12. Патент РФ №2027709 «Соли 2-[2-(диэтиламино)этилтио]-5,6-диметилбензимидазола, обладающие протиивоишемической, антигипоксической и антиаритмической активностью и 2-[2-(диэтиламино)этилтио]-5,6-диметилбензимидазол в качестве качестве промежуточного продукта для синтеза солей 2-[2-(диэтиламино)этилтио]-5,6-диметилбензимидазола».

13. Патент РФ №2088573 «1-[W-(N,N-замещенные амино)алкил]-2-(2*991-ацетенил) пирролы или их фармацевтически приемлемые соли, обладающие антиаритмической и противоишемической активностью».

14. Патент WO №0023447 «Adenosine analogues having antihypertensive, cardioprotective, anti-ischemic antilipolytic properties».

15. Патент GB №1911746 «The substance having antioxidant, geroprotective and anti-ischemic activity and method for preparing thereof».

16. Плотников М.Б., Смольякова В.И., Иванов И.С., Кучин А.В., Чукичева И.Ю., Краснов Е.А. Антиоксидантная активность производного о-изоборнилфенола при ишемии головного мозга у крыс // Вопр. биол., мед. и фармацевт. химии. - 2010. - №5. - С.22-24.

17. Плотников М.Б., Смольякова В.И., Иванов И.С., Кучин А.В., Чукичева И.Ю., Буравлев Е.В., Краснов Е.А. Синтез и биологическая активность производных о-изоборнилфенола // Хим.-фар. журн. - 2010. - Т. 44, №10 - С.28-31.

18. Патент РФ №2347561 «Средство, обладающее гемореологической, антитромбоцитарной и антитромбогенной активностью».

19. Плотников М.Б., Иванов И.С., Смольякова В.И., Кучин А.В., Чукичева И.Ю. Новые производные изоборнилфенола - основа для разработки средств профилактики и лечения тромбофилических состояний // Химия и медицина: Тез докл. VI Всерос. научного семинара с Молодежной научной школой. - Уфа, 2007. - С.80-81.

20. Плотников М.Б., Смольякова В.И., Иванов И.С., Краснов Е.А., Кучин А.В., Чукичева И.Ю. Гемореологическая активность производных о-изобарнилфенола // Микроциркуляция и гемореология: Тез. VI междунар. конф. - Ярославль, 2007. - С.205.

21. Плотников М.Б., Смольякова В.И., Иванов И.С., Кучин А.В., Чукичева И.Ю., Краснов Е.А. Антитромбогенная и антитромбоцитарная активность производного о-изоборнилфенола // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2008. - Т. 145, №3. - С.296-298.

22. Плотников М.Б., Смольякова В.И., Чернышева Г.А., Иванов И.С., Кучин А.В., Чукичева И.Ю., Краснов Е.А. Пространственно-затруденные фенолы в предупреждении артериального тромбоза у крыс // Клиническая гемостазиология и гемореология в сердечно-сосудистой хирургии: Материалы IV Всероссийской конференции. - М., 2009. - С.386-387.

23. Плотников М.Б., Смольякова В.И., Иванов И.С., Чернышева Г.А, Кучин А.В., Чукичева И.Ю., Краснов Е.А. Эндотелийпротекторная активность дибарнола // Гемореология и микроциркуляция (от функциональных механизмов в клинику) / Мат. Международной науч. Конф. - Ярославль: "ЯГПУ им. К.Д. Ушинского", 2009. - С.39.

24. Патент РФ №2406488 «Нейропротекторное средство».

25. Плотников М.Б., Чернышева Г.А., Смольякова В.И., Иванов И.С., Кучин А.В., Чукичева И.Ю., Краснов Е.А. Нейропротекторные эффекты и механизмы действия диборнола при ишемии головного мозга // Вестник Российской АМН. - 2009 - №11 - С.12-17.

26. Плотников М.Б., Смольякова В.И., Иванов И.С., Чернышева Г.А., Кучин А.В., Чукичева И.Ю., Краснов Е.А. Гемореологические эффекты производного о-изоборнилфенола в условиях ишемии головного мозга у крыс // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2010. - Т. 148 №6 - С.660-663.

27. Патент РФ №2406487 «Средство, обладающее ретинопротекторной активностью».

28. Патент РФ №2351321 «Средство, увеличивающее мозговой кровоток».

29. Иванов И.С. Связь структуры и токсичности в ряду производных изоборнилфенола // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии: Материалы конференции / Под ред. В.В. Жданова. - Томск: Изд-во Том. унта, 2007. - С.35-37.

30. Коган А.X. Хирургический метод моделирования коронароокклюзионного инфаркта и аневризмы сердца у крыс // Патол. физиол. и эксперим. терапия. - 1979. - №3. - С.79-81.

31. Пирс Э. Гистохимия. - М.: Издат-во иностранной литературы, 1956. - 488 с.

32. Мурашко В.В., Струтынский В.В. Электрокардиография. - М.: МЕДпресс, 2000. - 312 с.

Изобретение относится к медицине, конкретно к фармакологии, и касается применения 4-метил-2,6-диизоборнилфенола в качестве лекарственного средства, обладающего противоишемическими свойствами с высокой степенью активности. 3 табл., 2 пр.

Применение 4-метил-2,6-диизоборнилфенола в качестве противоишемического средства.