ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЕЗНИ АЛЬЦГЕЙМЕРА И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЕЗНИ АЛЬЦГЕЙМЕРА Российский патент 2014 года по МПК A61K39/395 A61P25/28 

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для лечения болезни Альцгеймера.

Болезнь Альцгеймера (БА) является нейродегенеративным заболеванием и характеризуется снижением когнитивных функций, ухудшением памяти, спутанностью сознания, изменениями эмоционального фона, деменцией (приобретенное слабоумие, стойкое снижение познавательной деятельности с утратой в той или иной степени ранее усвоенных знаний и практических навыков и затруднением или невозможностью приобретения новых). Хотя основной причиной развития данной патологии в настоящее время считается накопление бета-амилоида, приводящее к образованию бета-амилоидных бляшек и нейрофибриллярных клубков в тканях мозга, БА также сопровождается дефицитом холинэргической системы. На этом основан один из наиболее распространенных способов моделирования БА у животных с помощью антагониста холинергической системы скополамина. Введение скополамина экспериментальным животным (обычно крысам или мышам) нарушает способность к обучению и приводит к ухудшению памяти.

Из уровня техники известно нейротропное лекарственное средство на основе антисыворотки к мозгоспецифическому белку S-100 (RU 2156621 C1, A61K 39/395, 27.09.2000).

Известны также результаты исследований препарата на основе сверхмалых доз антител к мозгоспецифическому белку S-100 при нарушении когнитивных функций, эмоционального и неврологического статуса в условиях экспериментальной модели болезни Альцгеймера, из которых следует, что препарат обладает способностью восстанавливать нарушенные когнитивные функции, улучшает эмоциональное состояние, ослабляет тревожность и может быть перспективным для профилактики и лечения болезни Альцгеймера (Воронина Т.А., Белопольская М.В. и др. Действие сверхмалых доз антител к S-100 при нарушении когнитивных функций, эмоционального и неврологического статуса в условиях экспериментальной модели болезни Альцгеймера. - Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2009, №8, приложение, с.174-176).

Изобретение направлено на создание более эффективного средства для профилактики и лечения болезни Альцгеймера.

Решение поставленной задачи обеспечивается тем, что в способе лечения болезни Альцгеймера путем введения в организм активированной - потенцированной формы антител к мозгоспецифическому белку S-100, согласно изобретению дополнительно (одновременно и сочетанно) вводят активированную - потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе.

При этом активированную - потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100 и активированную - потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе используют в виде активированного - потенцированного водного или водно-спиртового раствора каждого компонента, активность которого обусловлена процессом последовательного многократного разведения в водном или водно-спиртовом растворителе в сочетании с внешним механическим воздействием - вертикальным встряхиванием каждого разведения.

Предпочтительно используют приготовленные в виде единого лекарственного препарата - одной лекарственной формы - смесь различных разведений антител к мозгоспецифическому белку S-100 в сочетании со смесью различных разведений антител к эндотелиальной NO-синтазе, приготовленных по гомеопатической технологии.

Решение поставленной задачи обеспечивается также тем, что для лечения патологического синдрома, в том числе болезни Альцгеймера, используют согласно изобретению лекарственное средство, которое выполнено в виде фармацевтической композиции и содержит активированную - потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100 и в качестве дополнительного - усиливающего компонента - активированную - потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе.

При этом активированную - потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100 и активированную - потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе используют в виде активированного - потенцированного водного или водно-спиртового раствора, активность которого обусловлена процессом последовательного многократного разведения в водном или водно-спиртовом растворителе в сочетании с внешним механическим воздействием - вертикальным встряхиванием каждого разведения.

Фармацевтическая композиция может быть выполнена в твердой лекарственной форме и содержать эффективное количество частиц нейтрального носителя, насыщенного смесью водных или водно-спиртовых растворов активированной - потенцированной формы антител к мозгоспецифическому белку S-100 и активированной - потенцированной формы антител к эндотелиальной NO-синтазе, и фармацевтически приемлемые добавки, включающие лактозу, целлюлозу микрокристаллическую и магния стеарат.

Причем водные или водно-спиртовые растворы активированных - потенцированных форм антител к мозгоспецифическому белку S-100 и к эндотелиальной NO-синтазе получены путем многократного последовательного разведения в сочетании с внешним воздействием - вертикальным встряхиванием каждого разведения из матричных растворов аффинно очищенных антител к мозгоспецифическому белку S-100 и к эндотелиальной NO-синтазе с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл.

Предпочтительно каждый компонент заявленного лекарственного средства используют в виде смеси различных, преимущественно сотенных, разведений, приготовленных по гомеопатической технологии.

Кроме того, лекарственное средство для лечения патологического синдрома, в том числе болезни Альцгеймера, содержит действующие компоненты в объемном соотношении 1:1, при этом каждый компонент используют в виде смеси трех соответствующих матричных растворов, разведенных, соответственно, в 100¹², 100³⁰, и 100²⁰⁰ раз, что эквивалентно сотенным разведениям С12, С30, С200, приготовленным по гомеопатической технологии.

Заявленную фармацевтическую композицию рекомендуется принимать, предпочтительно, по 1-2 таблетке 2-6 раз в день.

При лечении патологического синдрома, в том числе болезни Альцгеймера, возможно раздельное, но сочетанное и одновременное применение (введение в организм) заявленной фармацевтической композиции в виде двух отдельно приготовленных препаратов как в виде растворов, так и в твердых лекарственных формах (таблеток), каждый из которых содержит активированную - потенцированную форму сверхмалых доз аффинно очищенных антител к мозгоспецифическому белку S-100 и, соответственно, активированную - потенцированную форму сверхмалых доз аффинно очищенных антител к эндотелиальной NO-синтазе.

Предложенное сочетание активированных - потенцированных форм антител к мозгоспецифическому белку S-100 и к эндотелиальной NO-синтазе в фармацевтической композиции (т.е. форм антител к мозгоспецифическому белку S-100 и к эндотелиальной NO-синтазе, приготовленных по гомеопатической технологии потенцирования путем многократного последовательного разведения и внешнего воздействия - вертикального встряхивания (см., например, Швабе В. "Гомеопатические лекарственные средства", М., 1967 г., с.14-29), которые обладают активностью, обусловленной технологией потенцирования, в фармакологических моделях и/или клинических методах лечения, включающих лечение болезни Альцгеймера) обеспечивает получение неожиданного синергетического терапевтического эффекта, подтвержденного на адекватных (валидных) экспериментальных моделях и клинических исследованиях, который заключается в повышении эффективности лечения болезни Альцгеймера. Указанный технический результат обеспечивается усилением нейропротекторной активности антител к белку S-100, обусловленным влиянием на эффективность взаимодействия лигандов с сигма-1 рецептором, усилением вегетостабилизирующего эффекта, нормализацией вегетативного статуса, синергическим влиянием обоих компонентов на нейрональную пластичность, и, вследствие этого, повышением устойчивости мозга к токсическим воздействиям, что улучшает интегративную деятельность и восстанавливает межполушарные связи головного мозга, способствует устранению когнитивных нарушений, стимулирует репаративные процессы и ускоряет восстановление функций ЦНС, повышает умственную работоспособность, восстанавливает процессы обучения и памяти, нормализует соматовегетативные проявления, увеличивает мозговой кровоток, и, соответственно, обеспечивает повышение эффективности лечения болезни Альцгеймера.

При этом заявленное лекарственное средство, как и составляющие ее компоненты, не обладают седативным и миорелаксантным действием, не вызывают пристрастия и привыкания.

Кроме того, заявленное лекарственное средство расширяет арсенал препаратов, предназначенных для лечения и профилактики болезни Альцгеймера.

Лекарственное средство приготовляют, преимущественно, следующим образом.

Для приготовления активированной - потенцированной формы действующих компонентов используют моноклональные или, преимущественно, поликлональные антитела, которые могут быть получены по известным технологиям - методикам, описанным, например, в кн.: Иммунологические методы./Под ред. Г.Фримеля, М., «Медицина», 1987, с.9-33; или, например, в ст.: Laffly E., Sodoyer R. Hum. Antibodies. Monoclonal and recombinant antibodies, 30 years after. - 2005 - Vol.14. - N 1-2. P.33-55.

Моноклональные антитела получают, например, с помощью гибридомной технологии. Причем начальная стадия процесса включает иммунизацию, основанную на принципах, уже разработанных при приготовлении поликлональных антисывороток. Дальнейшие этапы работы предусматривают получение гибридных клеток, продуцирующих клоны одинаковых по специфичности антител. Их выделение в индивидуальном виде проводится теми же методами, что и в случае поликлональных антисывороток.

Поликлональные антитела могут быть получены активной иммунизацией животных. Для этого по специально разработанной схеме животным делают серию инъекций требуемыми в соответствии с изобретением веществами - антигенами: мозгоспецифическим белком S-100 и эндотелиальной NO-синтазой. В результате проведения такой процедуры получают моноспецифические антисыворотки с высоким содержанием антител, которые используют для получения активированных - потенцированных форм компонентов. При необходимости проводят очистку антител, присутствующих в антисыворотке, например, методом аффинной хроматографии, путем применения фракционирования солевым осаждением или ионообменной хроматографии.

Предпочтительным для приготовления заявленной фармацевтической композиции является использование поликлональных антител к мозгоспецифическому белку S-100 и к эндотелиальной NO-синтазе, которые в качестве матричного (первичного) раствора с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл используют для последующего приготовления активированной - потенцированной формы.

Предпочтительной для приготовления каждого компонента является использование смеси трех водно-спиртовых разведений первичного матричного раствора антител, разведенных, соответственно, в 100¹², 100³⁰, и 100²⁰⁰ раз, что соответствует сотенным разведениям С12, С30 и С200, приготовленным по гомеопатической технологии. При выполнении заявленного лекарственного средства в твердой лекарственной форме на лактозу наносится смесь указанных компонентов.

Предпочтительным для приготовления заявленного лекарственного препарата является использование поликлональных антител к мозгоспецифическому белку S-100 и эндотелиальной NO-синтазе, которые могут быть получены иммунизацией кроликов следующим образом.

Для проведения экспериментальных исследований были использованы антитела, приготовленные по заказу специализированной биотехнологической фирмой.

Поликлональные антитела к эндотелиальной NO-синтазе получают, используя в качестве иммуногена (антигена) для иммунизации кроликов адъювант и цельную молекулу эндотелиальной NO-синтазы следующей последовательности:

Возможно для получения поликлональных антител к эндотелиальной NO-синтазе использование в качестве иммуногена (антигена) цельной молекулы эндотелиальной NO-синтазы следующей последовательности:

Возможно для получения поликлональных антител к эндотелиальной NO-синтазе использование в качестве иммуногена (антигена) синтетического пептида эндотелиальной NO-синтазы, выбранного, например, из следующих аминокислотных последовательностей:

Перед отбором крови за 7-9 дней проводят 1-3 внутривенных инъекций для повышения уровня антител. В процессе иммунизации у кроликов отбирают небольшие пробы крови для оценки количества антител. Максимальный уровень иммунного ответа на введение большинства растворимых антигенов достигается через 40-60 дней после первой инъекции. После окончания первого цикла иммунизации кроликам в течение 30 дней дают восстановить здоровье и проводят реиммунизацию, включающую 1-3 внутривенные инъекции. Для получения антисыворотки из иммунизированных кроликов собирают кровь в центрифужную пробирку объемом 50 мл. С помощью деревянного шпателя удаляют со стенок пробирки образовавшиеся сгустки и помещают палочку в сгусток, образовавшийся в центре пробирки. Кровь помещают в холодильник (температура 4°С) на ночь. На следующий день удаляют сгусток, прикрепившийся к шпателю, и центрифугируют оставшуюся жидкость при 13000g в течение 10 мин. Супернатант (надосадочная жидкость) является антисывороткой. Полученная антисыворотка должна быть желтого цвета. Добавляют к антисыворотке 20% (весовая концентрация) NaN₃ до конечной концентрации 0,02% и хранят до использования в замороженном состоянии при температуре -20°С (или без добавления NaN₃ - при температуре -70°С). Для выделения из антисыворотки антител к эндотелиальной NO-синтазе производят абсорбцию на твердой фазе в следующей последовательности:

1) 10 мл антисыворотки кролика разбавляют в 2 раза 0,15 М NaCl, добавляют 6,26 г Na₂SO₄, перемешивают и инкубируют 12-16 ч при 4°С;

2) выпавший осадок удаляют центрифугированием, растворяют в 10 мл фосфатного буфера и затем диализуют против того же буфера в течение ночи при комнатной температуре;

3) после удаления осадка центрифугированием раствор наносят на колонку с ДЭАЭ-целлюлозой, уравновешенную фосфатным буфером;

4) фракцию антител определяют, измеряя оптическую плотность элюата при 280 нм.

Затем производят очистку антител методом аффинной хроматографии путем прикрепления полученных антител к эндотелиальной NO-синтазе, который находится на нерастворимом матриксе с последующим элюированием концентрированными растворами соли.

Полученный таким образом буферный раствор поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной NO-синтазе, очищенных на антигене, с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл, предпочтительно 2,0÷3,0 мг/мл, используют в качестве матричного (первичного) раствора для последующего приготовления активированной - потенцированной формы.

Для получения поликлональных антител к мозгоспецифическому белку S-100 используют мозгоспецифический белок S-100 (физико-химические свойства которого описаны в ст.: М.В.Старостина, С.М.Свиридов. Нейроспецифический белок S-100. Успехи современной биологии, 1977 г., т.5, с.170-178; в кн.: М.Б.Штарк. Мозгоспецифические белки /антигены/ и функции нейрона, М., "Медицина", 1985 г., с.12-14), выделенный из ткани головного мозга быка по следующей методике:

- замороженную в жидком азоте ткань растирают в порошок на специальной мельнице;

- экстракцию белков проводят в соотношении 1:3 (вес/объем) в экстрагирующем буфере при гомогенизации;

- гомогенат прогревают в течение 10 мин при 60°С и охлаждают до 4°С на ледяной бане;

- термолабильные белки удаляют центрифугированием;

- проводят ступенчатое фракционирование сульфатом аммония с последующим удалением выпадающих в осадок примесных белков;

- содержащую белок S-100 фракцию осаждают 100% насыщенным сульфатом аммония при снижении рН до 4,0 и собирают центрифугированием;

- осадок растворяют в минимальном объеме буфера, содержащего ЭДТА и меркаптоэтанол, диализируют против деионизованной воды и лиофильно высушивают;

- фракционирование кислых белков продолжают хроматографией на ионообменных носителях - ДЭАЭ целлюлозе ДЕ-52 и затем ДЭАЭ-сефадексе А-50;

- собранные и отдиализованные фракции, содержащие белок S-100, разделяют по молекулярному весу гель-фильтрацией на сефадексе G-100;

- очищенный белок S-100 диализируют и лиофильно высушивают.

Молекулярный вес очищенного мозгоспецифического белка S-100 составляет - 21000 д.

Благодаря высокому содержанию аспарагиновой и глутаминовой кислот мозгоспецифический белок S-100 является сильнокислым и занимает крайнее анодное положение при электрофорезе в прерывистой буферной системе в полиакриламидном геле, что облегчает его идентификацию.

Для получения мозгоспецифической антисыворотки к выделенному мозгоспецифическому белку S-100 готовят смесь очищенного белка S-100 (антигена) в комплексе с метилированным бычьим сывороточным альбумином в качестве носителя с полным адъювантом Фрейнда, которую вводят подкожно лабораторному животному - кролику в область спины в количестве 1-2 мл. На 8-й, 15-й день проводят повторную иммунизацию. Забор крови производят (например, из вены уха) на 26-й и 28-й день.

Полученная антисыворотка имеет титр 1:500 - 1:1000, образует единственную полосу преципитации с экстрактом из нервной ткани, но не реагирует с экстрактами гетерологичных органов и формирует единственный пик преципитации как с чистым белком S-100, так и с экстрактом нервной ткани, что свидетельствует о моноспецифичности полученной антисыворотки.

Активированную - потенцированную форму каждого компонента готовят путем равномерного уменьшения концентрации в результате последовательного разведения 1 части упомянутого матричного раствора в 9 частях (для десятичного разведения D), или в 99 частях (для сотенного разведения С), или в 999 частях (для тысячного разведения М) нейтрального растворителя в сочетании с многократным вертикальным (не менее 10 раз) встряхиванием ("динамизацией") каждого полученного разведения и с использованием отдельных емкостей для каждого последующего разведения до получения требуемой потенции - кратности разведения по гомеопатическому методу (см., например, Швабе В. "Гомеопатические лекарственные средства", М., 1967 г., с.14-29).

Внешнюю обработку в процессе уменьшения концентрации также можно осуществлять ультразвуком, электромагнитным или иным физическим воздействием.

Например, для приготовления 12-го сотенного разведения С12 одну часть упомянутого матричного раствора антител к мозгоспецифическому белку S-100 (или к NO-синтазе) с концентрацией 2,5 мг/мл разводят в 99 частях нейтрального водного или водно-спиртового растворителя (преимущественно 70% этилового спирта) и многократно (10 и более раз) вертикально встряхивают - потенцируют полученное 1-е сотенное С1 разведение. Из 1-го сотенного С1 разведения приготовляют 2-е сотенное разведение С2. Данную операцию повторяют 11 раз, получая 12-е сотенное разведение С12. Таким образом, 12-е сотенное разведение С12 представляет собой раствор, полученный разбавлением последовательно в разных емкостях 12 раз 1-й части исходного матричного раствора антител к мозгоспецифическому белку S-100 с концентрацией 2,5 мг/мл в 99 частях нейтрального растворителя, т.е. раствор, приготовленный разведением матричного раствора в 100¹² раз. Аналогичные операции с соответствующей кратностью разведения проводят для получения разведений С30 и С200.

При использовании в качестве биологически активного жидкого компонента смеси различных, преимущественно сотенных, разведений действующего вещества, полученных по гомеопатической технологии, каждый компонент состава (например, С12, С30, С200) приготовляют раздельно по описанной выше технологии до их предпоследнего разведения (соответственно, до получения С11, С29, С199), затем вносят в соответствии с составом смеси в одну емкость по одной части каждого компонента и смешивают с требуемым количеством растворителя (соответственно, с 97 частями для сотенного разведения). При этом получают активированную - потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100 в сверхмалой дозе, полученной сверхразведением матричного раствора, соответственно, в 100¹², 100³⁰ и 100²⁰⁰ раз, эквивалентной смеси сотенных гомеопатических разведений С12, С30 и С200.

Возможно использование каждого компонента в виде смеси других различных разведений по гомеопатической технологии, например, десятичных и/или сотенных (С12, С30, С100; D20, С30, С100 или D20, С30, М100 и т.д.), эффективность которых определяют экспериментально.

Для получения заявленной фармацевтической композиции водные или водно-спиртовые растворы действующих компонентов смешивают, преимущественно, в объемном соотношении 1:1 и используют в жидкой лекарственной форме.

Заявленная фармацевтическая композиция может быть использована и в твердой лекарственной форме, которая содержит эффективное количество частиц нейтрального носителя - лактозы, насыщенного путем пропитывания до насыщения смесью водных или водно-спиртовых растворов активированной - потенцированной формой антител к мозгоспецифическому белку S-100 и активированной - потенцированной формой антител к эндотелиальной NO-синтазе, и фармацевтически приемлемые добавки, включающие, преимущественно, лактозу, целлюлозу микрокристаллическую и магния стеарат.

Для получения твердой оральной формы заявленного лекарственного средства производят в установке кипящего слоя (например, типа «Huttlin Pilotlab» производства компании Huttlin GmbH) орошение до насыщения вводимых в псевдоожиженный - кипящий слой частиц нейтрального вещества - лактозы (молочного сахара) с размером частиц 100÷300 мкм, предварительно полученным водным или водно-спиртовым раствором активированных - потенцированных форм антител к мозгоспецифическому белку S-100 и к эндотелиальной синтазе оксида азота (NO-синтазе), преимущественно, в соотношении 1 кг раствора антител на 5 или 10 кг лактозы (1:5 - 1:10) с одновременной сушкой в потоке подаваемого под решетку нагретого воздуха при температуре не выше 40°С. Расчетное количество 10÷34 масс. частей высушенных гранул, насыщенных активированной - потенцированной формой антител, загружают в смеситель и смешивают с 25÷85 масс. частей от общей массы загрузки «ненасыщенной» чистой лактозы (для снижения стоимости и некоторого упрощения и ускорения технологического процесса без снижения эффективности лечебного воздействия). Затем в эту смесь добавляют стеарат магния в количестве 0,1÷1 масс. частей от общей массы загрузки и микрокристаллическую целлюлозу в количестве 3÷10 масс. частей от общей массы загрузки. Полученную таблеточную массу равномерно перемешивают и таблетируют прямым сухим прессованием (например, в таблет-прессе Korsch - XL 400) с формированием круглых таблеток массой 150÷500 мг, преимущественно массой 300 мг, пропитанных водно-спиртовым раствором (3,0-6,0 мг/табл.) активированной - потенцированной формой антител к мозгоспецифическому белку S-100 и к NO-синтазе в сверхмалой дозе, каждого компонента, приготовленной из матричного раствора, разведенного, соответственно, в 100¹², в 100³⁰ в 100²⁰⁰, что эквивалентно смеси сотенных разведений С12, С30 и С200, приготовленных по гомеопатической технологии.

В качестве нейтрального носителя возможно также использование глюкозы, сахарозы, мальтозы, крахмала, изомальтозы, изомальта и других моносахаридов, олигосахаридов и полисахаридов, использующихся в производстве фармацевтических препаратов, а также технологических смесей на основе последних с добавлением фармацевтически приемлемых добавок (например, изомальт, кросповидон, цикламат натрия, сахарин натрия, лимонная кислота безводная и т.д.), в том числе лубрикантов, дезинтегрантов, связующих и красителей.

Предпочтительно заявленную фармацевтическую композицию рекомендуется принимать по 1-2 таблетке 2-6 раз в день.

Для проведения экспериментальных исследований были использованы антитела, приготовленные по заказу специализированной биотехнологической фирмой.

Пример 1.

Исследование влияния комплексного препарата, в состав которого входят активированные - потенцированные формы поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к мозгоспецифическому белку S-100 (анти-S100) и к эндотелиальной NO-синтазе (анти-eNOS) в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений С12, С30, С200, в соотношении 1:1 (СМД анти-S100 + анти-eNOS), а также компонентов, входящих в его состав - активированной - потенцированной формы поликлональных кроличьих антител к мозгоспецифическому белку S-100, очищенных на антигене, в сверхмалой дозе (СМД анти-S100), полученной сверхразведением исходного матричного раствора в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентной смеси сотенных гомеопатических разведении С12, С30, С200 и активированной - потенцированной формы поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной NO-синтазе, очищенных на антигене, в сверхмалой дозе (СМД анти-eNOS), полученной сверхразведением исходного матричного раствора в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентной смеси сотенных гомеопатических разведений С12, С30, С200, проводили in vitro на связывание стандартного лиганда [³H]пентазоцина с рекомбинантным сигма 1 рецептором человека и оценивали радиолигандным методом.

Сигма-1 рецептор - внутриклеточный рецептор, локализованный в клетках центральной нервной системы, клетках большинства периферических тканей и иммунокомпетентных клетках. Рецепторы демонстрируют уникальную способность транслоцироваться, которая вызывается множеством психотропных препаратов. Динамика сигма-1 рецепторов непосредственно связана с различными влияниями, осуществляемыми препаратами при действии на сигма-1 рецепторы. Эти влияния включают регуляцию каналов активности, экоцитоз, передачу сигналов, ремоделирование плазменной мембраны (формирование рафтов) и транспортировку липидов/метаболизм. Все это может способствовать развитию пластичности нейронов в мозге. Имеются доказательные данные, что сигма-1 рецепторы оказывают модулирующее влияние на все основные нейромедиаторные системы: норадренергическую, серотонинергическую, дофаминергическую, холинергическую системы и NMDA-регулируемые глутаматные эффекты. Сигма-1 рецептор играет важную роль в патофизиологии нейроденегенративных заболеваний, в том числе Альцгеймера, участвует в процессах обучения и памяти. В связи с этим способность лекарственных средств оказывать влияние на эффективность взаимодействия лигандов с сигма-1 рецептором указывает на наличие нейропротекторного, противоишемического, анксиолитического, антидепрессивного, антиастенического компонентов в спектре их фармакологической активности, что позволяет рассматривать данные препараты в качестве эффективных лекарственных средств, в том числе для лечения цереброваскулярных заболеваний.

В качестве контроля тестируемых препаратов была протестирована потенцированная дистиллированная вода (смесь гомеопатических разведений С12 + С30 + С200).

В опыте (для измерения общего связывания) в инкубационную среду вносили 20 мкл комплексного препарата СМД анти-S100 + анти-eNOS или по 10 мкл СМД анти-S100 или 10 мкл СМД анти-eNOS. Таким образом, количество СМД анти-S100 + анти-eNOS, вносимых в экспериментальную лунку при тестировании комплексного препарата, было идентично количеству СМД анти-S100 и СМД анти-eNOS, тестируемых в качестве монопрепаратов, что позволяет провести сравнение эффективности комплексного препарата с его отдельными компонентами, входящими в его состав. Потенцированную дистиллированную воду вносили в инкубационную среду в объеме 20 мкл и 10 мкл.

Затем вносили 160 мкл (~200 µg белка) гомогената мембран клеток линии Jurkat (линия лейкемических Т-лимфоцитов человека), и в последнюю очередь 20 мкл радиолиганда меченного тритием [³H]пентазоцин (15 нМ).

Для измерения неспецифического связывания вместо препаратов или потенцированной воды в инкубационную среду вносили 20 мкл немеченного лиганда - галоперидол (10 мкМ).

Радиоактивность измеряли на сцинтилляционном счетчике (Topcount, Packard) с использованием сцинтилляционной смеси (Microscint 0, Packard) после инкубации в течение 120 минут при температуре 22°С в 50 мМ Tris-HCl буфере (рН=7,4) и фильтрации на стекловолоконных фильтрах (GF/B, Packard). Специфическое связывание (в опыте или контроле) рассчитывали, как разницу между общим (в опыте или контроле) и неспецифическим связыванием.

Результаты представлены в виде процента ингибирования специфического связывания в контроле (в качестве контроля использовали дистиллированную воду) (Таблица 1).

Таблица 1 Влияние препаратов и потенцированной воды на связывание стандартного радиолиганда [³H]пентазоцина с рекомбинантным сигма 1 рецептором человека Экспериментальная группа Количество, вносимое в экспериментальную лунку % от специфического связывания радиолиганда в контроле % ингибирования связывания радиолиганда в контроле 1-е измерение 2-е измерение среднее значение СМД анти-S100 + анти-eNOS 20 мкл 48,4 35,5 42,0 58,0 СМД анти-S100 10 мкл 67,3 63,1 65,2 34,8 СМД анти-eNOS 10 мкл 147,5 161,1 154,3 -54,3 Потенцированная вода 20 мкл 98,1 75,8 86,9 13,1 Потенцированная вода 10 мкл 140,1 106,2 123,2 -23,2 Примечание: % специфического связывания в контроле = (специфическое связывание в опыте / специфическое связывание в контроле) * 100%; % ингибирования специфического связывания в контроле = 100% - (специфическое связывание в опыте / специфическое связывание в контроле) * 100%).

Результаты, отражающие ингибирование выше 50%, представляют собой значительные эффекты исследуемых соединений; ингибирование от 25% до 50% свидетельствуют об эффектах от слабого до умеренного; ингибирование менее 25% считаются незначительными эффектами исследуемого соединения и находятся в пределах уровня фона.

Таким образом, в условиях данной экспериментальной модели показано, что: комплексный препарат СМД анти-S100 + анти-eNOS более эффективно, чем отдельные его компоненты (СМД анти-S100 и СМД анти-eNOS) ингибирует связывание стандартного радиолиганда [³H]пентазоцина с рекомбинантным сигма-1 рецептором человека; СМД анти-S100, внесенные в экспериментальную лунку в объеме 10 мкл, ингибируют связывание стандартного радиолиганда [³H]пентазоцина с рекомбинантным сигма-1 рецептором человека, но выраженность эффекта уступает выраженности эффекта комплексного препарата СМД анти-S100 + анти-eNOS; СМД анти-eNOS, внесенные в экспериментальную лунку в объеме 10 мкл, не оказывали влияния на связывание стандартного радиолиганда [³H]пентазоцина с рекомбинантным сигма-1 рецептором человека; потенцированная вода, внесенная в экспериментальную лунку в объеме 10 мкл или 20 мкл, не оказывала влияния на связывание стандартного радиолиганда [³Н]пентазоцина с рекомбинантным сигма 1 рецептором человека.

Пример 2.

В исследование были включены пациенты с установленным диагнозом болезни Альцгеймера.

Для исследования свойств заявленного лекарственного средства при лечении болезни Альцгеймера были использованы таблетки массой 300 мг, пропитанные фармацевтической композицией, содержащей водно-спиртовые растворы (6 мг/табл.) активированных - потенцированных форм поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к мозгоспецифическому белку S-100 (анти-S100) и к эндотелиальной NO-синтазе (анти-eNOS) в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (с концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений С12, С30, С200 (СМД анти-S100 + анти-eNOS).

В качестве контрольной группы использовалась группа пациентов, получающих лекарственное средство в виде таблеток массой 300 мг, пропитанных водно-спиртовым раствором (3 мг/табл.) активированной - потенцированной формы поликлональных кроличьих антител к мозгоспецифическому белку S-100, очищенных на антигене, в сверхмалой дозе (СМД анти-S100), полученной сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентной смеси сотенных гомеопатических разведений С12, С30, С200.

Исследование представляло собой открытое рандомизированное сравнительное клиническое исследование эффективности и безопасности исследуемой терапии (препараты СМД анти-S100 и СМД анти-S100 + анти-eNOS) в двух параллельных группах при лечении пациентов с болезнью Альцгеймера легкой и средней степени тяжести.

В исследование были включены 6 пациентов с диагнозом «болезнь Альцгеймера» легкой и средней степени тяжести, в возрасте от 55 до 64 лет. Средний возраст пациентов составил 59,0±3,58 года.

В исследовании проверялось соответствие пациентов следующим критериям включения и исключения:

Критерии включения:

1. Пациенты с болезнью Альцгеймера легкой и средней степени тяжести, подтвержденным данными медицинского анамнеза, неврологического обследования и медицинской документацией.

2. Неизменность сопутствующей терапии в течение как минимум месяца до Визита 1.

3. Отсутствие предпосылок к изменению неврологической сопутствующей терапии в течение всего периода наблюдения.

4. Отсутствие предпосылок к назначению иммуномодулирующих средств в течение ближайших 6 месяцев.

5. Уровень образования и степень понимания пациента достаточны для того, чтобы адекватно общаться с исследователем и координатором исследования.

6. Пациенты оцениваются исследователем как надежные, готовые выполнять все назначенные клинические визиты, тесты и процедуры, предусмотренные протоколом.

7. Пациенты имеют действительный домашний адрес.

Критерии исключения:

1. В анамнезе хирургическое вмешательство на головном мозге.

2. Инсульт в анамнезе.

3. Диагноз психоза, биполярного расстройства или шизоаффективного расстройства в анамнезе.

4. Большое депрессивное расстройство согласно критериям модуля депрессии международного нейропсихиатрического мини-интервью (MINI).

5. Факторы/состояния, медицинского или иного характера, которые, по мнению исследователя, могут повлиять на результаты тестирования пациента в рамках данного исследования.

6. Ответы «2А», «2Б», «2В» или «3» в рубрике «И» опросника депрессии Бека (активное суицидальное мышление с некоторым намерением к действию, без специфического плана или активное суицидальное мышление со специфическим планом и намерением).

7. Аутоиммунное заболевание в анамнезе.

8. Острое поражение печени или выраженный цирроз (класс С по Child-Pugh).

9. Некоррегированное нарушение функции щитовидной железы.

10. Некомпенсированная артериальная гипертензия в анамнезе.

11. Серьезное или декомпенсированное сердечно-сосудистое заболевание, заболевание печени, почек, метаболическое, респираторное или гематологическое заболевание, симптоматическое заболевание периферических сосудов или иное медицинское или психиатрическое состояние, которое, по мнению исследователя, может повлиять на участие пациента в исследовании или может привести к продлению сроков госпитализации или повторной госпитализации пациента в ходе проведения исследования.

12. 3аболевания и состояния, которые, по мнению исследователя, могут препятствовать участию пациента в исследовании.

13. Прием препарата Импаза (СМД анти-eNOS) или Тенотен (СМД анти-S100) до участия в исследовании.

14. Прием антидепрессантов любой группы, не исключая растительных и гомеопатических препаратов.

15. Прием анксиолитиков любой группы, не исключая растительных и гомеопатических препаратов.

16. Прием иммуномодуляторов, не исключая растительных и гомеопатических препаратов.

17. Системное лечение стероидами в течение 1 месяца или менее до Визита 1.

18. Прививки, в т.ч. против гриппа.

19. Участие в исследовании препаратов Импаза (СМД анти-eNOS) или Тенотен (СМД анти-S100), если пациенты приняли хотя бы одну дозу препарата.

20. Участие в других клинических исследованиях в течение 1 месяца перед включением в данное исследование.

21. Беременность, кормление грудью, невозможность использования адекватной контрацепции во время исследования и в течение месяца после последнего приема исследуемого препарата.

22. Наличие аллергии/непереносимости любого из компонентов лекарственных препаратов, используемых в лечении, включая непереносимость лактозы.

23. Употребление наркотиков, нейролептиков, алкоголизм, психические заболевания пациента.

24. Пациенты являются персоналом центра, напрямую связанным с проводимым исследованием и/или являются членами семьи персонала исследовательского центра, напрямую связанного с проводимым исследованием. Понятие "члены семьи" включает в себя супруга(у), родителей, детей, братьев(сестер) - связанных как биологическим, так и юридическим родством.

25. Участие в судебном процессе либо предположительное получение компенсации или участие в судебном процессе, по мнению исследователя.

После определения соответствия пациента критериям включения и исключения протокола пациенты были рандомизированы на две исследуемых группы: группу СМД анти-S100 (3 человека, женщины - 100%, мужчины - 0%, средний возраст - 59±3,6 года) и группу СМД анти-S100 + анти-eNOS (3 человека, женщины - 66,66%, мужчины - 33,33%, средний возраст - 59±4,36 года).

В ходе данного исследования было проведено 5 визитов в исследовательский центр. Фаза лечения продолжалась с Визита 1 до Визита 4 в течение 84±5 дней. Визит 4 (День 84±5) являлся первой конечной точкой исследования, после чего начиналась фаза катамнестического наблюдения. Фаза катамнестического наблюдения продолжалась до Визита 5 (День 168±5).

В анализ безопасности были включены данные всех пациентов, участвовавших в исследовании (n=6). В течение всего периода наблюдения за пациентами отмечалась хорошая переносимость исследуемых препаратов. Нежелательные явления отсутствовали. Все пациенты исследуемых групп завершили лечение в сроки, установленные протоколом исследования, досрочно выбывших пациентов не было.

При оценке действия препарата СМД анти-S100 + анти-eNOS на основные нейропсихические проявления болезни Альцгеймера (нейропсихический опросник NPI, раздел выраженность), на выраженность сопутствующего дистресса ухаживающего за пациентом лица (нейропсихический опросник NPI, раздел дистресс), активность повседневной жизни пациента (опросник ADS-ADL), а также когнитивные функции пациента (опросник MMSE), было выявлено улучшение по основным нейропсихическим проявления болезни Альцгеймера, выражавшееся в статистически достоверном уменьшении общего балла раздела «выраженность» нейропсихического опросника NPI (с 24,33±4,73 до 12,0±3,46, p<0,05) к Визиту 4 (Таблица 2).

Так же была выявлена тенденция к уменьшению дистресса ухаживающего лица, и увеличение активности повседневной жизни пациента, которая, впрочем, не достигла статистически значимых значений к окончанию терапии, что, возможно, связано с недостаточным числом пациентов.

Наряду с этим была выявлена тенденция к улучшению когнитивных функций, проявлявшаяся в увеличении оценки по MMSE с 23,66±3,21 баллов до 26,66±1,53 баллов, которая, однако, также не достигла статистически значимых значений к окончанию терапии, что, возможно, также связано с недостаточным числом пациентов.

Аналогичные показатели в группе пациентов, получавших СМД анти-S100, не показали тенденций к улучшению, за исключением статистически-недостоверного улучшения балла по MMSE с 22,66±0,577 баллов до 23,33±0,577 баллов.

При этом разница между группами по общему баллу шкалы MMSE к окончанию терапии была достоверной с вероятностью p<0,05.

Таблица 2   NPI (выраженность) NPI (дистресс) ADS-ADL MMSE СМД анти-S100 + анти-eNOS до лечения 24,33±4,73 9,66±1,53 71,0±6,56 23,66±3,21 СМД анти-S100 + анти-eNOS после лечения 12,0±3,46* 5,0±3,61 74,33±2,51 26,66±1,53** СМД анти-S100 до лечения 35,66±5,50 22,33±5,50 61,66±5,13 22,66±0,577 СМД анти-S100 после лечения 38,33±8,5 23,0±5,0 61,33±5,86 23,33±0,577 * - p от исх. <0,05; ** - p по сравнению с контролем <0,05.

Таким образом, в проведенном клиническом исследовании комбинированного препарата СМД анти-S100 + анти-eNOS показано положительное влияние на основные нейропсихические проявления болезни Альцгеймера и возможное влияния на когнитивные функции пациентов с болезнью Альцгеймера. Кроме того, подтверждена высокая переносимость препарата. Нежелательные явления при приеме препарата отсутствовали.

Пример 3.

Эффективность препаратов при скополаминовой амнезии у крыс (модель болезни Альцгеймера).

Болезнь Альцгеймера (БА) является нейродегенеративным заболеванием и характеризуется снижением когнитивных функций, ухудшением памяти, спутанностью сознания, изменениями эмоционального фона. Хотя основной причиной развития данной патологии в настоящее время считается накопление бета-амилоида, приводящее к образованию бета-амилоидных бляшек и нейрофибриллярных клубков в тканях мозга, БА также сопровождается дефицитом холинэргической системы. На этом основан один из наиболее распространенных способов моделирования БА у животных с помощью антагониста холинергической системы скополамина. Введение скополамина экспериментальным животным (обычно крысам или мышам) нарушает способность к обучению и приводит к ухудшению памяти.

Для оценки когнитивных функций крыс и мышей используют различные методы, в частности водный лабиринт Морриса. Суть этого теста состоит в том, что в сосуде с непрозрачной водой животные, выпускаемые в воду с разных точек, вынуждены искать скрытую неподвижную платформу. Преимуществом этого метода является то, что он позволяет как наблюдать за процессом обучения животного (формирование у него представления о пространственном расположении платформы независимо от того, в каком месте его опустили в воду), так и оценивать прочность запоминания (для этого проводят тест-пробу, когда платформу вынимают).

В нижеприведенном Примере 3 изучали эффективность при скополаминовой амнезии у крыс заявленного лекарственного средства в виде композиции, содержащей активированные - потенцированные формы поликлональных аффинно очищенных на антигене кроличьих антител к мозгоспецифическому белку S-100 (анти-S100) и к эндотелиальной NO-синтазе (анти-eNOS) в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (с концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений С12, С30, С200 (СМД анти-S100 + анти-eNOS).

В исследовании эффективности препарата СМД анти-S100 + анти-eNOS при скополаминовой амнезии у крыс (модель болезни Альцгеймера) было использовано 48 крыс-самцов линии Rj: Wistar (Han) (масса 180-280 г). В течение 4 дней крысам подкожно вводили физиологический раствор (n=12, интактные) или скополамин в дозе 0,5 мг/кг (n=36) (скополамин-индуцированная амнезия). Крыс со скополамин-индуцированной амнезией разделили на 3 группы и вводили им, соответственно, дистиллированную воду (7,5 мл/кг, n=12, контроль, группа №1), СМД анти-S100 (7,5 мл/кг, n=12, группа №2) и СМД анти-S100 + анти-eNOS (7,5 мл/кг, n=12, группа №3) внутрижелудочно в течение 9 дней (4 дня до начала инъекций скополамина, 4 дня на фоне введения скополамина и 1 день после окончания введения скополамина).

В течение 4 дней введения скополамина через 60 минут после введения тестируемых препаратов и 30 минут после введения скополамина проводили обучающую сессию в лабиринте Морриса (4 последовательных теста с интервалом 60 сек). Лабиринт Морриса представляет собой круглый сосуд (диаметром 150 см, высотой 45 см), на 30 см заполненный водой (26-28°С). В 18 см от края сосуда находится скрытая платформа (диаметром 15 см), утопленная на 1,5 см ниже уровня воды. Воду делают мутной, добавляя в нее нетоксичный краситель (например, молочный порошок), что делает платформу невидимой. Для каждого теста животное помещали в лабиринт в одной из начальных точек, находящихся на одинаковом расстоянии от скрытой платформы, и давали им возможность найти ее. Если животное не могло найти платформу за 120 секунд, его ставили на платформу на 60 секунд и затем начинали новый тест. В ходе 4 испытаний в случайном порядке животные начинали прохождение по лабиринту дважды с каждой исходной точки. Испытания записывали на видеопленку, а затем анализировали расстояние, преодоленное в поисках платформы в каждом испытании и латентный период поиска платформы.

На 5-й день проводили пробу: платформу убирали из лабиринта, и крысе давали свободно плавать на протяжении 60 секунд. Регистрировали время, проведенное в том месте, где раньше находилась платформа.

Введение скополамина значительно ухудшало способность животных к обучению: в контрольной группе №1 время, затраченное животными на поиск платформы, и расстояние, которое животные проплыли в поисках платформы, значительно увеличивались (Таблицы 3, 4). Проба показала, что и память животных контрольной группы №1 значительно ухудшилась: в месте, где раньше находилась платформа, они находились меньше времени, чем интактные крысы (Таблица 5). Введение СМД анти-S100 в группе №2 не приводило к улучшению исследованных параметров (Таблицы 3, 4, 5). Введение СМД анти-S100 + анти-eNOS в группе №3 приводило к некоторому улучшению обучения, которое выражалось в укорочении латентного времени поиска платформы (Таблица 3) и преодоленного расстояния (Таблица 4) в течение 4 дней обучения, и улучшению памяти, что выражалось в увеличении времени, проведенного в месте, где была платформа (Таблица 5).

Таблица 3 Латентный период поиска платформы, сек Группа Обучение 1 день 2 день 3 день 4 день Интактные, n=12 54,7±6,2 30,8±2,8 26,9±5,1 20,5±3,6 Контроль, n=12 100,1±6,8*** 92,4±9,3*** 81,4±10,7*** 77,7±9,4*** СМД анти-S100, n=12 106,8±7,0 99,3±7,8 95,6±9,0 80,4±11,1 СМД анти-S100 + анти-eNOS, n=12 94,4±7,2 90,7±8,2 78,3±8,6 60,1±10,2 *** - отличие от интактных достоверно, p<0,05.

Таблица 4 Расстояние, преодоленное в поисках платформы, см Группа Обучение 1 день 2 день 3 день 4 день Интактные, n=12 1055,7±94,6 659,5±62,2 564,8±119,3 406,1±61,2 Контроль, n=12 2587,1±217,2*** 2559,6±250,5*** 2397,9±312,6 2366,1±293,8*** СМД анти-S100, n=12 2797,2±208,9 2865,2±255,1 2857,01300,8 2457,4±344,4 СМД анти-S100 + анти-eNOS, n=12 2434,31222,8 2529,9±282,7 2344,2±283,0 1905,1±343,7 *** - отличие от интактных достоверно, p<0,05.

Таблица 5 Время, проведенное в месте, где раньше находилась платформа, сек Группа Проба 0-30 сек 30-60 сек 0-60 сек Интактные, n=12 40,8±4,1 36,8±3,6 38,5±2,6 Контроль, n=12 18,4±2,8*** 18,8±1,9*** 18,8±1,7*** СМД анти-S100, n=12 13,3±2,1 21,5±2,6 17,6±1,3 СМД анти-S100 + анти eNOS, n=12 19,1±4.8 23,8±2,2 21,2±2,5 *** - отличие от интактных достоверно, p<0,05.

Таким образом, в использованной модели болезни Альцгеймера применение комплекса СМД анти-S100 + анти-eNOS было более эффективным по сравнению с изолированным введением СМД анти-S100.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к неврологии, и касается лечения болезни Альцгеймера. Для этого вводят лекарственное средство, содержащее активированную - потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100, и в качестве дополнительного - усиливающего компонента активированную - потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе. Такое комплексное лекарственное средство обеспечивает эффективное лечение болезни Альцгеймера за счет синергетического действия входящих в него компонентов. 2 н. и 9 з.п. ф-лы, 5 табл., 3 пр.

1. Способ лечения нейродегенеративных заболеваний путем введения в организм активированной - потенцированной формы антител к мозгоспецифическому белку S-100, характеризующийся тем, что дополнительно одновременно и сочетанно вводят активированную - потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе.

2. Способ по п.1 характеризующееся тем, что нейродегенеративным заболеванием является болезнь Альцгеймера.

3. Способ по п.1, характеризующийся тем, что активированную - потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100 и активированную - потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе используют в виде активированного - потенцированного водного или водно-спиртового раствора каждого компонента, активность которого обусловлена процессом многократного разведения в водном или водно-спиртовом растворителе в сочетании с внешним механическим воздействием - встряхиванием каждого разведения.

4. Способ лечения по п.1, характеризующийся тем, что используют приготовленные в виде единого лекарственного препарата - одной лекарственной формы смесь различных разведений антител к мозгоспецифическому белку S-100 в сочетании со смесью различных разведений антител к эндотелиальной NO-синтазе, приготовленных по гомеопатической технологии.

5. Лекарственное средство для лечения нейродегенеративных заболеваний, содержащее активированную - потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100, характеризующееся тем, что выполнено в виде фармацевтической композиции и содержит в качестве дополнительного - усиливающего компонента активированную - потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе.

6. Лекарственное средство по п.5, характеризующееся тем, что нейродегенеративным заболеванием является болезнь Альцгеймера.

7. Лекарственное средство по п.5 или 6, характеризующееся тем, что активированную - потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100 и активированную - потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе используют в виде активированного - потенцированного водного или водно-спиртового раствора, активность которого обусловлена процессом последовательного многократного разведения в водном или водно-спиртовом растворителе в сочетании с внешним механическим воздействием - встряхиванием каждого разведения.

8. Лекарственное средство по п.5, характеризующееся тем, что фармацевтическая композиция выполнена в твердой лекарственной форме и содержит эффективное количество гранул нейтрального носителя, насыщенного смесью водных или водно-спиртовых растворов активированной - потенцированной формы антител к мозгоспецифическому белку S-100 и активированной - потенцированной формы антител к эндотелиальной NO-синтазе, и фармацевтически приемлемые добавки.

9. Лекарственное средство по п.5, характеризующееся тем, что водные или водно-спиртовые растворы активированных - потенцированных форм антител к мозгоспецифическому белку S-100 и к эндотелиальной NO-синтазе получены путем многократного последовательного разведения в сочетании с внешним воздействием - вертикальным встряхиванием каждого разведения из матричных растворов аффинно очищенных антител к мозгоспецифическому белку S-100 и к эндотелиальной NO-синтазе с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл.

10. Лекарственное средство по п.5, характеризующееся тем, что каждый из компонентов используют в виде смеси различных, преимущественно сотенных, разведений, приготовленных по гомеопатической технологии.

11. Лекарственное средство по п.6, характеризующееся тем, что фармацевтически приемлемые добавки включают лактозу, целлюлозу микрокристаллическую и магния стеарат.