СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ГОЛОВОКРУЖЕНИЯ РАЗЛИЧНОГО ГЕНЕЗА, КИНЕТОЗОВ И ВЕГЕТО-СОСУДИСТОЙ ДИСТОНИИ (ВАРИАНТЫ) И ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО Российский патент 2014 года по МПК A61K39/00 A61P25/28 

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для лечения головокружения различного генеза, кинетозов, а также вегето-сосудистой дистонии, сопровождающейся как повышением, так и понижением артериального давления.

Вегето-сосудистая дистония (синонимы: нейроциркуляторная дистония, нейроциркуляторная астения, психовегетативный синдром, вегетоневроз, синдром вегетативной дисфункции) - полиэтиологический синдром, характеризующийся дисфункцией вегетативной (автономной) нервной системы (ВНС), и функциональными (то есть не органическими) нарушениями со стороны практически всех систем организма (в основном сердечнососудистой). Основной клинической особенностью больных ВСД является наличие у больных многочисленных жалоб, многообразие различных симптомов и синдромов, что обусловлено особенностями патогенеза, вовлечением в процесс гипоталамических структур. Наиболее частые симптомы ВСД: кардиалгии, астения, невротические расстройства, головная боль, нарушение сна, головокружения, дыхательные расстройства, сердцебиения, похолодание рук и ног, вегетативно-сосудистые пароксизмы, дрожание рук, внутренняя дрожь, кардиофобии, миалгии, боли в суставах, отечность тканей, перебои сердца, ощущение жара в лице, субфебрилитет, обмороки.

Вегетативные расстройства, проявляющиеся в нарушении регуляции сердечно-сосудистой, дыхательной и других систем организма могут быть составной частью ряда болезненных состояний: гипертоническая болезнь, эндокринные нарушения, хроническая ишемическая болезнь сердца и т.д. Вегето-сосудистая дистония и нейроциркулярная дистония также могут ставится пациентам на основе симптокомплекса, характерного для соматоформной дисфункции вегетативной нервной системы.

В составе сложного симптомокомплекса вегето-сосудистой дистонии, отдельно выделяют синдром цереброваскулярных нарушений, характеризующийся головными болями, головокружением, шумом в голове и ушах, слабостью вестибулярного аппарата, склонностью к обморокам и кинетозам. В основе его развития лежат церебральные ангиодистонии, патогенетической основой которых является дисрегуляция тонуса сосудов мозга гипертонического, гипотонического или смешанного характера.

Кинетоз (синонимы: укачивание, морская болезнь, воздушная болезнь, автомобильная болезнь и др.) - болезнь передвижения (от греч. kynesis - движение) возникает при действии на организм более или менее продолжительных и изменяющихся ускорений. Для кинетозов характерны нарушения координации движений, головокружение, тошнота, рвота, бледность, холодный пот, снижение артериального давления, урежение сердечных сокращений. В тяжелых случаях возможно депрессивное состояние, астения, нарушения ясное сознания. Однако после прекращения действия ускорений симптомы кинетозов исчезают. Благодаря тому, что во время укачивания раздражаются попеременно разные рецепторы вестибулярного аппарата, мозжечок получает импульсы, вызывающие изменения тонуса различных групп мышц шеи, спины, конечностей - отсюда асимметрия тонуса мышц, нарушения координации движений. Проявления кинетозов более выражены у лиц с повышенной возбудимостью симпатического или парасимпатического отделов нервной системы или вестибулярного анализатора.

Приступы головокружения в значительной степени обусловлены изменениями функциональных взаимосвязей между симпатической и парасимпатической нервными системами в сторону преобладания функции парасимпатической системы. Эти изменения сопровождаются сосудодвигательными нарушениями во внутреннем ухе с повышением проницаемости стенок сосудов и последующим увеличением количества эндолимфы в вестибулярном аппарате. Головокружение (vertigo) - это типичный признак поражения вестибулярного анализатора различного генеза, включая нарушения функции вестибулярного нерва и вестибулярной кохлеарной системы, нарушения кровообращения в вертебрально-базилярной системе, патологию центральной нервной системы (ЦНС) и др. Головокружение как проявление кинетоза сопровождается другими вестибуло-вегетативными расстройствами, включающими три типа реакций: вестибуло-моторные (нистагм и реакции отклонения), вестибуло-сенсорные (помимо головокружения, это нистагм (или реакция поствращения), защитные движения) и вегетативные (тошнота, рвота, потливость, сердцебиение, чувство жара, колебание пульса и артериального давления).

Из уровня техники известно гомеопатическое лекарственное средство «АВИАМОРЕ» (RU 2113230 C1, A61K 35/78, 1998) на основе растительного сырья, которое предназначено для лечения и профилактики кинетозов в виде укачивания в транспорте, морской и воздушной болезни. Эффективность данного лекарственного средства в ряде случаев может быть недостаточно высока.

Известно также нейротропное лекарственное средство на основе антисыворотки к мозгоспецифическому белку S-100 (RU 2156621 C1, A61K 39/395, 27.09.2000). Однако применение данного лекарственного средства для лечения головокружения различного генеза, кинетозов, а также вегето-сосудистой дистонии является неочевидным и не следует явным образом из уровня техники.

Изобретение направлено на расширение терапевтического диапазона лекарственного средства на основе активированной - потенцированной формы антител к эндотелиальной NO-синтазе и повышение эффективности лечения вегето-сосудистой дистонии различного генеза, головокружения различного генеза и кинетозов.

Решение поставленной задачи обеспечивается тем, что для лечения головокружения различного генеза, кинетозов и вегето-сосудистой дистонии, согласно изобретению, в организм вводят активированную - потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100.

Причем, активированную-потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100 используют в виде активированного-потенцированного водного или водно-спиртового раствора, активность которого обусловлена процессом последовательного многократного разведения в водном или водно-спиртовом растворителе в сочетании с внешним механическим воздействием - вертикальным встряхиванием каждого разведения.

Кроме того, водный или водно-спиртовой раствор активированных-потенцированных форм антител к мозгоспецифическому белку S-100 получен путем многократного последовательного разведения в сочетании с внешним воздействием - вертикальным встряхиванием каждого разведения из матричного раствора аффинно очищенных антител к мозгоспецифическому белку S-100 с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл.

Возможно для лечения головокружения различного генеза, кинетозов и вегето-сосудистой дистонии использование лекарственного средства на основе активированной-потенцированной формы антител к мозгоспецифическому белку S-100 в твердой лекарственной форме, которая содержит эффективное количество гранул нейтрального носителя, насыщенного смесью водных или водно-спиртовых растворов активированной-потенцированной формы антител к мозгоспецифическому белку S-100, и фармацевтически приемлемые добавки, включающие лактозу, целлюлозу микрокристаллическую и магния стеарат.

Кроме того, как вариант, решение поставленной задачи обеспечивается тем, что для лечения головокружения различного генеза, кинетозов и вегето-сосудистой дистонии, согласно изобретению, в организм вводят активированную-потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100 одновременно и сочетано с активированной-потенцированной формой антител к эндотелиальной NO-синтазе.

При этом, активированную-потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100 и активированную-потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе используют в виде активированного-потенцированного водного или водно-спиртового раствора каждого компонента, активность которого обусловлена процессом последовательного многократного разведения в водном или водно-спиртовом растворителе в сочетании с внешним механическим воздействием - вертикальным встряхиванием каждого разведения.

Кроме того, используют приготовленные в виде единого лекарственного препарата - одной лекарственной формы смесь различных разведении антител к мозгоспецифическому белку S-100 в сочетании со смесью различных разведении антител к эндотелиальной NO-синтазе, приготовленных по гомеопатической технологии.

Решение поставленной задачи обеспечивается также тем, что лекарственное средство для лечения патологического синдрома, включая головокружения различного генеза, кинетозы и вегето-сосудистую дистонию, согласно изобретению, выполнено в виде фармацевтической композиции и содержит активированную-потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100 и активированную-потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе.

При этом, активированную-потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100 и активированную-потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе используют в виде активированного-потенцированного водного или водно-спиртового раствора, активность которого обусловлена процессом последовательного многократного разведения в водном или водно-спиртовом растворителе в сочетании с внешним механическим воздействием - вертикальным встряхиванием каждого разведения.

Кроме того, лекарственное средство может быть выполнено в твердой лекарственной форме и содержать эффективное количество гранул нейтрального носителя, насыщенного смесью водных или водно-спиртовых растворов активированной-потенцированной формы антител к мозгоспецифическому белку S-100 и активированной-потенцированной формы антител к эндотелиальной NO-синтазе, и фармацевтически приемлемые добавки, включающие лактозу, целлюлозу микрокристаллическую и магния стеарат.

При этом водные или водно-спиртовые растворы активированных-потенцированных форм антител к мозгоспецифическому белку S-100 и к эндотелиальной NO-синтазе получены путем многократного последовательного разведения в сочетании с внешним воздействием - вертикальным встряхиванием каждого разведения из матричных растворов аффинно очищенных антител к мозгоспецифическому белку S-100 и к эндотелиальной NO-синтазе с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл.

Причем каждый из компонентов заявленного лекарственного средства используют в виде смеси различных, преимущественно сотенных, разведении, приготовленных по гомеопатической технологии.

Кроме того, лекарственное средство может содержать действующие компоненты в объемном соотношении 1:1, при этом каждый компонент используют в виде смеси трех матричных растворов, разведенных, соответственно, в 100¹², 100³⁰, и 100²⁰⁰ раз, что эквивалентно сотенным разведениям С12, С30, С200, приготовленным по гомеопатической технологии.

Заявленную фармацевтическую композицию рекомендуется принимать, предпочтительно, по 1-2 таблетке 2-6 раз (предпочтительно 2-4 раза) в день.

При лечении головокружения различного генеза, кинетозов, а также вегето-сосудистой дистонии возможно раздельное, но сочетанное и одновременное применение (введение в организм) заявленной фармацевтической композиции в виде двух отдельно приготовленных препаратов как в виде растворов, так и в твердых лекарственных формах (таблеток), каждый из которых содержит активированную-потенцированную форму сверхмалых доз аффинно очищенных антител к мозгоспецифическому белку S-100 и, соответственно, активированную-потенцированную форму сверхмалых доз аффинно очищенных антител к эндотелиальной NO-синтазе.

Предложенное сочетание активированных-потенцированных форм антител к мозгоспецифическому белку S-100 и к эндотелиальной NO-синтазе в фармацевтической композиции (т.е. форм антител к мозгоспецифическому белку S-100 и к эндотелиальной NO-синтазе, приготовленных по гомеопатической технологии потенцирования путем многократного последовательного разведения и внешнего воздействия - неоднократного вертикального встряхивания каждого разведения (см., например, В. Швабе "Гомеопатические лекарственные средства", М., 1967 г., с.14-29), которые обладают активностью, обусловленной технологией потенцирования, в фармакологических моделях и/или клинических методах лечения головокружения различного генеза, кинетозов и вегето-сосудистой дистонии) обеспечивает получение неожиданного синергетического терапевтического эффекта, подтвержденного на адекватных (валидных) экспериментальных моделях и клинических исследованиях, который заключается в повышении эффективности лечения как головокружения различного генеза, кинетозов, так и вегето-сосудистой дистонии. Указанный технический результат обеспечивается усилением нейропротекторной активности антител к белку S-100, обусловленным влиянием на эффективность взаимодействия лигандов с сигма-1 рецептором, вегето-стабилизирующим эффектом, нормализацией вегетативного статуса, как проявлением ранее необнаруженных свойств активированной-потенцированной формы антител к мозгоспецифическому белку S-100, так и синергетическим влиянием обоих компонентов на нейрональную пластичность, и, вследствие этого, повышением устойчивости мозга к токсическим воздействиям, что улучшает интегративную деятельность и восстанавливает межполушарные связи головного мозга, способствует устранению когнитивных нарушений, стимулирует репаративные процессы и ускоряет восстановление функций ЦНС, нормализует соматовегетативные проявления, увеличивает мозговой кровоток, и, соответственно, обеспечивает расширение терапевтического диапазона лекарственного средства и повышение эффективности лечения головокружения, кинетезов, а также вегето-сосудистой дистонии различного генеза, в том числе, вегето-сосудистой дистонии, сопровождающейся как повышением, так и понижением артериального давления. При этом заявленное лекарственное средство, как и составляющие ее компоненты, не обладают седативным и миорелаксантным действием, не вызывают пристрастия и привыкания. В том числе, заявленное лекарственное средство может быть использовано в составе комплексной терапии.

Кроме того, заявленное лекарственное средство расширяет арсенал препаратов, предназначенных для лечения головокружения различного генеза, кинетозов, а также вегето-сосудистой дистонии.

Лекарственное средство приготовляют, преимущественно, следующим образом.

Для приготовления активированной-потенцированной формы действующих компонентов используют моноклональные или, преимущественно, поликлональные антитела, которые могут быть получены по известным технологиям - методикам, описанным, например, в книге: Иммунологические методы, под ред. Г. Фримеля, М., «Медицина», 1987, с.9-33; или, например, в статье Laffly E., Sodoyer R. Hum. Antibodies. Monoclonal and recombinant antibodies, 30 years after. - 2005 - Vol.14. - N1-2. P.33-55.

Моноклональные антитела получают, например, с помощью гибридомной технологии. Причем начальная стадия процесса включает иммунизацию, основанную на принципах, уже разработанных при приготовлении поликлональных антисывороток. Дальнейшие этапы работы предусматривают получение гибридных клеток, продуцирующих клоны одинаковых по специфичности антител. Их выделение в индивидуальном виде проводится теми же методами, что и в случае поликлональных антисывороток.

Поликлональные антитела могут быть получены активной иммунизацией животных. Для этого по специально разработанной схеме животным делают серию инъекций требуемыми в соответствии с изобретением веществами - антигенами: мозгоспецифическим белком S-100 и эндотелиальной NO-синтазой. В результате проведения такой процедуры получают моноспецифические антисыворотки с высоким содержанием антител, которые используют для получения активированных-потенцированных форм компонентов. При необходимости проводят очистку антител, присутствующих в антисыворотке, например, методом аффинной хроматографии, путем применения фракционирования солевым осаждением или ионообменной хроматографии.

Предпочтительным для приготовления заявленной фармацевтической композиции является использование поликлональных антител к мозгоспецифическому белку S-100 и к эндотелиальной NO-синтазе, которые в качестве матричного (первичного) раствора с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл, используют для последующего приготовления активированной-потенцированной формы.

Предпочтительной для приготовления каждого компонента является использование смеси трех водно-спиртовых разведении первичного матричного раствора антител, разведенных, соответственно, в 100¹², 100³⁰, и 100²⁰⁰ раз, что соответствует сотенным разведениям С12, С30 и С200, приготовленным по гомеопатической технологии. При выполнении заявленного лекарственного средства в твердой лекарственной форме на нейтральный носитель - лактозу может наноситься смесь указанных компонентов в объемном соотношении 1:1.

Предпочтительным для приготовления заявленного лекарственного препарата является использование поликлональных антител к эндотелиальной NO-синтазе и к мозгоспецифическому белку S-100, которые могут быть получены иммунизацией кроликов следующим образом.

Для проведения экспериментальных исследований могут быть использованы антитела, приготовленные по заказу специализированной биотехнологической фирмой.

Для получения поликлональных антител к мозгоспецифическому белку S-100 используют мозгоспецифический белок S-100, физико-химические свойства которого описаны в статье М.В. Старостина, С.М. Свиридов, Нейроспецифический белок S-100, Успехи современной биологии, 1977 г., т.5, с.170-178; книге М.Б. Штарк, Мозгоспецифические белки /антигены/ и функции нейрона, М., "Медицина", 1985 г.; с.12-14, выделенный из ткани головного мозга быка по следующей методике:

- замороженную в жидком азоте ткань растирают в порошок на специальной мельнице;

- экстракцию белков проводят в соотношении 1:3 (вес/объем) в экстрагирующем буфере при гомогенизации;

- гомогенат прогревают в течение 10 мин при 60°C и охлаждают до 4°С на ледяной бане;

- термолабильные белки удаляют центрифугированием;

- проводят ступенчатое фракционирование сульфатом аммония с последующим удалением выпадающих в осадок примесных белков;

- содержащую белок S-100 фракцию осаждают 100% насыщенным сульфатом аммония при снижении pH до 4,0 и собирают центрифугированием;

- осадок растворяют в минимальном объеме буфера, содержащего ЭДТА и меркаптоэтанол, диализируют против деионизованной воды и лиофильно высушивают;

- фракционирование кислых белков продолжают хроматографией на ионообменных носителях - ДЭАЭ целлюлозе ДЕ-52 и затем ДЭАЭ-сефадексе А-50;

- собранные и отдиализованные фракции, содержащие белок S-100, разделяют по молекулярному весу гель-фильтрацией на сефадексе G-100;

- очищенный белок S-100 диализируют и лиофильно высушивают.

Молекулярный вес очищенного мозгоспецифического белка S-100 составляет - 21000 д.

Благодаря высокому содержанию аспарагиновой и глутаминовой кислот мозгоспецифический белок S-100 является сильнокислым и занимает крайнее анодное положение при электрофорезе в прерывистой буферной системе в полиакриламидном геле, что облегчает его идентификацию.

Для получения мозгоспецифической антисыворотки к выделенному мозгоспецифическому белку S-100 готовят смесь очищенного белка S-100 (антигена) в комплексе с метилированным бычьим сывороточным альбумином в качестве носителя с полным адъювантом Фрейнда, которую вводят подкожно лабораторному животному - кролику в область спины в количестве 1-2 мл. На 8-й, 15-й день проводят повторную иммунизацию. Забор крови производят (например, из вены уха) на 26-й и 28-й день.

Полученная антисыворотка имеет титр 1:500 - 1:1000, образует единственную полосу преципитации с экстрактом из нервной ткани, но не реагирует с экстрактами гетерологичных органов и формирует единственный пик преципитации как с чистым белком S-100, так и с экстрактом нервной ткани, что свидетельствует о моноспецифичности полученной антисыворотки.

Поликлональные антитела к эндотелиальной NO-синтазе получают, используя в качестве иммуногена (антигена) для иммунизации кроликов адъювант и цельную молекулу эндотелиальной NO-синтазы следующей последовательности:

Возможно для получения поликлональных антител к эндотелиальной NO-синтазе использование в качестве иммуногена (антигена) цельной молекулы эндотелиальной NO-синтазы следующей последовательности:

Возможно для получения поликлональных антител к эндотелиальной NO-синтазе использование в качестве иммуногена (антигена) синтетического пептида эндотелиальной NO-синтазы, выбранного, например, из следующих аминокислотных последовательностей:

Перед отбором крови за 7-9 дней проводят 1-3 внутривенных инъекций для повышения уровня антител. В процессе иммунизации у кроликов отбирают небольшие пробы крови для оценки количества антител. Максимальный уровень иммунного ответа на введение большинства растворимых антигенов достигается через 40-60 дней после первой инъекции. После окончания первого цикла иммунизации кроликов в течение 30 дней дают восстановить здоровье и проводят реиммунизацию, включающую 1-3 внутривенные инъекции. Для получения антисыворотки из иммунизированных кроликов собирают кровь в центрифужную пробирку объемом 50 мл. С помощью деревянного шпателя удаляют со стенок пробирки образовавшиеся сгустки и помещают палочку в сгусток, образовавшийся в центре пробирки. Кровь помещают в холодильник (температура 4°C) на ночь. На следующий день удаляют сгусток, прикрепившийся к шпателю, и центрифугируют оставшуюся жидкость при 13000g в течение 10 мин. Супернатант (надосадочная жидкость) является антисывороткой. Полученная антисыворотка должна быть желтого цвета. Добавляют к антисыворотке 20% (весовая концентрация) NaN₃ до конечной концентрации 0,02% и хранят до использования в замороженном состоянии при температуре -20°C (или без добавления NaN₃ - при температуре -70°C). Для выделения из антисыворотки антител к эндотелиальной NO-синтазе производят абсорбцию на твердой фазе в следующей последовательности:

1. 10 мл антисыворотки кролика разбавляют в 2 раза 0,15 М NaCl добавляют 6,26 г Na₂SO₄, перемешивают и инкубируют 12-16 ч при 4°C;

2. выпавший осадок удаляют центрифугированием, растворяют в 10 мл фосфатного буфера и затем диализуют против того же буфера в течение ночи при комнатной температуре;

3. после удаления осадка центрифугированием раствор наносят на колонку с ДЭАЭ-целлюлозой, уравновешенную фосфатным буфером;

4. фракцию антител определяют, измеряя оптическую плотность элюата при 280 нм.

Затем производят очистку антител методом аффинной хроматографии путем прикрепления полученных антител к эндотелиальной NO-синтазе, который находится на нерастворимом матриксе с последующим элюированием концентрированными растворами соли.

Полученный, таким образом, буферный раствор поликлональных кроличьих антитела к эндотелиальной NO-синтазе, очищенных на антигене, с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл, предпочтительно 2,0÷3,0 мг/мл, используют в качестве матричного (первичного) раствора для последующего приготовления активированной-потенцированной формы по гомеопатической технологии.

Активированную-потенцированную форму каждого компонента готовят путем равномерного уменьшения концентрации в результате последовательного разведения 1 части упомянутого матричного раствора в 9 частях (для десятичного разведения D) или в 99 частях (для сотенного разведения С) или в 999 частях (для тысячного разведения М) нейтрального растворителя в сочетании с многократным (не менее 10 раз) вертикальным встряхиванием ("динамизацией") каждого полученного разведения и использованием отдельных емкостей для каждого последующего разведения до получения требуемой потенции - кратности разведения по гомеопатической технологии (см., например, В.Швабе "Гомеопатические лекарственные средства", М., 1967 г., с.14-29).

Например, для приготовления 12-го сотенного разведения С 12 одну часть упомянутого матричного раствора антител к мозгоспецифическому белку S-100 (или к NO-синтазе) с концентрацией 2,5 мг/мл разводят в 99 частях нейтрального водного или водно-спиртового растворителя (преимущественно 15% этилового спирта) и многократно (10 и более раз) вертикально встряхивают - потенцируют полученное 1-е сотенное С1 разведение. Из 1-го сотенного С1 разведения приготовляют 2-ое сотенное разведение С2. Данную операцию повторяют 11 раз, получая 12-е сотенное разведение С12. Таким образом, 12-е сотенное разведение С12 представляет собой раствор, полученный разбавлением последовательно в разных емкостях 12 раз 1-ой части исходного матричного раствора антител к NO-синтазе с концентрацией 2,5 мг/мл в 99-ти частях нейтрального растворителя, т.е. раствор, приготовленный разведением матричного раствора в 100¹² раз. Аналогичные операции с соответствующей кратностью разведения проводят для получения разведении С30 и С200.

При использовании в качестве компонента (например, активированной-потенцированной формы антител к мозгоспецифическому белку S-100) смеси различных, преимущественно сотенных, разведении, каждое разведение компонента (например, С12, С30, С200) приготовляют раздельно по описанной выше технологии до их предпоследнего разведения (соответственно, до получения С11, С29, С199) и затем вносят в одну емкость по одной части каждого полученного предпоследнего разведения и смешивают с требуемым количеством водно-спиртового растворителя (преимущественно 50-70% этилового спирта) (соответственно, с 97 частями для сотенного разведения). При этом получают активированную-потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100 в сверхмалой дозе, приготовленную сверхразведением матричного раствора, соответственно, в 100¹², 100³⁰ и 100²⁰⁰ раз, эквивалентной смеси сотенных разведении С12, C30 и С200, по гомеопатической технологии.

Возможно использование каждого компонента в виде смеси других различных разведении по гомеопатической технологии, например, десятичных и или сотенных, (С12, C30, С100; D20, С30, С100 или D20, С30, М100 и т.д.), эффективность которых определяют экспериментально.

При потенцировании вместо встряхивания в процессе уменьшения концентрации также можно осуществлять внешнее воздействие ультразвуком, электромагнитным или иным физическим воздействием.

Для получения заявленной фармацевтической композиции водные или водно-спиртовые растворы действующих компонентов смешивают, преимущественно, в объемном соотношении 1:1 и используют в жидкой лекарственной форме.

Заявленная фармацевтическая композиция может быть использована и в твердой лекарственной форме, которая содержит эффективное количество частиц нейтрального носителя - лактозы, насыщенного путем пропитывания до насыщения смесью водных или водно-спиртовых растворов активированной-потенцированной формой антител к мозгоспецифическому белку S-100 и активированной-потенцированной формой антител к эндотелиальной NO-синтазе, и фармацевтически приемлемые добавки, включающие, преимущественно, лактозу, целлюлозу микрокристаллическую и магния стеарат.

Для получения твердой оральной формы заявленного лекарственного средства производят в установке кипящего слоя (например, типа «Huttlin Pilotlab» производства компании Huttlin GmbH) орошение до насыщения вводимых в псевдоожиженный - кипящий слой частиц нейтрального вещества - лактозы (молочного сахара) с размером частиц 100÷300 мкм, предварительно полученным водным или водно-спиртовым раствором активированных-потенцированных форм антител к мозгоспецифическому белку S-100 и к эндотелиальной синтазе оксида азота (NO-синтазе), преимущественно, в соотношении 1 кг раствора антител на 5 или 10 кг лактозы (1:5 - 1:10) с одновременной сушкой в потоке подаваемого под решетку нагретого воздуха при температуре не выше 40°C. Расчетное количество 10÷34 масс частей высушенных гранул, насыщенных активированной-потенцированной формой антител, загружают в смеситель и смешивают с 25÷85 масс. частей от общей массы загрузки «ненасыщенной» чистой лактозы (для снижения стоимости и некоторого упрощения и ускорения технологического процесса без снижения эффективности лечебного воздействия). Затем в эту смесь добавляют стеарат магния в количестве 0,1÷1 масс. частей от общей массы загрузки и микрокристаллическую целлюлозу в количестве 3÷10 масс. частей от общей массы загрузки. Полученную таблеточную массу равномерно перемешивают и таблетируют прямым сухим прессованием (например, в таблет-прессе Korsch - XL 400) с формированием круглых таблеток массой 150÷500 мг, преимущественно массой 300 мг, пропитанных водно-спиртовым раствором (3,0-6,0 мг/табл.) активированной-потенцированной формой антител к мозгоспецифическому белку S-100 и к NO-синтазе в сверхмалой дозе, каждого компонента, приготовленной из матричного раствора, разведенного, соответственно, в 100¹², в 100³⁰ в 100²⁰⁰, что эквивалентно смеси сотенных разведении С12, C30 и С200, приготовленных по гомеопатической технологии.

В качестве нейтрального носителя возможно также использование глюкозы, сахарозы, мальтозы, крахмала, изомальтозы, изомальта и других моносахаридов, олигосахаридов и полисахаридов, использующихся в производстве фармацевтических препаратов, а также технологических смесей на основе последних с добавлением фармацевтически приемлемых добавок (например, изомальт, кросповидон, цикламат натрия, сахарин натрия, лимонная кислота безводная и т.д.), в том числе лубрикантов, дезинтегрантов, связующих и красителей.

Предпочтительно заявленную фармацевтическую композицию рекомендуется принимать по 1-2 таблетке 2-4 раза в день.

Пример 1.

Исследование влияния комплексного препарата, в состав которого входят активированные-потенцированные формы поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к мозгоспецифическому белку S-100 (анти-S100) и к эндотелиальной NO-синтазе (анти-eNOS) в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведении С12, C30, С200, в соотношении 1:1 (СМД анти-S100 + анти-eNOS), а также компонентов, входящих в его состав - активированной-потенцированной формы поликлональных кроличьих антител к мозгоспецифическому белку S-100, очищенных на антигене, в сверхмалой дозе (СМД анти-S100), полученной сверхразведением исходного матричного раствора в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентной смеси сотенных гомеопатических разведении С12, C30, С200 и активированной-потенцированной формы поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной NO-синтазе, очищенных на антигене, в сверхмалой дозе (СМД анти-eNOS), полученной сверхразведением исходного матричного раствора в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентной смеси сотенных гомеопатических разведении С12, C30, С200, проводили in vitro на связывание стандартного лиганда [³H]пентазоцина с рекомбинантным сигма-1 рецептором человека оценивали радиолигандным методом.

Сигма-1 рецептор - внутриклеточный рецептор, локализованный в клетках центральной нервной системе, клетках большинства периферических тканей и иммунокомпетентных клетках. Рецепторы демонстрируют уникальную способность транслоцироваться, которая вызывается множеством психотропных препаратов. Динамика сигма-1 рецепторов непосредственно связана с различными влияниями, осуществляемыми препаратами при действии на сигма-1 рецепторы. Эти влияния включают регуляцию каналов активности, экоцитоз, передачу сигналов, ремоделирование плазменной мембраны (формирование рафтов), и транспортировку липидов/метаболизм. Все это может способствовать развитию пластичности нейронов в мозге. Имеются доказательные данные, что сигма-1 рецепторы оказывают модулирующее влияние на все основные нейромедиаторные системы: норадренергическую, серотонинергическую, дофаминергическую, холинергическую системы и NMDA-регулируемые глутаматные эффекты. Сигма-1 рецептор играет важную роль в патофизиологии нейроденегенративных заболеваний, психических и аффективных расстройств, участвует в процессах обучения и памяти. В связи с этим способность лекарственных средств оказывать влияние на эффективность взаимодействия лигандов с сигма-1 рецептором указывает на наличие нейропротекторного, противоишемического, анксиолитического, антидепрессивного, антиастенического компонентов в спектре их фармакологической активности, что позволяет рассматривать данные препараты в качестве эффективных лекарственных средств, в том числе, для лечения цереброваскулярных заболеваний.

В качестве контроля тестируемых препаратов была протестирована потенцированная дистиллированная вода (смесь гомеопатических разведении С12+C30+С200).

В опыте (для измерения общего связывания) в инкубационную среду вносили 20 мкл комплексного препарата СМД анти-S100 + анти-eNOS или по 10 мкл СМД AT к S100 или 10 мкл СМД AT к NOS. Таким образом, количество СМД анти-S100 + анти-eNOS, вносимых в экспериментальную лунку при тестировании комплексного препарата, было идентично количеству СМД AT к S100 и СМД AT к NOS тестируемых в качестве монопрепаратов, что позволяет провести сравнение эффективности комплексного препарата с его отдельными компонентами, входящими в его состав. Потенцированную дистиллированную воду вносили в инкубационную среду в объеме 20 мкл и 10 мкл.

Затем вносили 160 мкл (~200 µg белка) гомогената мембран клеток линии Jurkat (линия лейкемических Т-лимфоцитов человека), и в последнюю очередь 20 мкл радиолиганда меченого тритием [³H]пентазоцин (15 нМ).

Для измерения неспецифического связывания вместо препаратов или потенцированной воды в инкубационную среду вносили 20 мкл немеченого лиганда - галоперидол (10 мкМ).

Радиоактивность измеряли на сцинтилляционном счетчике (Topcount, Packard) с использованием сцинтилляционной смеси (Microscint 0, Packard) после инкубации в течение 120 минут при температуре 22°C в 50 мМ Tris-HCl буфере (pH=7,4) и фильтрации на стекловолоконных фильтрах (GF/B, Packard). Специфическое связывание (в опыте или контроле) рассчитывали как разницу между общим (в опыте или контроле) и неспецифическим связыванием.

Результаты представлены в виде процента ингибирования специфического связывания в контроле (в качестве контроля использовали дистиллированную воду) (Таблица 1).

Таблица 1 Влияние препаратов и потенцированной воды на связывание стандартного радиолиганда [³H]пентазоцина с рекомбинантным сигма 1 рецептором человека Экспериментальная группа Количество, вносимое в экспериментальную лунку % от специфического связывания радиолиганда в контроле % ингибирования связывания радиолиганда в контроле 1-е измерение 2-е измерение Среднее значение СМД анти-S100 + анти-eNOS 20 мкл 48,4 35,5 42,0 58,0 СМД анти-S100 10 мкл 67,3 63,1 65,2 34,8 СМД анти-eNOS 10 мкл 147,5 161,1 154,3 -54,3 Потенцированная вода 20 мкл 98,1 75,8 86,9 13,1 Потенцированная вода 10 мкл 140,1 106,2 123,2 -23,2

Примечание:   % специфического связывания в контроле = (специфическое связывание в опыте / специфическое связывание в контроле) * 100%;   % ингибирования специфического связывания в контроле = 100% - (специфическое связывание в опыте / специфическое связывание в контроле) * 100%).  

Результаты, отражающие ингибирование выше 50%, представляют собой значительные эффекты исследуемых соединений; ингибирование от 25% до 50%, свидетельствуют об эффектах от слабого до умеренного; ингибирование менее 25% считаются незначительными эффектами исследуемого соединения и находятся в пределах уровня фона.

Таким образом, в условиях данной экспериментальной модели показано, что: комплексный препарат СМД анти-S100 + анти-eNOS более эффективно, чем отдельные его компоненты (СМД анти-S100 и СМД анти-eNOS) ингибирует связывание стандартного радиолиганда [³H]пентазоцина с рекомбинантным сигма 1 рецептором человека; СМД анти-S100, внесенные в экспериментальную лунку в объеме 10 мкл, ингибируют связывание стандартного радиолиганда [³Н]пентазоцина с рекомбинантным сигма 1 рецептором человека, но выраженность эффекта уступает выраженности эффекта комплексного препарата СМД анти-S100 + анти-eNOS; СМД анти-eNOS, внесенные в экспериментальную лунку в объеме 10 мкл, не оказывали влияния на связывание стандартного радиолиганда [³H]пентазоцина с рекомбинантным сигма 1 рецептором человека; потенцированная вода, внесенная в экспериментальную лунку в объеме 10 мкл или 20 мкл, не оказывала влияния на связывание стандартного радиолиганда [³H]пентазоцина с рекомбинантным сигма 1 рецептором человека.

Пример 2.

Были исследованы лекарственное средство в виде таблеток массой 300 мг, пропитанных водно-спиртовым раствором (3 мг/табл.) активированной-потенцированной формы поликлональных кроличьих антител к мозгоспецифическому белку S-100, очищенных на антигене, в сверхмалой дозе (СМД анти-S100), полученной сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентной смеси сотенных гомеопатических разведении С12, C30, С200; лекарственное средство в виде таблеток массой 300 мг, пропитанных фармацевтической композицией, содержащей водно-спиртовые растворы (6 мг/табл.) активированных-потенцированных форм поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к мозгоспецифическому белку S-100 (анти-S100) и к эндотелиальной NO-синтазе (анти-eNOS) в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (с концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведении С12, C30, С200 (СМД анти-S100 + анти-eNOS); лекарственное средство в виде таблеток массой 300 мг, пропитанных водно-спиртовым раствором (3 мг/табл.) активированной-потенцированной формы поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной NO-синтазе, очищенных на антигене, в сверхмалой дозе (СМД анти-eNOS), полученной сверхразведением исходного матричного раствора (с концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентной смеси сотенных гомеопатических разведении С12, C30, С200. В качестве плацебо были использованы таблетки массой 300 мг, содержащие вспомогательные вещества: лактозу (моногидрат лактозы) - 267 мг, целлюлозу микрокристаллическую - 30 мг, магний стеарат - 3 мг.

Эффективность изучаемых лекарственных средств в терапии головокружения (vertigo) и других симптомов укачивания оценивали на модели кинетоза, или болезни движения/укачивания, которая проявляется различными вестибуло-вегетативными нарушениями. Головокружение - это типичный признак поражения вестибулярного анализатора различного генеза, включая нарушения функции вестибулярного нерва и вестибулярной кохлеарной системы, нарушения кровообращения в вертебрально-базилярной системе, патологию центральной нервной системы (ЦНС) и др. Головокружение как проявление кинетоза сопровождается другими вестибуло-вегетативными расстройствами, включающими три типа реакций: вестибуло-моторные (нистагм и реакции отклонения), вестибуло-сенсорные (помимо головокружения, это нистагм (или реакция поствращения), защитные движения) и вегетативные (тошнота, рвота, потливость, сердцебиение, чувство жара, колебание пульса и артериального давления).

Двойное слепое плацебоконтролируемое сравнительное клиническое исследование в параллельных группах эффективности противоукачивающих свойств композиции СМД анти-S100 + анти-eNOS, препарата СМД анти-S100, и препарата анти-eNOS, проводили с участием 15 соматически здоровых добровольцев - мужчин и женщин в возрасте от 15 до 60 лет (средний возраст 33,3±0,75 лет) с низкой (n=5; 33%) или средней (n=10; 67%) степенью устойчивости к укачиванию.

Для моделирования состояния укачивания и оценки эффективности исследуемых препаратов использовали наиболее адекватную и общепризнанную модель кинетозов - пробу с непрерывным кумулятивным воздействием ускорений Кориолиса (НКУК). Исходная переносимость пробы НКУК у всех участников исследования была не более 5 минут. Вестибуло-вегетативные расстройства, вызываемые кинетическим воздействием (НКУК), регистрировали с использованием комплекса диагностических методов, включающих осмотр пациента, количественную оценку расстройств вестибуло-вегетативной чувствительности (Шкала Галле), анализ вариабельности сердечного ритма (ВСР), самооценку функционального состояния (САН - самочувствие, активность, настроение). В качестве критериев эффективности проводимой терапии оценивали динамику переносимости и длительности периода восстановления при кинетическом воздействии, изменение выраженности сенсорно-моторных реакций (нистагм), показателей ВСР (с использованием системы Biocom Wellness Scan, разработанной AWS, LLC в соответствие с Международным стандартом Европейской ассоциации кардиологов и Северо-Американской ассоциацией Электрофизиологии) и данных САН. Критериями безопасности были характер, выраженность и сроки появления возможных нежелательных явлений (НЯ) в период терапии, связанных с приемом препарата; влияние изучаемых лекарственных средств на показатели, характеризующие функцию ЦНС (реакцию на движущийся объект [РДО], время простой двигательной реакции [ВПДР]); динамика физикальных и функциональных показателей (частоты сердечных сокращений [ЧСС], систолического [САД] и диастолического [ДАД] артериального давления, пробы Штанге, пробы Генча); переносимость физической нагрузки (индекс Гарвардского степ-теста). Безопасность оценивалась как при приеме тестовой дозы препаратов, так и при курсовом приеме в течение 7 дней.

Все участники в течение 1 месяца до включения в исследование не принимали каких-либо лекарственных средств. После визита скрининга участники рандомизировались в 4 группы в зависимости от принимаемого препарата (1 - СМД анти-S100 + анти-eNOS, 2 - СМД анти-S100; 3 - СМД анти-eNOS; 4 - плацебо).

В первый день исследования (Визит 1) регистрировалось исходное функциональное и психофизиологическое состояние добровольцев, затем осуществлялся 5-кратный тестовый прием препарата, после чего выполнялась проба НКУК, фиксировалась длительность выполнения теста, с помощью комплексного диагностического обследования выявлялись связанные с укачиванием вегетативно-вестибулярные расстройства и НЯ. В последующие 2-6 дни доброволец получал назначенный препарат по 1 таблетке 3 раза в день. В 7 день (Визит 2) пациент принимал препарат по схеме первого дня, проводили повторный комплекс диагностических исследований до и после пробы НКУК. Исследование было организовано таким образом, чтобы исследовательская бригада работала только с одним испытуемым. Исследование было параллельным и проводилось в первой половине дня, с участием, как правило, 4 человек в день, по одному человеку на препарат или плацебо. Следующие 3 недели был отмывочный период, к исходу которых пациентам каждой подгруппы назначали новый препарат/плацебо, цикл исследования повторялся (Визит 1, курсовой прием препарата; Визит 2). Таким образом, в ходе исследования каждый доброволец участвовал в четырех циклах исследования. При этом отслеживали, чтобы все испытуемые приняли участие в оценке каждого из трех препаратов и плацебо, что позволило нивелировать влияние индивидуальных особенностей испытуемого на эффект терапии. Анализ эффективности лекарственного средства проводился по данным всех испытуемых, завершивших полный курс приема исследуемых препаратов в соответствии с протоколом исследования (n=15).

Показатели выраженности симптомов укачивания (головокружения, тошноты, вялости, бледности кожи, потливости и др.) после кинетического воздействия (НКУК) на фоне однодневного приема исследуемых препаратов свидетельствовали о том, что все участники исследования достигали примерно одинакового состояния укачивания, поскольку выраженность оцениваемых врачом-исследователем по шкале Галле симптомов вегетативной дисфункции достоверно не различалась во всех группах (Таблица 2, Визит 1). Однако время кинетического воздействия, которое вызывало сходные симптомы укачивания, различалось в четырех группах и зависело от лекарственного средства, которое принимали участники исследования (Таблица 3, Визит 1). Однодневный прием препарат СМД анти-S100 + анти-eNOS приводил к наиболее отчетливому противоукачивающему эффекту, что проявлялось не только в значимо большем времени переносимости пробы НКУК (104,10±13,14 сек против 68,50±6,57 сек - в группе СМД анти-S100; 75,00±6,79 сек - в группе СМД анти-eNOS и 61,30±3,15 сек - в группе плацебо), но и в наименьшем времени нистагма (9,90±1,20 сек против 13,50±1,51; 16,10±1,68 и 13,30±1,12 сек соответственно) и максимально быстром восстановлении (96,90±13,54 сек против 194,20±18,45; 202,50±21,72 и 241,70±38,41 сек соответственно).

Примерно сходные показатели были зарегистрированы на Визите 2 после курсового приема лекарственных средств. Для достижения сходных симптомов укачивания (Таблица 2, Визит 2) дольше всего кинетическое воздействие применяли к добровольцам, получавшим в течение 7 дней композицию СМД анти-S100 + анти-eNOS (Таблица 3, Визит 2). Наиболее выраженный противоукачивающий эффект композиции СМД анти-S100 + анти-eNOS выражался также в значимо меньшем времени нистагма (9,50±1,38 сек; p<0,01) и длительности периода восстановления (117,90±15,65 сек; p<0,01). Противоукачивающим действием обладал монокомпонентный препарат СМД анти-S100, о чем свидетельствовали лучшие, чем в группе плацебо, показатели переносимости пробы НКУК, времени нистагма и восстановления (Таблица 3, Визиты 1 и 2), однако по эффективности препарат СМД анти-S100 уступал композиции СМД анти-S100 + анти-eNOS. Монокомпонентный препарат СМД анти-eNOS не демонстрировал противоукачивающего эффекта, поскольку результаты пробы НКУК и последующего восстановительного периода не имели значимых отличий от группы плацебо (Таблица 3, Визиты 1 и 2).

Сравнительный анализ показателей пробы НКУК в группах СМД анти-S100 + анти-eNOS и СМД анти-S100 при однодневном приеме лекарственных средств показал, что добавление СМД анти-eNOS повышало переносимость кинетического воздействия на 52%, уменьшало время нистагма на 27% и способствовало сокращению периода восстановления после окончания кинетического воздействия на 50%, в том числе длительности головокружения - на 49%. Однако наибольший вклад компонент СМД анти-eNOS вносил в эффективность комбинированного препарата (композиции СМД анти-S100 + анти-eNOS) при курсовом приеме, что выражалось в превышении на 30% результата, достигнутого в группе СМД анти-S100 по показателям переносимости кинетического воздействия и длительности нистагма (по каждому из параметров). Кроме того, прирост эффекта на Визите 2 по показателям переносимости пробы НКУК и длительности нистагма относительно данных Визита 1 при приеме композиции СМД анти-S100 + анти-eNOS по сравнению с монокомпонентным препаратом СМД анти-S100 был выражен в большей степени, что подтверждалось изменением данных показателей на 30% и 4% (против 21% и 0% в группе СМД анти-S100).

При оценке эффективности противоукачивающих свойств лекарственных средств особенное внимание было уделено возможному влиянию препаратов на стабильность вегетативной нервной системы (ВНС), в частности, изменение баланса между ее симпатическим и парасимпатическим отделами. С этой целью на каждом визите анализировали показатели ВСР в состоянии покоя и при выполнении функциональных проб (дыхательного и ортостатического тестов).

Анализ ВСР в покое (в положении сидя) до и после проведения пробы НКУК (Таблица 4) установил, что на фоне приема исследуемых препаратов имела место тенденция к возрастанию показателя SDNN, что свидетельствовало об увеличении вариабельности ЧСС за счет парасимпатического влияния на ритм сердца. В ответ на кинетическое воздействие во всех исследуемых группах возрастала величина RMS-SD, характеризующая активность парасимпатической составляющей вегетативной регуляции. В группах приема композиции СМД анти-S100 + анти-eNOS и СМД анти-S100 отмечалось увеличение HF, что также свидетельствовало о смещении вегетативного баланса в сторону парасимпатического звена. Таким образом, после проведения пробы НКУК во всех исследуемых группах происходило нарастание парасимпатических влияний на сердечный ритм.

Анализ ВСР при переходных состояниях показал, что однодневный прием композиции СМД анти-S100 + анти-eNOS увеличивал время реакции (13,9±1,14; p≤0,05) и время стабилизации (24,2±1,28; p≤0,05) по сравнению с СМД анти-S100 и плацебо (Таблица 5). Эти же показатели превосходили значения группы плацебо и после кинетического воздействия, что демонстрировало позитивное влияние комбинированного препарата на реактивность ВНС (повышение толерантности к изменениям положения тела). Наименьшая разница между максимальной и минимальной ЧСС в дыхательном тесте (Таблица 6) подтверждала лучшую сбалансированность двух отделов ВНС после однодневного приема композиции СМД анти-S100 + анти-eNOS (25,1±2,66 уд/мин; p≤0,05). К концу недельного курса терапии стабилизирующее воздействие на баланс ВНС после пробы НКУК (при ортостатическом и дыхательном тесте) также отмечено в группе приема композиции СМД анти-S100 + анти-eNOS (Таблицы 5, 6).

Результаты самооценки функционального состояния (самочувствие-активность-настроение) добровольцев, которую участники исследования проводили после моделирования укачивания (пробы НКУК) в начале и конце курса терапии, свидетельствовали о том, что испытуемые всех исследуемых групп дали «средние» баллы каждому из параметров (Таблица 7). Таким образом, на фоне приема препаратов переносимость пробы НКУК была удовлетворительной. Наибольший прирост показателей по сравнению с данными группы плацебо к окончанию 7-дневного приема (более 10%) отмечался в группе композиции СМД анти-S100 + анти-eNOS.

В анализ безопасности были включены данные всех добровольцев, участвовавших в исследовании. В течение всего периода наблюдения отмечалась хорошая переносимость исследуемых препаратов. Нежелательных явлений, связанных с приемом препаратов, не выявлено. Все добровольцы исследуемых групп завершили лечение в сроки, установленные протоколом исследования, досрочно выбывших из исследования не было.

По результатам физикального осмотра, включая показатели ЧСС, САД и ДАД, а также по данным Гарвардского степ-теста, у испытуемых не регистрировалось каких-либо патологических отклонений во время проведения исследования (Таблица 8). Все выявленные изменения не выходили за рамки нормальных значений. При этом субъективно все испытуемые отмечали удовлетворительное самочувствие.

Наряду с гемодинамическими показателями для оценки безопасности изучаемых препаратов, их возможного негативного влияния на высшие нервные функции, у добровольцев исследовали психофизиологические показатели (РДО, ВПДР, УВ, ОВ, КУВ). Кроме того, проводили пробы Штанге и Генча для оценки толерантности к гипоксии.

Согласно полученным результатам (Таблица 9), ни однодневный, ни курсовой прием препаратов не оказывали существенного влияния на оцениваемые параметры. Показатели сенсомоторной координации (ВПДР, РДО) не отличались от результатов группы плацебо до и после пробы НКУК на обоих визитах. Данные по исследованию такой сложной функции как объем и устойчивость внимания свидетельствовали о том, что изучаемые лекарственные средства, как до, так и после пробы НКУК, не изменяли степень концентрации и переключаемости внимания, не отличаясь от группы плацебо.

Анализ показателей стандартных нагрузочных проб с задержкой дыхания показал тенденцию к повышению переносимости испытуемыми гипоксии (Таблица 9). При задержке дыхания на вдохе длительность пробы Штанге возрастала после приема всех исследуемых препаратов, но только прием композиции СМД анти-S100 + анти-eNOS позволял значимо дольше не возобновлять дыхание после кинетического воздействия (68,1±18,8 сек исходно и 91,7±27,4 сек после пробы НКУК; p<0,05). Увеличение переносимости гипоксии также отмечалось при выполнении пробы Генча (задержка дыхания на выдохе; p>0,05).

Таким образом, проведенное исследование с использованием экспериментальной болезни движения продемонстрировало противоукачивающую эффективность композиции СМД анти-S100 + анти-eNOS и монокомпонентного препарата СМД анти-S100. Изучаемые препараты повышают устойчивость испытуемых к кинетическому воздействию после воспроизведения клинико-физиологических эффектов болезни движения, способствуя более легкому течению клиники укачивания и более раннему восстановлению испытуемых после прекращения воздействия. Кроме того, было показано, что противоукачивающее действие комбинированного препарата (композиции СМД анти-S100 + анти-eNOS) превышает эффективность отдельных компонентов. Эффективность композиции СМД анти-S100 + анти-eNOS в контроле вестибуло-вегетативных и сенсорных реакций организма при экспериментальной болезни движения возрастает при курсовом приеме. Следует отметить, что СМД анти-eNOS в виде монопрепарата не обладает протективным в отношении укачивания действием, но при сочетании с СМД анти-S100 значимо усиливает противоукачивающий эффект последнего, что проявляется как при однодневном, так и при коротком курсовом приеме лекарственного средства. Наилучшая способность корректировать переходные процессы, то есть воздействовать на реактивность парасимпатического и симпатического отделов ВНС, а также адаптационные возможности ВНС в состоянии укачивания (повышать толерантность к резким изменениям положения тела), отмечена у композиции СМД анти-S100 + анти-eNOS, что является важной составляющей противоукачивающих свойств лекарственного средства. Композиция СМД анти-S100 + анти-eNOS и монокомпонентный препарат СМД анти-S100 при применении их в качестве противоукачивающего средства, в том числе при выполнении операторских функций, безопасны и не оказывают отрицательного влияния на физикальные и психофизиологические показатели.

Композиция СМД анти-S100 + анти-eNOS и СМД анти-S100 могут быть рекомендованы для профилактики и купирования укачивания при болезни движения (в том числе морской, воздушной, транспортной болезни) лицам с низкой и средней степенью устойчивости. Препараты отличаются высокой безопасностью и не оказывают негативного влияния на качество профессиональной деятельности.

Таблица 2 Показатели шкалы Галле в зависимости от принимаемого препарата после проведения пробы НКУК Препарат Шкала Галле (баллы) Визит 1 (однодневный прием) (n=15; M±SE) Визит 2 (курсовой прием) (n=15; M±SE) СМД анти-S100 + анти-eNOS 12,00±0,63 12,30±0,59 СМД анти-S100 13,30±0,65 12,30±0,46 СМД анти-eNOS 13,10±0,78 12,00±0,55 Плацебо 13,40±0,77 13,30±0,45

Таблица 3 Динамика показателей пробы НКУК в зависимости от принимаемого препарата Препарат Визит 1 (однодневный прием) Переносимость пробы НКУК, сек (n=15; M±SD) Время нистагма, сек (n=15; M±SD) Время восстановления, сек (n=15; M±SD) СМД анти-S100 + анти-eNOS 104,10±13,14** 9,90±1,20* 96,90±13,54*** СМД анти-S100 68,50±6,57 × 13,50±1,51 194,20±18,45 ××× СМД анти-eNOS 75,00±6,79 16,10±1,68 202,50±21,72 ××× Плацебо 61,30±3,15 13,30±1,12 241,70±38,41 Значение Р по критерию Краскела-Уоллиса¹ 0,0182 0,0658 0,0001 Визит 2 (курсовой прием) СМД анти-S100 + анти-eNOS 134,70±20,24** 9,50±1,38** 117,90±15,65** СМД анти-S100 82,70±10,33 13,50±1,69 167,50±14,72 × СМД анти-eNOS 74,30±9,49 × 17,30±2,40 ××× 209,20±21,62 ×× Плацебо 63,70±3,91 15,00±1,47 199,60±31,19 Значение Р по критерию Краскела-Уоллиса¹ 0,0341 0,0244 0,0061 Примечание: ¹ для определения достоверности различий между группами использовался критерий Краскела-Уоллиса. В случае если критерий показывал достоверность, p<0,05; для сравнения групп между собой использовался критерий Манна-Уитни. * достоверность различий по сравнению с плацебо, p<0,05; ** достоверность различий по сравнению с плацебо, p<0,01; *** достоверность различий по сравнению с плацебо, p<0,001. × достоверность различий по сравнению с СМД анти-S100 + анти-eNOS, p<0,05; ×× достоверность различий по сравнению с СМД анти-S100 + анти-eNOS, p<0,01; ××× достоверность различий по сравнению с СМД анти-S100 + анти-eNOS, p<0,001.

Таблица 4 Параметры ВСР участников исследования в состоянии покоя до и после кинетического воздействия Показатель Визит 1 (однодневный прием) Визит 2 (курсовой прием) После приема препарата После пробы НКУК После приема препарата После пробы НКУК Группа СМД анти-S100 + анти-eNOS (M±SD) SDNN, мсек 57,7±5,51 68,2±7,42 59,4±5,03 65,6±4,66 RMSSD, мсек 43,1±6,77 51,4±9,22 47,0±6,21 47,6±5,33 ТР, мсек² 979,0±186,06 1678,3±397,11# 1067,2±167,24 1381,0±166,30 LF, мсек² 437,5±709,6 709,6±178,72 391,9±75,61 588,5±87,48 HF, мсек² 171,5±51,08 228,4±76,79 206,5±58,32 218,5±43,96 LF/HF, у.е. 4,2±0,82 4,9±0,83 3,3±0,83 4,2±0,91 Группа СМД анти-S100 (M±SD) SDNN, мсек 60,9±4,62 70,9±5,90 59,1±4,80 68,8±4,87 RMSSD, мсек 44,3±5,39 50,6±6,56 42,4±4,63 47,8±5,57 ТР, мсек² 832,2±124,93* 1342,8±217,09 841,4±149,93 1288,0±163,52# LF, мсек² 315,2±52,38* 550,9±72,44# 313,6±66,71 540,7±87,57# HF, мсек² 151,4±41,19 247,0±69,53# 138,3±38,42 187,1±39,80 LF/HF, у.е. 3,0±0,54 4,0±0,72 2,8±0,53 4,0±0,52 Группа СМД анти-eNOS (M±SD) SDNN, мсек 67,4±7,73 78,6±6,14 65,8±8,68 69,0±5,23 RMSSD, мсек 53,0±8,86 58,4±7,68 59,6±12,45 52,2±5,30 ТР, мсек² 1307,8±324,24 1841,1±359,79# 1232,3±292,51 1275,4±172,47 LF, мсек² 576,5±167,07 849,9±194,2# 527,2±167,07 562,1±89,38 HF, мсек² 313,3±139,90 285,3±65,92 218,9±74,78 216,3±63,72 LF/HF, у.е. 3,6±0,87 3,9±0,82 3,7±1,14 3,8±0,58 Группа плацебо (M±SD) SDNN, мсек 64,6±6,10 75,7±6,42 61,1±6,72 70,8±6,79 RMSSD, мсек 50,9±7,74 53,1±6,62 44,6±6,63 44,3±5,31 ТР, мсек² 1062,2±150,02 1917,8±318,96# 898,8±169,62 1418,5±227,59# LF, мсек² 440,6±77,30 832,4±181,15 334,8±75,94 611,4±113,64# HF, мсек² 253,9±59,95 266,7±61,94 166,0±48,14 174,1±44,96 LF/HF, у.е. 3,4±0,72 5,0±1,33 3,4±0,93 4,8±0,83 Примечание: * достоверность различий по сравнению с плацебо, p≤0,05); # достоверность различий по сравнению с исходными показателями, p≤0,05.

Таблица 5 Параметры ВСР участников исследования при проведении ортостатического теста до и после кинетического воздействия Показатель Визит 1 (однодневный прием) Визит 2 (курсовой прием) После приема препарата После пробы НКУК После приема препарата После пробы НКУК Группа СМД анти-S100 + анти-eNOS (M±SD) Реакция на нагрузку, у.е. 1,30±0,06 1,40±0,04 1,30±0,06 1,40±0,06 Время реакции, сек 13,9±1,14*× 12,7±1,24* 11,8±0,57 11,7±1,09 Время стабилизации, сек 24,2±1,28*× 21,9±1,44* 20,6±0,74 22,4±1,44*× Группа СМД анти-S100 (M±SD) Реакция на нагрузку, у.е. 1,40±0,04 1,30±0,04 1,30±0,04 1,30±0,05 Время реакции, сек 7,60±1,05 10,6±1,55 9,7±1,21 10,0±1,73 Время стабилизации, сек 15,1±1,16* 18,3±1,43 18,0±1,18 18,0±1,80 Группа СМД анти-eNOS (M±SD) Реакция на нагрузку, у.е. 1,30±0,04 1,30±0,04 1,50±0,12 1,30±0,04 Время реакции, сек 8,20±0,94 9,10±1,12 9,2±0,77 8,3±0,70 Время стабилизации, сек 16,5±1,02 17,1±1,33 19,0±2,04 16,7±0,98 Группа плацебо (M±SD) Реакция на нагрузку, у.е. 1,30±0,04 1,30±0,04 1,40±0,06 1,30±0,06 Время реакции, сек 9,5±1,28 8,1±0,90 10,4±1,58 8,8±1,09 Время стабилизации, сек 18,3±0,94 16,8±1,09 18,0±1,37 16,5±1,11 Примечание: * достоверность различий по сравнению с плацебо, p≤0,05); × достоверность различий по сравнению с СМД анти-S100, p≤0,05.

Таблица 6 Параметры ВСР участников исследования при проведении дыхательного теста до и после кинетического воздействия Показатель Визит 1 (однодневный прием) Визит 2 (курсовой прием) После приема препарата После пробы НКУК После приема препарата После пробы НКУК Группа СМД анти-S100 + анти-eNOS (M±SD) Соотношение max ЧСС / min ЧСС, у.е. 1,5±0,05* 1,5±0,06 1,5±0,05 1,5±0,05 Разница max ЧСС - min ЧСС, уд/мин. 25,1±2,66* 26,5±2,77 26,5±2,37 24,9±2,24* Группа СМД анти-S100 (M±SD) Соотношение max ЧСС / min ЧСС, у.е. 1,5±0,06 1,6±0,05 1,5±0, 04 1,6±0,06 Разница max ЧСС - min ЧСС, уд/мин. 27,7±2,68 27,2±2, 40 25,7±2,24 26,9±2,67 Группа СМД анти-eNOS (M±SD) Соотношение max ЧСС / min ЧСС, у.е. 1,5±0,05 1,5±0,04 1,5±0,06 1,6±0,05 Разница max ЧСС - min ЧСС, уд/мин. 26,7±2,44 26,2±2,04 27,7±2,47 27,3±2,12 Группа плацебо (M±SD) Соотношение max ЧСС / min ЧСС, у.е. 1,6±0,07 1,6±0,06 1,5±0,05 1,6±0,05 Разница max ЧСС - min ЧСС, уд/мин. 31,2±3,06 28,2±2,50 27,7±2,37 29,2±2,44 Примечание: * достоверность различий по сравнению с плацебо, p≤0,05

Таблица 7 Динамика показателей самооценки функционального состояния (самочувствие-активность-настроение) участников исследования Показатель Визит 1 (однодневный прием) Визит 2 (курсовой прием) Группа СМД анти-S100 + анти-eNOS (M±SE) Самочувствие 4,3±0,26 4,6±0,27 Активность 4,2±0,20 4,2±0,22 Настроение 5,0±0,16 5,2±0,13 Группа СМД анти-S100 (M±SE) Самочувствие 3,7±0,21 4,3±0,22 Активность 3,6±0,17 4,0±0,19 Настроение 4,5±0,16 4,9±0,19 Группа СМД анти-eNOS (M±SE) Самочувствие 3,9±0,25 4,1±0,26 Активность 3,8±0,25 3,9±0,23 Настроение 4,4±0,19 4,6±0,19 Группа плацебо (M±SE) Самочувствие 4,0±0,24 4,0±0,24 Активность 3,8±0,20 3,7±0,26 Настроение 4,3±0,20 4,7±0,24

Таблица 8 Динамика физикальных показателей и переносимости физической нагрузки участников исследования до и после кинетического воздействия Показатель 1 визит (однодневный прием) 2 визит (курсовой прием) После приема препарата После пробы НКУК После приема препарата После пробы НКУК Группа СМД анти-S100 + анти-eNOS (M±SE) ЧСС (уд/мин) 74,6±3,36 68,4±3,67 74,1±3,10 67,7±2,62 САД (мм. рт.ст.) 123,4±2,83 125,9±4,08 121,8±2,65 128,3±4,25 ДАД (мм. рт.ст.) 74,0±3,09 79,3±2,62 76,2±2,43 80,3±3,30 Индекс степ-теста - 53,6±2,60 - 52,3±2,09 Группа СМД анти-S100 (M±SE) ЧСС (уд/мин) 73,5±2,57 69,7±2,78 72,1±2,84 67,7±2,39 САД (мм. рт.ст.) 127,5±2,55 133,5±4,77 127,1±2,55 129,9±5,06 ДАД (мм. рт.ст.) 75,5±2,65 82,6±3,31 74,9±2,41 82,3±3,19 Индекс степ-теста - 50,6±1,71 - 53,0±1,63 Группа СМД анти-eNOS (M±SE) ЧСС (уд/мин) 76,5±2,59 67,3±1,98 77,3±2,02 70,1±3,23 САД (мм. рт.ст.) 127,3±3,14 131,5±5,16 123,5±3,06 129,3±4,13 ДАД (мм. рт.ст.) 75,2±2,24 80,3±2,66 73,9±2,83 81,0±3,22 Индекс степ-теста - 51,8±2,12 - 51,2±2,21 Группа плацебо (M±SE) ЧСС (уд/мин) 74,5±2,78 68,9±3,46 73,9±3,23 72,3±3,58 САД (мм. рт.ст.) 125,3±3,30 133,3±4,73 124,3±2,83 126,9±3,95 ДАД (мм. рт.ст.) 76,2±2,15 81,7±2,83 75,4±1,86 79,7±3,03 Индекс степ-теста - 50,0±2,03 - 50,1±1,99

Таблица 9 Динамика показателей психофизиологического состояния участников исследования до и после кинетического воздействия Показатель 1 визит (однодневный прием) 2 визит (курсовой прием) После приема препарата После пробы НКУК После приема препарата После пробы НКУК Группа СМД анти-S100 + анти-eNOS (M±Sb) ВПДР 257,5±8,67 268,9±10,18 269,6±9,75 279,9±12,24 РДО, у.е. 50,1±3,92 49,5±4,50 47,3±4,86 47,0±3,54 РДО, % попадания в цель 3,0±0,95 4,5±1,15 5,3±1,58 4,0±1,11 УВ, сек 5,2±0,34 5,2±0,35 5,2±0,41 5,1±0,40 Объем внимания, сек. 41,7±2,36 39,9±2,38 38,1±2,17 37,5±2,04 КУВ 17,4±1,66 17,2±1,51 18,0±1,71 18,8±1,72 Проба Штанге 68,1±4,85 91,7±7,07* 71,8±6,02 85,5±9,36 Проба Генча 47,1±4,03 50,1±3,94 46,7±3,28 48,1±4,52 Группа СМД анти-S100 (М±SE) ВПДР 258,9±9,95 282,4±13,56 268,4±11,37 279,1±9,20 РДО, у.е. 58,1±6,40 57,5±6,34 55,1±5,06 53,8±5,02 РДО, % попадания в цель 3,7±1,50 2,0±0,82 2,3±0,83 5,0±1,69 УВ, сек 6,0±0,40 6,4±0,52 6,2±0,42 6,0±0,41 Объем внимания, сек. 42,6±2,68 42,1±2,27 42,7±2,30 41,9±2,52 КУВ 14,5±1,16 14,9±1,26 15,3±1,13 15,4±1,18 Проба Штанге 59,0±4,09 72,6±6,19 64,5±4,93 75,9±5,67 Проба Генча 47,1±4,48 49,4±4,69 48,3±4,30 48,8±4,14 Группа СМД анти-eNOS (M±SE) ВПДР 257,7±8,49 279,4±14,23 266,7±13,19 275,5±11,44 РДО, у.е. 48,3±3,67 51,9±4,39 52,5±4,79 49,6±4,22 РДО, % попаданияв цель 2,3±0,83 2,0±0,82 3,3±1,26 5,7±1,68 УВ, сек 5,9±0,25 6,0±0,34 5,5±0,24 5,9±0,33 Объем внимания, сек. 41,9±2,10 43,8±2,39 41,3±2,00 42,5±2,22 КУВ 13,7±1,34 14,8±1,31 15,6±1,24 14,1±1,40 Проба Штанге 62,5±5,49 69,5±5,09 56,7±3,34 73,1±7,98 Проба Генча 43,1±3,51 45,7±3,15 43,4±3,77 45,8±4,03 Группа плацебо (M±SE) ВПДР 267,6±7,64 290,1±11,33 281,1±9,78 263,3±6,85 РДО, у.е. 60,7±8,31 54,1±5,57 51,1±3,69 52,6±5,38 РДО, % попадания в цель 3,7±1,03 3,7±1,24 3,3±0,93 4,3±1,61 УВ, сек 6,1±0,71 5,7±0,36 5,5±0,32 5,9±0,71 Объем внимания, сек. 41,9±2,09 42,4±2,81 41,3±2,18 39,6±2,26 КУВ 14,5±1,64 14,5±1,79 15,3±1,55 15,9±1,58 Проба Штанге 63,7±4,71 67,9±6,90 64,8±5,94 83,0±12,24 Проба Генча 44,7±2,52 47,1±3,30 43,7±2,71 47,8±3,78

В процессе проведения исследования были использованы следующие методики и определялись следующие параметры состояния:

- Проба с непрерывным кумулятивным воздействием ускорений Кориолиса (НКУК) (Маркарян С.С., Юганов Е.М., Сидельников И.А. Вестибулярный отбор методом непрерывной кумуляции ускорений Кориолиса // Воен. мед. журн. 1966. №9. С.59-62; Методики исследований в целях врачебно-летной экспертизы. - М.: Воениздат, 1972).

Проба позволяет выявить устойчивость человека к воздействию ускорений Кориолиса и таким образом может свидетельствовать о степени подверженности данного субъекта укачиванию.

Порядок выполнения пробы. Испытуемый, сидя в кресле Барани или на электровращающемся кресле, принимает такое положение туловища и головы, чтобы ось вращения проходила вдоль туловища. Глаза закрыты. На фоне постоянного равномерного вращения кресла со скоростью 180 град/сек, (один оборот за две секунды) обследуемый в конце пятого оборота начинает выполнять наклоны головой от правого плеча к левому или от левого к правому и обратно на угол не менее 30 град. в каждую сторону от вертикали. Наклоны осуществляются непрерывно, без излишнего напряжения мышц шеи и поворотов головы в течение всего периода вращения. Каждое движение головой от плеча к плечу выполняется плавно за 2 сек без остановок в крайних и среднем положениях. Скорость наклонов контролируется с помощью метронома или временем произнесения цифр 21 и 22, что должно соответствовать 2 сек. Отсчет времени выполнения пробы необходимо начинать с момента первого качательного движения головой.

Перед испытанием обследуемого инструктируют, в частности указывают, что он должен сообщить врачу о появлении иллюзии качания, чувства тепла, жара, саливации, тошноты, которые могут возникнуть в процессе испытания. До начала испытания выполняется несколько пробных движений головой с тем, чтобы обследуемый получил навык контроля за скоростью качательных движений и усвоил правильное положение головы в момент движения.

Появление выраженных вестибуло-вегетативных расстройств (бледность, гипергидроз, тошнота, позывы на рвоту) в течение непрерывного выполнения пробы НКУК являются критериями предельной переносимости воздействия ускорений Кориолиса. Регистрируется время появления вестибуло-вегетативных реакций от начала выполнения пробы НКУК и время их прекращения после окончания выполнения пробы НКУК. Испытания на переносимость ускорений Кориолиса проводились в первой половине дня, не раньше чем через 2 часа после принятия пищи и только один раз в день. В день испытания обследуемый больше не подвергался другим воздействиям (в барокамере, на центрифуге и др.).

- Методика количественной оценки расстройств вестибуло-вегетативной чувствительности (Шкала Галле) (Количественная оценка расстройств вестибуло-вегетативной чувствительности // Космическая биология и авиакосмическая медицина, 1981. - №3. - С.72-75). На основании оценки выраженности (в баллах) вестибуло-вегетативных симптомов (головокружения, тошноты, потливости, бледности кожи, сонливости и др.) возникающих при проведении пробы НКУК, методика позволяет выявить степень переносимости человеком ускорений Кориолиса (плохая, удовлетворительная, хорошая, отличная).

- Исследование вариабильности сердечного ритма (ВСР) (Task Force of the European Society of Cardiology and the North American Society of Pacing and Electrophysiology. Heart Rate Variability standards of measurement, physiological interpretation, and clinical use. Cir. 1996; 93:1043 1065).

Для сбора данных ВСР использована Biocom Wellness Scan система, разработанная AWS, LLC. Она была создана в соответствие с Международным стандартом Европейской ассоциации кардиологов и Северо-Американской ассоциацией Электрофизиологии (International Task Force consisting of the European Society of Cardiology and the North American Society for Pacing and Electrophysiology, 1996).

Система содержит следующие компоненты:

1. Персональный компьютер (ПК) с операционной системой Windows.

2. Фотоплетизмограф HRM-02 (PPG).

3. Ушной датчик (PPG ear-clip).

4. Программное обеспечение Biocom Wellness Scan Software на CD.

5. Руководство по использованию в электронном формате (PDF).

Исследование по созданию базы данных пациента включала проведение трех тестов оценки автономного баланса: 5-минутная запись ВСР в покое; дыхательный тест; ортостатический тест.

Этапы исследования ВСР

1. Исследователь дает субъекту краткое описание каждого теста до начала старта.

2. Субъект комфортно сидит, находясь в расслабленном состоянии.

3. Ушной датчик протирается спиртовым раствором и размещается на мочке уха. Серьги, если имеются, необходимо снять перед тестом.

4. Исследователь выбирает 5-минутную запись ВСР в покое (Short-term Resting HRV Test) для выполнения.

5. Исследователь следует инструкциям по выполнению теста.

6. Сразу как тест закончен, и данные записаны в базу данных, исследователь выбирает дыхательный (Metronome Breathing Test) или ортостатический тест (Orthostatic Test).

7. Исследователь следует инструкциям по выполнению дыхательного или ортостатического теста.

8. Сразу как тест закончен и данные записаны в базу данных, исследователь просматривает результаты всех проведенных тестов, чтобы определить являются ли они приемлемыми. Если какие-то из данных не удовлетворяют требованиям исследования, исследователь повторяет тестирование.

9. По окончанию просмотра данных, тестирование заканчивается, и ушной датчик снимается с уха субъекта.

Описание 5-минутной записи ВСР в покое:

Кратковременный тест ВСР используется для оценки баланса между симпатической и парасимпатической ветвями автономной нервной системы. Он представляет собой 5-минутную запись ФПГ в сидячем положении без провокационных маневров. В течение теста участник исследования дышит произвольно с частотой дыхания не менее 9 дыханий в минуту для получения валидных параметров ВСР. Вычисляются следующие параметры ВСР:

1. Параметры во временной области:

1. HR

2. Mean NN

3. SDNN

4. RMS-SD

2. Параметры в частотной области:

5. Total Power

6. VLF

7. LF

8. HF

9. LF/HF Ratio

10. LF Norm

11. HF Norm

Все параметры ВСР во временной области вычисляются на нормальных межбитовых интервалах (NN), вызванных нормальным синусовым сокращением сердца, записанных в течение теста.

Частотные параметры ВСР вычисляются из плотности спектра мощности (PSD), рассчитанного методом быстрого преобразования Фурье (FFT).

Параметры во временной области:

HR - это среднее значение частоты сердечных сокращений, вычисленное по всей записи ритма сердца. HR измеряется в ударах в минуту (ВРМ).

Mean NN - это среднее значение межбитового интервала по всей записи. Mean NN измеряется в миллисекундах.

SDNN - это стандартное склонение NN интервалов, которое является квадратным корнем из разброса NN. Поскольку величина под корнем математически эквивалентна общей мощности в спектральном анализе, SDNN отражает все циклические компоненты, ответственные за вариабельность. Действительное значение SDNN зависит от длины записи - чем длиннее запись, тем выше значение SDNN. Таким образом, в практике нельзя сравнивать значения SDNN, вычисленные на разных временных интервалах. SDNN измеряется в миллисекундах.

RMS-SD - это квадратный корень различий между последовательными NN интервалами. Этот показатель оценивает высокочастотный компонент вариабельности сердечного ритма, который связан с парасимпатической регуляцией сердца. RMS-SD измеряется в миллисекундах.

Параметры в частотной области:

Total Power (TP) - это оценка плотности спектра мощности в диапазоне от 0 до 0.4 Hz. Этот показатель отражает общую активность автономной нервной системы, причем симпатическая активность вносит наибольший вклад. Total Power вычисляется в миллисекундах в квадрате (ms²).

Very Low Frequency (VLF) - плотность спектра мощности в диапазоне между 0.0033 и 0.04 Hz. Физиологическая сущность этого показателя заключается в том, что он является индикатором общей активности различных медленных механизмов регуляции. VLF вычисляется в миллисекундах в квадрате (ms²).

Low Frequency (LF) - плотность спектра мощности в диапазоне между 0.04 и 0.15 Hz. Этот показатель отражает как симпатическую, так и парасимпатическую активность. Он является хорошим индикатором симпатической активности в долговременных записях ВСР. Парасимпатическле влияние представлено в LF, когда частота дыхания меньше чем 9 дыханий в минуту. LF вычисляется в миллисекундах в квадрате (ms²).

High Frequency (HF) - плотность спектра мощности в диапазоне между 0.15 и 0.4 Hz. Этот показатель отражает парасимпатическую активность. HF так же известен как «дыхательный» компонент, так как соответствует вариации NN интервалов, вызванных дыханием (этот феномен известен как респираторная синусовая аритмия (RSA)). Частота сердечных сокращений увеличивается в течение вдоха и уменьшается в течение выдоха. HF вычисляется в миллисекундах в квадрате (ms²).

LF/HF Ratio - это соотношение между плотностью спектра мощности в диапазоне LF и HF. Этот показатель отражает общий баланс между симпатической и парасимпатической активностью. Высокие значения этого показателя являются индикатором доминирования симпатической активности, в то время как низкие - парасимпатической. LF/HF Ratio вычисляется в нормализованных единицах.

Normalized Low Frequency (LF norm) - это отношение между абсолютным значением LF и ТР без учета VLF. Этот показатель минимизирует эффект влияния VLF в общем спектре мощности и выделяет изменения в симпатической регуляции. LF Norm вычисляется в процентах.

Normalized High Frequency (HF norm) - это отношение между абсолютным значением HF и ТР без учета VLF. Этот показатель минимизирует эффект влияния VLF в общем спектре мощности и выделяет изменения в парасимпатической регуляции. HF norm вычисляется в процентах.

- Дыхательный тест

Этот тест предназначен для оценки парасимпатической ветви автономной нервной системы. Тест дает положительную стимуляцию парасимпатической регуляции сердечного ритма.

В течение этого теста субъект дышит глубоко и равномерно с частотой дыхания 6 дыханий в минуту. Во время теста очень важно исключить любые события, которые могут повлиять на произвольное дыхание, например разговор, кашель, вздохи и т.п. Эти помехи могут вызвать нежелательные флуктуации сердечного ритма и могут исказить результаты. Субъект был проинструктирован дышать 1 минуту, следуя движению пейсера, изображенного на экране компьютера. Вычисляются следующие параметры теста:

1. Minimal HR (bpm)

2. Maximal HR (bpm)

3. Standard Deviation of HR (bpm)

4. Mean ratio of HR max / HR min (E/I Ratio)

5. Maximal Variance of HR during test (bpm)

- Ортостатический тест

Этот тест используется для оценки влияния парасимпатической регуляции на ритм сердца. Тест основан на изменении положения тела субъекта. Субъекту необходимо находиться в расслабленном состоянии в положении сидя. После минутной записи сердечного ритма, субъекту дается команда встать, избегая любых резких движений. Субъект остается в положении стоя еще одну минуту. Мониторинг ритма сердца продолжается в течение всего теста. Цель записи базовой линии и маневра вставания - оценить нестационарный переходный процесс в ритме сердца, вызванный изменением положения тела. ЧСС мониторируется до тех пор, пока новое стационарное состояние ритма сердца не будет детектировано. Вычисляются следующие параметры теста:

1. 30:15 Ratio (соотношение между максимальным значение ЧСС в течение первых 15 секунд после вставания к минимальному значению ЧСС в течение первых 30 сек после вставания, или реакция на нагрузку, у.е.).

2. Время достижения максимального значения ЧСС после вставания (или время реакции, сек).

3. Время достижения ЧСС 75% уровня базовой линии (или время стабилизации, сек).

4. Минимальное значение ЧСС (уд/сек).

5. Максимальное значение ЧСС (уд/сек).

- Самооценка функционального состояния (САН) (Доскин В.А., Лаврентьева Н.А., Мирошников Н.П., Шарай В.Б. Тест дифференцированной самооценки функционального состояния // Вопросы психологии, 1973. - №6. - С.141-145).

Методика позволяет количественно выразить показатели субъективного состояния, характеризующие три категории признаков: самочувствие, активность и настроение (САН), которые определяются с помощью специального бланка. На бланке имеются 30 пар слов противоположного значения и между ними оценочная шкала. В зависимости от субъективной оценки своего состояния испытуемый отмечает степень выраженности того или иного признака по семибалльной шкале. Признаки по номерам характеризуют: 1-2, 7-8, 13-14, 19-20, 25-26 - самочувствие; 3-4, 9-10, 15-16, 21-22, 27-28 - активность; 5-6, 11-12, 17-18, 23-24, 29-30 - настроение. При обработке результатов самочувствия и настроения оценки перекодируются от 7 до 1 слева - направо, а активности - справа - налево.

Для каждого признака (самочувствия, активности, настроения) подсчитываются средняя арифметическая величина, ее ошибка и среднеквадратическое отклонение. Это дает возможность интегрально оценить субъективное состояние. Средняя арифметическая величина является непосредственной субъективной характеристикой функционального состояния и работоспособности, а по величине разброса оценок внутри одной группы признаков (среднеквадратического отклонения) можно судить о достоверности полученных результатов.

- Психометрические тесты

Выполнялись на компьютерах по программе «ОКО» (оперативный контроль оператора), разработанной для такого рода исследований специалистами управления «Обитаемости и медицинского обеспечения личного состава ВМФ» Центрального научно-исследовательского института кораблестроения Минобороны России, под руководством профессора Рыбникова В.Ю.

Определяли следующие психофизиологические показатели показатели:

- реакция на движущийся объект (РДО);

- время простой двигательной реакции (ВПДР);

- объем внимания (ОВ);

- устойчивость внимания (УВ).

Вследствие высокой вариабельности психофизиологических показателей их измерение проводили по нескольку раз и затем рассчитывали среднее арифметическое из всей серии значений. В частности, оценку ВПДР повторяли 50 раз, РДО - 20 раз, 0 В и УВ по 5 раз. В тесте РДО также из 20 значений подсчитывали число попаданий в цель и затем рассчитывали процент точных попаданий. В тесте УВ исследовали среднее время выполнения теста, количество правильных ответов в процентах к их общему числу, выполненному добровольцем.

Для интеграции этих показателей определяли коэффициент устойчивости внимания (КУВ), который рассчитывался путем деления процента правильных ответов на среднее время выполнения теста.

- Реакция на движущийся объект (РДО) (Сохранение работоспособности плавающего состава Военно-Морского Флота. Руководство для врачей // Под общей редакцией Жеглова В.В., Сапова И.А., Щеголева B.C. - М.: Воениздат. - 1990. - 192 с.).

Реакция на движущийся объект позволяет определить точность реагирования испытуемого на раздражитель и судить об уравновешенности процессов возбуждения и торможения в коре головного мозга. Суть реакции заключается в необходимости останавливать быстрое движение объекта в заранее фиксированной точке. Для этого может быть использован включаемый дистанционно экспериментатором электросекундомер, стрелку которого испытуемый должен остановить точно на отметке «О» нажатием кнопки на своем пульте. Данный тест может также выполняться с помощью специальной компьютерной программы на ПЭВМ. Ответная реакция испытуемого может быть преждевременной - стрелка электросекундомера не достигла отметки «О», запаздывающей - стрелка проскочила отметку «О», точной - стрелка остановлена на отметке «О». Каждая преждевременная или запаздывающая реакция имеет количественную характеристику в абсолютных единицах. Для оценки результатов выполненной пробы высчитывается относительная точность ответов (в % от общего количества реакций), а также средняя арифметическая и средняя алгебраическая величины отклонений из всех предъявленных реакций.

- Простая сенсомоторная реакция на световой сигнал или время простой двигательной реакции (ВПДР) (Сохранение работоспособности плавающего состава Военно-Морского Флота. Руководство для врачей // Под общей редакцией Жеглова В.В., Сапова И.А., Щеголева B.C. - М.: Воениздат, 1990. - 192 с.).

Время простой двигательной реакции является одной из информативных методик для характеристики силы нервных процессов. В простой сенсомоторной реакции можно выделить два психических акта: акт восприятия (сенсорный момент реакции) и ответное движение (моторный компонент). Оценку ВПДР можно производить традиционным способом (с помощью хронорефлексометров), а также с использованием специальных компьютерных программ. Испытуемому предварительно объясняют содержание и правила проведения теста. Затем он садится на стул, кладет руки на стол перед хронорефлексометром, палец ведущей руки располагает на его соответствующей кнопке. После готовности испытуемого врач-исследователь подает команду и в течение 3-10 сек. после нее включает устройство. Задача испытуемого, как можно быстрее после возникновения сигнала, отреагировать нажатием на кнопку и погасить лампочку. Время простой двигательной реакции измеряется (в миллисекундах) с момента появления на экране монитора специального объекта до нажатия испытуемым кнопки на манипуляторе (клавиатуре или мыши). ВПДР измеряется, как правило, 50 раз, после чего определяется среднеарифметическое значение показателя.

- Гарвардский степ-тест (Методы исследования в физиологии военного труда. Руководство / Под редакцией B.C.Новикова. - М.: Воениздат, 1993. - 240 с.)

В качестве функциональной пробы, позволяющей выявить реакцию сердечно-сосудистой системы на неблагоприятное воздействие, и в частности воздействие ускорений Кориолиса, использовали 2-минутный Гарвардский степ-тест (Карпман В.Л. и соавт., 1988).

Методика основана на оценке вегетативных сдвигов при выполнении физической нагрузки субмаксимальной мощности и восстановительных возможностей организма по нормализации частоты сердечных сокращений.

Величина степ-теста характеризует скорость восстановительных процессов после достаточно напряженной мышечной работы. Чем быстрее восстанавливается пульс, тем меньше величина (Р2+Р3+Р4) и следовательно, тем выше индекс степ-теста.

У спортсменов этот показатель, как правило, выше, чем у нетренированных людей. При токсическом воздействии препаратов следует ожидать его снижения. В тоже время его увеличения свидетельствует, что препарат повышает функциональные резервы организма и способность переносить неблагоприятные воздействия окружающей среды, в том числе и кинетические воздействия.

Процедура проведения теста заключается в том, что обследуемый в течение 2 минут с частотой 30 раз в минуту приседает. Сразу после нагрузки у него на 2, 3 и 4-й минутах подсчитывают пульс за первые 30 сек каждой минуты. Индекс степ-теста рассчитывали по формуле:

Индекс гарвардского степ-теста = Т*100/(Р2+Р3+Р4)*2,

где Т - время нагрузки в сек; Р2, Р3, Р4 - частота пульса на 2-й, 3-й, 4-й минутах периода восстановления, * - знак умножения.

В связи с тем, что препараты предназначены лицам, подверженным укачиванию, в том числе и водителям, оценивалась их безопасность при выполнении человеком ответственных операторских функций. С этой целью были исследованы основные предикторы качества деятельности операторского типа, для чего детально исследовали функциональное состояние ЦНС (в частности, состояние систем координации и реагирования, систем обеспечивающих высокую эффективность тонких моторных компонентов деятельности, а также систем внимания).

- Проба Штанге (Сохранение работоспособности плавающего состава Военно-Морского Флота. Руководство для врачей // Под общей редакцией Жеглова В.В., Сапова И.А., Щеголева B.C. - М.: Воениздат. - 1990. - 192 с.).

Суть выполнения пробы заключается в задержке дыхания после трех дыханий на 3/4 глубины полного вдоха. До проведения пробы обследуемому на нос одевается зажим или же обследуемый зажимает нос пальцами. Время задержки регистрируется по секундомеру. Проба может быть проведена дважды с интервалами в 3-5 мин между определениями. По длительности задержки дыхания проба оценивается следующим образом:

- менее 39 сек - неудовлетворительно;

- 40-9 сек - удовлетворительно;

- свыше 50 сек - хорошо.

- Проба Генча (Сохранение работоспособности плавающего состава Военно-Морского Флота. Руководство для врачей // Под общей редакцией Жеглова В.В., Сапова И.А., Щеголева B.C. - М.: Воениздат. - 1990. - 192 с.).

Суть выполнения пробы заключается в задержке дыхания на выдохе после трех дыханий. При проведении пробы Генча в положении лежа длительность задержки дыхания у здоровых людей равняется 25-30 сек. При ее повторении после дозированной ходьбы (44 м в течение 30 сек.) длительность задержки дыхания уменьшается до 17-22 сек, а при функциональной недостаточности организма - до 5-15 сек. Оценка пробы проводилась следующим образом:

- менее 34 сек - неудовлетворительно;

- 35-39 сек - удовлетворительно;

- свыше 40 сек - хорошо.

Пример 3.

Для исследования эффективности лечения пациентов с Синдром Вегетативной Дисфункции (СВД) психофизиологического и дисгормонального генеза заявленным лекарственным средством были использованы таблетки массой 300 мг, пропитанные фармацевтической композицией, содержащей водно-спиртовые растворы (6 мг/табл.) активированных - потенцированных форм поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к мозгоспецифическому белку S-100 (анти-S100) и к эндотелиальной NO-синтазе (анти-eNOS) в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (с концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведении С12, C30, С200 (СМД анти-S100 + анти-eNOS).

В качестве контрольной группы использовалась группа пациентов, получающих препарат в виде таблеток массой 300 мг, пропитанных водно-спиртовым раствором (3 мг/табл.) активированной-потенцированной формы поликлональных кроличьих антител к мозгоспецифическому белку S-100, очищенных на антигене, в сверхмалой дозе (СМД анти-S100), полученной сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентной смеси сотенных гомеопатических разведении С12, C30, С200

По дизайну исследование представляло из себя одноцентровое открытое рандомизированное сравнительное клиническое исследование эффективности и безопасности применения препаратов СМД анти-S100 + анти-eNOS и СМД анти-S100, применяемых в качестве монотерапии, при лечении пациентов с Синдром Вегетативной Дисфункции (СВД) психофизиологического и дисгормонального генеза.

В исследование были включены 12 пациентов с диагнозом «СВД психофизиологического генеза» и «СВД дисгормонального генеза», в возрасте от 23 до 61 года. Средний возраст пациентов составил 49,25±12,63 года.

После определения соответствия пациента критериям включения и исключения протокола, пациенты были рандомизированы в одну из двух исследуемых групп: группа СМД анти-S100 + анти-eNOS - 6 пациентов (3 пациента с СВД психофизиологического и 3 пациента СВД дисгормонального генеза). Средний возраст пациентов группы СМД анти-S100 + анти-eNOS составил 41,33±12,5 года (17,7% мужчин и 82,3% женщин); группа СМД анти-S100 - 6 пациентов (3 пациента с СВД психофизиологического и 3 пациента СВД дисгормонального генеза). Средний возраст пациентов группы СМД анти-S100 составил 57,16±4,35 года (17,7% мужчин и 82,3% женщин).

В ходе данного исследования было проведено 4 визита в исследовательский центр. Фаза лечения продолжалась с Визита 1 до Визита 3. Визит 3 (День 56±5) являлся первой конечной точкой исследования, после чего начиналась фаза катамнестического наблюдения. Фаза катамнестического наблюдения продолжалась до Визита 4 (День 84±5).

В анализ безопасности были включены данные всех пациентов, участвовавших в исследовании (n=12). В течение всего периода наблюдения за пациентами отмечалась хорошая переносимость препарата. Нежелательные явления отсутствовали. Одна пациентка не явилась на второй визит, контакт с ней утерян. Пациентка не включалась в анализ. Все пациенты исследуемых групп завершили лечение в сроки, установленные протоколом исследования, досрочно выбывших пациентов не было.

При оценке действия препарата СМД анти-S100 + анти-eNOS на основные проявления СВД, а так же тревожно-депрессивные расстройства (опросник депрессии Бека), было выявлено улучшение качества жизни пациентов, выражавшееся в статистически-достоверном увеличении общего балла опросника SF-36 (подшкала «физическое здоровье» с 38,04±2,44 до 47,84±1,27, р=0,005, подшкала «психическое здоровье» - с 57,88±3,94 до 72,75±1,64, p<0,01), а так же статистически-достоверное снижение общего балла по опроснику депрессии Бека (с 11,0±1,4 до 5,5±1,37, p<0,02)

При оценке действия препарата СМД анти-S100 на основные проявления СВД, а так же тревожно-депрессивные расстройства пациента (опросник депрессии Бека), было выявлено улучшение качества жизни пациентов, выражавшееся в статистически-достоверном увеличении общего балла опросника SF-36, (подписала «психическое здоровье» - с 56,107±1,36 до 70,7±1,39, p<0,001). Тенденций увеличения общего балла по подшкале «физическое здоровье» в данной группе выявлено не было.

При анализе динамики тревожно-депрессивных расстройств в группе СМД анти-S100 выявлено статистически-достоверное снижение общего балла по опроснику депрессии Бека (с 10,5±1,04 до 5,33±1,5, p<0,02) (Таблица 10).

Таблица 10   SF-36 (физическое здоровье) SF-36 (психическое здоровье) Опросник Депрессии Бека СМД анти-S100 + анти-eNOS до лечения 38,04±2,44 57,88±3,94 11,0±1,4 СМД анти-S100 + анти-eNOS после лечения 47,84±1,27* 72,75±1,64** 5,5±1,37*** СМД анти-S100 до лечения 46,99±8,09 56,107±1,36 10,5±1,04 СМД анти-S100 после лечения 49,17±2,68 70,7±1,39**** 5,33±1,5***

* - p от исх. = 0,005   ** - p от исх. <0,01   *** - p от исх. 0,02   **** - p от исх. 0,001  

Достоверных межгрупповых различий после лечения по этим показателям не выявлено. При планировании исследования и наборе пациентов, группы были разделены на следующие подгруппы:

1. пациенты с диагнозом Синдром Вегетативной Дисфункции психофизиологического генеза (хронический стресс), которые будут получать препарат СМД анти-S100 + анти-eNOS в качестве монотерапии;

2. пациенты с диагнозом Синдром Вегетативной Дисфункции психофизиологического генеза (хронический стресс), которые будут получать препарат СМД анти-S100 в качестве монотерапии;

3. Пациенты с диагнозом Синдром Вегетативной Дисфункции дисгормонального (климактерического) генеза, которые будут получать препарат СМД анти-S100 + анти-eNOS в качестве монотерапии;

4. Пациенты с диагнозом Синдром Вегетативной Дисфункции дисгормонального (климактерического) генеза, которые будут получать препарат СМД анти-S100 в качестве монотерапии.

При анализе полученных данных подгрупповые тенденции соответствовали таковым при общегрупповом анализе, хотя и имели меньшую степень достоверности, что, вероятно, связано с небольшим количеством наблюдений (Таблица 11, 12).

Таблица 11 СВД дисгормонального (климактерического) генеза   SF-36 (физическое здоровье) SF-36 (психическое здоровье) Опросник Депрессии Бека СМД анти-S100 + анти-eNOS до лечения 38,5±2,99 57,9±4,42 11,0±2,0 СМД анти-S100 + анти-eNOS после лечения 47,99±1,48* 72,75±1,85* 5,33±0,57*** СМД анти-S100 до лечения 47,39±8,35 56,79±1,23 10,0±1.0 СМД анти-S100 после лечения 48,96±3,16 70,71±1,68** 4,66±0.057**** * - p от исх. <0,05 ** - p от исх. <0,005 *** - p от исх. = 0,053 **** - p от исх. = 0,01

Таблица 12 СВД психофизиологического (хронический стресс) генеза   SF-36 (физическое здоровье) SF-36 (психическое здоровье) Опросник Депрессии Бека СМД анти-S100 + анти-eNOS до лечения 37,57±2,31 57,85±4,39 11,0±1,0 СМД анти-S100 + анти-eNOS после лечения 47,69±1,32* 72,73±1,82** 5,66±2,08**** СМД анти-S100 до лечения 47,39±8,35 55,42±1,31 11,0±1,0 СМД анти-S100 после лечения 48,96±3,16 70,69±1,65*** 6,0±2,0**** * - p от исх. <0,02 ** - p от исх. <0,05 *** - p от исх. = 0,002 **** - p от исх. = 0,082

При межгрупповом и внутригрупповом анализе динамики артериального давления, интегративных вегетативных показателей, показателей вариационной пульсометрии, статистически-достоверных тенденций выявлено не было, за исключением тенденции к уменьшению Индекса Вегетативного Равновесия (ИВР). Скорее всего, это обусловлено недостаточным количеством наблюдений.

ИВР - интегративный показатель, вычисляемый как отношение амплитуды Мо (число кардиоинтервалов, соответствующее диапазону моды) к Вариационному Размаху (разница между максимальным и минимальным значениями R-R). Уменьшение этого показателя свидетельствует о смещении вегетативного равновесия от симпатикотонии к нормо- и ваготонии, т.е. об увеличении влияния парасимпатических отделов вегетативной нервной системы (ВНС).

В группе дисгормональной СВД отмечена статистически-достоверная тенденция к уменьшению ИВР в подгруппе СМД анти-S100 + анти-eNOS. При этом, выявлена статистически-достоверная (p<0,05) разница между подгруппой СМД анти-S100 + анти-eNOS и подгруппой СМД анти-S100 (Таблица 13).

Таблица 13 Дисгормональная СВД   ИВР до лечения ИВР после лечения СМД анти-S100 + анти-eNOS 721,1±38,52 416,86±73,72*# СМД анти-S100 после лечения 48,96±3,16 696,26±61,85 * - p от исх. <0,05 # - p по сравн. с СМД анти-S100. <0,05

Таким образом, в проведенном клиническом исследовании заявленного лекарственного средства СМД анти-S100 + анти-eNOS показано положительное влияние на качество жизни пациентов с Синдром Вегетативной Дисфункции (СВД) психофизиологического и дисгормонального генеза, положительное влияние на тревожно-депрессивные расстройства пациентов. Продемонстрировано положительное влияние препарата на вегетативную нервную систему. Кроме того, подтверждена высокая переносимость заявленного лекарственного препарата. Нежелательные явления отсутствовали.

Пример 4.

Эффективность препаратов при скополаминовой амнезии у крыс (модель болезни Альцгеймера).

Болезнь Альцгеймера (БА) является нейродегенеративным заболеванием и характеризуется снижением когнитивных функций, ухудшением памяти, спутанностью сознания, изменениями эмоционального фона. Хотя основной причиной развития данной патологии в настоящее время считается накопление бета-амилоида, приводящее к образованию бета-амилоидных бляшек и нейрофибриллярных клубков в тканях мозга, БА также сопровождается дефицитом холинэргической системы. На этом основан один из наиболее распространенных способов моделирования БА у животных с помощью антагониста холинергической системы скополамина. Введение скополамина экспериментальным животным (обычно крысам или мышам) нарушает способность к обучению и приводит к ухудшению памяти.

Для оценки когнитивных функций крыс и мышей используют различные методы, в частности водный лабиринт Морриса. Суть этого теста состоит в том, что в сосуде с непрозрачной водой животные, выпускаемые в воду с разных точек, вынуждены искать скрытую неподвижную платформу. Преимуществом этого метода является то, что он позволяет как наблюдать за процессом обучения животного (формирование у него представления о пространственном расположении платформы независимо от того, в каком месте его опустили в воду), так и оценивать прочность запоминания (для этого проводят тест-пробу, когда платформу вынимают).

В нижеприведенном Примере 4 изучали эффективность при скополаминовой амнезии у крыс заявленного лекарственного средства в виде композиции, содержащей активированные - потенцированные формы поликлональных аффинно очищенных на антигене кроличьих антител к мозгоспецифическому белку S-100 (анти-S100) и к эндотелиальной NO-синтазе (анти-eNOS) в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (с концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведении С12, C30, С200 (СМД анти-S100 + анти-eNOS).

В исследовании эффективности препарат СМД анти-S100 + анти-eNOS при скополаминовой амнезии у крыс (модель болезни Альцгеймера) было использовано 48 крыс-самцов линии Rj: Wistar (Han) (масса 180-280 г). В течение 4 дней крысам подкожно вводили физиологический раствор (n=12, интактные) или скополамин в дозе 0,5 мг/кг (n=36) (скополамин-индуцированная амнезия). Крыс со скополамин-индуцированной амнезией разделили на 3 группы и вводили им, соответственно, дистиллированную воду (7,5 мл/кг, n=12, контроль, группа №1), СМД анти-S100 (7,5 мл/кг, n=12, группа №2) и СМД анти-S100 + анти-eNOS (7,5 мл/кг, n=12, группа №3) внутрижелудочно в течение 9 дней (4 дня до начала инъекций скополамина, 4 дня на фоне введения скополамина и 1 день после окончания введения скополамина).

В течение 4 дней введения скополамина через 60 минут после введения тестируемых препаратов и 30 минут после введения скополамина проводили обучающую сессию в лабиринте Морриса (4 последовательных теста с интервалом 60 сек). Лабиринт Морриса представляет собой круглый сосуд (диаметром 150 см, высотой 45 см), на 30 см заполненную водой (26-28°C). В 18 см от края сосуда находится скрытая платформа (диаметром 15 см), утопленная на 1,5 см ниже уровня воды. Воду делают мутной, добавляя в нее нетоксичный краситель (например, молочный порошок), что делает платформу невидимой. Для каждого теста животное помещали в лабиринт в одной из начальных точек, находящихся на одинаковом расстоянии от скрытой платформы, и давали им возможность найти ее. Если животное не могло найти платформу за 120 секунд, его ставили на платформу на 60 секунд и затем начинали новый тест. В ходе 4 испытаний в случайном порядке животные начинали прохождение по лабиринту дважды с каждой исходной точки. Испытания записывали на видеопленку, а затем анализировали расстояние, преодоленное в поисках платформы в каждом испытании и латентный период поиска платформы.

На 5 день проводили пробу: платформу убирали из лабиринта, и крысе давали свободно плавать на протяжении 60 секунд. Регистрировали время, проведенное в том месте, где раньше находилась платформа.

Введение скополамина значительно ухудшало способность животных к обучению: в контрольной группе №1 время, затраченное животными на поиск платформы и расстояние, которое животные проплыли в поисках платформы, значительно увеличивались (Таблицы 14, 15). Проба показала, что и память животных контрольной группы №1 значительно ухудшилась: в месте, где раньше находилась платформа, они находились меньше времени, чем интактные крысы (Таблица 16). Введение СМД анти-S100 в группе №2 не приводило к улучшению исследованных параметров (Таблицы 14, 15, 16). Введение СМД анти-S100 + анти-eNOS в группе №3 приводило к некоторому улучшению обучения, которое выражалось в укорочении латентного времени поиска платформы (Таблица 14) и преодоленного расстояния (Таблица 15) в течение 4 дней обучения, и улучшению памяти, что выражалось в увеличении времени, проведенного в месте, где была платформа (Таблица 16).

Таблица 14 Латентный период поиска платформы, сек Группа Обучение 1 день 2 день 3 день 4 день Интактные, n=12 54,7±6,2 30,8±2,8 26,9±5,1 20,5±3,6 Контроль, n=12 100,1±6,8*** 92,4±9,3*** 81,4±10,7*** 77,7±9,4*** СМД анти-S100, n=12 106,8±7,0 99,3±7,8 95,6±9,0 80,4±1 1,1 СМД анти-S100 + анти-eNOS, n=12 94,4±7,2 90,7±8,2 78,3±8,6 60,1±1 0,2 *** - отличие от интактных достоверно, p<0,05

Таблица 15 Расстояние, преодоленное в поисках платформы, см Групп а Обучение 1 день 2 день 3 день 4 день Интактные, n=12 1055,7±94,6 659,5±62,2 564,8±119,3 406,1±61,2 Контроль, n=12 2587,1±217,2*** 2559,6±250,5*** 2397,9±312,6 2366,1±293,8*** СМД анти-S100, n=12 2797,2±208,9 2865,2±255,1 2857,0±300,8 2457,4±344,4 СМД анти-S100 + анти-eNOS, n=12 2434,3±222,8 2529,9±282,7 2344,2±283,0 1905,1±343,7 *** - отличие от интактных достоверно, p<0,05

Таблица 16 Время, проведенное в месте, где раньше находилась платформа, сек Группа Проба 0-30 сек 30-60 сек 0-60 сек Интактные, n=12 40,8±4,1 36,8±3,6 38,5±2,6 Контроль, n=12 18,4±2,8*** 18,8±1,9*** 18,8±1,7*** СМД анти-S100, n=12 13,3±2,1 21,5±2,6 17,6±1,3 СМД анти-S100 + анти eNOS, n=12 19,1±4.8 23,8±2,2 21,2±2,5 *** - отличие от интактных достоверно, p<0,05

Таким образом, в использованной модели болезни Альцгеймера, применение комплекса СМД анти-S100 + анти-eNOS было более эффективным по сравнению с изолированным введением СМД анти-S100.

Настоящая группа изобретений относится к медицине, а именно к терапии и неврологии, и касается лечения кинетозов. Для этого вводят фармацевтическую композицию, содержащую активированную-потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100 и активированную-потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе. Это обеспечивает эффективное лечение кинеотозов за счет синергетического действия компонентов композиции. 2 н. и 9 з.п. ф-лы, 16 табл., 4 пр.

1. Способ лечения кинетозов, характеризующийся тем, что в организм вводят активированную-потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100.

2. Способ лечения по п.1, характеризующийся тем, что активированную-потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100 используют в виде активированного-потенцированного водного или водно-спиртового раствора, активность которого обусловлена процессом последовательного многократного разведения в водном или водно-спиртовом растворителе в сочетании с внешним механическим воздействием - встряхиванием каждого разведения.

3. Способ лечения по п.1 или 2, характеризующийся тем, что водный или водно-спиртовой раствор активированных-потенцированных форм антител к мозгоспецифическому белку S-100 получен путем многократного последовательного разведения в сочетании с внешним воздействием - вертикальным встряхиванием каждого разведения из матричного раствора аффинно очищенных антител к мозгоспецифическому белку S-100 с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл.

4. Способ лечения по п.1 или 2, характеризующийся тем, что используют активированную-потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100 в твердой лекарственной форме, которая содержит эффективное количество гранул нейтрального носителя, насыщенного смесью водных или водно-спиртовых растворов активированной-потенцированной формы антител к мозгоспецифическому белку S-100, и фармацевтически приемлемые добавки, включающие лактозу, целлюлозу микрокристаллическую и магния стеарат.

5. Способ лечения по п.1 или 2, характеризующийся тем, что используют приготовленные в виде единого лекарственного препарата - одной лекарственной формы смесь различных разведении антител к мозгоспецифическому белку S-100, приготовленных по гомеопатической технологии.

6. Лекарственное средство для лечения кинетозов, характеризующееся тем, что выполнено в виде фармацевтической композиции и содержит активированную-потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100.

7. Лекарственное средство по п.6, характеризующееся тем, что активированную-потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100 используют в виде активированного-потенцированного водного или водно-спиртового раствора, активность которого обусловлена процессом последовательного многократного разведения в водном или водно-спиртовом растворителе в сочетании с внешним механическим воздействием - встряхиванием каждого разведения.

8. Лекарственное средство по п.6, характеризующееся тем, что фармацевтическая композиция выполнена в твердой лекарственной форме и содержит эффективное количество гранул нейтрального носителя, насыщенного смесью водных или водно-спиртовых растворов активированной-потенцированной формы антител к мозгоспецифическому белку S-100 и фармацевтически приемлемые добавки.

9. Лекарственное средство по п.6 или 7, характеризующееся тем, что водные или водно-спиртовые растворы активированных-потенцированных форм антител к мозгоспецифическому белку S-100 получены путем многократного последовательного разведения в сочетании с внешним воздействием - вертикальным встряхиванием каждого разведения из матричных растворов аффинно очищенных антител к мозгоспецифическому белку S-100 с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл.

10. Лекарственное средство по п.6 или 7, характеризующееся тем, что активированную-потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100 используют в виде смеси различных, преимущественно сотенных, разведений, приготовленных по гомеопатической технологии.

11. Лекарственное средство по п.8, характеризующееся тем, что фармацевтически приемлемые добавки включают лактозу, целлюлозу микрокристаллическую и магния стеарат.